专利名称：紫花地丁总酚提取物治疗高尿酸血症的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及天然药物领域，具体涉及紫花地丁总酚提取物治疗高尿酸血症的医药用途。
背景技术：
由于嘌呤代谢紊乱产生过多尿酸及/或尿酸排泄减少，血尿酸浓度超过尿酸可溶性的上限时，一般血清尿酸值大于416μπι01/1(7π^/( υ时，即为高尿酸血症 (hyperuricemia)，易出现针状或不定形的尿酸钠结晶，可在任何软组织内沉积(中枢神经系统除外)，从而引起一系列病变，主要包括急慢性痛风性关节炎，痛风石沉积，痛风性肾病，尿酸性泌尿系结石等。因此，高尿酸血症是引起痛风(gout)的主要原因。临床上治疗高尿酸血症和痛风主要是抑制尿酸合成和增加尿酸的排泄。目前治疗高尿血酸症和痛风的药物主要是西药，但所使用的西药都有副作用。如西药秋水仙碱可引起白细胞降低及秃发；别嘌呤醇通过抑制黄嘌呤氧化酶活性来抑制血尿酸合成但因影响代谢酶的活性，毒副作用较大；丙磺舒，苯溴马隆通过增加肾对尿酸的排泄从而降低血尿酸水平，但无抗炎镇痛作用，且痛风初期易使症状加重，不宜用于急性通风性关节炎。中医药虽然在治疗高尿酸血症和痛风方面显示了良好的前景和疗效，但相关上市产品均为复方制剂，用药服用量大，应用不方便。紫花地丁，为堇菜科植物紫花地丁(Viola yedoensis Makino)的干燥全草。紫花地丁全草入药，性苦、辛、寒，入心、肝经。具有清热解毒、凉血消肿的功效。用于痈肿疔疮， 乳痈肠痈，丹毒肿痛，毒蛇咬伤。植物化学成分研究表明，紫花地丁的主要化学成分为香豆素类，黄酮类成分。现已分离得到的主要有七叶内酯、双七叶内酯、早开堇菜苷、芹菜素和异槲皮苷等。现代药理学研究表明，紫花地丁具有抑菌、抗炎、抗内毒素、增强免疫、抗氧化和抗HIV病毒作用。 现有报道如CN 1883619A，公开了一种紫花地丁多糖药物组合物及其制备方法，公开其提取物紫花地丁多糖的抗病毒抗肿瘤作用。CN 1772039公开了紫花地丁叶的水提取物的抗糖尿病，降低血清脂质，增殖乳酸菌的应用，以及在食品，动物饲料中的应用，但该专利所涉及的植物是爵床科十万错属植物宽叶十万错Asystasia gangetica(L. ) T. Anders.。CN 101601780A公开了植物紫花地丁在抗糖尿病和相关代谢疾病中的应用。至今尚无紫花地丁及其提取物具有抗高尿血酸症的报道。
发明内容
本发明公开了紫花地丁总酚提取物治疗高尿酸血症的用途。试验证明紫花地丁总酚提取物具有该治疗用途。所述的高尿酸血症优选痛风性关节炎、高血尿酸肾病或尿路结石。所述的紫花地丁总酚提取物优选以下方法制备取紫花地丁全草，用水或50 80%的乙醇水溶液热回流或渗漉法提取；提取液减压浓缩；用水稀释浓缩液，取上清液过大孔树脂柱吸附，用水或10 25%乙醇洗涤吸附柱，之后用30 90%的乙醇洗脱柱，收集洗脱液，干燥得紫花地丁总酚提取物。该紫花地丁总酚提取物中主要含有七叶内酯，以七叶内酯计含量大于50%。本发明所述的百分比浓度均为重量百分比。所述大孔树脂优选自DlOl、AB-8、HPD100、HPD300、HPD450、Dl 或 D2。进一步优选 HPD300。药效学实验证明，紫花地丁总酚提取物灌胃给药，能明显减轻尿酸钠结晶(MSU) 所致大鼠痛风性关节炎的关节肿胀，改善大鼠步态。对尿酸酶抑制剂，腺嘌呤和乙胺丁醇所致小鼠高尿酸血症及尿酸性肾病有显著抑制作用，但对尿量无明显影响，说明紫花地丁总酚提取物抗高尿酸血症是通过促进尿酸排泄，而不是通过增加尿量来实现的。紫花地丁总酚提取物具有促尿酸排泄功能而无利尿作用，这种功能的单一性使得医生在临床应用时， 无需考虑利尿因素对患者的影响。建议临床患者使用紫花地丁总酚的剂量为IOOmg/次(口服)，一天三次，具体可遵医嘱。
具体实施例方式含量分析紫外分光光度法测定紫花地丁总酚的含量其中紫外分光光度计为UV-2401PC型， 运用标准曲线线性回归方法，以七叶内酯为对照品，在3Mnm测定。标准品溶液的配制精密称取对照品七叶内酯3. %ig，用适量75%乙醇溶解，定容与IOml容量瓶中，摇勻作为储备液，分别吸取0. 2,0. 3,0. 5,0. 6,1. 2,1. 6ml定容于IOml容量瓶中，进行紫外测定，记录吸收度值，以对照品浓度(χ)为横坐标，吸收度(y)为纵坐标进行回归计算。测定方法分别精密称取IOmg样品，加30ml 75%乙醇，超声提取半小时，提取液过滤，药渣按前法再操作1次，过滤，两次滤液合并，浓缩后定容至50ml容量瓶中。吸取5ml 续滤液测定，记录吸光度，按线性方程计算含量，由吸光度值计算紫花地丁总酚的含量。实施例1紫花地丁总酚提取物取紫花地丁全草10kg，用药材重量8倍的95%乙醇，70°C热回流提取两次，每次2 小时。提取液浓缩后上HPD300大孔树脂柱，先用8倍量柱体积25%乙醇洗脱去杂质，再用 8倍量柱体积40%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥得紫花地丁总酚提取物235g。总酚含量为 67. 09%。实施例2急性毒性试验本试验观察昆明种小鼠单次灌服紫花地丁总酚提取物(实施例1制得，后同) 后，由于吸收所产生的毒性反应和死亡情况，结果表明本发明提供的紫花地丁总酚提取物 23. 2g/kg灌服给药后，昆明种小鼠饮食活动等未见异常。在给药后14天内，小鼠未发生死亡。因此，紫花地丁总酚提取物对昆明种小鼠的最大给药量> 23.2g/kg。1受试药物由本发明实施例1制备的紫花地丁总酚提取物分成高，中，低剂量组。
2试验动物昆明种小鼠，雌雄各半，体重18_22g。3试验方法昆明种小鼠20只，用最大浓度、最大剂量进行实验，实验前禁食12h，实验时按 23.2g/kg紫花地丁总酚提取物灌胃(相当于生药量610.5g/kg，相当于临床用量的156 倍)，给药量已达最大体积。实验时室温25士2°C，一次给药，观察14d内小鼠的饮食、活动、 皮毛、粪便、口、眼、鼻分泌物等反应，14d后颈椎脱臼法处死小鼠，进行解剖观察其心、肝、 肺、肾、胃、肠等内脏器官。4试验结果在急性毒性试验过程中，给药小鼠均无一死亡，小鼠的饮食、活动、皮毛色泽、粪便、口、眼、鼻分泌物等无异常，14d后处死小鼠，肉眼观察其心、肝、肺、肾、胃、肠等内脏器官未有异常变化。5 结论结果表明，紫花地丁总酚提取物对昆明种小鼠的最大给药量> 23. 2g/kg，相当于临床用量的156倍，提示该药物在用于临床时毒性不大。实施例3紫花地丁总酚提取物对尿酸钠结晶(MSU)所致大鼠痛风性关节炎的作用1受试药物紫花地丁总酚提取物，同上；七叶内酯，纯度> 95% ；尿酸；消炎痛。2试验动物SD 大鼠，雄性，体重 200g士20g。3试验方法雄性SD大鼠56只，正常饲养1周后按体重随机分为8组(1)正常组，(2)模型对照组，⑶紫花地丁总酚高剂量组1. 42g/kg，(4)紫花地丁总酚中剂量组0. 71g/kg，(5) 紫花地丁总酚低剂量组0.36g/kg，(6)七叶内酯组142mg/kg，(7)阳性对照组消炎痛 10mg/kgo灌胃7天。于第3天灌胃前造模，⑵ ⑶组大鼠右侧踝关节腔内注射无菌2% MSU 0. anl，正常组注射生理盐水0. 2mL·在造模前、造模后1、3、6、9、48小时以皮尺测量右踝关节周长，排水法测量肿胀体积，以其与给药前的差值表示关节肿胀度。造模后M小时观察大鼠步态。于末次给药后2小时处死大鼠，取受试关节软组织，甲醛固定，光镜下观察局部病理组织学变化。4实验结果由表1、表2、表3可见，紫花地丁总酚提取物710mg/kg和七叶内酯14ang/kg灌胃给药，能明显改善MSU所致痛风大鼠的活动状态并抑制其关节肿胀，明显改善MSU所致大鼠痛风的踝关节囊滑膜组织，包括改善滑膜细胞变性、坏死；改善滑膜，纤维膜间质血管扩张、 充血、水肿；改善滑膜、纤维膜间质炎细胞浸润。表1紫花地丁总酚提取物对MSU诱导大鼠急性痛风的关节肿胀度的影响(χ士SD， η = 8)
权利要求
1.紫花地丁总酚提取物用于制备治疗或预防高尿酸血症的药物的用途。
2.权利要求1的用途，其中高尿酸血症是痛风性关节炎、高血尿酸肾病或尿路结石。
3.权利要求1的用途，其中紫花地丁总酚提取物中，以七叶内酯计，紫花地丁总酚含量大于50%。
4.权利要求1的用途，其中紫花地丁总酚提取物采用以下方法制得取紫花地丁全草， 用50 80%的乙醇水溶液热回流或渗漉法提取；提取液减压浓缩；用水稀释浓缩液，取上清液过大孔树脂柱吸附，用水或10 25%的酒精洗涤吸附柱，之后用30 90%的乙醇洗脱柱，收集洗脱液，干燥得紫花地丁总酚提取物。
全文摘要
本发明涉及天然药物领域，具体涉及紫花地丁总酚提取物治疗高尿酸血症的医药用途。药理试验证明紫花地丁总酚提取物灌胃给药，能明显减轻尿酸钠结晶所致大鼠痛风性关节炎的关节肿胀，改善大鼠步态。对尿酸酶抑制剂、腺嘌呤和乙胺丁醇所致小鼠高尿酸血症及尿酸性肾病有显著抑制作用，但对尿量无明显影响，因此，紫花地丁总酚提取物具有促尿酸排泄功能而无利尿作用，这种功能的单一性使得医生在临床应用时，无需考虑利尿因素对患者的影响。
文档编号A61P19/02GK102210787SQ201110157059
公开日2011年10月12日 申请日期2011年6月10日 优先权日2011年6月10日
发明者吴刚, 朱婕, 洪俊丽, 王强, 王 琦, 秦晓颖, 秦民坚 申请人:中国药科大学