含有有效成分二均-γ-亚麻酸(DGLA)的组成物的制作方法

专利名称：含有有效成分二均-γ-亚麻酸(DGLA)的组成物的制作方法
技术领域：
本发明涉及对特应性皮肤炎、接触性皮肤炎等过敏性皮肤炎、湿疹、紫外线引起的皮肤损伤等各种皮肤疾病具有预防或治疗效果的食品成分、或含有该食品成分的食品组成物，具体涉及为了最大限度地发挥该成分的效果而提供的最适当的用量。本发明还涉及对于皮肤疾病、呼吸系统疾病、消化系统疾病等与嗜酸细胞浸润或嗜酸细胞数增加密切相关的各种疾病，具有预防或治疗效果的食品成分、或含有该食品成分的食品组成物或医药组成物，特别涉及嗜酸细胞浸润抑制剂。进而本发明还涉及对于特应性皮肤炎、支气管哮喘、花粉症、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎等特别是认为病巢部肥大细胞数增加的各种疾病，具有预防或治疗效果的食品成分、或含有该食品成分的食品组成物或医药组成物，特别涉及肥大细胞数增加抑制剂。
背景技术：
从结构学的观点出发对各种各样的脂肪酸进行分类时，把其分子内具有含有约20 个碳原子的长脂肪链、且具有2个或2个以上的不饱和部分(双键)的脂肪酸称为多不饱和脂肪酸(PUFA)。或者，从营养学的观点出发，从作为对维持人体健康具有极其重要作用的物质的重要性来看，一部分脂肪酸常表现为必需脂肪酸(EFA)。EFA的定义，狭义上指的是在人体内不能合成而必须从食物中摄取的亚油酸(LA)和α-亚麻酸(ALA)，广义上其包括这些物质的代谢产物花生四烯酸(AA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)。这些物质中以ALA为母体脂肪酸生成的一系列的脂肪酸称为η3系列PUFA，EPA,DHA包括在该系列中。另一方面，如图I所示，以LA为母体脂肪酸得到的同样物质称为η6系列PUFA，具体是在Λ 6去饱和酶的作用下，LA代谢成Y-亚麻酸(GLA)，接着在碳链延长酶的作用下代谢成DGLA，在Λ 5去饱和酶的作用下进一步代谢成ΑΑ。关于这些η6系列PUFA的生理学功能，都已进行了详细的研究，其中研究表明， GLA 对皮肤损伤(Cosmetic & Toiletries, Nissen HP, 1995,110, P. 71 )、糖尿病及其合并症(Diabetic Medisine, JamalGA, 1990, 7, p. 319 )、风湿样关节炎(Arthritis Rheumatisum, Zurier RB, 1996, 39, p. 1808 )等有用。关于GLA生理功能的分子作用机理，如图I所示，推测其活性分子是GLA的碳链延长代谢物DGLA、或者是DGLA的环氧化酶代谢物I系列的前列腺素(PGl)、或者是DGLA的脂加氧酶代谢物15-羟基二十碳三烯酸 (15-hydroxyeicosatrienoic acid) (15-HETrE)。另一方面,关于DGLA的生理活性,在in vivo或in vitro中其效果的一部分得到了确认，报道其具有下述作用在in vivo中抑制血小板凝集(British Medical Journal, Kernoff PBA，1977，2，ρ· 1441 )、延迟型足底浮肿(Lipids, Taki H，1993，28，ρ· 873 )、 抑制血压上升(Lipids, Cedric H, 1984,19, p. 699 )等作用，在in vitro中抑制产生白细胞介素_2、10、肿瘤坏死因子(TNF-α)等细胞因子的作用(Immunology, Maaike MBffD, 2003,110, ρ·348 ；The Journal of Immunology, Deniela S,1989,143, p.1303 )、 抑制产生白三烯的作用(Archives of DermatoIogicalResearch, Iversen L, 1992,284, ρ· 222 )、抑制 T cel I 增殖作用(Prostaglandine Leukotrienes and Essential Fatty Acids, Zurier RB, 1999,60, p. 371 )等。生物(特别是皮肤)的生理功能与PUFA的关系，已经在很多领域对其进行了研究，例如在缺乏EFA的状态下长期饲养大白鼠等动物时，确认有皮肤脱屑、水分含量降低、 水分缺失量上升等症状、特别是伴随有皮肤功能异常的现象。此外，推测其他湿疹、接触性皮肤炎、紫外线引起的皮肤损伤等各种皮肤疾病与PUFA的参与有很大关系。并且，如上所述GLA对各种疾病的预防、治疗是有用的，其中确认GLA对皮肤疾病特别是特应性皮肤炎有效(American Journal ofClinical Nutrition, Harrobin DF,2000,71, p367 )。研究发现，起初患有特应性皮肤炎的患者的血清中的LA量，与健康常人相比明显增加，而当时LA的代谢产物DGLA及AA的量反而在降低。这足以表明在患有特应性皮肤炎的患者的n6系列PUFA的代谢途径中，从LA到GLA的转换酶Λ 6去饱和酶的功能可能在降低。因此，推测摄取处于Λ 6去饱和酶下游的PUFA，能够改善这种伴随发生PUFA代谢异常的疾病。研究是否能够通过摄取其中在自然界存在比较多的月见草、黑茶子(cassis)、 琉璃苣(common borage)的种子内含有的大量的GLA，来改善特应性皮肤炎的各种症状。其结果报告,在人体试验中经口摄取GLA(每日约180mg/人 1440mg/人)，能够改善特应性皮肤炎的皮肤炎症或瘙痒感，特别是每日以720mg/人或1440mg/人的高用量摄取的患者效果更好。当时发现GLA能够增加生物体的DGLA及AA的量，特别能够更有效地增加DGLA的量,进而确认症状改善与DGLA之间存在正相关性(ProstaglandinsLeukotrienes and Medicine, Mauku MS, 1982,9, p. 615 ；TheLancet, Wright S, 1982, 20, p. 1120 )。其有效性在特应性皮肤炎动物模型NC/Nga小鼠上也得到了确认，判明经口摄取 GLA(每日约1250mg/kg)，具有抑制形成特应性皮肤炎以及抑制产生IgE的效果(第50次日本变态反应学学会总会摘要集，滨田瑞，2000，p. 999 )。如上所述，要改善特应性皮肤炎摄取H6PUFA中的GLA是有用的，因此推测优选摄取预测为其活性本体的DGLA更加有效。但是，以纠正如上述特应性皮肤炎的PUFA代谢异常为目的摄取GLA时，有可能没有设定恰当的用量。对于豚鼠，使其每日以约3200mg/kg的超量摄取GLA时，与每日摄取约 400mg/kg时相比，其表皮中的DGLA量反而减少，产生这种给药量与生物体PUFA量的增加不相关的现象(Prostaglandins Leukotrienes and Essential FattyAcids, Navarette R, 1992，46，p. 139 )。这表明摄取大量GLA时，GLA向DGLA的转换有可能受到阻碍。就是说，假如大量摄取GLA时，生物体的DGLA量不但不增加反而有降低的可能性， 这样就蕴含着使特应性皮肤炎恶化的危险性。并且大家都知道人体内的GLA的代谢存在着个体差异，向特应性皮肤炎患者给与GLA时，红细胞膜DGLA量的增加度因患者的情况而不同，其中DGLA量增加的患者群的皮肤炎症状明显缓解，相反DGLA量不增加的患者群的皮肤炎症状没有得到改善(British Journal ofDermatology, Henz BM, 1999,140, p. 685 )。 这表明摄取GLA对增加DGLA量并不一定有效，进而在治疗特应性皮肤炎时，GLA的最适合用量不一定是DGLA的最适合用量。另一方面，确认摄取DGLA后，体内DGLA量随着用量的增加而增加(第58次日本营养食粮学会大摘要集，堀川千贺，2004，p. 219 )，对于假如摄取大量DGLA后生物体的 DGLA量仍降低的事情是难于理解的。并且确认上述因GLA引起的代谢酶障碍，原来该酶的活性比较高，对于认为随着加龄活性并不降低的碳链延长酶，其酶反应有可能受到基质环境或其他因素的影响。其结果认为摄取GLA时，DGLA的增加量在各种条件下有可能发生变动，这充分表明对通过摄取GLA治疗特应性皮肤炎进行适当控制是困难的。以上从安全性或有效性方面来看，认为在治疗或预防特应性皮肤炎时，与摄取GLA相比，优选直接摄取DGLA本品，并且认为提供最合适的用量是非常重要的。但是，虽然有些肉、蛋、鱼贝类中含有DGLA，但其种类有限，对于菜食主义者等很少吃肉的人来说，从天然物中摄取DGLA是极其困难的。此外，虽然天然存在DGLA，但其量极低难于大量制备，因此如上述GLA试验一样，使用实际的DGLA实施其对特应性皮肤炎的效能检验是极其困难的。也就是说，在我们所了解的范围内，还没有用DGLA本品改善特应性皮肤炎的直接的证明。此外如上所述，虽然DGLA在动物的in vivo试验、或从动物、人体得到的细胞株的in vitro试验中表现具有各种生理作用，但都难于说是特应性皮肤炎的模拟试验，实际上DGLA是否能改善特应性皮肤炎，这个问题还没有明确的答案。如日本国专利第3354581号所述，发明者以往发明了制备缺损Λ5去饱和酶的微生物、以及利用本菌株发酵生产DGLA油脂的方法，因此能够大量调制其构成脂肪酸的约 40%含有DGLA的甘油三酯SUNTCD，克服了取得DGLA原料的困难。近年来，对于特应性皮肤炎、湿疹、干癣等皮肤疾病，支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、过敏性肺炎、嗜酸细胞性肺炎等呼吸系统疾病，嗜酸细胞性胃肠炎、溃疡性大肠炎等消化系统疾病等各种疾病，已搞清楚在这些炎症局部发生嗜酸细胞浸润，推测这些病态的形成、进展与嗜酸细胞的参与有很大的关系。以上述事实为背景，尝试通过抑制下述过程来预防、治疗这些疾病，这些过程是嗜酸细胞向病巢部组织的浸润过程，具体为嗜酸细胞的活化、粘附于血管内皮、向血管外游走、在趋化因子的作用下向病巢部迁移(AmericanJournal of Clinical Dermatology, Chari S,2001,2, p.I ，Paediatric Respiratory Reviews, McMillan RM,2001,2,p.238 ，Agents Actions, Rask-Madsen J, 1992，C37 ，日本特许平8-3036号公报)。例如，将临床上已经确认其有用性的治疗皮肤疾病的类固醇外用剂或免疫抑制剂，用于特应性皮肤炎样动物模型NC/Nga小鼠身上，结果判明能够使皮肤症状的恶化明显减轻，同时能够明显抑制向皮肤病巢部浸润的嗜酸细胞数(Japanese Journal of Pharmacology, Hiroi J，1998，76，p. 175 )。此外，作为嗜酸细胞的趋化因子、且具有使嗜酸细胞向病巢部集聚的性质的生物体物质中可以例举白三烯B4，证明该物质是通过5-脂加氧酶合成的。与此相反，5-脂加氧酶抑制剂能够抑制该酶的活性，所以抑制白三烯B4的生成， 不仅如此，其还继续抑制生物体的重要的嗜酸细胞的浸润。其结果判明能够减轻与白三烯类或嗜酸细胞的参与有很大关系的夜间性哮喘的呼吸障碍，表明该化合物对呼吸系统疾病的有用性(American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine,Wenzel SE, 1995，152,p. 897 )。这表明这些医药品能够抑制嗜酸细胞的异常状态，对预防、治疗各种疾病是有用的。但另一方面，事实上又存在其安全性、使用方法方面的问题。使用类固醇外用剂时，会出现使用时的红潮、皮肤萎缩、中断给药后反而使皮肤炎症恶化的反弹现象等副作用；使用免疫抑制剂时，有可能使皮肤肿瘤的发生期提前、或因涂布部位及皮肤的屏障功能状态而大大影响药效(日本皮肤科学会杂志，古江益隆，2004， 114，p. 135 )；使用5-脂加氧酶抑制剂时，必须每日4次经口摄取，认为长期服用会引起消化不良(ZYFLOtmFILMTAB (注册商标)附录文件，Abbott laboratories, 1998)。所以在这种背景下，需要在医学上是有用的、任何人都可以安全使用的、且能够有效地抑制嗜酸细胞功能的原材料。从上述观点出发，考虑在医学上、营养学上有用的食品成分时，可以例举如图2所示的n-3系列多不饱和脂肪酸(PUFA)的二十碳五烯酸(EPA)或二十二碳六烯酸(DHA)，作为其候补原材料之一。这些成分在海产动物脂内、特别是金枪鱼、沙丁鱼等的鱼油内含量比较多。这些都是我们人类常年累月经常摄取的物质，是安全性极高的原材料。此外，对这些物质的生理功能进行了大量研究，表明前者具有抑制血栓的效果，后者具有提高学习能力等有用性(功能性脂质新展示，铃木修，2001)。此外,其他的有用生理活性之一可以例举抗过敏效果(TheEuropean Respiratory Journal, Nagatsuka T,2000,16, p.861 ，The Journal of Infectious Diseases, McMurray DN, 2000,182，p. 861 )，推测其分子作用机理之一是对免疫效应细胞给与一些影响。作为证明该推测的试验之一，如日本特开平10-1434所示，失泽等研究了 EPA及DHA 对嗜酸细胞的游走产生的影响。其中，用IOOmgEPA乙酯、或50mgDHA乙酯向豚鼠腹腔内给药，表明在豚鼠延迟型过敏反应中能够抑制嗜酸细胞的游走。但是，本试验是为了确认将EPA及DHA从腹腔内给药时的生物反应的试验，但不能说是以食品形态实际经口摄取状况的模拟，对于腹腔内给药与经口给药，容易推测前者的嗜酸细胞浸润的组织是腹腔，腹腔内EPA及DHA的浓度绝对高，即其是生理活性容易检出的状况。因此，通过经口摄取实际上是否具有这样的效果还不明确。此外，还有认为是因EPA或DHA的结构学特征引起的易氧化性和产生恶臭的问题。 EPA或DHA的分子内有不饱和键部分，即容易发生氧化反应的部分，EPA有5个、DHA有6个。 这些物质发生氧化后质量明显下降，不仅破坏上述有用的生理功能，而且生成的氧化分解物可能会对生物体产生不好的影响。并且这些PUFA的氧化分解物会释放出严重的恶臭，随着时间的延长，氧化加速，恶臭的程度增加。作为防止这些EPA或DHA易氧化的对策，虽然考虑到防止氧化剂、抑臭剂、掩蔽剂等，但其防止氧化的效果或持续性仍未达到满意的程度，或存在因添加剂引起的外观混浊等各种问题，因此都不是有效的防止对策(日本特开平2-55785号公报，日本特开平 3-100093号公报，日本特开2004-137420号公报)。就是说，即使EPA或DHA的生理活性是有用的，采取各种对策也很难使其性质保持稳定，这就成为影响其在食品方面的利用范围的理由之一。综上所述，期望得到医药上有用的、安全性好、质量稳定的食品原材料。
近年来，因环境、饮食生活的变化、遗传因素等原因引起的过敏性疾病的患者的人数急剧增加。过敏性疾病的病态，以其病态形成机理或相关功能分子为基础，大致分为I型到IV型，认为肥大细胞与其中被称为I型过敏反应的速发型过敏反应的其中之一密切相关。I型过敏反应的情况下，如果生物体暴露在某种抗原下，通过抗原提示细胞、协助者T细胞，由B细胞产生抗原特异性IgE抗体。其后，IgE抗体结合在肥大细胞的表面，处于对再次入侵的抗体进行监视的状态， 该状态的肥大细胞在膜表面捕获再次入侵的抗原，发生脱颗粒，释放出组胺、白三烯等各种化学传递物质。接着，这些化学传递物质与受体结合，就会引起所谓的“过敏反应”的浮肿、 发红、发痒、气管反应性增加或粘液分泌增加等对人体不好的生理现象。在这种背景下，形成了抑制肥大细胞的功能、具体为抑制肥大细胞脱颗粒抑制化学传递物质释放的方法，抑制合成化学传递物质的方法，或抑制释放的化学传递物质与受体结合的方法等，特别是通过抑制肥大细胞产生的化学传递物质的作用，减轻过敏反应的方法。证明现在在减轻特应性皮肤炎的发痒症状或在治疗花粉症、过敏性结膜炎等方面使用的医药品，均是以上述的作用机理为基础的(Internet HP “风湿病·变态反应-信息中心”、长谷川真纪、2005. 04. 04、变态反应-炎症性疾病-新探讨、黑泽元博、1994)。但是也有报告指出，不仅上述肥大细胞产生的化学传递物质的功能发生改变，病巢部确认的肥大细胞的数目本身也发生变化。例如证明过敏性鼻炎患者的鼻腔粘膜上的肥大细胞的分化及增殖具有比非过敏性的增多的倾向(日本耳鼻咽喉科学会会报、吉田尚史、2001，104，P. 504 )。此外，证明局部存在于哮喘患者的支气管平滑肌束内的肥大细胞与健康常人相比，具有明显的高值(Current Opinion inAllergy and Clinical Immunology, Peter B,2003,3,p.45 )。对于皮肤疾病也有同样的报道，例如报道在基底细胞癌、寻常性干癣、特应性皮肤炎病巢部等的肥大细胞增多(变态反应、山本升壮、2000，49，p. 455 )。就是说，作为抑制或减轻与肥大细胞数增多密切相关的疾病的手段，不仅要控制炎症性细胞、特别是肥大细胞产生的化学传递物质的量或功能，而且要抑制肥大细胞本身的异常增殖，必须使本细胞数保持正常的水平，推测通过抑制本过程能够实现更有效地预防或治疗多方面的疾病。例如将临床上确认对过敏性皮肤炎等有用的类固醇外用剂或免疫抑制外用剂，用于患有同样疾病的动物模型NC/Nga小鼠身上，结果证明不仅明显改善了伴随皮肤发炎时的皮肤炎症状、明显抑制了血中IgE升高，同时也明显抑制了皮肤病巢部增加的肥大细胞数(Japanese Journal of Pharmacology, Hiroi J, 1998, 76, ρ· 175 )。这也充分表明治疗效果与肥大细胞数可能是相关的，此外，也可以证实使肥大细胞数控制在适当的水平是重要的。这就说明这些医药品对于预防、治疗过敏性疾病等与肥大细胞相关的各种疾病是有用的，另一方面，事实上又存在其安全性或使用方法方面的问题。使用类固醇外用剂时， 会出现使用时的红潮、皮肤萎缩、中断给药后反而使皮肤炎症恶化的反弹现象等副作用；使用免疫抑制剂时，有可能使皮肤肿瘤的发生期提前、或因涂布部位及皮肤的屏障功能状态而大大影响药效(日本皮肤科学会杂志，古江益隆，2004，114，p. 135 )。所以在这种背景下，需要在医学上有用的、任何人都可以安全使用的、且能够有效地抑制肥大细胞数增加的原材料。
专利文献1日本国特许第3354581号专利文献2日本特开平8-3036号公报专利文献3日本特开平2-55785号公报专利文献4日本特开平3-100093号公报专利文献5日本特开2004-137420号公报非专利文献ICosmetic & Toiletries, Nissen HP，1995，110，P. 71 非专利文献2Diabetic Medisine，Jamal GA，1990，7，p. 319 非专利文献3Arthritis Rheumatisum，Zurier RB，1996，39，p. 1808 非专利文献4British Medical Journal, Kernoff PBA，1977，2，p. 1441 非专利文献5Lipids，Taki H，1993，28，p. 873 非专利文献6Lipids，Cedric H，1984，19，p. 699 非专利文献7Immunology，Maaike MBWD, 2003,110，p. 348 非专利文献8The Journal of Immunology, Deniela S，1989，143，p. 1303 非专利文献9Archives of Dermatological Research, Iversen L，1992，284， p. 222 非专利文献 lOProstaglandine Leukotrienes and Essential Fatty Acid， ZurierRB，1999，60，p.371 非专利文献llAmerican Journal of Clinical Nutrition, Harrobin DF, 2000, 71，p367 非专利文献12Prostaglandins Leukotrienes and Medicine，Mauku MS, 1982,9, p. 615 非专利文献13The Lancet, Wright S，1982，20，p. 1120 非专利文献14第50次日本变态反应学学会总会摘要集，滨天瑞，2000，p. 999 非专利文献 15Prostaglandins Leukotrienes Essential Fatty Acids， Navarette R，1992，46，p.139 非专利文献16British Journal of Dermatology, Henz BM，1999，140，p. 685 非专利文献17第58次日本营养食粮学会摘要集，堀川千贺，2004，p. 219 非专利文献18功能性脂质新展示，铃木修，2001非专利文献19 Y-Linolenic Acid，Recent Advances inBiotechnology and Clinical Applications, Hundy YS,2001非专利文献20American Journal of Clinical Dermatology, Chari S, 2001, 2, p. 1 非专利文献21PaediatricRespiratory Reviews,McMi 1 lan RM，2001，2，p. 238 非专利文献22Agents Actions，Rask-Madsen J，1992，C37 ，特開平 8-3036)。非专利文献23Japanese Journal of Pharmacology，HiroiJ，1998，76，p. 175 非专利文献24American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine，Wenzel SE，1995，152，p.897 非专利文献25日本皮肤科学会杂志，古江益隆，2004，114，p. 135 非专利文献26ZYFL0 TM FILMTAB 附录文件，Abbott laboratories，1998
非专利文献27The European Respiratory Journal, Nagatsuka T, 2000,16, p. 861 非专利文献28The Journal of Infectious Diseases, McMurray DN, 2000,182, p. 861 非专利文献29British Medical Journal, Kernoff PBA, 1977, 2, p. 1441 非专利文献30The Journal of Immunology, Deniela S, 1989,143, p. 1303 非专利文献31Archives of Dermatological Research, Iverson L, 1992,284, p. 222 非专利文献32长谷川真纪、2005. 04. 04、变态反应-炎症性疾病-新新探讨、黑泽元博、199非专利文献33日本耳鼻咽喉科学会会报、吉田尚史、2001，104，p. 504 非专利文献34CurrentOpinion in Allergy and ClinicalImmunology,Peter B, 2003, 3, p.45 非专利文献35Prostaglandine Leukotrienes and Essential Fatty Acids, Gueck T,2003,68,p.317 非专利文献36Veterinary Dermatology, Gueck T, 2004，15，p. 309

发明内容
本发明的目的是，为了安全且更加有效地预防和治疗特应性皮肤炎，提供适量的 DGLA。本发明发现，经常因种种因素致使PUFA及其相关代谢产物的量和质发生异常，以此为原因又导致了不好的生物反应，或者相反，因发生了不好的生物反应，结果导致PUFA 及其相关代谢物的量和质发生异常，在这种情况下通过积极摄取PUFA来纠正这种异常状态是最基本的原理，特别是在改善特应性皮肤炎的PUFA异常状态方面，PUFA中尤其是n6系列PUFA的DGLA是极其有用的，且使用比GLA量更少的量就可以，完成了本发明。因此，本发明提供含有DGLA、对皮肤疾病具有预防或治疗效果的组成物。该组成物，例如是食品组成物或医药组成物。上述皮肤炎，例如是过敏性皮肤炎，如特应性皮肤炎。上述组成物中的DGLA的含量，例如是成人每人每日摄取5mg 600mg DGLA的适当量。例如、DGLA的摄取量是成人每人每日5mg 200mg,或5mg 150mg。DGLA例如以甘油酯、磷脂质、糖脂质、烷基酯或游离脂肪酸的形式存在，上述甘油酯是甘油三酯、甘油二酯、单酸甘油酯，上述甘油酯优选甘油三酯及/或甘油二酯。组成物例如是丸剂、片剂或胶囊剂的形式。本发明的组成物还可以是含有DGLA、标示其具有预防或治疗皮肤疾病的效果的饮食物的形式，例如可以是含有的DGLA量为成人每人每日的摄取量5mg 600mg、且附有表明其具有预防或治疗皮肤疾病效果的标示的饮食物，并且还可以是含有的DGLA量为成人每人每日的摄取量5mg 200mg，且附有表明其具有预防或治疗皮肤疾病效果的标示的饮食物，或者是，含有的DGLA量为成人每人每日的摄取量5mg 150mg，且附有表明其具有预防或治疗皮肤疾病效果的标示的饮食物。
本发明的其他目的是，提供能够安全且更加有效地预防或治疗与嗜酸细胞浸润或嗜酸细胞数增加密切相关的各种疾病的食品或医药组成物。本发明者为了解决上述课题进行了潜心研究，结果首次发现二均-Y-亚麻酸 (DGLA)对抑制嗜酸细胞浸润极其有用，且与其他PUFA相比能够有效地进行抑制，完成了本发明。因此，本发明提供含有DGLA、对与嗜酸细胞浸润、嗜酸细胞数增加密切相关的各种疾病具有预防或治疗效果的组成物。该组成物例如是食品组成物或医药品组成物。上述各种疾病例如是特应性皮肤炎、湿疹、干癣等皮肤疾病，支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、过敏性肺炎、嗜酸细胞性肺炎等呼吸系统疾病，嗜酸细胞性胃肠炎、溃疡性大肠炎等消化系统疾病等。如图2所示，EPA、DHA被称为n_3系列PUFA，而从体内合成途径的关系来看DGLA 属于n-6系列PUFA。DGLA虽然是肉、蛋、鱼贝类等中含有的安全性极高的食品成分，但总的来说，证明其含量与EPA、DHA或同n-6系列PUFA的花生四烯酸相比极其少。如日本专利第3354581号所述，本发明者们以往发明了利用菌株发酵生产DGLA油脂的方法，使大量调制其构成脂肪酸的约40%含有DGLA的甘油三酯SUNTGD成为可能。从结构学来看，DGLA有 3个不饱和键，比EPA、DHA的少，由此可以判断，该成分抗氧化性强，因此产生的臭味少质量稳定性高。关于DGLA的生理活性,在in vivo或in vitro中其效果的一部分得到了确认,报道其具有下述作用在in vivo中抑制血小板凝集(British Medical Journal, Kernoff PBA, 1977，2，p. 1441 )、延迟型足底浮肿(Lipids, Taki H，1993，28，p. 873 )、抑制血压上升(Lipids, Cedric H, 1984,19, ρ· 699 )等作用，在in vitro中抑制产生白细胞介素-2、10、肿瘤坏死因子(TNF-α)等细胞因子的作用(Immunology，Maaike MBffD, 2003, 110,ρ· 348 ；The Journalof Immunology,Deniela S, 1989,143,ρ· 1303 )、抑制产生白三烯的作用(Archives of Dermatological Research, Iversen L, 1992, 284, ρ· 222 )、抑制 T cell 增殖作用(Prostaglandine Leukotrienesand Essential Fatty Acids,Zurier RB, 1999,60, p. 371 )等。但是，关于对嗜酸细胞产生的影响还没有直接的证明，如上所述，虽然很容易推测 DGLA有高安全性和良好的质量稳定性，但是在生理功能方面，特别是对嗜酸细胞是否产生作用，进而如果有作用，其作用的强度与其他PUFA相比如何等问题，一概不知。DGLA例如以甘油酯、磷脂质、糖脂质、烷基酯或游离脂肪酸的形式存在，上述甘油酯是甘油三酯、甘油二酯或单酸甘油酯，上述甘油酯优选甘油三酯及/或甘油二酯。组成物例如是丸剂、片剂或胶囊剂的形式。本发明的组成物还可以是，含有DGLA、且标示其具有预防或治疗与嗜酸细胞浸润或嗜酸细胞数增加密切相关的各种疾病效果的饮食物的形式。例如可以是，含有DGLA、且附有表明其具有预防或治疗与嗜酸细胞浸润或嗜酸细胞数增加密切相关的各种疾病效果的标示的饮食物。本发明的进一步目的是，提供能够安全且更加有效地预防或治疗与肥大细胞数增加密切相关的各种疾病的食品或医药组成物。
本发明者们为了解决上述课题进行了潜心研究，结果首次发现二均-Y-亚麻酸 (DGLA)对抑制肥大细胞数增加极其有用，完成了本发明。从医学或营养学方面来考虑有用食品成分时，如图2所示的n-6系列多不饱和脂肪酸(PUFA)的二均-Y-亚麻酸(DGLA)可以是其中候补原材料之一。肉、蛋、鱼贝类等中含有DGLA，这些都是我们人类长年累月经常摄取的安全性极其高的原材料，但是总的来说， 证明其含量与同n-6系列PUFA的花生四烯酸或n-3系列PUFA的EPA或DHA相比极低。如日本专利第3354581号所述，本发明者们以往发明了利用菌株发酵生产DGLA油脂的方法， 使大量调制其构成脂肪酸的约40%含有DGLA的甘油三酯SUNTGD成为可能。关于本成分的生理活性,在in vivo或in vitro中其效果的一部分得到了确认， 报道其具有下述作用在in vivo中抑制血小板凝集(British Medical Journal,Kernoff PBA, 1977，2，p. 1441 )、延迟型足底浮肿(Lipids, Taki H，1993，28，p. 873 )、抑制血压上升(Lipids, Cedric H, 1984,19, ρ· 699 )等作用，在in vitro中抑制产生白细胞介素-2、10、肿瘤坏死因子(TNF-α)等细胞因子的作用(Immunology，Maaike MBffD, 2003, 110,ρ· 348 ；The Journalof Immunology,Deniela S, 1989,143,ρ· 1303 )、抑制产生白三烯的作用(Archives of Dermatological Research, Iverson L, 1992, 284,ρ· 222 )、抑制 T cell 增殖作用(Prostaglandine Leukotrienesand Essential Fatty Acids,Zurier RB，1999，60，p. 371 )等，但是还没有关于对肥大细胞产生影响的直接证明。另一方面，研究同n-6系列PUFA中的亚油酸(LA)及Y-亚麻酸(GLA)对肥大细胞产生的影响，对于前者，有报告指出从株化的肥大细胞种中释放的刺激应答性组胺增力口 (ProstaglandineLeukotrienes and Essential Fatty Acids, Gueck T,2003,68, p. 317 ),对于后者,确认在同试验系中抑制组胺的释放(VeterinaryDermatology,Gueck T，2004，15，p. 309 )。但是，所有的研究都是在讨论对肥大细胞中化学物质的释放产生的影响，两者均不知道是否会对肥大细胞的数量产生何种程度的影响。如上所述，根本不清楚DGLA是否会对肥大细胞的数量产生何种程度的影响。因此，本发明提供含有DGLA、对与肥大细胞数增加密切相关的各种疾病具有预防或治疗效果的组成物。该组成物例如是食品组成物或医药品组成物。上述各种疾病是特应性皮肤炎、湿疹、干癣、基底细胞癌、棘细胞癌等皮肤疾病， 支气管哮喘、花粉症、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎等。DGLA例如以甘油酯、磷脂质、糖脂质、烷基酯或游离脂肪酸的形式存在，上述甘油酯是甘油三酯、甘油二酯或单酸甘油酯，上述甘油酯优选甘油三酯及/或甘油二酯。组成物例如是丸剂、片剂或胶囊剂的形式。本发明的组成物还可以是含有DGLA、且标示其具有预防或治疗与肥大细胞数增加密切相关的各种疾病效果的饮食物的形式，例如可以是含有DGLA、且附有表明其具有预防或治疗与肥大细胞数增加密切相关的各种疾病效果的标示的饮食物。


图I表示η6系列高度不饱和脂肪酸(PUFA)的代谢途径。图2表示η6系列及η3系列高度不饱和脂肪酸的代谢途径。
具体实施例方式下面对本发明进行详细说明。食品组成物可以是辅助食品、及(医药)处方物及调制品，如片剂、丸剂及胶囊剂。 并且还可以是固体或液体食品，如乳制品(人造黄油、黄油、牛奶、酸奶)、面包、西式糕点； 饮料类，如饮料(茶、咖啡、可可、巧克力饮料)、水果汁、软饮料(如碳酸饮料)；糕点；油性食品(小吃、色拉调味汁、蛋黄酱)、汤、西餐调味汁、富含碳水化合物的食品(米饭、面类、意大利面食)、含鱼肉食品、婴儿食品(如常规液体或粉状)、宠物食品以及调理好的食品或能够用微波炉调理的食品。DGLA可以从任意的适当的来源得到，但是几乎没有已知的高DGLA含量的天然油脂源，能够从牛的肝脏、猪的肾脏、卵黄等中提取出极其微量的DGLA。近年来随着微生物发酵技术的进步，可以从微生物如真菌类、细菌类或酵母中得到。适当的真菌类是属于毛霉目(Mucorales)如被孢霉属(Mortierella)、腐霉属 (Pythium)或Entomophyhora的真菌。DGLA的来源优选被孢霉属(Mortierella),更优选来源于高山被孢霉(Mortierella alpina)。含有DGLA的油脂,如日本专利第3354581号所述，本发明者根据使用被孢霉属(Mortierella)的微生物发酵法调制出其构成脂肪酸的约 40 %含有DGLA的甘油三酯。本发明还可以在DGLA的基础上提供附加的I种或I种以上的PUFA，可以在DGLA 上附加别的n-6系列PUFA (例如亚油酸(LA)、Y -亚麻酸(GLA)、花生四烯酸(AA)等)，也可以附加n-3系列PUFA (如EPA、DHA)。在该酸的生理活性允许的范围内，本发明使用的DGLA能够变化的功能性衍生物可以是，含有DGLA的甘油三酯、甘油二酯、单酸甘油酯形式，或含有DGLA的磷脂质、糖脂质的形式，并且也可以是含有DGLA的游离脂肪酸、脂肪酸酯(如甲酯或乙酯)、固醇酯的形式。优选PUFA存在于油中，可以是纯净油、加工油(例如化学及/或酶处理油)、或浓缩油。这些油可以含有10% 100%的PUFA，如果油来源于微生物，则期望的PUFA如DGLA 的含量可以为油中的5%或大于5%，优选等于或大于10%，更优选等于或大于25%。在这些百分比的浓度范围内该油可以含有I种或I种以上的PUFA。该油可以是由单一细胞或微生物得到的单一油，也可以是由其他来源得到的2种或2种以上油的配合油或混合油。该油可以含有如I种或I种以上的添加物，如抗氧化剂(如维生素E、维生素E、生育三烯酸、 抗坏血酸衍生物、棕榈酸盐或酯、虾青素)或芝麻素、CoQlO等。对于正常的健康的饮食充分的个体即其PUFA表现为正常值的个体，本发明能够用于提高其PUFA水平、预防疾病、保持健康。但是，也可以用于PUFA水平低或不足的个体，例如，能够用于预防、防止、改善、治疗与血中n3系列或n6系列PUFA异常或低水平相关的疾病或状态。因此，本发明能够给 DGLA水平低的被验者如其LA不能转化成GLA及DGLA、GLA不能转化成DGLA的被验者及/ 或不能有效转化的被验者提供使用。因此，适合的患者其△ 6去饱和酶及/或碳链延长酶可以功能不全、不充分或缺乏。本发明特别给DGLA水平低的人提供使用，例如给特应性皮肤炎等处于免疫水平异常状态时的被验者使用，该免疫水平异常状态指免疫水平比通常低或高的状态。
本发明可以用于纠正DGLA水平低的状态、DGLA水平偏离正常进行变动的状态或其他状态，例如可以在接触性皮肤炎、湿疹、紫外线引起的皮肤损伤等各种皮肤疾病，慢性风湿性关节炎，糖尿病患者，酒精中毒者、吸烟者等中使用。本发明特别给患有皮肤疾病、呼吸系统疾病、消化系统疾病等与嗜酸细胞浸润或嗜酸细胞数增加密切相关的各种疾病的被验者提供使用。皮肤疾病指特应性皮肤炎、湿疹、干癣等，呼吸系统疾病指支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、过敏性肺炎、嗜酸细胞性肺炎等，消化系统疾病指嗜酸细胞性胃肠炎、溃疡性大肠炎等各种疾病。本发明特别给确认有肥大细胞数增加的各种疾病的被验者提供使用，确认有肥大细胞数增加的各种疾病指的是特应性皮肤炎、湿疹、干癣、基底细胞癌、棘细胞癌等皮肤疾病，支气管哮喘、花粉症、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎等各种疾病。实施例下面用实施例对本发明进行更加具体的说明。实施例I如上所述，因为预测摄取DGLA对特应性皮肤炎的预防或治疗有用，所以将DGLA油脂的甘油三酯SUNTGD用于实验动物，研究其有用性。甘油三酯SUNTGD是按照日本专利第 3354581号所述的方法进行调制的，其以DGLA为主要构成脂肪酸。本次使用NC/Nga小鼠作为特应性皮肤炎的动物模型，本动物模型被确认为现在最有用的特应性皮肤炎的动物模型之一，证明实际上在特应性治疗的临床现场使用的类固醇外用剂或免疫抑制剂等在本动物模型身上也有效，因此在特应性皮肤炎治疗药物的筛选试验上被广泛使用。本动物在通常的饲养环境下，在出生后约8周前后自然发病患皮肤炎后，其炎症状况随着时间的延长而加剧、慢性化，因此不管从肉眼上看还是从病理组织学上看，都可看出其呈现人体的特应性皮肤炎的症状。此外，伴随着皮肤炎症的发作，呈现出本病态的特征，如血清中的IgE升高、病巢部中的肥大细胞或嗜酸细胞、T细胞等免疫效应细胞明显浸润。该试验中准备了雄性或雌性NC/Nga小鼠，在通常的饲养环境下设定3组，每组7 只。如表I所示，调制了下述3种食物，离乳后的5周龄以后，使其自由摄取食物直到试验结束的12周龄。把组分为对照食组、高DGLA食组、低DGLA食组，对于后两组添加SUNTCD， 设定高DGLA食组的食物中约含I. O %的DGLA (以游离脂肪酸量计算)，设定低DGLA食组的食物中约含O. 5%的DGLA(以游离脂肪酸量计算)。小鼠体重平均20g，平均每日摄食量约 2g，计算该试验中的DGLA的摄取量，推算高DGLA食组每日约1000mg/kg，低DGLA食组每日约500mg/kg。此外，使每一组的食物中的总脂肪酸量一律为5%。在双盲试验条件下，评价项目为的皮肤炎症状的肉眼评分、搔爬反射、血中IgE。研究结果没有发现体重变化或一般所见的异常，与对照食组相比较，两DGLA摄取组在肉眼评分(表2)、搔爬反射(表3)、血浆中IgE(表4)产生量的任一评价项目中，表示具有统计学上的显著抑制作用，这表明摄取DGLA对预防特应性有可能有用。此外，此时血浆中的脂肪酸组成(表5)反映了食物的影响，发现在任何脏器中，随着DGLA饲料的用量的增加DGLA的量增加，而LA的量减少，特别是脾脏中的脂肪酸组成变化显著，由此可以预测 DGLA能够对免疫系统的生理功能产生强的影响。并且令人吃惊的是，本预测效果与DGLA用量没有依存性，即低DGLA食组比高DGLA食组表现有更强的预防特应性的效果。如上所述，发现生物体的脂肪酸组成随着DGLA的用量的增加而增加，所以不会因 DGLA自身的吸收障碍等减弱作用。上述事实更加表明，对于本动物模型或人体的DGLA的特应性预防效果，存在最适当的用量，换句话说，比本次使用的低DGLA食饲料的用量更低的用量可能会产生最高的抑制效果。进而对DGLA食引起的血浆中DGLA量的变动进行特别关注，发现对特应性皮肤炎样症状改善特别有效的低DGLA食的血浆磷脂质中DGLA含量为4. 3 %，对照食组的血浆磷脂质中的DGLA含量为1.0%，作为含有比率约增加4倍或按重量％约增加3%，证明血浆中DGLA量增加是对特应性皮肤炎的治疗效果产生大的作用的参数之一。认为如果人体摄取DGLA后能够促进这种DGLA量的变化，那么也能够改善特应性皮肤炎。此外如上所述，已有GLA用于本动物模型的相关报道(第50次日本变应性学会总会摘要集，滨田瑞，2000，p. 999 )，当时用量是每日大约1250mg/kg，本次使用的低DGLA 食饲料大约只是其一半或低于一半的500mg/kg,但与GLA相比,确认DGLA更能有效地预防特应性皮肤炎。并且，在别的报告中研究将n3系列PUFA的ALA用于相同动物模型的试验 (ProstaglandinsLeukotrienes and Essential Fatty Acids, Suzuki R,2002,66, p.43)。 虽然无法知道其正确的给药量，但至少发现虽然含有大量ALA的食物能够使生物体的红细胞膜内的ALA明显升高，但没有改变皮肤炎症状、血中IgE等预防特应性皮肤炎的效果。表I :各食物成分表(单位％ )
权利要求
1.DGLA在生产用于预防或治疗由紫外线引起的皮肤炎症或劣化的食品组成物或药物组成物方面的应用。
2.如权利要求I所述的应用，其中，所述由紫外线引起的皮肤炎症或劣化为皮肤急性炎症、色素沉着、日晒或皮肤癌。
3.如权利要求I或2所述的应用，其中所述食品组成物为婴儿食品。
4.如权利要求I 3中任一项所述的应用，其中，所述食品组成物或药物组成物为丸剂、片剂、胶囊剂或粉剂的形态。
5.如权利要求I 4中任一项所述的应用，其中，所述DGLA以甘油酯、磷脂质、糖脂质、 烷基酯或游离脂肪酸或其盐的形式存在。
6.如权利要求I 5任一项所述的应用，其中，所述甘油酯是甘油三酯、甘油二酯或单酸甘油酯。
7.如权利要求I 6中任一项所述的应用，其中，所述DGLA来源于微生物。
8.如权利要求I 7所述的应用，其用以生产用于治疗DGLA水平低的人的皮肤疾病的食品组成物或药物组成物。
9.如权利要求8所述的应用，其中，所述DGLA水平低的人是△6去饱和酶及/或碳链延长酶功能不全、不充分或缺乏的人。
全文摘要
提供其中含有二均-γ-亚麻酸(DGLA)、对皮肤疾病具有预防或治疗效果的食品、医药等的组成物；提供其中含有二均-γ-亚麻酸(DGLA)、对皮肤疾病具有预防或治疗效果的食品、医药等的组成物以及提供其中含有二均-γ-亚麻酸(DGLA)、对预防或治疗与肥大细胞数增加相关的疾病有效的组成物。
文档编号A61K31/557GK102600174SQ20121001644
公开日2012年7月25日 申请日期2006年2月14日 优先权日2005年2月14日
发明者河岛洋, 立石法史 申请人:三得利控股株式会社