专利名称：一种从红枣中提取熊果酸的方法
技术领域：
本发明涉及一种天然产物提取方法，具体而言涉及一种从红枣中提取熊果酸的方法。
背景技术：
熊果酸(Ursolic Acid, UA)，又名乌索酸、乌苏酸，属α -香树脂醇型五环三萜类化合物。纯净的熊果酸为白色针状晶体，熔点为285-287°C，易溶于二氧六环、吡啶，可溶于甲醇、乙醇，微溶于丙酮，微溶于苯、氯仿、乙醚。在自然界中熊果酸主要分布在女贞子、山楂、夏枯草、车前草和苦丁茶等多种植物中，在医药、食品、保健和化妆品等领域获得了广泛的应用。熊果酸具有广泛的生物活性，尤其在抗肿瘤、抗氧化、抗菌抗病毒、保肝和美容护肤等方面的作用显著，值得重视。研究发现，熊果酸具有抗致癌、抗促癌、诱导F9畸胎瘤细胞分化和抗肿瘤血管形成作用。其主要通过以下几方面进行作用熊果酸能抗突变、抑制癌变的启动、能直接杀伤肿瘤细胞，具有肿瘤逆转作用及抗侵袭性、诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成，从而抑制癌变的形成；并且对多种肿瘤细胞体内、外均有抑制作用，并可以减少放疗、化疗之后对造血系统的损害。熊果酸对结肠癌、黑色素瘤和胃癌等多种细胞系具有抑制作用，并诱导其凋亡，其机制可能是通过影响细胞周期及癌相关基因的表达而实现的。如于丽波等研究发现熊果酸可明显抑制卵巢癌细胞生长，并诱导细胞凋亡，其主要机制与调节Bcl-2和Bax的蛋白表达有关。氧化作用是造成人类衰老现象的重要原因之一，在防止人体内不良胆固醇(LDL) 的氧化，保持血管的年轻化方面，熊果酸扮演着重要角色。熊果酸具有明显的抗氧化功能，因而被广泛地用作医药和化妆品原料。抗氧化作用对人体抗衰老和皮肤祛斑、祛色素、美容都有积极作用。对于熊果酸的抗氧化作用有人曾作过研究，发现熊果酸对超氧阴离子和羟自由基有明显的清除作用，对超氧阴离子的最高清除率可达88. 42%，但是清除作用弱于同浓度下的Vc。熊果酸对羟自由基的清除作用最高可达86. 35%，并且强于同浓度下的甘露醇，具有明显的抗氧化性。熊果酸有保护糖尿病大鼠血管损伤的作用，机制可能与熊果酸抗氧化，从而抑制NF-kB的激活有关。熊果酸能导致细胞生存能力下降，能抑制G+和G_菌以及抑制真菌生长。对杀灭和抑制变形链球菌组及牙周病原菌具有明显的效果。熊果酸能抑制HIV-I蛋白酶活性，增强免疫功能，发挥抗HIV的作用。专利CN101543499针对目前金黄色葡萄球菌耐药性严重的问题，对熊果酸进行了体外和体内抗菌试验。体外试验特别是体外协同试验，发现其与青霉素的共同作用下对耐药金黄色葡萄球菌有较好的抗菌活性，最低抑菌浓度为1. 13ug/disC，并且体内试验也表明熊果酸在协同作用下也有较好的活性。
此外，熊果酸还具有抗疟作用，能使疟原虫的增殖明显减少。熊果酸对急性实验性肝损伤有明显的保护作用，临床表现为血清谷丙转氨酶含量下降、肝细胞变性、坏死明显减轻，可迅速恢复肝功能的作用，具有见效快、疗程短、效果稳定的特点。熊果酸可有效治疗病毒性肝炎，是抗病毒性肝炎药的主要活性成分。在制备治疗病毒性肝炎药物中，熊果酸不论单独使用，还是与其它药物配合使用，只要制备成药品或保健药品均具有显著的作用。皮肤中L-羟脯氨酸的含量随着熊果酸剂量的增大而增大，熊果酸内服可促进皮肤胶原蛋白的合成，使皮肤区域年轻化转变。熊果酸具有吸湿性和保湿型，但就保湿型而言，熊果酸就可以作为化妆品的新材料。含有熊果酸的化妆品能够有效地减缓皮肤的老化以及凉血止血，通过促进血液循环排除体内毒素，可以达到祛除青春痘及各种斑点的功效。同时还能够激活细胞的酶，保持表皮细胞的生理活性和促进细胞的代谢，起到全面营养肌肤和瞬间美白皮肤的效果。山茱萸肉可做为加工保健食品的良好资源，而熊果酸在山茱萸中是主要的功能性成分。但是，由于山茱萸用于大规模的食品加工时间较短，加工难度较大，市场上有关山茱萸保健食品很少。目前，主要有山茱萸酒、山茱萸饮料、山茱萸果酱、罐头等。山茱萸保健酒的生产具有较为悠久的历史，一般是将山茱萸冷浸而制成。山茱萸保健酒不像普通药酒那样只是针对特殊人群，它是具有山茱萸独特香味的低酒度果酒；同时还含有马钱素、熊果酸等功能性成分，起到调节机体、延缓衰老等功用，老少皆宜。此外，熊果酸还具有明显的抗辐射、镇静、抗溃疡、抗动脉粥样硬化以及安定、降温、协同戊巴比妥的催眠作用等多种生物学效应。熊果酸以其广泛的生物活性备受瞩目，吸引了越来越多的研究工作者介入这方面的研究工作。专利CN101318985公开了一种熊果酸的制备方法及其产品和应用。将熊果酸与罗汉果甜甙、蜂蜜混合可制成具有保健作用的罗汉果蜜膏。所制成的罗汉果蜜膏不仅具有罗汉果甜甙的清香、甜厚感及蜂蜜的淡雅香气，口感清甜，醇厚香浓，而且具有镇静、清热润肺、润肠、通便、改善睡眠的作用，是集营养和保健于一体的优质保健品。
发明内容
为了能够获得天然熊果酸提取物，本发明采用如下的技术方案本发明一方面涉及一种从红枣中提取熊果酸的方法，其特征在于包括如下步骤红枣洗净烘干，粉碎，称取红枣干粉，再加入红枣质量20倍乙醇水溶液作为提取溶剂；然后，将溶液移入微波反应器，设定微波控制温度为60-80°C、功率为200-400W、 微波作用时间为80-100S，然后冷却，然后重复微波反应和冷却操作1-10个循环，提取液进行离心，然后将上清夜减压过滤，收集滤液，滤液减压蒸馏得到熊果酸浸膏；最后，浸膏用蒸馏水和石油醚洗涤，过滤，再用无水乙醇溶解浸膏，加入活性炭脱色，重结晶，抽滤，得到熊果酸提取物。在本发明的一个优选实施方式中，其特征在于乙醇水溶液为80%乙醇水溶液。本发明还涉及由上述提取方法提取得到的熊果酸提取物。
本发明还涉及上述熊果酸提取物在制备药物、保健品或化妆品中的应用，所述的药物优选是指抗肿瘤药物、抗菌药物、抗病毒药物或治疗肝炎的药物；所述的化妆品优选是指具有抗衰老、抗氧化和/或保湿攻效的化妆品。采用本发明的提取方法所得到的熊果酸提取物提取效率高，所得产品纯度高。
图1 标准品的紫外光谱；图2 红枣提取物的紫外光谱。
具体实施例方式实施例1 首先，将落地红枣洗净，50°C烘干至恒重，粉碎过60目筛。称取红枣干粉末于烧瓶中，再加入红枣质量20倍，体积分数为80 %乙醇水溶液(80mL无水乙醇与20mL 蒸馏水互溶)作为提取溶剂。然后，将烧瓶移入微波反应器，设定微波控制温度为70°C、功率为300W、微波作用时间为90s，固定转速搅拌，待反应器停止后，取出烧瓶常温下冷却20min后。继续在相同设定条件下微波反应，累计每次微波作用时间达90s。提取液按转速3000r/min离心20min， 取出离心管，将其中的提取上清液倾入一容器中，然后进行减压过滤，收集滤液。随后，将滤液减压蒸馏，并回收乙醇，得到熊果酸浸膏。最后，浸膏用蒸馏水洗涤2次，石油醚洗涤3次，过滤。再用无水乙醇溶解浸膏，加入活性炭脱色2次，重结晶，抽滤，得到熊果酸提取物。熊果酸提取物的分析鉴定精密称取熊果酸标准品10mg，用无水乙醇定容于IOOmL容量瓶中，即得0. lmg/mL 的熊果酸标准溶液。精密吸取熊果酸标准溶液1. OmL置于具塞试管中，加热挥去溶剂后，加 5%香草醛-冰醋酸0. 3mL,高氯酸0. 7mL, 60°C水浴中加热15min，取出冷却后移至5mL具指试管中，乙酸乙酯定容，摇勻后用紫外分光光度计在548nm处测定吸光度，同时以试剂空白作参比，如图1所示。精密称取熊果酸提取物10mg，方法同上，结果如图2所示。由图1可知，熊果酸的最大吸收波长λ max在MSnm附近。由图2可知，熊果酸晶体在M5nm处出现明显的紫外吸收，由此可以判断出枇杷叶中的提取物为熊果酸。经鉴定，采用本发明的提取方法雄果算的收率为2. 5-3. Omg/g ；纯度80 90%当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
权利要求
1.一种从红枣中提取熊果酸的方法，其特征在于包括如下步骤红枣洗净烘干，粉碎，称取红枣干粉，再加入红枣质量20倍乙醇水溶液作为提取溶剂； 然后，将溶液移入微波反应器，设定微波控制温度为60-80°C、功率为200-400W、微波作用时间为80-100S，然后冷却，然后重复微波反应和冷却操作1-10个循环，提取液进行离心，然后将上清夜减压过滤，收集滤液，滤液减压蒸馏得到熊果酸浸膏；最后，浸膏用蒸馏水和石油醚洗涤，过滤，再用无水乙醇溶解浸膏，加入活性炭脱色，重结晶，抽滤，得到熊果酸提取物。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于乙醇水溶液为80%乙醇水溶液。
3.根据权利要求1或2所述的提取方法提取得到的熊果酸提取物。
4.根据权利要求3所述的熊果酸提取物在制备药物、保健品或化妆品中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述的药物是指抗肿瘤药物、抗菌药物、抗病毒药物或治疗肝炎的药物。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述的化妆品是指具有抗衰老、抗氧化和/ 或保湿攻效的化妆品。
全文摘要
本发明公开了一种从红枣中提取熊果酸的方法，其特征在于包括如下步骤红枣洗净烘干，粉碎，称取红枣干粉，再加入红枣质量20倍乙醇水溶液作为提取溶剂；然后，将溶液移入微波反应器，设定微波控制温度为60-80℃、功率为200-400W、微波作用时间为80-100s，然后冷却，然后重复微波反应和冷却操作1-10个循环，提取液进行离心，然后将上清夜减压过滤，收集滤液，减压蒸馏得到熊果酸浸膏；最后，浸膏用蒸馏水和石油醚洗涤，过滤，再用无水乙醇溶解浸膏，加入活性炭脱色，重结晶，抽滤，得到熊果酸提取物。采用本发明的提取方法所得到的熊果酸提取物提取效率高，所得产品纯度高。
文档编号A61K31/56GK102321144SQ20111020726
公开日2012年1月18日 申请日期2011年7月25日 优先权日2011年7月25日
发明者刘军海, 李志洲, 聂峰, 葛红光 申请人:陕西理工学院