专利名称：具有溶血栓活性的化合物、其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及化合物，尤其涉及具有溶血栓活性的化合物、其制备方法以及它们作为溶血栓剂的应用，属于生物医药领域。
背景技术：
血管栓塞性疾病，例如心肌梗塞和脑卒中，是心脑血管疾病中死亡率最高的疾病。 寻找安全有效的溶血栓药物，是心脑血管疾病治疗药物研究的热点之一。发明人以纤维蛋白降解产物P6A(ARPAK为先导结构，通过结构修饰得到了一系列具有明确血管活性的寡肽 (彭师奇，赵明，王超，唐朝枢，王银叶，心血管活性多肽以及它们的合成和在医学中的应用， 发明专利证书第57116号，中华人民共和国知识产权局，2001年7月观日)；发明人通过小鼠体内P6A及类似物的代谢研究，确定了它们的代谢产物以及作为溶血栓剂的应用前景 (彭师奇，赵明，王超，徐友宣，吴艳芬，P6A的代谢产物及其在医学中的应用，发明专利申请号第01136780. 6号，中华人民共和国知识产权局)；发明人将咔啉羧酸引入ARPAK、GRPAK 和QRPAK的N端和C端制备拟肽，使制得的拟肽包含了原多肽序列的溶栓活性，包含了咔啉羧酸的抗血小板聚集活性，以及具有紫外可检测性(Yanfen ffu, Ming Zhao, Chaoffang and Shiqi Peng*, Synthesis and Thrombolytic Activity of Pseudopeptides Relatedto Fibrinogen Fragment,Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters 12,2331-2333,2002)。 所述紫外可检测性使这类拟肽的药代动力学研究变得简捷。考察杂环的结构，发明人认识到了图1描述的巧妙关联。这种结构关联的合理推广是，将四氢异喹啉羧酸、色氨酸和苯丙氨酸分别引入ARPAK、GRPAK和QRPAK的N端和C端制备修饰肽。
发明内容
本发明的目的之一是将ARPAK、GRPAK和QRPAK三种溶血栓小肽进行修饰，使其溶血栓活性更好并具有检测方便的优点。本发明的目的之一是通过以下技术方案来实现的具有溶血栓活性的化合物，为下述通式(I)或通式(II)所示M1-AA1-Arg-Pro-Ala-Lys-OH 通式(I)；H-AA1-Arg-Pro-Ala-Lys-Ii2-OH 通式(II)。其中，R1选自色氨酰基、苯丙氨酰基或1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰基；R2选自色氨酸残基、苯丙氨酸残基或1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸-2-基；AA1选自丙氨酸残基 (Ala)、甘氨酸残基(Gly)或谷氨酰氨残基(Gin)。本发明的目的之二是提供一种制备上述具有溶血栓活性的通式(I)和通式(II) 化合物的方法。本发明的目的之二是通过以下技术方案来实现的一种制备上述具有溶血栓活性的通式(I)或通式(II)化合物的方法，包括通过液相法逐步接肽，制备以下6种C端游离或N端游离的短肽
(1) Boc-Ala-Arg (NO2) -Pro-Ala-Lys (Z) -0H,(2) Boc-Gln-Arg (NO2) -Pro-Ala-Lys (Z) -0H,(3) Boc-Gly-Arg (NO2) -Pro-Ala-Lys (Z) -0H,(4) H-Gly-Arg (NO2) -Pro-Ala-Lys (Z) -OBzl，(5) H-Ala-Arg (NO2) -Pro-Ala-Lys (Z) -OBzl，(6)H-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys (Z)-OBzl ；将四氢异喹啉羧酸、色氨酸和苯丙氨酸与上述C端游离或N端游离的6种短肽分别进行C端或N端偶联，制备保护的偶联肽；将所制备保护的偶联肽脱Boc之后氢解，得到目标化合物。动物模型试验证实，本发明通式化合物(I)或(II)具有良好的溶血栓活性。
图1啉环和四氢异喹啉环、吲哚环及苯环的结构关联性。图2本发明化合物的合成路线图。在IA-C 和 2A-C 中，AA = Ala,Gly,Gln ；在 la，1，a，l，，a，lb, 1' b 禾口 l，，b 中 AA = Ala,R = Phe ；在 2a, 2' a，2”a，2b，2，b 和 2”b 中 AA = Gly,R = Phe ；在 3a, 3' a，3”a，3b， 3，b 和 3”b 中 AA = Gln，R = Phe ；在 4a，4，a，4”a，4b，4，b 和 4”b 中 AA = Ala,R = Trp ； 在 5a, 5' a，5”a，5b，5，b 禾口 5”b AA = Gly, R = Trp ；在 6a，6，a，6”a，6b，6，b 禾口 6”b 中 AA = Gin, R = Trp ；在 7a，7，a，7”a，7b，7，b 和 7”b 中 AA = Ala, R =异喹啉酰基；在 8a， 8，a，8”a，8b，8，b 和 8”b 中 AA = Gly, R =异喹啉酰基；在 9a,9' a，9”a，9b，9，b 和 9”b 中AA = Gin, R =异喹啉酰基。为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。本发明中所出现的术语或缩
THF四氢呋喃
DCC环己基酰亚胺
DCU环己基脲
OBzl苄氧基
Boc叔丁氧羰基
HOBtN-羟基苯并三P
TLC薄层层析
DMF二甲基甲酰胺
具体实施例方式实施例1 制备 Boc-Ala-Lys (Z) -OBzl将47;3mg (2. 5mmol) Boc-Ala-OH溶于IOml无水四氢呋喃(THF)，冰浴下往里加 IOml 338mg(2. 5mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)和 619mg (3mmol) 二环己基羰二亚胺(DCC) 的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液。将936mg (2. 3mmol) HCl · Lys (Z) -OBzl和23ang (2. 3mmol) N-甲基吗啉先与6ml无水THF混合，然后与上面的活泼酯溶液混合。反应混合物室温搅拌Mh，TLC(CHC13 MeOH = 30 1)显示HCl · Lys(Z)-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。 滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37°C减压浓缩，得1.204g(97%)标题化合物，为无色固体。Mp 88 90°C， [a]^°=-6.6 (C = 0.2, CHCl3), ESI-MS (m/e) 543 [M+H]+。实施例2 制备 HCl · Ala-Lys (Z) -OBz 1将1. 354g(2. 5mmol) Boc-Ala-Lys (Z)-OBzl 与 15ml 氯化氢 _ 乙酸乙酯液(4N)混合、室温搅拌 3h、TLC (CHCl3 MeOH = 20 1)显示 Boc-Ala-Lys (Z)-OBzl 消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到的标题化合物，ESI-MS(m/e)443[M+H] +。实施例
权利要求
1.通式(II)所示的化合物 H-AA1-Arg-Pro-Ala-Lys-Ii2-OH 通式(II)；其中，R1选自色氨酰基、苯丙氨酰基或1，3，4_三氢异喹啉-3-S-甲酰基出2选自色氨酸残基、苯丙氨酸残基或1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸-2-基；AA1选自丙氨酸残基、甘氨酸残基或谷氨酰氨残基。
2.制备权利要求1的化合物的方法，包括 通过液相法逐步接肽，制备以下3种短肽(1)Boc-Ala-Arg (NO2) -Pro-Ala-Lys (Z) -0H,(2)Boc-Gln-Arg (NO2) -Pro-Ala-Lys (Z) -0H,(3)Boc-Gly-Arg (NO2) -Pro-Ala-Lys (Z) -0H,将1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯、色氨酸苄酯或苯丙氨酸苄酯与上述C端游离的 3种短肽分别进行C端偶联，制备保护的偶联肽；将所制备的保护的偶联肽脱叔丁氧羰基之后催化氢化，即得。
3.权利要求1的化合物在制备抗血栓药物中的用途。
全文摘要
本发明公开了具有溶血栓活性的通式化合物，本发明还公开了该通式化合物的制备方法以及它们作为抗血栓剂的应用。本发明通式化合物结构如下所示H-R1-AA1-Arg-Pro-Ala-Lys-OH或H-AA1-Arg-Pro-Ala-Lys-R2-OH；其中，R1选自色氨酰基、苯丙氨酰基或1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰基；R2选自色氨酸残基、苯丙氨酸残基或1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸-2-基；AA1选自丙氨酸残基、甘氨酸残基或谷氨酰氨残基。动物模型试验证实，本发明通式化合物具有良好的溶血栓活性。
文档编号A61P7/02GK102153623SQ20111000460
公开日2011年8月17日 申请日期2006年11月30日 优先权日2006年11月30日
发明者彭师奇, 王亭, 王超, 赵明 申请人:首都医科大学