专利名称：鲜马齿苋降血糖有效组分组合物及制备方法
技术领域：
本发明涉及鲜马齿苋降血糖有效组分组合物及制备方法，属于中药领域。
背景技术：
马齿苋是马齿苋科马齿苋属一年生肉质草本植物。现代药理研究表明，马齿苋具有降血脂、降血糖、抗动脉粥样硬化等功效。近年来有关马齿苋降血糖的报道，主要是针对马齿苋干药材进行的，通过水煮或用有机溶剂高温提取制备提取物，再对提取物做一些相关的活性研究，而较少有对提取物总体做进一步的分离、分析和活性研究，更没有相关研究涉及对鲜药马齿苋降血糖有效组分及组合物的制备和活性研究。传统中药原料一般采用干药材，但很多研究表明，药材鲜品药效优于干品，主要原因在于干药材在提取加工过程中很容易破坏中药成分中一些不耐热、易氧化、不稳定的有效成分，甚至完全破坏原有中药的主要活性成分，使中药药效降低。同时，中药本身作为一个复杂的体系，其药效的发挥是通过多组分、多靶点协同作用，而药材在干制、提取等加工过程中，对药材中不稳定成分的破坏， 使药材内部组分结构发生变化，最终导致药效降低，甚至无效。本发明针对传统中药干药材应用的一些缺点，采用新鲜药材，对鲜药材进行榨汁处理，能最大限度保留药材的全活性成分不受破坏。糖尿病(DM)是一组由遗传和环境因素相互作用，导致胰岛素分泌绝对和相对不足以及细胞对胰岛素敏感性下降，而引起糖、脂肪、蛋白质、水、电解质等一系列代谢紊乱的临床综合征，其以高血糖为主要标志。随着生活水平的提高，生活方式的改变，全世界糖尿病患者人数与日俱增，已成继恶性肿瘤、心血管疾病的第三大疾病，严重威胁人类的健康。 根据WHO的预测，1995-2025年间，中国糖尿病增长幅度将达68%，增长率居全球首位，届时我国糖尿病患者绝对人数将突破5000万。对糖尿病及其并发症进行早期诊断和治疗已成为当务之急。目前，西医药治疗糖尿病，在发挥疗效的同时，也存在较大的副作用，中医药治疗糖尿病历史悠久，疗效显著，不仅能降低血糖，使临床症状消失或好转，而且可降低血脂， 改善血液流变的高粘状态，预防和减少糖尿病并发症的发生。
发明内容
本发明从药效出发，首先比较了鲜、干马齿苋降血糖药效差异，发现鲜药药效明显优于干药材。因此，本发明采用马齿苋鲜药材为原料，目的是提供一种具有降血糖作用的鲜马齿苋有效组分组合物及其制备方法，将克服现有一些中药在传统高温、有机溶剂等提取过程中，对不稳定化学成分的破坏，导致药材活性降低的缺点。采集新鲜马齿苋，对其榨汁处理，将榨汁液应用大孔吸附树脂分离纯化，并结合体内外降血糖活性筛选，除去部分杂质和无效成分，富集鲜药材中的有效组分，混合有效组分制备有效组分组合物，以便与药学上常规辅料混合，制备常用制剂，便于患者服用，同时解决了马齿苋中有效成分利用率低、疗效差的缺点。本发明制备工艺便捷、能最大限度地保持原药材的生物活性，工艺设备要求简单，提取时间短，成本低，损耗小，利于安全生产。所得中药降血糖活性组分，能进行大规模生产，适宜开发成降血糖中药新药。本发明的目的在于提供一种利用鲜马齿苋全草，榨汁分离降血糖有效组分组合物，该组合物的组成包括鲜马齿苋多糖组分、鲜马齿苋多酚类组分和鲜马齿苋生物碱组分，其中多糖组分、多酚类组分、生物碱组分的重量比为2-30 1.2-20 0.8-15。取自鲜马齿苋降血糖作用有效组分组合物，更优化的组合是，多糖组分、多酚类组分、生物碱组分的重量比为2-15 1.2-10 0.8-8。本发明提供的马齿苋降血糖有效组分组合物，以新鲜马齿苋全草为原料，按以下步骤制备得到步骤1 采新鲜马齿苋全草，洗净，放入榨汁机中榨汁，药渣用蒸馏水浸泡6_12h， 继续榨汁2-3次；步骤2 榨汁液浓缩、分离、干燥；步骤3 取榨汁液干燥粉末用蒸馏水溶解，上AB-8型大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱， 得提取物I，用10% -95%体积百分比的乙醇洗脱得提取物II ；步骤4 将提取物I干燥，用少量蒸馏水复溶，然后加入40% -80%乙醇沉淀，过滤；将所得沉淀用蒸馏水溶解，再加入&wage试剂除去蛋白，离心，得上清液；将上清液透析、干燥，得鲜马齿苋多糖组分；步骤5 将提取物II浓缩干燥，上HP-20型大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱，浓缩、干燥得鲜马齿苋生物碱组分，用10% -30%体积百分比的乙醇洗脱，浓缩、干燥得马齿苋黄酮苷元和酚酸组分，用70% -95%体积百分比的乙醇洗脱，浓缩、干燥得马齿苋黄酮苷组分，合并黄酮苷元、黄酮苷和酚酸组分，得鲜马齿苋多酚类组分；步骤6 将鲜马齿苋多糖组分、多酚类组分、生物碱组分混合，得本发明的活性组分组合物。该活性组分可与药学制剂上常规辅料混合，也可不加常规辅料，制成常规药物制剂。本发明制备方法中涉及分离方法采用离心分离、膜分离和/或常压或减压过滤进行沉淀或析出物与液体分离；浓缩方法采用低温减压浓缩或常压浓缩工艺；干燥方法采用真空干燥、冷冻干燥和/或喷雾干燥。本发明具有降血糖作用的有效组分组合物的制备方法，优先选择的制备方法是 采用离心分离和常压过滤进行沉淀或析出物与液体分离；样品浓缩采用低温减压浓缩工艺，浓缩温度<45°C ；干燥方法采用冷冻干燥。本发明的组合物与药用辅料混合，可以制成散剂、胶囊剂、片剂、丸剂、微囊、颗粒剂、液体制剂等。其中胶囊剂包括软胶囊剂和硬胶囊剂，硬胶囊剂可以由粉末、颗粒、微片或微丸填充制备。片剂包括普通片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片、缓释片、肠溶片、胃漂浮片、双层片等。丸剂包括滴丸、蜜丸、浓缩丸、水丸、微丸等。液体制剂包括汤剂、合剂、 口服液、灭菌制剂等。本发明的组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、润湿剂等；适用的填充剂包括淀粉、坏糊精、乳糖、蔗糖、微晶纤维素和其他类似的填充剂；适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物；适宜的润滑剂包括，硬脂酸镁或微粉硅胶；所述的润湿剂包括水、乙醇或十二烷基硫酸钠； 通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。
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本发明的有意效果在于本发明所制备的具有降血糖作用的药物组合物，经过细胞水平上检测该组合物对胰岛素抵抗细胞葡萄糖消耗的影响，能明显增加胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗量；在体动物试验结果表明，本发明制备的鲜马齿苋有效组分组合物能明显降低糖尿病小鼠的血糖。
图1鲜、干马齿苋提取物多酚类成分HPLC差异比较A.马齿苋晒干药材水提液； B.马齿苋鲜药材榨汁液图2鲜、干马齿苋提取物生物碱类成分差异比较A.马齿苋晒干药材水提液； B.混合标准品；C.马齿苋鲜药材榨汁液 图3马齿苋榨汁液HP-20水洗部位HPLC分析图A. HP-20水洗部位；B.混合标准品；①去甲肾上腺素；②多巴胺图4马齿苋榨汁液HP-2010%乙醇洗脱部位HPLC分析图A. HP-20水洗部位；B.标准品①咖啡酸图5马齿苋榨汁液HP-2030%乙醇洗脱部位HPLC分析图A. 30%醇洗部位；B.混合标准品①阿魏酸；②橙皮苷图6马齿苋榨汁液HP-2095%乙醇洗脱部位HPLC分析图Α. ΗΡ_2095%醇洗部位； B.混合标准品1槲皮素；2木犀草素图7本发明提取分离流程图
具体实施例方式以下结合实施例及药效试验对本发明作进一步说明。实施例1取新鲜马齿苋全草^g，洗净后放入榨汁机中榨汁，过滤、离心分离榨汁液和药渣， 药渣用2倍量蒸馏水浸泡6h，继续榨汁2-3次，合并榨汁液，低温减压浓缩、冷冻干燥得冻干粉。将冻干粉用5倍体积的蒸馏水复溶，上AB-8型大孔树脂，用蒸馏水和10% -50%乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩、冷冻干燥。AB-8水洗部位冻干粉加少量蒸馏水复溶和50%乙醇醇沉，离心分离沉淀溶于少量蒸馏水，加试剂脱蛋白，透析除去小分子物质，低温减压浓缩、冻干得马齿苋多糖组分a-萘酚-硫酸试验和糖脎形成试验鉴定结果为阳性，经紫外分光光度法测得总多糖含量为81. 9% ；AB-8醇洗部位冻干，蒸馏水复溶后上HP-20型大孔树脂，用蒸馏水洗脱，浓缩冻干得马齿苋生物碱组分碘化铋钾试验结果为阳性，经HPLC含量测定结果，总生物碱含量为53. 4%；10-30%,60% -90%体积比乙醇洗脱、浓缩、冻干得马齿苋多酚类组分盐酸-锌粉试验、三氯化铝试验鉴定结果为阳性，经HPLC含量测定，多酚类含量为57. 6% ；将马齿苋多糖、生物碱、多酚类组分混合，即得鲜马齿苋降血糖有效组分组合物，其中含多糖组分、多酚类组分、生物碱组分的重量比为2. 8 2.2 1.3。实施例2取新鲜马齿苋全草^g，洗净后放入榨汁机中榨汁，过滤、离心分离榨汁液和药渣， 药渣用3倍量蒸馏水浸泡8h，继续榨汁2-3次，合并榨汁液，低温减压浓缩、冷冻干燥得冻干粉。将冻干粉复溶用5倍体积的蒸馏水中，上AB-8型大孔树脂，用蒸馏水和10% -60%乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩、冷冻干燥，AB-8水洗部位冻干粉加少量蒸馏水复溶，60%乙醇醇沉，离心分离沉淀溶于少量蒸馏水，加savage试剂脱蛋白，透析除去小分子物质，低温减压浓缩、冻干得马齿苋多糖组分a_萘酚-硫酸试验和糖脎形成试验鉴定结果为阳性，经紫外分光光度法测得总多糖含量为52. 1% ；AB-8醇洗部位冻干，蒸馏水复溶后上HP-20型大孔树脂，用蒸馏水洗脱，浓缩冻干得马齿苋生物碱组分经碘化铋钾试验结果为阳性，HPLC含量测定结果，总生物碱含量为66. 2% ；10-35%,65% -90%体积比乙醇洗脱、浓缩冻干得马齿苋多酚类组分经盐酸-锌粉试验、三氯化铝试验鉴定结果为阳性，经HPLC含量测定，多酚类含量为58. 7% ；将马齿苋多糖、生物碱、多酚类组分混合，即得鲜马齿苋降血糖有效组分组合物，其中含多糖组分、多酚类组分、生物碱组分的重量比为2. 9 2.6 1.5。实施例3取新鲜马齿苋全草^g，洗净后放入榨汁机中榨汁，过滤、离心分离榨汁液和药渣， 药渣用4倍量蒸馏水浸泡10h，继续榨汁2-3次，合并榨汁液，低温减压浓缩、冷冻干燥得冻干粉。将冻干粉复溶用5倍体积的蒸馏水中，上AB-8型大孔树脂，用蒸馏水和10% -65% 乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩、冷冻干燥，AB-8水洗部位冻干粉加少量蒸馏水复溶，70%乙醇醇沉，离心分离沉淀溶于少量蒸馏水，加savage试剂脱蛋白，透析除去小分子物质，低温减压浓缩、冻干得马齿苋多糖组分a_萘酚-硫酸试验和糖脎形成试验鉴定结果为阳性，经紫外分光光度法测得总多糖含量为84. 7% ；AB-8醇洗部位冻干，蒸馏水复溶后上HP-20型大孔树脂，用蒸馏水洗脱，浓缩冻干得马齿苋生物碱组分碘化铋钾试验结果为阳性，经HPLC 含量测定结果，总生物碱含量为讨.4% ；15-35%,70% -90%体积比乙醇洗脱、浓缩冻干得马齿苋多酚类组分盐酸-锌粉试验、三氯化铝试验鉴定结果为阳性，经HPLC含量测定，多酚类含量为59. 1% ；将马齿苋多糖、生物碱、多酚类组分混合，即得鲜马齿苋降血糖有效组分组合物，其中含多糖组分、多酚类组分、生物碱组分的重量比为3.1 2.3 1.8。实施例4取新鲜马齿苋全草^g，洗净后放入榨汁机中榨汁，过滤、离心分离榨汁液和药渣， 药渣用5倍量蒸馏水浸泡12h，继续榨汁2-3次，合并榨汁液，低温减压浓缩、冷冻干燥得冻干粉。将冻干粉复溶5倍体积的蒸馏水中，上AB-8型大孔树脂，用蒸馏水和10% -70%乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩、冷冻干燥，AB-8水洗部位冻干粉加少量蒸馏水复溶，80%乙醇醇沉，离心分离沉淀溶于少量蒸馏水，加savage试剂脱蛋白，透析除去小分子物质，低温减压浓缩、冻干得马齿苋多糖组分a_萘酚-硫酸试验和糖脎形成试验鉴定结果为阳性，经紫外分光光度法测得总多糖含量为50. 9% ；AB-8醇洗部位冻干，蒸馏水复溶后上HP-20型大孔树脂，用蒸馏水洗脱，浓缩冻干得马齿苋生物碱组分碘化铋钾试验结果为阳性，经HPLC含量测定结果，总生物碱含量为58.9% ；10-30%,70% -95%体积比乙醇洗脱、浓缩冻干得马齿苋多酚类组分盐酸-锌粉试验、三氯化铝试验鉴定结果为阳性，经HPLC含量测定，多酚类含量为77. 6% ；将马齿苋多糖、生物碱、多酚类组分混合，即得鲜马齿苋降血糖有效组分组合物，其中含多糖组分、多酚类组分、生物碱组分的重量比为3. 5 2.6 1.9。实施例5鲜、干药材成分差异比较及各有效组分含量测定(1)鲜、干药材成分HPLC比较①多酚类成分HPLC差异比较色谱条件=AgilentllOO型高效液相色谱仪(DAD检测器)；色谱柱:Alltima C18 柱(250mmX4. 6mm, 5 μ m)；柱温为 35°C ；流速1. OmL/min ；检测波长360nm ；进样量10 μ L ；乙腈-0. 2 %磷酸水溶液梯度洗脱，流动相梯度洗脱程序见表1，色谱图见图1。 表1各洗脱液流动相梯度洗脱程序
权利要求
1.一种取自鲜马齿苋降血糖有效组分组合物，其特征在于该组合物的组成包括鲜马齿苋多糖组分、鲜马齿苋生物碱组分和鲜马齿苋多酚类组分，其中多糖组分、多酚类组分、生物碱组分的重量比为2-30 1.2-20 0.8-15。
2.根据权利要求1所述的一种取自鲜马齿苋降血糖作用有效组分组合物，其特征在于多糖组分、多酚类组分、生物碱组分的重量比为2-15 1.2-10 0.8-8。
3.根据权利要求1所述的一种取自鲜马齿苋降血糖有效组分组合物，其特征在于经 HPLC含量测定，以槲皮素、木犀草素、咖啡酸、阿魏酸为代表的多酚类组分含量大于55%。
4.根据权利要求1所述的一种取自鲜马齿苋降血糖有效组分组合物，其特征在于经 HPLC含量测定，以去甲肾上腺素和多巴胺为代表的生物碱组分含量大于50%。
5.一种鲜马齿苋降血糖有效组分组合物的制备方法，其特征在于按以下步骤制备得到步骤1 采新鲜马齿苋全草，洗净，榨汁，药渣用蒸馏水浸泡6-12h，继续榨汁2-3次；步骤2 榨汁液浓缩、分离、干燥；步骤3 取榨汁液干燥粉末用蒸馏水溶解，过AB-8型大孔树脂柱，蒸馏水洗脱，得提取物I，10% -95%体积百分比的乙醇洗脱得提取物II ；步骤4 将提取物I干燥，加少量蒸馏水复溶和40% -80%乙醇溶液沉淀、过滤；将所得沉淀用蒸馏水溶解，再加入&wage试剂除去蛋白，离心，得上清液，将上清液透析、干燥，得鲜马齿苋多糖组分；步骤5 将提取物II浓缩干燥，少量蒸馏水复溶后上HP-20型大孔树脂柱，蒸馏水洗脱，浓缩、干燥得鲜马齿苋生物碱组分；10% -30%体积百分比的乙醇洗脱，浓缩、干燥得鲜马齿苋黄酮苷元和酚酸组分；70% -95%体积百分比的乙醇洗脱，浓缩、干燥得马齿苋黄酮苷组分，合并黄酮苷元、黄酮苷和酚酸组分，得鲜马齿苋多酚类组分；步骤6 将鲜马齿苋多糖组分、多酚类组分、生物碱组分混合，获得组合物。
6.根据权利要求5所述的具有降血糖作用的有效组分组合物的制备方法，其特征在于分离方法采用离心分离、膜分离和/或常压或减压过滤进行沉淀或析出物与液体分离；样品浓缩采用低温减压浓缩或常压浓缩工艺；样品的干燥方法采用真空干燥、冷冻干燥和/ 或喷雾干燥。
7.根据权利要求6所述的具有降血糖作用的有效组分组合物的制备方法，其特征在于采用离心分离和常压过滤进行沉淀或析出物与液体分离；样品浓缩采用低温减压浓缩工艺，浓缩温度<45°C ；干燥方法采用冷冻干燥。
8.根据权利要求5所述的具有降血糖作用的有效组分组合物的制备方法，在步骤6中， 将鲜马齿苋多糖组分、多酚类组分、生物碱组分与药用辅料混合，制成散剂、胶囊剂、片剂、 丸剂、微囊、颗粒剂、液体制剂等。
9.根据权利要求1-4所述的取自鲜马齿苋降血糖的有效组分组合物在于制备药物中应用。
全文摘要
本发明涉及鲜马齿苋降血糖有效组分组合物及制备方法，属于中药领域。组合物的组成包括鲜马齿苋多糖组分、鲜马齿苋多酚类组分、鲜马齿苋生物碱组分，特征是多糖组分、多酚类组分、生物碱组分的重量比为2-30∶1.2-20∶0.8-15。制备时以新鲜马齿苋为原料，洗净后通过榨汁机榨汁得到含有有效成分的汁液，并进一步将该汁液过大孔树脂分离得不同溶剂部位，将所得不同溶剂部位经体内外降血糖药效筛选，弃无效组分，保留有效组分。将有效组分混合得鲜马齿苋降血糖有效组分的组合物。本发明有效除去杂质，富集有效组分，工艺便捷，成本低，能进行大规模生产。
文档编号A61P3/10GK102526138SQ201210016620
公开日2012年7月4日 申请日期2012年1月19日 优先权日2012年1月19日
发明者张振海, 贾晓斌, 郑智音 申请人:贾晓斌