一种鼻用型胰岛素制剂及制备方法

专利名称：一种鼻用型胰岛素制剂及制备方法
技术领域：
本发明涉及非注射型胰岛素技术领域。具体涉及一种鼻用型胰岛素制剂；并涉及该鼻用型胰岛素制剂的制备方法；同时还涉及该鼻用型胰岛素制剂的应用。
背景技术：
胰岛素的生理和药理胰岛素是一种由胰岛P细胞分泌的含有51个氨基酸的蛋白质激素，分子量为5808道尔顿，参与调节糖代谢，控制血糖水平。体内胰岛素绝对或相对不足可导致糖尿病，主要临床表现为“三多一少”(多饮、多尿、多食和体重下降)以及尿糖、 高血糖和多种并发症等。中国目前约有六千万糖尿病患者，其中很多人需要终生(如I型糖尿病患者)或长期频繁(如部分II型糖尿病患者)利用外源性胰岛素来调控血糖水平， 以防止血糖过高或过低引发的严重临床并发症。胰岛素的使用现状及问题胰岛素疗法的最常用给药方式为皮下注射。患者需要每日2-4次在餐前注射速效胰岛素，并辅以睡前注射适量中长效胰岛素。长期反复局部注射不但容易形成瘢痕组织和过敏反应，影响药物的吸收，而且会使患者感到疼痛、产生厌烦情绪，甚至不遵医嘱而导致并发症，严重时可危及生命。长期以来研究者一直试图开发安全、方便、有效的非注射给药方式的胰岛素制剂。非注射型胰岛素制剂的种类和不足之处目前提出的替代性给药方案包括经肺、 透皮、口服、经肠、舌下和经鼻等途径给予治疗性胰岛素制剂。肺部吸入法首推美国辉瑞公司的Exubera肺部干粉吸入剂。但它上市后不久即被撤回，主要是考虑到长期使用对肺功能的潜在损伤，且其相对生物利用率仅为皮下注射的10-20%。虽然患者较易接受口服肠溶制剂，但能够完全耐受蛋白水解酶的胰岛素制剂尚未开发出来，而且胰岛素自身难以透过消化道粘膜上皮。其他一些替代性给药方案也有各自的缺点。例如直肠给药不卫生不方便、透皮给药的生物利用率极低、舌下制剂中含有潜在不良的外来化合物等。胰岛素经鼻给药的可行性和关键点已知鼻腔粘膜表面积达150平方厘米，且大量细微绒毛可增加有效吸收面积。如果药物能够渗透鼻腔粘膜上皮细胞，则可迅速地被鼻腔粘膜层内丰富的毛细血管和淋巴管吸收，比皮下注射方式更快地进入全身血液循环。由于胰岛素渗透鼻腔粘膜上皮细胞的能力有限，故普通胰岛素经鼻给药的相对生物利用率极低(仅为皮下注射的1_2%)。因此，增加鼻腔粘膜上皮细胞对胰岛素的通透性是研发胰岛素鼻内给药制剂的关键点。各种胰岛素经鼻给药制剂的专利检索经“中国国家知识产权局专利检索”， 发现9项与鼻用型胰岛素制剂相关的专利申请。申请人为中国上海医药工业研究院 (200510028990. 0 ；200510028991. 5 ；200710173622. 4 ；200810035771. 9)、日本株式会社 DDS研究所(01801146. 2)和产业化研究株式会社(02804546. 7)、以及美国纳斯泰克制药公司(200680047851. 5)和 CPEX 药品公司(200780028627. 6 ；200980121227. 9)。他们分别使用多孔球状碳酸钙、结晶纤维素多聚体、油脂、乳化剂、增溶剂、大环类渗透剂和表面活性剂等化学制剂来增加胰岛素渗透鼻腔粘膜上皮细胞的能力。由于这些外来化合物及代谢产物
4大多不存在于正常机体内，它们对鼻粘膜的潜在刺激性和进入体内后可能产生的慢性毒性颇值得关注。此外，这些发明专利申请说明书要么未公布其胰岛素经鼻给药制剂的相对生物利用率，要么所得到的相对生物利用率很低，结果导致有效治疗剂量与最低中毒剂量之间的安全范围很小。例如，多孔球状碳酸钙/胰岛素制剂的相对生物利用率仅为5. 69%。 这些发明尚未能满足糖尿病临床治疗的要求。

发明内容
本发明的目的是在于提供一种鼻用型胰岛素制剂。该制剂主要由细胞渗透肽、胰岛素和液相载体三种原料组成，为一种以鼻部给药方式将治疗用胰岛素输入患者体内的复合制剂。其优点是制剂中的胰岛素易于透过鼻腔粘膜屏障，相对药物吸收率(血胰岛素浓度)约80%，生物利用率(降血糖效应)达60%以上，远高于目前在研的其它非注射型胰岛素制剂。本发明的另一个目的是在于提供一种鼻用型胰岛素制剂的制备方法。该制剂的主要制备步骤是将细胞渗透肽和胰岛素以恰当浓度溶于液相载体。操作安全简便，重复性非常好，质量控制容易。本发明的再一个目的是在于提供一种鼻用型胰岛素制剂在调控血液中葡萄糖水平中的应用。可用鼻内喷雾给药器将治疗剂量的该制剂施布于患者的鼻腔粘膜表面，使用方便，无疼痛感，对鼻腔粘膜无刺激，体内可快速降解为氨基酸，安全性高。为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施本发明的技术构思是许多具有潜在治疗作用的生物大分子难以用于临床，究其原因是细胞膜对这些分子的通透性很低。过去10多年来，多种细胞渗透肽作为一类传递系统相继被开发出来，它们具有穿过哺乳动物细胞膜的能力，且不受能量和受体的约束，成为促进或携带多种药物分子(包括化学小分子、生物大分子和纳米颗粒等受载物)跨膜转运的新工具。细胞渗透肽是由几个到二十几个氨基酸组成的多肽分子，含有数个碱性氨基酸和亲水(极性)/疏水(非极性)两性基团。它们能以非共价键形式与受载物形成稳定的复合物，帮助后者以高效无害的方式透过组织上皮细胞进入体内，发挥生物学效应。此外，进入体内的细胞渗透肽很快被蛋白酶降解为普通的氨基酸分子，而不产生有害的代谢产物。 细胞渗透肽的研究进展极大地加快了质粒DNA、寡核苷酸、SiRNA、肽核酸、肽和蛋白质以及脂质体纳米颗粒等生物大分子类药物的开发和应用。申请人将31种细胞渗透肽及类似物与各种胰岛素在不同条件下进行反应，得到各种各样的组合物。然后经过大量动物实验，测试每一组合物经鼻给药的药物吸收率和生物利用率，筛选优化出一类鼻用型胰岛素制剂。本发明要解决的技术问题是提供一种具有高生物利用率、无粘膜刺激性和慢性毒性的鼻用型胰岛素制剂。一种可供治疗用的鼻用型胰岛素制剂，它由下述溶于液相载体中的原料共同组成细胞渗透肽 0. 02-2纳摩尔/微升液相载体；胰岛素0. 001-0. 5国际单位/微升液相载体；该胰岛素制剂是一种以鼻部给药方式将治疗用胰岛素输入患者体内的复合制剂， 主要成分为液相载体、胰岛素和细胞渗透肽。具体描述如下
I、所述的制剂中液相载体为(但不限于)医用无菌水、生理盐水、磷酸缓冲液或人工脑脊液，PH值为6. 5-7. 5，其配制方法如下I)生理盐水取氯化钠9克，加水至1000毫升。2)磷酸缓冲液将0. 2摩尔/升的磷酸氢二钠水溶液610毫升与0. 2摩尔/升的磷酸二氢钠水溶液390毫升混匀，即成0. 2摩尔/升的磷酸缓冲液1000毫升，pH7. O。3)人工脑脊液取氯化钠6. 279克，氯化钾0. 216克，氯化钙0. 353克，氯化镁 0. 488克，碳酸氢钠I. 932克，葡萄糖0. 6克，磷酸氢二钠0. 358克，加水至1000毫升，通入含95%氧与5%二氧化碳混合气体至饱和，pH7. 3-7. 4。2、所述的制剂中胰岛素为具有生物活性(能调节血糖水平)的胰岛素，例如(但不限于)天然胰岛素、人工胰岛素、胰岛素前体、胰岛素类似物或胰岛素代谢物。3、所述的制剂中细胞渗透肽由CS936X多肽合成仪制备，它是一类含有12_22个氨基酸的多肽分子，其中精氨酸和赖氨酸是维持细胞渗透功能的重要成分。该细胞渗透肽的第一种基本形态为Arg Trp Phe Lys He Gln Met Gln He Arg Arg Trp Lys Asn Lys Lys在不改变精氨酸和赖氨酸位置的情况下，上述基本形态的细胞渗透肽可调整为第二种基本形态的细胞渗透肽Arg Gln He Lys He Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys以上两种基本形态的细胞渗透肽序列可进一步调整如下(但不限于下例)I)将氨基端前半段与羧基端后半段的位置互换后，上述基本形态的细胞渗肽序列可调整为He Arg Arg Trp Lys Asn Lys Lys Arg Trp Phe Lys He Gln Met Gln ;或Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys Arg Gln He Lys He Trp Phe Gln2)经逆向排序，上述基本形态的的细胞渗透肽序列可调整为Lys Lys Asn Lys Trp Arg Arg He Gln Met Gln He Lys Phe Trp Arg ;或Lys Lys Trp Lys Met Arg Arg Asn Gln Phe Trp He Lys He Gln Arg3)将精氨酸与赖氨酸互换，上述基本形态的细胞渗透肽序列可调整为Lys Trp Phe Arg He Gln Met Gln He Lys Lys Trp Arg Asn Arg Arg ;或Lys Gln He Arg He Trp Phe Gln Asn Lys Lys Met Arg Trp Arg Arg4)在上述基本形态的细胞渗透肽的羧基端，加上I至6个甘氨酸或非特定氨基酸， 可形成含有17-22个氨基酸的细胞渗透肽Arg Trp Phe Lys He Gln Met Gln He Arg Arg Trp Lys Asn Lys Lys加上 1-6 个Gly或非特定氨基酸；或Arg Gln He Lys He Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys 加上 I 6个Gly或非特定氨基酸。5)在上述基本形态的细胞渗透肽的羧基端，加上I至6个精氨酸或非特定氨基酸Arg Trp Phe Lys He Gln Met Gln He Arg Arg Trp Lys Asn Lys Lys加上 1-6 个Arg或非特定氨基酸；或Arg Gln He Lys He Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys加上 1-6个Arg或非特定氨基酸。6)在上述基本形态的细胞渗透肽的羧基端，加上I至6个非特定的氨基酸Arg Trp Phe Lys He Gln Met Gln He Arg Arg Trp Lys Asn Lys Lys加上 1-6 个非特定氨基酸；或Arg Gln He Lys He Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys加上 1-6
个非特定氨基酸。7)从上述基本形态的细胞渗透肽中，去掉1-4个氨基酸Arg Trp Phe Lys He Gln Gln Arg Arg Trp Lys Asn Lys Lys ;或Arg Gln He Lys He Trp Gln Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys8)将上述各种细胞渗透肽中的30%氨基酸进行调整之后，所形成的新的细胞渗透肽。一种可供治疗用的鼻用型胰岛素制剂，它由下述溶于液相载体中的原料共同组成 (较好范围)细胞渗透肽 0. 05-1. 0纳摩尔/微升液相载体胰岛素0. 005-0. 4国际单位/微升液相载体一种可供治疗用的鼻用型胰岛素制剂，它由下述溶于液相载体中的原料共同组成 (优选范围)细胞渗透肽 0. 1-0. 6纳摩尔/微升液相载体胰岛素0. 015-0. 3国际单位/微升液相载体一种可供治疗用的鼻用型胰岛素制剂，它由下述溶于液相载体中的原料共同组成 (最好范围)细胞渗透肽 0. 2-0. 4纳摩尔/微升液相载体胰岛素0. 03-0. 2国际单位/微升液相载体一种可供治疗用的鼻用型胰岛素制剂，它由下述溶于液相载体中的原料共同组成 (最佳值)细胞渗透肽 0. 3纳摩尔/微升液相载体胰岛素0. I国际单位/微升液相载体一种可供治疗用的鼻用型胰岛素制剂的制备方法，其步骤是I、在室温(22±2°C，以下相同)下，准确称取200国际单位的胰岛素粉末，置于一支5晕升的小试管内；2、将200微升0. I当量的盐酸溶液缓慢地加入上述小试管内，轻摇，溶解胰岛素粉末；3、然后加入I. 6毫升液相载体进行稀释，轻摇混匀；4、用200微升0. I当量的氢氧化钠将上述含有胰岛素的溶液调至pH6. 8-7. 2 ；5、另外准确称取600纳摩尔的细胞渗透肽，置于另一支5毫升的小试管内；6、用微量移液器将上述胰岛素溶液缓慢地转移至含有细胞渗透肽的小试管内，轻摇混匀30分钟；7、用不吸附蛋白质的0. 45微米孔径的滤膜过滤上述含有细胞渗透肽的胰岛素溶液；
8、将过滤后的鼻用型胰岛素制剂收集到一密封的无菌给药器内；9、置于低温(4±1°C )保存备用；或置于冷冻(_20°C或_80°C )长期保存。—种可供治疗用的鼻用型胰岛素制剂的应用方法，其步骤是I、将鼻用型胰岛素制剂置于鼻内喷雾式或滴注式给药器中；2、将治疗剂量的胰岛素制剂施布于患者的鼻腔粘膜表面；3、每次施布的制剂体积为100(50-200)微升；4、每次施布的制剂中，胰岛素剂量为10(5-20)国际单位；5、每次施布的制剂中，细胞渗透肽剂量为30(15-60)纳摩尔；6、于施布前后，定时监测血糖水平。技术特征本发明的鼻用型胰岛素制剂中含有由特定氨基酸序列组成的细胞渗透肽，它可高效地帮助胰岛素穿透鼻腔粘膜上皮细胞进入全身血液循环，调控血糖水平。作为一种全新的胰岛素经鼻吸收促进剂，本发明鼻用型胰岛素制剂中的细胞渗透肽与其它细胞渗透促进剂相比，具有完全不同的化学结构和作用机理，可使制剂中的胰岛素产生高得多的药物吸收率和生物利用率。该细胞渗透肽和鼻用型胰岛素在透过鼻腔粘膜上皮细胞时，以及在进入全身血液循环后，具有如下技术特征。I、细胞渗透肽结构与转运胰岛素的能力相关本发明所用两种基本形态的细胞渗透肽经过适当调整(包括重新排序、加长或缩短)后，其胰岛素制剂的相对药物吸收率和相对生物利用率有一定程度(10-30%)的变化。2、细胞渗透肽浓度与胰岛素跨膜转运效率相关当细胞渗透肽在鼻用型胰岛素制剂中的浓度范围为0. 02-2纳摩尔/微升时，血中胰岛素水平与细胞渗透肽浓度呈正相关。 考虑到成本与效益关系以及制剂中各种成分配比，细胞渗透肽浓度的最好范围为0. 2-0. 4 纳摩尔/微升。3、细胞渗透肽可快速转运各种胰岛素将细胞渗透肽分别与不同的重组人胰岛素、胰岛素类似物或天然猪胰岛素组合，进行动物实验。结果表明这几种不同组合物经鼻给药十分钟后，血中胰岛素水平明显升高，三十分钟开始产生显著的降血糖效应。4、鼻用型胰岛素制剂可产生较高的胰岛素相对药物吸收率与相同剂量的实验动物皮下或腹腔注射相比，细胞渗透肽浓度为0. 2-0. 4纳摩尔/微升的鼻用型胰岛素制剂可产生高达80%的相对药物吸收率。5、鼻用型胰岛素制剂可产生较高的胰岛素相对生物利用率与相同剂量的实验动物皮下或腹腔注射相比，细胞渗透肽浓度为0. 2-0. 4纳摩尔/微升的鼻用型胰岛素制剂可产生高达60%的相对生物利用率。6、细胞渗透肽可在体内迅速被降解而失活经静脉给药后，同位素标记的细胞渗透肽在血液循环中的半衰期小于60分钟，主要经肝脏和肾脏降解代谢。7、细胞渗透肽可溶于多种液相载体在室温下，细胞渗透肽可单独溶于pH值为中性(6. 5-7. 5)的等渗生理盐水或磷酸缓冲液；亦可与治疗剂量的胰岛素混溶于上述液相载体。8、细胞渗透肽可在低温下长期保存细胞渗透肽与胰岛素的混合应用液在低温 (4°C )下存放二个月，其生物学活性无明显改变。
9、鼻用型胰岛素制剂未对鼻腔粘膜上皮细胞产生刺激性鼻用型胰岛素制剂未影响离体粘膜组织纤毛的完整性和运动；在体实验发现经鼻给药对鼻腔粘膜无刺激，未改变鼻腔粘膜上皮细胞的组织学形态。10、细胞渗透肽未对体内组织器官产生急性和慢性损伤细胞渗透肽未对心、肝、 脾、肺、肾、脑、胃、肠、肌肉和生殖等主要脏器结构和功能产生明县的急慢性损伤。11、鼻用型胰岛素制剂反复多次使用后的生物效应稳定且有规律对同一受试动物每日一次、连续一周使用鼻用型胰岛素，降血糖的效果稳定，而且重复性好。12、细胞渗透肽和鼻用型胰岛素的上述特征被至少两种实验动物所证实组织细胞的离体实验，以及小鼠和大鼠在体实验均证实了细胞渗透肽和鼻用型胰岛素制剂的上述特征。13、人体的初步试验结果显示空腹时给予健康志愿者5国际单位的鼻用型胰岛素制剂，可使血糖水平降低约20%。进餐前给予健康志愿者5国际单位的鼻用型胰岛素制剂，可使餐后血糖水平升高值减少约70%。根据上述技术特征和以下具体实施结果，可知本发明的创造性在于I、首次将合适结构的细胞渗透肽用于制备非注射型胰岛素制剂；2、确定了细胞渗透肽浓度、胰岛素用量和生物效应之间的关系；3、建立了鼻用型胰岛素制剂的制备方法；4、探讨了制剂中胰岛素的相对药物吸收率和相对生物利用率；5、检测了制剂中细胞渗透肽的药物代谢动力学，以及对局部和全身的急慢性毒作用；6、最终获得了具有临床应用潜力的鼻用型胰岛素制剂。本发明的鼻用型胰岛素制剂可替代皮下注射方式，经鼻内喷雾式或滴注式给药， 用于治疗糖尿病患者。每次使用量为100微升(50至200微升)，内含胰岛素10(5-20)国际单位。具体使用由医师根据患者病情等因素来决定。


图I为一种含有16个氨基酸的细胞渗透肽的色谱分析图像，反映了产物的纯度。图2为一种含有16个氨基酸的细胞渗透肽的质谱分析图像，反映了产物的结构。图3为一种细胞渗透肽促进胰岛素经鼻吸收的实验结果，显示了细胞渗透肽含量在一定范围内可促进胰岛素经实验大鼠鼻腔粘膜吸收，迅速增加血中胰岛素浓度。图4为一种细胞渗透肽帮助胰岛素降低血糖的实验结果，显示了细胞渗透肽可促进不同的胰岛素(如人胰岛素和猪胰岛素)经实验小鼠鼻腔粘膜吸收，降低血中葡萄糖水平。图5为一种鼻用型胰岛素制剂吸收效率的实验结果，显示了鼻用型胰岛素比皮下注射胰岛素的药物吸收速度稍快(给药后20分钟之内)，相对药物吸收率为80%。图6为一种鼻用型胰岛素制剂降糖效应的实验结果，显示了鼻用型胰岛素可产生与皮下注射胰岛素相似的降血糖效果和持续时间，相对生物利用率为60-70%。图7为一种细胞渗透肽在体内代谢的实验结果上图显示了血中细胞渗透肽的半衰期很短，脑中细胞渗透肽的含量极低；下图显示了进入体内的细胞渗透肽主要在肝、肾中蓄积和降解。图8为两种细胞渗透肽帮助胰岛素降低血糖的对比实验结果，显示了第一种基本型态的细胞渗透肽(16个氨基酸)比另一种调整后的细胞渗透肽(18个氨基酸)更能促进胰岛素经鼻吸收、降低血糖水平，两者的差异约为20%。图9为一种鼻用型胰岛素制剂存放条件的实验结果，显示了鼻用型胰岛素制剂在低温(4°C)下存放1-60天后仍维持原有的降血糖能力(血中葡萄糖水平)和时间效应(给药后30-120分钟)。图10为一种受试动物对多次给药的敏感性实验结果，显示了实验小鼠每日一次， 连续五天接受鼻用型胰岛素制剂，始终保持对胰岛素降糖效应的敏感性。每日的分图(从第一日到第五日)显示相似的降血糖能力(血中葡萄糖水平)和时间效应(给药后30-240 分钟)。
具体实施例方式以下用实施例进一步说明本发明，但本发明不受此限制。实施例I :用人胰岛素制备实验用的鼻用型胰岛素制剂。表一、一组动物实验用的鼻用型胰岛素制剂，它由溶于磷酸缓冲液的下列成分和浓度组成。
权利要求
1.一种胰岛素制剂，它由以下溶解于液相载体中的原料共同组成细胞渗透肽 O. 02-2纳摩尔/微升液相载体；胰岛素O. 001-0. 5国际单位/微升液相载体；1)所述的制剂中液相载体为医用无菌水、生理盐水、磷酸缓冲液或人工脑脊液，PH值为6. 5-7. 5，其配制方法如下a)生理盐水取氯化钠9克，加水至1000毫升；b)磷酸缓冲液将O.2摩尔/升的磷酸氢二钠水溶液610毫升与O. 2摩尔/升的磷酸二氢钠水溶液390毫升混匀，即成O. 2摩尔/升的磷酸缓冲液1000毫升，pH7. O ；c)人工脑脊液取氯化钠6.279克，氯化钾O. 216克，氯化钙O. 353克，氯化镁O. 488 克，碳酸氢钠I. 932克，葡萄糖O. 6克，磷酸氢二钠O. 358克，加水至1000毫升，通入含95% 氧与5%二氧化碳混合气体至饱和，pH7. 3-7. 4 ；2)所述的胰岛素为具有生物活性的胰岛素，为天然胰岛素、人工胰岛素、胰岛素前体、 胰岛素类似物或胰岛素代谢物；3)所述的细胞渗透肽是含有12-22个氨基酸的多肽分子，其中精氨酸和赖氨酸是维持细胞渗透功能的重要成分。
2.根据权利要求I所述的一种胰岛素制剂，其特征在于细胞渗透肽 O. 05-1. O纳摩尔/微升液相载体；胰岛素O. 005-0. 4国际单位/微升液相载体。
3.根据权利要求I所述的一种胰岛素制剂，其特征在于细胞渗透肽 O. 1-0. 6纳摩尔/微升液相载体；胰岛素O. 015-0. 3国际单位/微升液相载体。
4.根据权利要求I所述的一种胰岛素制剂，其特征在于细胞渗透肽 O. 2-0. 4纳摩尔/微升液相载体；胰岛素O. 03-0. 2国际单位/微升液相载体。
5.根据权利要求I所述的一种胰岛素制剂，其特征在于细胞渗透肽O. 3纳摩尔/微升液相载体；胰岛素 O. I国际单位/微升液相载体。
6.权利要求I所述的一种胰岛素制剂，其特征在于所述的胰岛素制剂中细胞渗透肽的氨基酸序列为Arg Trp Phe Lys He Gln Met Gln He Arg Arg Trp Lys Asn Lys Lys ;或 Arg Gln He Lys He Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys0
7.权利要求6所述的一种胰岛素制剂，其特征在于所述的胰岛素制剂中细胞渗透肽的氨基酸序列调整为IleArgArgTrpLysAsnLysLysArgTrpPheLysIleGlnMetGln或AsnArgArgMetLysTrpLysLysArgGlnIleLysIleTrpPheGln或LysLysAsnLysTrpArgArgIleGlnMetGlnIleLysPheTrpArg或LysLysTrpLysMetArgArgAsnGlnPheTrpIleLysIleGlnArg或LysTrpPheArgIleGlnMetGlnIleLysLysTrpArgAsnArgArg或LysGlnIleArgIleTrpPheGlnAsn 2LysLysMetArgTrpArgArg0
8.权利要求7所述的一种胰岛素制剂，其特征在于所述的胰岛素制剂中细胞渗透肽的氨基酸序列延长为Arg Trp Phe Lys Ile Gly或非特定氨基酸；或GlnMetGlnIleArgArgTrpLysAsnLysLys加上1-6个Arg Gln He Lys Ile Gly或非特定氨基酸；或TrpPheGlnAsnArgArgMetLysTrpLysLys加上1-6个Arg Trp Phe Lys Ile 个Arg或非特定氨基酸；或GlnMetGlnIleArgArgTrpLysAsnLysLys加上I 6Arg Gln He Lys Ile 个Arg或非特定氨基酸；或TrpPheGlnAsnArgArgMetLysTrpLysLys加上I 6Arg Trp Phe Lys Ile 非特定氨基酸；或GlnMetGlnIleArgArgTrpLysAsnLysLys加上1-6个Arg Gln He Lys IleTrpPheGlnAsnArgArgMetLysTrpLysLys加上1-6个非特定氨基酸。
9.权利要求7所述的一种胰岛素制剂，其特征在于所述的胰岛素制剂中细胞渗透肽的氨基酸序列缩短1-4个氨基酸Arg Trp Phe Lys He Gln Gln Arg Arg Trp Lys Asn Lys Lys ;或 Arg Gln He Lys He Trp Gln Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys0
10.权利要求I所述的一种胰岛素制剂的制备方法，其步骤是1)称取治疗剂量的胰岛素粉末，置于一小试管内；2)将O.I当量的盐酸溶液缓慢地加入小试管中，轻摇，溶解胰岛素粉末；3)加入液相载体稀释至所需浓度，轻摇混匀；4)用O.I当量的氢氧化钠将含有胰岛素的溶液调至pH6. 5-7. 5 ；5)准确称取特定剂量的细胞渗透肽，置于另一小试管内；6)用微量移液器将胰岛素溶液缓慢地转移至含有细胞渗透肽的小试管中，轻摇混匀 30分钟；7)用不吸附蛋白质的O.45微米孔径滤膜过滤上述含有细胞渗透肽的胰岛素溶液；8)将过滤后的胰岛素制剂收集到无菌给药器内；9)直接用于调控血液中葡萄糖水平，或置于低温保存备用。
全文摘要
本发明公布了一种鼻用型胰岛素制剂及制备方法，它由溶解于液相载体中的细胞渗透肽和胰岛素共同组成。其中的细胞渗透肽是含有特定氨基酸序列的多肽分子，能促进胰岛素经鼻腔粘膜进入体内，调节血糖水平。该制剂的主要制备步骤为用盐酸溶解治疗剂量的胰岛素；用液相载体稀释至所需浓度；用氢氧化钠调节pH至中性；与特定量的细胞渗透肽混溶；过滤除菌后置低温保存。可用鼻内给药器将本制剂施布于人或动物鼻腔粘膜表面。与相同剂量的皮下注射胰岛素制剂相比，本鼻用型胰岛素制剂的相对药物吸收率约80%，生物利用率达60%以上。细胞渗透肽和胰岛素对鼻腔粘膜无刺激，体内可降解为氨基酸，半衰期短，安全性高。
文档编号A61K47/42GK102580061SQ20111039309
公开日2012年7月18日 申请日期2011年12月1日 优先权日2011年12月1日
发明者余丽莉, 李健学, 李志刚 申请人:武汉健宇生物医药科技有限公司