一种防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于水产用中医药技术领域，具体涉及一种防治淡水鱼细菌性疾病的中草 药发酵提取液及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 淡水鱼类细菌性疾病一年中有两个高发阶段，即春季、秋季。由于鱼体皮肤能分泌 粘液，鱼体内又有一定的免疫力，细菌通常难以侵入。但是随着水产养殖业养殖面积和规 模的不断扩大，水体中鱼类密度增加、水域环境产生了一定程度的污染，再加之饲养管理不 当、鱼体有损伤抵抗力降低时，细菌性鱼病就会时常发生和流行，导致鱼类大量死亡。我国 淡水鱼的细菌性鱼病，主要有粘细菌性烂鳃病、白皮病、赤皮病、肠炎、打印病等，多数可防 治。
[0003] 目前，在治疗淡水鱼细菌性疾病方面仍然多以化学药物为主，在防病治病方面作 出了不可磨灭的贡献，但长期的使用不仅使病原菌产生耐药性，从而引起内源性感染及二 重感染，而且其在水产品内残留、富集对人类健康也是一种威胁。所以，减少化学药物特别 是抗生素的使用已经成为水产养殖行业迫在眉睫的事情。中草药具有抗菌、抗病毒及促进 免疫功能，提高机体抗病能力等作用，中药副作用少，毒性低，不产生抗药性，所以无残留、 无污染的中草药越来越受到重视，应用也日益广泛。现在应用中草药防治鱼病的有效性已 在生产实践所证实，应用中草药防治鱼病也是我们发展绿色水产业的需要，是人类自身健 康的需要，因而有看美好的应用前景。芽孢杆菌是一种益生菌，其可以在鱼类肠道和体表固 定并大量繁殖，抑制不良微生物的增殖，提高鱼类的免疫力，有效防止肠道及体表疾病的发 生，促进养殖动物生长。同时芽孢杆菌在水中增殖后可以产生许多胞外酶能够降解和转化 有机物，减少或消除氨氮、硫化氢、亚硝酸盐等有害物质，改善水质。
[0004] 近年来，由于水产生态健康养殖的需要，人们加大了绿色、环保药物和添加剂的研 究力度，微生态制剂和中草药制剂在水产养殖中使用，均可以促进养殖动物的生长，增强其 抵抗疾病的能力。本发明通过利用芽孢杆菌对中草药提取液进行发酵得到发酵提取液的方 法，可以使二者使用起到相辅相成的作用，中草药能够促进益生菌的增殖，益生菌可以促进 中草药的吸收和利用，从而更有利于淡水鱼类的养殖。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液，该中草 药发酵提取液属于天然药物，无毒副作用，主要用于治疗淡水鱼主要细菌性传染病，治疗成 本低、治愈率高、安全、无毒副作用、使用方便。
[0006] 为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案： 本发明提供了一种防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加 入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：黄连2~5、黄 柏3~6、地锦草5~10、连翘1~2和甘草1~3。
[0007] 根据上述的防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入 芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：黄连2~4、黄柏 3~4. 5、地锦草8~10、连翘1~1. 6和甘草2. 4~3。
[0008] 根据上述的防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入 芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：黄连4~5、黄柏 4. 5~6、地锦草5~8、连翘1. 6~2和甘草1~2. 4。
[0009] 根据上述的防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入 芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：黄连5、黄柏4、 地锦草8、连翘2和甘草1。
[0010] 所述的防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液的制备方法，具体步骤如下： (1) 将中药黄连、黄柏、地锦草、连翘和甘草烘干、粉碎为40~80目粉末备用； (2) 按照上述配方取步骤（1)中药粉末加入8~10倍量中药粉末量的水煎煮提取，煎 煮1~2小时过滤得滤液；药渣加入8~10倍药渣量的水煎煮提取，煎煮1~2小时过滤 得滤液，合并滤液备用； (3 )按重量比取芽孢杆菌菌液加入步骤（2 )所得滤液中，芽孢杆菌菌液与中药液的重量 比1: (40~60)，密闭厌氧发酵，分装，即得防治淡水鱼病毒性疾病的中草药发酵提取液。
[0011] 所述芽孢杆菌菌液的制备方法如下：取芽孢杆菌菌种进行斜面菌种培养，将 斜面培养产生的悬浮液在对应的培养基内厌氧扩大培养，至对数生长期菌落数高于 1.0 XIoiidCFUAiL时止，得对应的菌液。
[0012] 步骤（1)烘干温度为60~80°C。
[0013] 步骤（3)中发酵温度为30°C~37°C，发酵时间为24~48h。
[0014] 芽孢杆菌的培养基为营养琼脂培养基。
[0015] 本发明中各原料功效简述如下： 黄连：又名鸡爪连、川连、味连、土黄连，多年生草本植物。以根状茎入药，有抑菌、消炎、 解毒功能，主要用于防治细菌性肠炎。
[0016] 黄柏：又名案木、聚皮、元柏，落叶乔木。以树皮入药，有抑菌、解毒、消肿、止痛等功 能，可防治草鱼出血病。
[0017] 地锦草：又名奶浆草、血见愁、铺地红等，一年生草本。以全株入药，有广谱抗菌、止 血散疯、清热解毒作用，主要防治肠炎、烂鳃病。
[0018] 连翘：又名黄花条、连壳、青翘、落翘等，主要功效为清热，解毒，散结，消肿。
[0019] 甘草：补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。
[0020] 芽孢杆菌：芽孢杆菌是一类好氧或兼性厌氧的革兰氏阳性细菌，在缺乏营养或遇 不良环境时可形成内生孢子。其应用到水产养殖能够减少病害发生；促进养殖动物生长； 改善养殖环境。
[0021] 与现有技术相比，本发明取得的有益效果： 1.本发明中草药发酵提取液属于天然药物，无毒副作用，药物中各个营养成分相互协 同、互为补充，具有抗微生物、抗病毒、抗寄生虫、抗真菌和提高免疫力的作用，能有效促进 鱼类的生长发育。
[0022] 2.本发明通过芽孢杆菌的加入可以与养殖环境中的有害藻类及水产致病菌竞 争，形成优势种群，抑制有害藻类及水产致病菌，有利于水产养殖，改善养殖环境，同时对水 溶性有机物分解也有重要的作用。
[0023] 3.本发明采用中药与益生菌的结合有显著的经济效益和社会效益。
[0024] 用法用量:泼洒法，预防用药，本品每瓶1000 ml泼洒范围为1000ml/10m2,连用2~3 天。治疗量加倍，连用5~8天。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合实施例对本发明进一步的描述，但并不限制本发明的内容。
[0026] 实施例1 一种防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌 液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：黄连2~5、黄柏3~6、地锦草 5~10、连翘1~2和甘草1~3。
[0027] 所述的防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液的制备方法，具体步骤如下： (1) 将中药黄连、黄柏、地锦草、连翘和甘草烘干、粉碎为40~80目粉末备用； (2) 按照上述配方取步骤（1)中药粉末加入8~10倍量中药粉末量的水煎煮提取，煎 煮1~2小时过滤得滤液；药渣加入8~10倍药渣量的水煎煮提取，煎煮1~2小时过滤 得滤液，合并滤液备用； (3 )按重量比取芽孢杆菌菌液加入步骤（2 )所得滤液中，芽孢杆菌菌液与中药液的重量 比1: (40~60)，密闭厌氧发酵，分装，即得防治淡水鱼病毒性疾病的中草药发酵提取液。
[0028] 所述芽孢杆菌菌液的制备方法如下：取芽孢杆菌菌种进行斜面菌种培养，将 斜面培养产生的悬浮液在对应的培养基内厌氧扩大培养，至对数生长期菌落数高于 1.0 XIoiidCFUAiL时止，得对应的菌液。
[0029] 实施例2 一种防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌 液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：黄连5、黄柏4、地锦草8、连 翘2和甘草1。
[0030] 本实施例的制备方法与实施例1相同。
[0031] 实施例3 一种防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌 液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：黄连3、黄柏6、地锦草5、连 翘1和甘草2。
[0032] 本实施例的制备方法与实施例1相同。
[0033] 实施例4 一种防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌 液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：黄连2、黄柏3、地锦草5、连 翘2和甘草2。
[0034] 本实施例的制备方法与实施例1相同。
[0035]实施例5 一种防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌 液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：黄连3、黄柏4、地锦草6、连 翘1和甘草1。
[0036] 本实施例的制备方法与实施例1相同。
[0037] 实施例6 一种防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌 液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：黄连2. 5、黄柏4. 2、地锦草 6. 4、连翘1.2和甘草2. 2。
[0038] 本实施例的制备方法与实施例1相同。
[0039] 实施例7 一种防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌 液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：黄连3、黄柏5、地锦草7、连 翘1和甘草2。
[0040] 本实施例的制备方法与实施例1相同。
[0041] 实施例8 一种防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌 液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：黄连4、黄柏3、地锦草8、连 翘2和甘草2. 5。
[0042] 本实施例的制备方法与实施例1相同。
[0043] 实施例9 一种防治淡水鱼细菌性疾病的中草药发酵提取液