专利名称：胆木茎皮和叶中总生物碱的提取方法
CN 102526277 A胆木茎皮和叶中总生物碱的提取方法
技术领域
本发明属于天然药物分离纯化技术领域，特别涉及一种胆木茎皮和叶中总生物碱的提取方法。
技术背景
胆木，又名药乌檀，山熊胆、熊胆树、细叶黄棵木、黄羊木等。为茜草科乌檀属乔木乌檀(Nauclea Officinalis Pierre ex Pitard)干燥的茎、枝、树皮和根。胆木性味苦、寒，具有清热解毒、消肿止痛之功效。我国广西、广东和海南民间常用于感冒发热、肺炎、肠炎、痢疾、湿疹、皮疹、脓疡等病的治疗。目前有“胆木注射液”、“胆木浸膏片”、“胆木浸膏胶囊”和“胆木浸膏糖浆”四种中药制剂，临床应用于清热解毒，用于急性扁桃腺炎，急性咽喉炎，急性结膜炎及上呼吸道感染。根据现有文献报道，胆木中主要含有40多种吲哚类生物碱，多数生物碱水溶性较差、也含有少数几种水溶性较好的生物碱糖苷，另外含有少量五环三萜、留醇等有生物活性的化学成分，研究和报道中最多的是生物碱类成分。文献研究表明胆木的主要活性成分是其中的生物碱类成分。据现有的各项资料， 胆木药材现有的分离纯化方法主要有1、胆木浸膏的制备将胆木鲜的茎皮切片，粉碎成粗粉，加水1(Γ20倍，加热水煮3次， 第一次池，第二次1. 5h、第三次lh，合并水煮液后，过滤，减压浓缩至相对密度为1. 2(Tl. 23 (60°C)的浓缩液，喷雾干燥得到胆木干浸膏，主要用于制备胆木浸膏片。
2、胆木提取物溶液的制备将胆木鲜的茎皮切片，粉碎成粗粉，加水煎煮三次，第一次2 h，第二次1.5 h，第三次1 h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1. 1纩1. 19 (60 °C)的清膏，加石膏粉适量，混勻，7(T80°C减压干燥，粉碎成50目粉，加乙醇使含醇量达80%，搅拌提取三次，冷藏，静置Mh，取上清液，回收乙醇，加蒸馏水至相对密度为 1.02 1.03 (60°C)，冷至室温，用10%盐酸溶液调pH值至2.0 3.0，冷藏，静置M h，滤过， 滤液用10%氢氧化钠溶液调节pH值至7. (Γ7. 2，冷藏，静置M h，滤过，得到胆木提取物溶液，用于胆木注射液的制备。
现有提取纯化技术工艺主要存在以下不足(1)使用水作为提取介质，虽然经济但提取有效成分的效率低，使得胆木药材中的有效成分难以有效浸出，这对于生长周期长、 野生资源日益减少的胆木药材来说没有得到有效的利用；另外长时间的水煮和较高温度的浓缩会造成部分稳定性较差的有效成分发生结构变化或破坏，造成不应有的损失。(2)胆木提取物溶液的制备，因胆木茎皮用水煮，含有一定量胶质，处理时步骤多，周期长，物耗、 能耗和工时均较高，收率也不够理想。由于步骤多，反复的高温和碱性条件下的存放必然造成某些稳定性差的活性物质的变化和损失。(3)试验表明醇浓度相对较高的水溶液制备的胆木提取物具有更高的抗菌活性，目前，胆木药材主要用于胆木浸膏片和胆木注射液的生产，在中国大陆南方数省区有一定的市场，对上呼吸道感染引发的感冒、炎症等疾病有良好的治疗效果，由于胆木药材的短缺，市场情况是供不应求，随着技术的进步和市场需求的扩大，原有的制备工艺中的一些不足之处亟待改进。(4)采用醇的酸性水溶液提取不仅可以提取出水溶性较好的生物碱糖苷还可得到一些水溶性较差的生物碱，即得到胆木总生物碱
发明内容
为了解决上述现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种胆木茎皮和叶中总生物碱的提取方法。该方法以弱酸性的醇水为提取介质，采用常温浸泡提取和真空减压控温浓缩，得到了较高收率的胆木总碱提取物，降低了能耗和工时。
本发明通过下述技术方案实现一种胆木茎皮中总生物碱的分离纯化方法，包括如下步骤(1)用醇的酸性水溶液渗滤提取将胆木茎皮粉碎成粗粉后，用醇(质量百分比浓度35 75%)的酸性水溶液(质量百分比浓度1 3%)浸泡提取，第一遍渗滤液直接浓缩，第二遍以后的渗滤液视浸出物浓度反复使用于新的药材粉，循环浸泡提取至胆木茎皮粉中的生物碱浸提干净为止(采用薄层层析法以异长春花苷内酰胺在365nm紫外光灯下的显色斑点为标准)。
(2)总生物碱浓缩液制备于60°C以下减压回收醇至水溶液无醇味后，加氨水中和至pH6. 5^7. 0，继续浓缩至密度1. 16^1. 17，4°C放置过夜，过滤得到总生物碱浓缩液。
(3)总生物碱干粉或干浸膏的制备将(1)中得到的提取液回收醇至水溶液无醇味后，加氨水中和至PH6. 5 7.0，继续浓缩至密度1. 16^1. 17喷雾干燥或真空浓缩后再真空干燥得到总生物碱干粉或干浸膏。
(4)总生物碱含量的测定异长春花苷内酰胺是胆木茎皮和叶中的主要生物碱，且在2001 !!!处有显著吸收， 故选择异长春花苷内酰胺为对照可测定胆木提取物中总生物碱的相对含量。精密称取异长春花苷内酰胺1. OOmg置IOOml量瓶中加甲醇溶解后稀释至刻度，精密量取0. 1、0.2、0.4、 0. 6,0. 8,1. Oml用甲醇分别稀释到anl，用紫外可见分光光度计测定206nm处的吸光度值， 制作标准曲线。取上述总生物碱浓缩液、总生物碱干粉或浸膏适量，用甲醇溶解稀释至合适浓度，测定该甲醇液在206nm处的吸光度值，将该吸光度值与标准曲线对照即可确定浓缩液、干粉或浸膏中总生物碱的含量。
为了更好地实现本发明，所述步骤(1)中胆木茎皮粉是30 60目的胆木茎皮粉。
所述步骤(1)中所用的酸可以是盐酸、醋酸和硫酸水溶液等。
所述步骤(1)中所用的醇可以是甲醇、乙醇等。
所述步骤(1)中所用的薄层层析条件为，用GF254荧光硅胶为载体，制备薄层层析板，以氯仿甲醇乙酸乙酯(9 1 3)为展开剂，在365nm紫外光灯下显色观察。
所述步骤(2)中中和提取液中的酸可以用氨水、氢氧化钠或氢氧化钾溶液等。
所述步骤(2)中所述的冷藏放置的温度可以是圹10°C。
所述步骤(3)中中和提取液中的酸可以用氨水、氢氧化钠或氢氧化钾溶液等。4
所述步骤(3)中真空干燥的温度在5(T60°C。
所述步骤(4)用分光光度计测定异长春花苷内酰胺和总生物碱含量的波长范围是 203 210nm。
本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果(1)本发明通过醇的酸性水溶液浸泡提取，真空浓缩，大大降低了提取温度和浓缩温度，减少了提取物的受热时间，节约了能耗；提高了生物碱活性成分的浸出效率、浸出比例和浸出量；避免或减少了稳定性差的生物碱的破坏或变质，能有效获得胆木总生物碱提取物或总碱干粉。
(2)减少了胆木总生物碱浓缩液的制备工序，减少了总生物碱的损失。
(3)试验表明一定浓度的醇水溶液提取胆木中生物碱的效果好于单纯水煮提取， 用醇的酸性水溶液提取效果则更好。
(4)通过高效液相色谱与薄层色谱分析对比，该法与原有的水煮法比较相同的提取液量、提取时间和提取次数下，醇的酸性水溶液得到的总生物碱的浓度提高了 1/3 (紫外可见分光光度法定量测定)，活性生物碱的类型增加了超过1倍(薄层色谱定性检测)，原水提取法得到的提取物仅能检出4飞个生物碱成分，醇的酸性水溶液提取物能检出l(Tll个生物碱成分。
(5)提出了简便的测定胆木提取物中总生物碱的测定方法，选定了总生物碱测定的波长范围。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1(1)用醇的酸性水溶液提取将5kg胆木茎皮粉碎成30 60目的胆木茎皮粉，投入提取罐中，加入10倍胆木茎皮粉质量的含量75% (质量百分比浓度)乙醇的3% (质量百分比浓度)盐酸水溶液，室温浸泡提取2小时，放出浸出液，同法反复浸泡至异长春花苷内酰胺检出很少时止，过滤提取液后，合并真空浓缩至几无醇味，用10%氢氧化钠调节溶液的pH到6. 5^7. 0，再继续浓缩至密度为1. 16^1. 17，冷藏过夜后过滤，即得到胆木总生物碱浓缩液6. 5升。将该浓缩液真空浓缩干燥即可得到胆木总碱粉420克。
(2)总碱粉中胆木总生物碱含量的测定精密称取异长春花苷内酰胺l.OOmg置IOOml量瓶中加甲醇溶解后稀释至刻度，精密量取0. 1,0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. Oml用甲醇分别稀释到aiil，用紫外可见分光光度计测定 206nm处的吸光度值，制作标准曲线。取上述总生物碱干粉0. 100g，用70%甲醇水溶解稀释至100ml，过滤后取0. Iml用甲醇稀释到anl，测定该甲醇液在206nm处的最大吸光度值，将该吸光度值与标准曲线对照，计算出胆木总碱干粉中总生物碱的含量为2. 68%。
实施例2(1)用醇的酸性水溶液提取将3kg胆木茎皮粉碎成30 60目的胆木茎皮粉，投入提取罐中，加入10倍胆木茎皮粉质量的含量60% (质量百分比浓度)乙醇的3% (质量百分比浓度)冰醋酸水溶液，室温浸泡提取2小时，放出浸出液，同法反复浸泡至异长春花苷内酰胺检出很少时止，过滤提取液后，合并真空浓缩至几无醇味，用浓氨水调节溶液的PH到6. 5^7. 0，再继续浓缩至密度为 1. 16^1. 17，冷藏过夜后过滤，即得到胆木总生物碱浓缩液3. 6升。将该浓缩液真空浓缩干燥即可得到胆木总碱粉252克。
(2)总碱粉中胆木总生物碱含量的测定精密称取异长春花苷内酰胺l.OOmg置IOOml量瓶中加甲醇溶解后稀释至刻度，精密量取0. 1,0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. Oml用甲醇分别稀释到aiil，用紫外可见分光光度计测定 206nm处的吸光度值，制作标准曲线。取上述总生物碱干粉0. 100g，用70%甲醇水溶解稀释至100ml，过滤后取0. Iml用甲醇稀释到anl，测定该甲醇液在204nm处的最大吸光度值，将该吸光度值与标准曲线对照，计算出胆木总碱干粉中总生物碱的含量为2. 83%。
实施例3(1)用醇的酸性水溶液提取将3kg胆木茎皮粉碎成30 60目的胆木茎皮粉，投入提取罐中，加入10倍胆木茎皮粉质量的含量45% (质量百分比浓度)乙醇的3% (质量百分比浓度)硫酸水溶液，室温浸泡提取2小时，放出浸出液，同法反复浸泡至异长春花苷内酰胺检出很少时止，过滤提取液后，合并真空浓缩至几无醇味，用10%氢氧化钾调节溶液的pH到6. 5^7. 0，再继续浓缩至密度为1. 16^1. 17，冷藏过夜后过滤，即得到胆木总生物碱浓缩液3. 5升。将该浓缩液真空浓缩干燥即可得到胆木总碱粉2 克。
(2)总碱粉中胆木总生物碱含量的测定精密称取异长春花苷内酰胺l.OOmg置IOOml量瓶中加甲醇溶解后稀释至刻度，精密量取0. 1,0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. Oml用甲醇分别稀释到aiil，用紫外可见分光光度计测定 206nm处的吸光度值，制作标准曲线。取上述总生物碱干粉0. 100g，用70%甲醇水溶解稀释至100ml，过滤后取0. Iml用甲醇稀释到anl，测定该甲醇液在203nm处的最大吸光度值，将该吸光度值与标准曲线对照，计算出胆木总碱干粉中总生物碱的含量为2. 54%0
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
所述的石墨粉为纳米级颗粒，直径为40nm、纯度大于等于99. 5%、密度为2^0kg/3m ο
所述的碳纤维直径为5 μ m、长径比为10 :1、密度为1780kg/m3。
权利要求
1.胆木茎皮和叶中总生物碱的提取方法，其特征在于包括如下步骤(1)用醇的酸性水溶液渗滤提取将胆木茎皮和叶粉碎成粗粉后，用醇的酸性水溶液浸泡提取，其中醇的质量百分比浓度35 75%，酸性水溶液的质量百分比浓度1 3%，第一遍渗滤液直接浓缩，第二遍以后的渗滤液视浸出物浓度反复使用于新的药材粉，循环浸泡提取至胆木茎皮和叶粉中的生物碱浸提取干净为止，采用薄层层析法以异长春花苷内酰胺在365nm紫外光灯下的显色斑点为标准；(2)总生物碱浓缩液制备于5(T60°C真空减压回收醇至水溶液无醇味后，加碱水中和至pH6. 5 7. 0，继续浓缩至密度1. 16^1. 17，4°C放置过夜，过滤得到总生物碱浓缩液；(3)总生物碱干粉或干浸膏的制备将(1)中得到的提取液回收醇至水溶液无醇味后，加碱水中和至PH6. 5 7.0，继续浓缩至密度1. 16^1. 17喷雾干燥或真空浓缩后再真空干燥得到总生物碱干粉或干浸膏；(4)总生物碱含量的测定精密称取异长春花苷内酰胺1. OOmg置IOOml量瓶中加甲醇溶解后稀释至刻度，精密量取0. 1,0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. Oml用甲醇分别稀释到aiil，用紫外可见分光光度计测定 206nm处的吸光度值，制作标准曲线；取上述总生物碱浓缩液Iml加入IOOml容量瓶中，用甲醇稀释到刻度，取总生物碱干粉或浸膏0. 2g于IOOml容量瓶中用甲醇溶解稀释至刻度， 测定该甲醇液在206nm处的吸光度值，将该吸光度值与标准曲线对照即可确定浓缩液、干粉或浸膏中总生物碱的含量。
2.根据权利要求1所述的胆木茎皮和叶中生物碱的提取方法，其特征在于所述步骤 (1)中胆木茎皮和叶粉是30 60目的胆木茎皮粉。
3.根据权利要求1所述的胆木茎皮和叶中生物碱的提取方法，其特征在于所述步骤(1)中醇的酸性水溶液，其中醇是甲醇或乙醇；其中的酸是盐酸、醋酸或硫酸。
4.根据权利要求1所述的胆木茎皮和叶中生物碱的提取方法，其特征在于所述步骤(2)中提取液的浓缩采用真空减压浓缩的方法，浓缩时的温度范围为5(T60°C；用于中和酸的碱水是浓氨水、氢氧化钠或氢氧化。
5.根据权利要求1所述的胆木茎皮和叶中生物碱的提取方法，其特征在于所述步骤(3)中浓缩液应减压浓缩至浓缩液的密度为1.16^1. 17，真空干燥的温度为5(T60°C。
6.根据权利要求1所述的胆木茎皮和叶中生物碱的提取方法，其特征在于所述胆木浓缩液、胆木总碱干粉中总生物碱的含量测定采用异长春花苷内酰胺为标准品做标准曲线作为对照。
7.根据权利要求1所述的胆木茎皮和叶中生物碱的提取方法，其特征在于所述步骤 (1)中所用的薄层层析条件为，用GF254荧光硅胶或硅胶G为载体，制备薄层层析板，以氯仿 甲醇乙酸乙酯等于9 :1 :3为展开剂，在365nm紫外光灯下显色观察。
8.根据权利要求1所述的胆木茎皮和叶中生物碱的提取方法，其特征在于所述总生物碱含量测定中所用的紫外吸收波长范围是203 210nm。
全文摘要
本发明涉及胆木茎皮和叶中总生物碱的提取方法。该方法步骤为(1)用醇的酸性水溶液渗滤提取，(2)总生物碱浓缩液制备，(3)总生物碱干粉或干浸膏的制备，(4)总生物碱含量的测定。本发明的有益效果(1)降低了提取温度和浓缩温度，减少了提取物的受热时间，节约了能耗；提高了生物碱活性成分的浸出效率、浸出比例和浸出量；避免或减少了稳定性差的生物碱的破坏或变质，能有效获得胆木总生物碱提取物或总碱干粉。(2)减少了制备工序，减少了总生物碱的损失。(3)醇的酸性水溶液得到的总生物碱的浓度提高了1/3，活性生物碱的类型增加了超过1倍。(4)提出了简便的测定胆木提取物中总生物碱的测定方法，选定了总生物碱测定的波长范围。
文档编号A61P11/04GK102526277SQ20121002734
公开日2012年7月4日 申请日期2012年2月8日 优先权日2012年1月30日
发明者李争光, 李秀峰, 蒲含林, 赖潜 申请人:海南制药厂有限公司