专利名称：一种大分子-顺铂复合物及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种大分子-顺钼复合物，并提供该复合物的制备方法与应用，属于抗癌药物的制备领域。
背景技术：
癌症己成为人类第二大致死病因，大量的人力、物力和财力已被投入到抗癌药物的开发上。目前世界上的抗癌药物己经超过上百种，在这些抗癌药主要有顺钼、紫杉醇、阿霉素和喜树碱等。这些用于临床治疗的大多数抗肿瘤药物对组织都具有很高的毒副作用、 且溶解度低、难以给药，副作用多等缺陷，因此在临床使用上有很大的局限性。
顺钼[cis-dichlorodiammin印Iatinum(II)，CDDP]为重金属络合物，在临床上广泛用于多种恶性肿瘤的治疗，是治疗癌症的首选药物之一，属周期非特异性抗癌药，抗癌谱广。顺钼杀伤肿瘤细胞的作用原理是与DNA交联连接形成相当稳定的复合物锁住DNA，造成DNA的损伤，破坏DNA的复制、转录，从而抑制DNA和RNA的合成。但因其溶解度低、无靶向性、在体内很快会和蛋白结合而失效，且钼半衰期很长，体内毒性大，尤其具有肾毒性、神经毒性、骨髓抑制和严重的胃肠道反应，因此在临床应用上仍受到很大限制。
为解决上述缺陷，有研究将其载于高分子载体上，使得顺钼可以靶向性输送到肿瘤组织(即被动靶向)，目前，国外报道的几种载体有微球体、纳米微粒、脂质体和微型胶囊等，它们均极大地提高了药物的生物利用率，有效地降低药物的毒副作用，但其仍存在稳定性差，药物无明显缓释性等缺点。
聚氨基酸是一种水溶性，生物降解，不含毒性的生物高分子。目前，聚氨基酸在医药领域中的应用较多，因其具有良好的生物亲和性和生物降解性，作为药物载体，可实现药物的缓释性、靶向性，提高药物水溶性，降低药物毒副作用，从而可以提高药物的疗效、 扩大药物的使用范围。叶海峰等(Haifeng Ye, Li Jin, Rongzhang Hu, et al.Poly(y , L-glutamic acid)-cisplatin conjugate effectively inhibits human breast tumor xenografted in nude mice [J]. Biomaterials, 2006, 27 (35) :5958-5965.)以 Y _ 聚谷氨酸作为载体连接顺钼，制备得聚谷氨酸-顺钼复合物；李文娟等(李文娟，冯震，薛晓敏，等。 Y-聚谷氨酸天冬氨酸-顺钼复合物的制备及其生物活性[J]中国医药生物技术，2010， 5(2) =98-104.)以Y-聚谷氨酸天冬氨酸作为载体连接顺钼，制备得Y-聚谷氨酸天冬氨酸-顺钼复合物，两者均得到较好的结果，顺钼的水溶性和毒性得到大大改善，但前者仅以小分子Y-聚谷氨酸作为载体，制备得的复合物载药量仅为9 12%，存在载药量低、载体用量大和释放率低的缺点，后者虽然有所改进，但复合物的载药量和顺钼的有效结合率仍较低，其顺钼有效结合率仅为30%。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种由聚氨基酸经小分子酸修饰后作为载体与顺钼通过离子键结合形成一种大分子-顺钼复合物，这样改善顺钼水溶性，降低其毒性的同时也增大了复合物的载药量和顺钼的有效结合率，并且改善了复合物中顺钼的释放行为。
本发明目的之二在于提供一种简单易行，安全有效的新型载体聚合物——聚氨基酸衍生物的制备方法。
本发明目的之三在于提供一种成本低廉，操作简单的大分子-顺钼复合物的制备方法。
本发明目的之四在于提供该大分子-顺钼复合物在抗肿瘤领域的应用。
因此，本发明提供一种大分子-顺钼复合物，其特征是，所述复合物由聚氨基酸用小分子修饰剂修饰得到聚氨基酸衍生物，再通过离子键与顺钼结合而得到，
其中所述的聚氨基酸包含但不局限于Y-聚谷氨酸(Y-PGA)、ε-聚赖氨酸 (ε "PL)、聚天冬氨酸(PASP)和聚精氨酸(PAA)，优选Y -聚谷氨酸(Y -PGA)和ε -聚赖氨酸(ε-PL)，其结构通式分别为
ηCOOH
其中，Y -PGA与ε -PL分子量为5 60KDa。
其中所述的小分子修饰剂为含两个以上羧基的酸或该酸的酯，主要包含L-谷氨酸、L-天冬氨酸、柠檬酸、氨基丙二酸、丙三酸等，以最常见为例，其结构式可以表示如下，但不限于此，其中η = 0、1、2、3。
hooc^LN^JT^COOHCOOHOHhooc'^LV^V^COOHCOOHCOOHH7NCOOHΗ,Ν-H2l /COOC2H5 C fCHn COOC2H5OHHOOC
COOHCOOH
Y-PGA的侧链羧基既可以用含游离羟基的酸修饰，也可以用含游离氨基的酸修饰，而ε "PL的侧链氨基因其需与游离羧基反应，因此，上述含三个以上游离羧基的修饰剂均可用来修饰ε-PL。
本发明中提供的经小分子修饰剂修饰后聚氨基酸的典型结构式表示如下，以 α-羟基多酸修饰Y-PGA和多酸修饰8^^为例，但不限于此，其中111 = 0、1、2、3。
权利要求
1.一种大分子-顺钼复合物，其特征是，所述复合物由聚氨基酸用小分子修饰剂修饰得到聚氨基酸衍生物，再通过离子键与顺钼结合而得到，其中聚氨基酸包含但不局限于 Y -聚谷氨酸、ε -聚赖氨酸、聚天冬氨酸、聚精氨酸，其中小分子修饰剂为含两个以上羧基的酸或该酸的酯，包含L-谷氨酸、L-天冬氨酸、柠檬酸、氨基丙二酸、丙三酸；所述复合物的分子量为40 70KDa。
2.如权利要求1中所述的复合物，其特征是顺钼与修饰后的聚氨基酸有多种结合方式，可以是成环结合，也可以是开环结合，其结合主要是通过顺钼中的氯离子与聚氨基酸衍生物的活性羧基反应来实现的。
3.如权利要求1中所述的复合物，其特征是选自以下复合物 Y-聚谷氨酸柠檬酸-顺钼复合物；Y-聚谷氨酸天冬氨酸-顺钼复合物； Y-聚谷氨酸氨基丙二酸顺钼复合物； ε-聚赖氨酸柠檬酸顺钼复合物； ε-聚赖氨酸丙三酸顺钼复合物； 聚天冬氨酸柠檬酸-顺钼复合物； 聚天冬氨酸谷氨酸顺钼复合物； 聚天冬氨酸氨基丙二酸顺钼复合物； 聚精氨酸柠檬酸顺钼复合物； 聚精氨酸丙三酸顺钼复合物。
4.权利要求1的复合物的制备方法，其特征是其中聚氨基酸衍生物的制备方法包括以下步骤(1)将聚氨基酸溶于反应溶剂中，在多肽缩合剂的作用下与小分子修饰剂进行反应， 通过聚氨基酸侧链羧基或氨基与小分子修饰剂中游离羟基、氨基或羧基的酯化或酰胺化作用，将小分子修饰剂连接于聚氨基酸上；(2)透析除去小分子物质，冷冻干燥得聚氨基酸衍生物。
5.如权利要求4中所述的制备方法，其特征是步骤(1)的反应溶剂可以是惰性有机溶剂，如DMSO，DMF或环己烷，也可以是纯水，优选纯水做反应溶剂；参与反应的多肽缩合剂可以是1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)，二环己基碳化二亚胺(DCC) ,N, N'-羰基二咪唑(⑶I)，N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHSS)，1-羟基-苯并-三氮唑(HOBT)，4- 二甲氨基吡啶(DMAP)，优选为EDCI与NHSS组合参与反应；小分子修饰剂与聚氨基酸(-C00H或-NH2)的摩尔比为0.5 1 5 1，优选比例为1 1 ；反应时间为 6h Mh，优选反应时间为Mh ；反应pH为7. 0 9. 0，优选为7. 5 8. 5。
6.权利要求1中所述复合物的制备方法，该方法包括(1)将顺钼与硝酸银在纯水中反应，对顺钼进行充分水化；(2)将顺钼与硝酸银的反应液离心取上清，得水化后的顺钼；(3)将聚氨基酸衍生物溶于水化后的顺钼溶液中，调节pH至7.0 9. 0，通过离子键将顺钼连于聚氨基酸衍生物上；(4)透析除去未反应的顺钼，冷冻干燥即得。
7.如权利要求6中所述复合物的制备方法，其特征是该方法中步骤(1)提供的顺钼水化反应，顺钼与硝酸银的摩尔比例为1 2;反应时间为12 36h，优选Mh;该反应需避光。
8.如权利要求6中所述复合物的制备方法，其特征是所述步骤(3)中顺钼与聚氨基酸衍生物的结合方式是离子键结合，顺钼与载体聚合物的摩尔比为1 1 5 1，优选为 5 1 ；该反应的pH为7.0 9.0，优选为7. 5 8.0 ；该反应的反应温度为25°C 37°C，优选为25°C ；该反应的反应时间为M 48h，优选为Mh。
9.如权利要求6中所述复合物的制备方法，其特征是所述步骤中提供的复合物的纯化方法既可以采用透析袋透析纯化，也可以采用离心浓缩管纯化。
10.权利要求1中所述的复合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种大分子-顺铂复合物及其制备方法与应用，本发明以聚氨基酸为原料，通过降解或纯化得到分子量合适的聚氨基酸载体，先用修饰剂小分子酸与其侧链活性基团进行反应，对其结构进行修饰，再把顺铂巧妙地连接到该聚合物上制备得载药复合物，并对该载药复合物的性质进行了研究，结果表明其性质明显优于现有报道，所制得复合物体内毒性低且无溶血性。
文档编号A61K33/24GK102499986SQ20111034786
公开日2012年6月20日 申请日期2011年11月7日 优先权日2011年11月7日
发明者吴建梅, 涂家生, 蒋薇薇 申请人:南京泛太化工医药研究所