专利名称：一种治疗慢性肝病的中药有效部位组合物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物，尤其涉及一种治疗慢性肝病的中药有效部位组合物；此外，本发明还涉及该治疗慢性肝病的中药有效部位组合物的制备方法及其应用。
背景技术：
肝硬化是多种慢性肝脏疾病的终末阶段，以弥漫性肝纤维化伴异常结节形成为其形态学特征。肝硬化是常见疾病和主要死亡病因之一。已有明确证据表明肝纤维化甚至肝硬化是可逆的，阻断、抑制或逆转肝纤维化是治疗慢性肝病的重要目标，但目前尚无FDA批准的抗肝纤维化化学或生物制剂进入临床应用。美国肝纤维化研究权威Friedman教授曾指出:“肝纤维化机理的不断阐明使有效地抗肝纤维化治疗成为可能，然而，抗肝纤维化治疗仍然是一个富有挑战的艰巨任务，迄今为止临床上尚无有效的抗肝纤维化药物，其有效作用于肝脏而无明显毒副作用的治疗药物研制尚需长期努力。”近二十多年来的 中医药抗肝纤维化研究，已取得显著进展。自2000年起，已先后有复方鳖甲软肝片、扶正化瘀胶囊(片)等抗肝纤维化国家中药新药应用于临床，扶正化瘀片已被美国FDA批准在美国开展抗丙型肝炎肝纤维化II期临床试验。中药复方抗肝纤维化作用是通过多途径、多层次作用实现的，呈现出综合效应，与肝纤维化发生发展的复杂病理机制相适应，这也正是中医药整体观念的优势所在。近二十多年来，国内外也开展了一些抗肝纤维化中药有效组分或成分的研究，并发现了一些有抗肝纤维化效应的中药有效组分或成分。然而，无论传统中药复方还是单一的有效成分，皆有其不足之处。传统中药复方由于成分复杂，质量控制困难，稳定性较差，这也是中药走向国际市场的难题之一；而单一组分或成分往往难以取得良好效应。因此如何对传统复方“去粗取精”而又保持中医复方配伍治疗复杂疾病的优势，是一大难题，也是中医药抗肝纤维化药物研究的重要发展方向之一。“一贯煎”是清代著名中医学家魏玉璜所创，首见于《续名医类案.心胃痛门》。清 王孟英将其辑入《柳州医话》中。一贯煎由北沙参、麦门冬(又名麦冬)、干生地(又名生地黄)、当归、枸杞子和川楝子等6味中药组成，原方未著用量用法。目前方剂学教材中所列一贯煎的组方:北沙参，麦冬，当归(各9g)，生地黄(18-30g)，枸杞子(9-18g)，川楝子(4.5g)，水煎服。均与本发明的组成与制备方法有所不同。以往的研究工作已经证实，对急、慢性肝损伤实验模型，一贯煎能有效改善肝功能，减轻肝细胞坏死，抑制肝脏纤维组织增生。本发明的前期研究结果显示，在CC14诱导大鼠肝纤维化已形成阶段给予一贯煎能显著抑制肝硬化的形成，显著降低肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline, Hyp)含量及肝脏胶原纤维的增生程度
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种能提高抗肝纤维化、抗肝损伤作用，治疗慢性肝病的中药复方的有效提取部位，并提出该复方的有效提取部位的用途、制备方法。本发明一方面提供一种治疗慢性肝病的中药有效部位组合物，该组合物包括:毛蕊花糖苷、阿魏酸、皂苷、环烯醚萜苷、香豆素、木脂素、酚酸以及有机酸；以组合物的总重量为基础计，所述毛蕊花糖苷的含量范围为:0.157% -0.219%，所述阿魏酸的含量范围为:0.218% -0.306%;该组合物按如下方法制成:取北沙参、麦门冬、干生地、当归、枸杞子和川楝子6味原料药材加水煎煮制得水煎液，该水煎液经大孔吸附树脂色谱柱，经极性溶剂洗脱，经低温浓缩，减压干燥而制成。所述北沙参、麦门冬、当归、干生地、枸杞子和川楝子的重量比例为1:1:1:(1.8-5): (1-2): (0.45-0.5)。在本发明的另一方面，还提供上述中药有效部位组合物的制备方法，该方法包括以下步骤:(I)水煎液的制备:取原料药材饮片，加水8-10倍量煎煮三次，每次I小时至1.5小时，煎出液经适当浓缩，过滤得水煎液；(2)有效部位的制备:取上述水煎液上大孔吸附树脂色谱柱，装上样品一段时间后达吸附平衡，以水洗脱至经alfa-萘酚-浓硫酸试剂的显色反应呈阴性；然后以极性溶剂洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，减压干燥而制成。优选的，步骤(2)中，所述大孔吸附树脂色谱柱中使用的大孔吸附树脂为苯乙烯型大孔吸附树脂，选自D-101，HPD-100或DA-201。优选的，步骤(2)中，所述极性溶剂为20-40%的乙醇水混合液。优选的，步骤(2)中，所述的水煎液加上大孔吸附树脂色谱柱时的浓度为0.5-1.5克生药/晕升，上样量为1.0-3.0克生药/克干树脂；吸附时间为1-8小时。此外，本发明还提供该中药有效部位组合物在制备治疗慢性肝炎药物中的应用，在制备防治肝损伤、肝纤维化药物中的应用，以及在制备防治肝硬化药物中的应用。本发明对中药复方一贯煎治疗慢性肝损伤、肝纤维化的有效部位进行了筛选研究，明确了一贯煎治疗肝损伤、肝纤维化的有效部位，并对有效部位的制备工艺进行了研究，确立了有效部位的制备技术。经采用经典动物模型试验并验证，本发明的中药有效部位组合物具有显著改善四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的作用，能显著降低模型大鼠肝组织胶原含量，减轻肝纤维化以及肝损伤程度，有效阻止肝纤维化的发展，上述作用明显优于一贯煎原复方(例如水煎剂、水提醇沉、水提+ 二氯甲烷萃取等)的效果，可用于治疗和预防各种慢性肝炎、肝损伤、肝纤维化、肝硬化等慢性肝病病症。本发明的中药有效部位组合物可采用本领域常规的制剂方法制成片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸、微丸等口服固体制剂。
图1是实施例1的一贯煎及不同提取部位对小鼠急性肝损伤血清ALT活性的影响。图2是实施例2的一贯煎及其有效部位(YGJ_D)对CC14肝硬化小鼠肝脏Hyp含量的影响。图3是实施例1的小鼠CC14慢性模型中各组小鼠肝组织病理照片(HE染色，X 200)。图4是实施例2的小鼠CC14慢性模型中各组小鼠肝组织病理照片(天狼星红胶原染色，X 100)。图5是实施例3中一贯煎有效部位(YGJ_D)的HPLC图谱，图中显示18个共有峰。图6是实施例3中一贯煎有效部位(YGJ_D)指纹图谱共有模式图。图7是实施例3中生地黄和当归中两个具有主要成分对照品的HPLC图，SI，S2分别是毛蕊花糖苷和阿魏酸的色谱峰。具体实施方法下面结合附图和具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求所限定的范围。本发明的药物组合物的有益效果通过下述实验证实:实施例1中药复方一贯煎抗肝损伤有效部位的筛选实验1、一贯煎水煎液不同极性部位的制备1.1 一贯煎水煎液的制备:一贯煎处方为由北沙参，麦冬，当归(各10克)，生地黄(18克)，枸杞子(12克)，川楝子(4.5克)，加水煎三次，加水量分别为10倍、10倍、8倍；煎煮时间为1.5小时，1.5小时和I小时。1.2不同极性部位的分离:取一贯煎水煎液流浸膏，适当稀释，加95 %乙醇至含醇量70 %，醇沉二次，得YGJ_A (70%乙醇二次沉淀部分)取一贯煎水煎液流浸膏，加水适当稀释至澄清溶液，等量二氯甲烷萃取，萃取液回收有机溶剂，得YGJ_B (CH2Cl2萃取物)取一贯煎水煎液流浸膏，加水适当稀释至澄清溶液，加入预先处理好的大孔吸附树脂色谱柱中，经100%水、30%乙醇、60%乙醇和95%乙醇水混合溶液充分洗脱。100%水洗脱至无甜味或以α -萘酚-浓硫酸试剂检测至反应明显呈阴性后，再以不同比例乙醇水溶液进行洗脱，至1000毫升流出液经蒸馏后基本无残留物。100%水及不同比例乙醇水混合溶剂洗脱后分别得到下列部分:得水洗脱部分(YGJ_C)，30%乙醇洗脱部分(YGJ_D，即本发明中药有效部位组合物)，60%乙醇洗脱部分(YGJ_E)大孔吸附树脂主要使用非极性大孔吸附树脂，如D-101，HPD-100，HPD-300，DA-201, X-5或H103，并按说明书处理。2、一贯煎不同极性部位供试液的制备一贯煎处方药材量按人的临床剂量换算成小鼠的剂量为9.03g药材量/kg动物体重。不同极性部分按成人剂量及得率计算小鼠给药剂量。3、四氯化 碳急性肝损伤模型中一贯煎水煎液不同极性部分的筛选3.1 一贯煎(yiguanjian, YGJ)水煎液不同极性部分提取物对小鼠四氯化碳急性肝损伤模型血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)活性的影响。
3.2方法:6-8周龄Bal b/c小鼠，每组10只。实验开始先灌胃2d，I次/d，对照组灌生理盐水10ml/kg，给药组按成人剂量换算成相应剂量灌胃给药。实验第3天时，实验对照组分别腹腔注射0.5% CC14-橄榄油10ml/kg—次造模型，灌胃改为2次/d，剂量同上。造模后48h将小鼠全部处死。处死前15h禁食，但不禁水，末次给药后Ih摘取小鼠眼球，眼眶取血，离心分离血清后，测定ALT活性。结果以均数土标准差(X土s)表示。3.3统计学方法:组间比较采用单因素方差分析。采用SPSS软件包进行统计分析。4、结果:表明YGJ_D组分(即本发明中药有效部位组合物)具有显著改善四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的作用(见表1、图1和图3)。表1.一贯煎及不同提取部位对小鼠急性肝损伤血清ALT活性的影响
权利要求
1.一种治疗慢性肝病的中药有效部位组合物，其特征在于，该组合物包括:毛蕊花糖苷、阿魏酸、皂苷、环烯醚萜苷、香豆素、木脂素、酚酸以及有机酸；以组合物的总重量为基础计，所述毛蕊花糖苷的含量范围为:0.157% -0.219%，所述阿魏酸的含量范围为:0.218% -0.306%;该组合物按如下方法制成:取北沙参、麦门冬、干生地、当归、枸杞子和川楝子6味原料药加水煎煮制得水煎液，该水煎液经大孔吸附树脂色谱柱，经极性溶剂洗脱，经低温浓缩，减压干燥而制成。
2.如权利要求1所述的中药有效部位组合物，其特征在于，所述北沙参、麦门冬、当归、干生地、枸杞子和川楝子的重量比例为1:1:1: (1.8-5): (1-2): (0.45-0.5)。
3.如权利要求1或2所述的中药有效部位组合物的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤: (1)水 Η液的制备: 取原料药，加水8-10倍量煎煮三次，每次I小时至1.5小时，煎出液经适当浓缩，过滤得水煎液； (2)有效部位的制备: 取上述水煎液上大孔吸附树脂色 谱柱，装上样品一段时间后达吸附平衡，以水洗脱至经alfa-萘酚-浓硫酸试剂的显色反应呈阴性；然后以极性溶剂洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，减压干燥而制成。
4.如权利要求3所述的中药有效部位组合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述大孔吸附树脂色谱柱中使用的大孔吸附树脂为苯乙烯型大孔吸附树脂，选自D-101，HPD-100 或 DA-20I。
5.如权利要求3所述的中药有效部位组合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述极性溶剂为20-40 %的乙醇水混合液。
6.如权利要求3所述的中药有效部位组合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的水煎液加上大孔吸附树脂色谱柱时的浓度为0.5-1.5克生药/毫升，上样量为1.0-3.0克生药/克干树脂；吸附时间为1-8小时。
7.如权利要求1所述的中药有效部位组合物在制备治疗慢性肝炎药物中的应用。
8.如权利要求1所述的中药有效部位组合物在制备防治肝损伤、肝纤维化药物中的应用。
9.如权利要求1所述的中药有效部位组合物在制备防治肝硬化药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种治疗慢性肝病的中药有效部位组合物，该组合物包括毛蕊花糖苷、阿魏酸、皂苷、环烯醚萜苷、香豆素、木脂素、酚酸以及有机酸；以组合物的总重量为基础计，毛蕊花糖苷的含量为0.157％-0.219％，阿魏酸的含量为0.218％-0.306％；该组合物按如下方法制成取北沙参、麦门冬、干生地、当归、枸杞子和川楝子6味原料药加水煎煮制得水煎液，该水煎液经大孔吸附树脂色谱柱，经极性溶剂洗脱，经低温浓缩，减压干燥而制成。此外，本发明还公开了该组合物的制备方法和应用。经试验验证，本发明中药有效部位组合物能显著降低模型大鼠肝组织胶原含量，减轻肝纤维化及肝损伤程度，有效阻止肝纤维化的发展，可用于防治各种慢性肝炎、肝纤维化、肝硬化等病症。
文档编号A61P1/16GK103156997SQ20111042322
公开日2013年6月19日 申请日期2011年12月16日 优先权日2011年12月16日
发明者刘平, 付文卫, 孙明瑜, 张文萌, 宁冰冰, 慕永平, 周文君, 陈高峰, 刘佳, 刘成海, 胡义扬, 徐列明 申请人:上海中医药大学附属曙光医院