专利名称：红豆杉活性提取物的制备方法及其抗真菌的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从红豆杉科(Taxaceae)红豆杉属(Tasus)植物中提取红豆杉活性提取物(精制品)的方法，以及该红豆杉活性提取物在制备抗真菌药品、保健食品或日化用品的用途，属于药用天然产物领域或保健食品、日化用品制造业。
背景技术：
红豆杉是一种珍贵的药用植物，为世界珍稀濒危树种，国家一级保护植物，被誉为“植物黄金”。南方红豆杉枝叶的次生代谢代谢产物中，其药用价值中除含有极少量的紫杉醇成分已在临床上广泛用于治疗各种恶性肿瘤，被认为是最好的抗癌药之一。红豆杉枝叶中的非紫杉烷类成分具有抗菌、消炎、止痒、驱虫等功效，可用于开发治疗粉刺、皮肤瘙痒等 发病率高的顽固性皮肤疾病。随着人工种植面积的不断扩大，其生物量也在大幅增加，为了进一步发掘人工种植红豆杉枝叶的内在功效，合理、可持续利用资源，提升综合利用附加值以达到创品牌、增效益的目的，本发明通过多种活性筛选实验发现红豆杉活性提取物具有很好的抗菌作用。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种红豆杉活性提取物的制备方法及其抗真菌的应用，从红豆杉中提取具有生物活性的提取物，制备的红豆杉活性提取物成分含量明确。本发明提供了一种红豆杉活性提取物抗真菌的应用，该红豆杉活性提取物作为抗菌的药物、保健品和日化用品的添加剂，并给出了有效剂量，用于抑制真菌时更为安全、稳定。按照本发明提供的技术方案，所述红豆杉活性提取物的制备方法，特征是，包括以下工艺步骤(I)将红豆杉枝叶切碎置于提取釜中，加入3 10倍红豆杉枝叶体积的低级醇进行提取，提取温度为30 70°C，提取时间为6 12小时，过滤得到滤液；反复提取I 4次，每次提取的温度为30 70°C，提取时间为6 12小时，每次提取后过滤，合并每次过滤的滤液得到粗提取液；所述低级醇为Cl C5的醇类，质量百分浓度为50 95% ；(2)将粗提取液在旋转蒸发仪上进行减压浓缩得到粗浸膏，减压浓缩的压力为7 IOkPa,温度为50 60°C，时间为3 5小时；将粗浸膏溶于30 70°C的热水中，粗浸膏与热水的体积比为I : 2 3;再加入石油醚萃取，除去亲脂性杂质得到浸膏，粗浸膏与石油醚的体积比为I : I 3;(3)向浸膏中加入乙酸乙酯进行萃取，浸膏与乙酸乙酯的体积比为I : I 3，萃取3 5次，合并乙酸乙酯萃取液；将乙酸乙酯萃取液减压浓缩得到乙酸乙酯浸膏，减压浓缩的压力为7 IOkPa,温度为40 50°C，时间为I 2小时；(4)向乙酸乙酯浸膏中加入水中进行溶解，乙酸乙酯浸膏与水的比例为15 25mg ImL ;溶解后进行抽滤，滤去不溶于水的固体；抽滤后再进行减压浓缩，减压浓缩的压カ为7 IOkPa,温度为50 60°C，时间为2 3小时，即得到红豆杉活性提取物，该红豆杉活性物的得率为O. 8% 3%，总黄酮类的含量为30 50%。本发明还保护ー种红豆杉活性提取物的制备方法，特征是，包括以下エ艺步骤(I)将红豆杉枝叶切碎置于提取釜中，加入3 10倍红豆杉枝叶体积的低级醇进行提取，提取温度为30 70°C，提取时间为6 12小时，过滤得到滤液；反复提取I 4次，每次提取的温度为30 70°C，提取时间为6 12小吋，每次提取后过滤，合并每次过滤的滤液得到粗提取液；所述低级醇为Cl C5的醇类，质量百分浓度为50 95% ；(2)将粗提液在旋转蒸发仪上进行减压浓缩，减压浓缩的压カ为7 IOkPa,温度为50 60°C，时间为3 5小时；将减压浓缩后得到的粗提液在大孔吸附树脂上进行吸附，先用水洗去粗提液中的水溶性杂质，再用浓度为30% 90%的こ醇依次从低浓度到高浓度进行梯度洗脱，收集洗脱液；洗脱吋，大孔吸附树脂的用量是粗提液体积的2 3倍，水的用量是粗提液体积的I 2倍，こ醇的用量是粗提液体积的3 5倍；(3)将洗脱液在旋转蒸发仪上进行减压浓缩，减压浓缩的压カ为7 IOkPa,温度为50 60°C，时间为7 8小时，得到红豆杉活性提取物；该红豆杉活性提取物的得率为O. 2 2%，总黄酮类的含量为70 90%。所述大孔吸附树脂为大孔吸附树脂D101、大孔吸附树脂SA-3或大孔吸附树脂AB-8。本发明还保护ー种红豆杉活性提取物的制备方法，特征是，包括以下エ艺步骤(I)将红豆杉枝叶切碎置于提取釜中，加入3 10倍红豆杉枝叶体积的低级醇进行提取，提取温度为30 70°C，提取时间为6 12小时，过滤得到滤液；反复提取I 4次，每次提取的温度为30 70°C，提取时间为6 12小吋，每次提取后过滤，合并每次过滤的滤液得到粗提取液；所述低级醇为Cl C5的醇类，质量百分浓度为50 95% ；(2)将粗提液在旋转蒸发仪上进行减压浓缩，减压浓缩的压カ为7 IOkPa,温度为80 60°C，时间为3 5小时；向减压浓缩后得到的粗提液中加入30°C 70°C的热水，粗提液与热水的体积比为I : 2 3，在2000 3000转/分钟的条件下离心20 30min，得到沉淀物和上清液；(3)向步骤⑵得到的沉淀物中加入浓度为50 95%的こ醇进行回流提取，回流提取的温度为75 80°C，回流时间为2 3小时；将回流提取后得到的液体进行过滤；将过滤得到的滤液在旋转蒸发仪上进行减压浓缩，减压浓缩的压カ为7 IOkPa,温度为50 60°C，时间为I 2小时；将减压浓缩后得到的浓缩液进行干燥，干燥温度为70 80°C，干燥时间为2 3小吋，即得到所述的红豆杉活性提取物，该红豆杉活性提取物的得率为
0.3% 4%，总黄酮类的含量为65 75%。本发明还保护ー种红豆杉活性提取物抗真菌的应用，特征是所述红豆杉活性提取物作为抗菌物质或消炎物质添加到洗化用品中，红豆杉活性提取物的添加量为0.01 15%。本发明采用制备药品、保健品及日化用品的常规方法，将红豆杉活性成分制备成各种制剂，例如片剂、喷雾剂、洗手液、沐浴露、浴足剂、洗发乳及按摩膏等。本发明制备得到 的红豆杉活性成分在抑菌方面有显著的效果。本发明所述的红豆杉活性成分的制备方法，方法简单，生产成本低，产品中有效成分含量较高，质量稳定、易于控制。
图I为实施例6得到的样品在360nm下的HPLC检测图。图2为实施例9得到的样品在360nm下的HPLC检测图。图3为实施例6得到的样品在272nm下的HPLC检测图。图4为实施例9得到的样品在272nm下的HPLC检测图。
图5为红豆杉活性提取物抑制细菌实验照片。其中图5中左侧为红豆杉活性提取物样品抑制金黄色葡萄球菌实验照片；图5中间为红豆杉活性提取物样品抑制沙门氏菌实验照片；图5中右侧为红豆杉活性提取物样品抑制大肠杆菌实验照片。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。本发明得到的红豆杉活性提取物中总黄酮类的含量为30 90%，总黄酮类中的主要成分为槲皮素(quercetin)、紫杉双黄酮(sciadopitysin)和银杏黄酮(Ginkgetin),其中槲皮素(quercetin)含量不低于1%，紫杉双黄酮(sciadopitysin)含量不低于3%,银杏黄酮(Ginkgetin)含量不低于5%。槲皮素(quercetin)的结构式如式(I)所示，紫杉双黄酮(sciadopitysin)的结构式如式(II)所示，银杏黄酮(Ginkgetin)的结构式如式(III)所示
权利要求
1.一种红豆杉活性提取物的制备方法，其特征是，包括以下工艺步骤 (1)将红豆杉枝叶切碎置于提取釜中，加入3 10倍红豆杉枝叶体积的低级醇进行提取，提取温度为30 70°C，提取时间为6 12小时，过滤得到滤液；反复提取I 4次，每次提取的温度为30 70°C，提取时间为6 12小时，每次提取后过滤，合并每次过滤的滤液得到粗提取液；所述低级醇为Cl C5的醇类，质量百分浓度为50 95% ; (2)将粗提取液在旋转蒸发仪上进行减压浓缩得到粗浸膏，减压浓缩的压力为7 IOkPa,温度为50 60°C，时间为3 5小时；将粗浸膏溶于30 70°C的热水中 ，粗浸膏与热水的体积比为I : 2 3;再加入石油醚萃取，除去亲脂性杂质得到浸膏，粗浸膏与石油醚的体积比为I : I 3; (3)向浸膏中加入乙酸乙酯进行萃取，浸膏与乙酸乙酯的体积比为I: I 3，萃取3 5次，合并乙酸乙酯萃取液；将乙酸乙酯萃取液减压浓缩得到乙酸乙酯浸膏，减压浓缩的压力为7 IOkPa,温度为40 50°C，时间为I 2小时； (4)向乙酸乙酯浸膏中加入水中进行溶解，乙酸乙酯浸膏与水的比例为15 25mg ImL;溶解后进行抽滤，滤去不溶于水的固体；抽滤后再进行减压浓缩，减压浓缩的压力为7 IOkPa,温度为50 60°C，时间为2 3小时，即得到红豆杉活性物，该红豆杉活性提取物的得率为0. 8% 3%，总黄酮类的含量为30 50%。
2.—种红豆杉活性提取物的制备方法，其特征是，包括以下工艺步骤 (1)将红豆杉枝叶切碎置于提取釜中，加入3 10倍红豆杉枝叶体积的低级醇进行提取，提取温度为30 70°C，提取时间为6 12小时，过滤得到滤液；反复提取I 4次，每次提取的温度为30 70°C，提取时间为6 12小时，每次提取后过滤，合并每次过滤的滤液得到粗提取液；所述低级醇为Cl C5的醇类，质量百分浓度为50 95% ； (2)将粗提液在旋转蒸发仪上进行减压浓缩，减压浓缩的压力为7 IOkPa,温度为50 60°C，时间为3 5小时；将减压浓缩后得到的粗提液在大孔吸附树脂上进行吸附，先用水洗去粗提液中的水溶性杂质，再用浓度为30% 90%的乙醇依次从低浓度到高浓度进行梯度洗脱，收集洗脱液；洗脱时，大孔吸附树脂的用量是粗提液体积的2 3倍，水的用量是粗提液体积的I 2倍，乙醇的用量是粗提液体积的3 5倍； (3)将洗脱液在旋转蒸发仪上进行减压浓缩，减压浓缩的压力为7 IOkPa,温度为50 60°C，时间为7 8小时，得到红豆杉活性提取物；该红豆杉活性提取物的得率为0.2 2%，总黄酮类的含量为70 90%。
3.如权利要求2所述的红豆杉活性提取物的制备方法，其特征是所述大孔吸附树脂为大孔吸附树脂D101、大孔吸附树脂SA-3或大孔吸附树脂AB-8。
4.一种红豆杉活性提取物的制备方法，其特征是，包括以下工艺步骤 (1)将红豆杉枝叶切碎置于提取釜中，加入3 10倍红豆杉枝叶体积的低级醇进行提取，提取温度为30 70°C，提取时间为6 12小时，过滤得到滤液；反复提取I 4次，每次提取的温度为30 70°C，提取时间为6 12小时，每次提取后过滤，合并每次过滤的滤液得到粗提取液；所述低级醇为Cl C5的醇类，质量百分浓度为50 95% ； (2)将粗提液在旋转蒸发仪上进行减压浓缩，减压浓缩的压力为7 IOkPa,温度为80 60°C，时间为3 5小时；向减压浓缩后得到的粗提液中加入30°C 70°C的热水，粗提液与热水的体积比为I : 2 3，在2000 3000转/分钟的条件下离心20 30min，得到沉淀物和上清液； (3)向步骤(2)得到的沉淀物中加入浓度为50 95%的乙醇进行回流提取，回流提取的温度为75 80°C，回流时间为2 3小时；将回流提取后得到的液体进行过滤；将过滤得到的滤液在旋转蒸发仪上进行减压浓缩，减压浓缩的压力为7 IOkPa,温度为50 60°C，时间为I 2小时；将减压浓缩后得到的浓缩液进行干燥，干燥温度为70 80°C，干燥时间为2 3小时，即得到所述的红豆杉活性提取物，该红豆杉活性提取物的得率为0. 3% 4%，总黄酮类的含量为65 75%。
5.一种红豆杉活性提取物抗真菌的应用，其特征是所述红豆杉活性提取物作为抗菌物质或消炎物质添加到洗化用品中，红豆杉活性提取物的添加量为0. 01 15%。
全文摘要
本发明涉及一种红豆杉活性提取物的制备方法及其抗真菌的应用，属于药用天然产物领域或保健食品、日化用品制造业。提取物为红豆杉脂溶性活性成分，制备方法包括50～95％乙醇提取，低极性溶剂萃取，离心，大孔树脂，得到总黄酮类含量为30～90％的红豆杉活性提取物。本发明采用制备药品、保健品及日化用品的常规方法，将红豆杉活性成分制备成各种制剂，例如片剂、喷雾剂、洗手液、沐浴露、浴足剂、洗发乳及按摩膏等。本发明制备得到的红豆杉活性成分在抑菌方面有显著的效果。本发明所述的红豆杉活性成分的制备方法，方法简单，生产成本低，产品中有效成分含量较高，质量稳定、易于控制。
文档编号A61K36/13GK102631379SQ20121012506
公开日2012年8月15日 申请日期2012年4月25日 优先权日2012年4月25日
发明者喻琼林, 张丹, 王琼 申请人:江苏红豆杉保健品有限公司