专利名称：胡桃醌用于调节小鼠的免疫状态及氧化反应的用途的制作方法
胡桃醌用于调节小鼠的免疫状态及氧化反应的用途所属领域本发明涉及药效学成分胡桃醌用于调节小鼠的免疫状态及氧化反应的用途，属于药效学研究領域。
背景技木胡桃楸为胡桃科胡桃属植物，具有很高的药用价值，其味苦，辛，性寒，有抑制多种肿瘤细胞增殖的活性、清热解毒、抗菌消炎和明目等功效。胡桃醌(Juglone)属于萘醌类成分，存在于胡桃科核桃属植物胡桃楸(Jugland mandshurica Maxim)和核桃(Juglansregia L)的根皮、树皮、青果皮(青龙衣)、叶中。国内外均有研究报道，胡桃醌具有广泛的药理作用，在医学和农业上都具有潜在的应用价值。胡桃醌不仅具有抗肿瘤作用，还具有杭真菌、抗衣原体、抗HIV病毒、降血糖和杀虫等生物活性，并且越来越受到人们的重视。胡桃醌能显著増加BEL-7402细胞的膜流动性，促进药物进入细胞内部，提高药物对细胞的毒 性，具有抗血管生成作用。迄今，虽对胡桃醌的抗肿瘤活性研究较多，但对小鼠的不同免疫状态的免疫调节及氧化反方面鲜有研究。
发明内容本发明发现了胡桃醌用于调节小鼠的免疫状态及氧化反应的用途，主要研究药效成分为胡桃醌，化学名称5_羟基-1，4-萘醌，5-羟基-1，4-萘二酮；英文名称Juglone, walnuts quinone，5-hydroxy-l,4-naphthoquinone,5-hydroxynaphthoqumone,regianin, Nucin ;分子式=C10H6O3 ;相对分子量174. 15 ;纯度95%，理化性质黒色粉末，不
溶于冷水，微溶于热水，溶于こ醇、こ醚，易溶于氯仿、苯等有机溶剤。化学结构
勾本发明经过系统的药理动物实验证明胡桃醌可以提高正常小鼠的体液免疫，提高地塞米松诱导的免疫低下小鼠的体液免疫水平。胡桃醌具有双向免疫调节作用，即上调地塞米松诱导的免疫抑制小鼠的体液免疫，井能下调绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠产生SRBC抗体及环磷酰胺建立的免疫刺激小鼠的体液免疫。胡桃醌能够使低下的免疫功恢复到正常水平，也能够改善免疫刺激状态维持机体的自稳；同时胡桃醌显示出具有通过调节机体内的氧化应激反应来调节机体免疫系统功能。
具体实施方式为了进一步证明胡桃醌具有调节小鼠的免疫状态及氧化反应的作用，以下结合发明人对胡桃醌进行系统药理实验进行详细说明。实施例I.胡桃醌对小鼠免疫状态的调节作用
I. I实验动物KM小鼠，雄性，4 6周龄，体重18_22g，SPF级。北京大学医学部实验动物科学部提供，许可证号SCXK (京)2006-0008。实验前适应性饲养3天。环境温度控制为22 25°C，湿度>60%，自然光照(12小吋/天)，自由进水，标准颗粒饲料喂养。I. 2试验材料I. 2. I药品与主要试剂I)药品胡桃醌，由北京百灵威科技有限公司提供；地塞米松磷酸钠注射液，由天津金耀氨基酸有限公司提供；环磷酰胺，由江苏恒瑞医药股份有限公司提供。2)试剂绵羊红细胞，由广州蕊特生物科技有限公司提供；冰醋酸，由北京化工厂提供。I. 2. 2主要仪器 1)ΗΗ-4型数显恒温水浴锅，BOKE博科试验设备研究所生产；2)FA2104N型电子天平，上海民桥精密科学仪器有限公司生产；3) WH-3微型涡旋混合仪，上海沪西分析仪器厂产品生产；4) SB5200D型超声波清洗机，宁波新芝生物科技股份有限公司生产；5)DT5-2型低速自动平衡离心机，北京时代北利离心机有限公司生产；6) TGL-16G高速台式离心机，上海安亭科学仪器厂生产。I. 3动物处理将48只小鼠按体重随机分为6组，雄性，分组饲养。6组分别为正常对照组、正常给药组；免疫低下对照组、免疫低下胡桃醌组；免疫刺激对照组和免疫刺激胡桃醌组。(I)地塞米松致KM小鼠免疫低下模型地塞米松磷酸钠注射液连续七日腹腔注射造模，注射剂量为O. 2mL/只。(2)绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠产生SRBC抗体及环磷酰胺致免疫超常模型每只小鼠腹腔注射2% (v/v，用生理盐水配制)压积SRBC O. 2mL进行免疫，于致敏前三天腹腔注射环磷酰胺250mg/Kg。各实验组给药方式(I)正常对照组连续10日腹腔注射，生理盐水；(2)正常给药组连续10日腹腔注射，300mg/Kg的胡桃醌；(3)免疫低下对照组连续10日腹腔注射，生理盐水；(4)免疫低下胡桃醌组连续10日腹腔注射，300mg/Kg的胡桃醌；(5)免疫刺激对照组连续10日腹腔注射，生理盐水；(6)免疫刺激胡桃醌组连续10日腹腔注射，300mg/Kg的胡桃醌.I. 4胡桃醌对小鼠免疫器官指数的影响I)试验方法每日给药前对小鼠体重进行测量并记录。于第11日称重所有小鼠，随后摘眼球取血，制备血清。断颈处死，迅速取出胸腺和脾脏，用(TC生理盐水清洗，除去血液，并用滤纸吸干水分，称重，计算胸腺指数和脾脏指数。称取O. Ig脾脏组织放入IOmL的离心管中，按照质量体积比为I : 9的比例，使用移液枪加入冷的生理盐水，并用超声破碎仪进行匀浆，将匀浆后的组织悬液在低温离心机中离心，收集上清液，即得10%脾脏组织匀浆。如若部分脾脏不够O. lg，则按相同比例配制。其中，分别以小鼠的胸腺重量(g)和脾脏重量(g)与其体重(g)的比值作为胸腺指数和脾脏指数。计算公式如下胸腺(脾脏)指数=胸腺重(g)/体重(g)2)统计学处理所用的数据均用i±SD表示，统计学分析用t检验。3)结果胸腺指数和脾脏指数是反映机体免疫功能的最基本最常规的指标。由表I可知，从免疫器官指数方面来看，免疫低下模型及免疫刺激模型造模成功，胡桃醌能够显著提高免疫低下小鼠的胸腺、脾脏指数，同时也能降低免疫刺激小鼠的胸腺、脾脏指数，并对免疫力正常小鼠的胸腺、脾脏指数也有一定的提高作用。因此，初步证明胡桃醌能够调节小鼠的不同免疫状态，維持免疫功能于平稳状态。表I胡桃醌对实验小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响(I 土s, n=8)
权利要求
1.胡桃醌用于调节小鼠的免疫状态及氧化反应的用途，其所述特征在于胡桃醌能够使低下的免疫功能恢复到正常水平，改善免疫刺激状态，维持机体的自稳，显示出具有双向免疫调节作用；胡桃醌显示出具有通过调节机体内的氧化应激反应来调节机体免疫系统功倉泛。
2.根据权利要求I的方法，其特征在于胡桃醌能够使正常、地塞米松诱导的免疫低下模型和绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠产生SRBC抗体及环磷酰胺致免疫刺激模型的实验动物的不同免疫状态维持在相对平稳的范围内。
3.根据权力要求I的方法，其特征在于在抗氧化机制中，胡桃醌具有提高机体抗氧化能力，而非直接削弱氧化应激过程。
4.根据权力要求I的方法，其特征在于胡桃醌调节机体自由基水平及氧化还原信号的传递以维持机体免疫功能的稳定。
全文摘要
本发明涉及医药技术领域，发现了胡桃醌用于调节小鼠免疫状态及氧化反应的用途，主要研究药效成分胡桃醌，化学名称5-羟基-1，4-萘醌，5-羟基-1，4-萘二酮；英文名称Juglone，walnuts quinone，5-hydroxy-1，4-naphthoquinone，5-hydroxynaphthoquinone，regianin，Nucin；分子式C10H6O3；相对分子量174.15。本发明经过系统的药理试验，利用KM小鼠，采用地塞米松磷酸钠注射液建立免疫低下模型，绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠产生SRBC抗体及环磷酰胺建立小鼠免疫刺激模型，证明胡桃醌能够使低下的免疫功能恢复到正常水平，也能够改善免疫刺激状态，维持机体的自稳，显示出具有双向免疫调节作用；胡桃醌显示出具有通过调节机体内的氧化应激反应来调节机体免疫系统功能的作用。
文档编号A61P37/02GK102824335SQ20121018880
公开日2012年12月19日 申请日期2012年6月8日 优先权日2012年6月8日
发明者李岩, 郭楠, 马晓科, 董继锐, 付振平, 赵剑璞, 夏雨 申请人:北京理工大学