专利名称：一种用于治疗鸡球虫病的脂质体及其制备方法
一种用于治疗鸡球虫病的脂质体及其制备方法技术领域
本发明属于兽药技术领域，具体涉及一种用于治疗鸡球虫病的脂质体及其制备方法。
背景技术：
鸡球虫病是危害现代化养鸡业的重大疾病，分布很广，世界各地均有发生，是一种肠道寄生性原虫病，主要由艾美耳属的多种球虫引起。此病是通过球虫卵囊传播，鸡吞食孢子化卵囊而感染，在我国发生很普遍，特别是从国外引进的品种鸡。该急性流行性寄生虫病主要危害3月龄以内的鸡，特别是15 45日龄最易发生，死亡率可达80%。病愈雏鸡生长发育受阻，增重缓慢，长期不能康复，成鸡多为带虫者，增重和产蛋都受到一定影响，是传播球虫病的重要病源。对于鸡球虫病，各个品种的鸡均有易感性，凡被带虫鸡污染过的饲料、 饮水、土壤和用具等都有卵囊存在，鸡感染球虫的途径主要是吃了感染性卵囊。
控制鸡球虫病一方面要加强饲养管理，控制球虫的致病因素，减少球虫病的发生。 此外应用药物是防治球虫病的主要手段，如何选择应用抗球虫药物是影响防治效果的关键。
托曲珠利具有广谱抗球虫活性，将其制成脂质体，对鸡球虫病有显著疗效，一方面使药物缓慢释放，延长托曲珠利的作用时间，另一方面能够提高该药物的稳定性，降低其毒副作用。发明内容
本发明的目的是提供一种用于治疗鸡球虫病的脂质体，提高托曲珠利的抗球虫作用，对鸡球虫病具有显著疗效。
本发明的第二个目的是提供一种用于治疗鸡球虫病的脂质体的制备方法。
为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是一种用于治疗鸡球虫病的脂质体，该脂质体的组成及质量份数为托曲珠利8份，蛋黄卵磷脂20 50份，胆固醇5 15 份，葡萄糖100 200份。
用于治疗鸡球虫病的脂质体的制备方法，包括以下步骤
I)配制PBS缓冲液；
2)按比例称取托曲珠利、蛋黄卵磷脂、胆固醇，置于65 75°C水浴，加入乙酸乙酯搅拌溶解，使脂质形成磷脂膜，旋转蒸发除去乙酸乙酯；
3)取PBS缓冲液置于水浴中预热，后加到磷脂膜中，水浴搅拌水化15 20min，完全水化后取出脂质体液体，室温搅拌30 50min混勻；
4)检查脂质体粒径合格；
5)称取葡萄糖溶于PBS缓冲液，后加入脂质体液体，置于65 75°C水浴，保温 IOmin,微孔滤膜过滤除菌，分装封盖，冻干即得。
所述PBS缓冲液的pH值为6. 8-7. 2。
所述微孔滤膜的孔径为O. 45 μ m。
本发明采用扫描电镜法测定脂质体粒径，结果表明制备的托曲珠利脂质体粒径小于200nm，且分布均匀，呈正态性，跨距小。
本发明采用超速离心法将溶液中游离药物和脂质体分离，测定包封率。托曲珠利脂质体的药物包封率达92%。包封率=(脂质体中包封的药物/脂质体中药物总量)X 100%。
本发明所制的脂质体是指将药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型泡囊体， 对机体毒副作用小。其脂质双分子层与生物膜有较大的相似性与组织相溶性，易于被组织吸收。脂质体包裹药物为物理过程，不改变药物分子结构，当药物被包裹后可降低药物毒性，减小药物使用量，具有缓释和控释作用。各种分子大小的药物都可被包裹。利用脂质体的被动靶向性，提高药物的生物利用度，减少用量，降低毒副作用。
本发明脂质体中所用组分托曲珠利属三嗪酮化合物，具有广谱抗球虫活性，广泛用于治疗鸡球虫病。托曲珠利可在球虫正常发育阶段诱导虫体细胞内质网和高尔基体发生膨胀，从而使细胞核周围空间的分布发生异常。同时，托曲珠利还抑制球虫呼吸链酶活性， 抑制球虫细胞线粒体内氧化磷酸化作用，结果导致球虫的呼吸作用受阻，从而影响虫体的正常新陈代谢，导致球虫死亡。托曲珠利使用安全范围大，禽可耐受10倍以上的推荐剂量。
本发明将托曲珠利制成脂质体，不仅提高了托曲珠利的抗球虫作用，使药物缓慢释放，延长作用时间，还提高了药物稳定性，降低其毒副作用，对鸡球虫病有显著疗效。本发明的用于治疗鸡球虫病的脂质体为注射用冻干品，包封率高，渗漏小，质量稳定，方便使用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述
实施例I
本实施例的用于治疗鸡球虫病的脂质体，其质量组成为托曲珠利8g、蛋黄卵磷脂20g、胆固醇5g、葡萄糖IOOg0
该用于治疗鸡球虫病的脂质体的制备方法采用如下步骤
I)用磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和注射用水配制pH值为6. 8的PBS缓冲液；
2)称取托曲珠利8g、蛋黄卵磷脂20g、胆固醇5g于容器中，置于65°C水浴,加入乙酸乙酯IOOml搅拌溶解，于旋转仪上旋转使脂质在容器壁上形成磷脂膜，旋转蒸发除去乙酸乙酯；
3)另取PBS缓冲液于同置水浴中，预热后加到含磷脂膜的容器中，水浴搅拌水化 15min，待完全水化后取出脂质体液体，室温搅拌30min混匀；
4)检查脂质体粒径合格；
5)称取葡萄糖IOOg溶于PBS缓冲液，加入脂质体液体，置于65°C水浴中不时晃动， 保温lOmin，使用孔径为O. 45 μ m的微孔滤膜过滤除菌，分装封盖，冻干即得。
实施例2
本实施例的用于治疗鸡球虫病的脂质体，其质量组成为托曲珠利8g、蛋黄卵磷脂35g、胆固醇10g、葡萄糖150g。
该用于治疗鸡球虫病的脂质体的制备方法采用如下步骤
I)用磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和注射用水配制pH值为7. O的PBS缓冲液；
2)称取托曲珠利Sg、蛋黄卵磷脂35g、胆固醇IOg于容器中，置于70°C水浴，加入乙酸乙酯IOOml搅拌溶解，于旋转仪上旋转使脂质在容器壁上形成磷脂膜，旋转蒸发除去乙酸乙酯；
3)另取PBS缓冲液于同置水浴中，预热后加到含磷脂膜的容器中，水浴搅拌水化 17min，待完全水化后取出脂质体液体，室温搅拌40min混匀；
4)检查脂质体粒径合格；
5)称取葡萄糖150g溶于PBS缓冲液，加入脂质体液体，置于70°C水浴中不时晃动， 保温lOmin，使用孔径为O. 45 μ m的微孔滤膜过滤除菌，分装封盖，冻干即得。
实施例3
本实施例的用于治疗鸡球虫病的脂质体，其质量组成为托曲珠利8g、蛋黄卵磷脂50g、胆固醇15g、葡萄糖200g。
该用于治疗鸡球虫病的脂质体的制备方法采用如下步骤
I)用磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和注射用水配制pH值为7. 2的PBS缓冲液；
2)称取托曲珠利Sg、蛋黄卵磷脂50g、胆固醇15g于容器中，置于75°C水浴，加入乙酸乙酯IOOml搅拌溶解，于旋转仪上旋转使脂质在容器壁上成磷脂膜，旋转蒸发除去乙酸乙酯；
3)另取PBS缓冲液同置水浴中，预热后加到含磷脂膜的容器中，水浴搅拌水化 20min，待完全水化后取出脂质体液体，室温搅拌50min混匀；
4)检查脂质体粒径合格；
5)称取葡萄糖200g溶于PBS缓冲液，加入脂质体液体，置于75°C水浴中不时晃动， 保温lOmin，使用孔径为O. 45 μ m的微孔滤膜过滤除菌，分装封盖，冻干即得。
动物实验
某地养殖户养殖肉鸡2000余只，32日龄时有发病鸡变得胆小怕惊，易乍群，有的不停地奔跑，发出“吱吱”的尖叫声，翅根及顶冠两侧的羽毛直立，冠、髯、腿、爪等灰白或苍白。排便主要有水样、黄色或桔黄色粪便，蚯蚓状骨节便。死亡呈突然性，死亡鸡只个体较大，发育较好，肌肉苍白，多数仰面而死。剖检可见两侧盲肠肿大至原来的2 3倍，外观呈黑褐色，外壁布满白色坏死点，剖开后肠腔内有紫黑色或鲜红色血液，肠壁布满大量出血点。诊断为鸡盲肠球虫病。肌肉注射本发明实施例I制备的托曲珠利脂质体，治疗两次后， 病鸡拉血便症状明显减轻，精神好转，饮食欲增加，鸡群停止死亡，继续治疗，三天后，鸡群基本康复，治愈率达92. 1%。
安全性试验结果为病鸡注射后无异常死亡，观察半月余，给药后的鸡只长势良好， 无任何疾病发生。
权利要求
1.一种用于治疗鸡球虫病的脂质体，其特征在干该脂质体的组成及质量份数为托曲珠利8份，蛋黄卵磷脂20 50份，胆固醇5 15份，葡萄糖100 200份。
2.一种如权利要求I所述的用于治疗鸡球虫病的脂质体的制备方法，其特征在于包括以下步骤 1)配制PBS缓冲液; 2)按比例称取托曲珠利、蛋黄卵磷脂、胆固醇，置于65 75°C水浴，加入こ酸こ酯搅拌溶解，使脂质形成磷脂膜，旋转蒸发除去こ酸こ酯； 3)取PBS缓冲液置于水浴中预热，后加到磷脂膜中，水浴搅拌水化15 20min，完全水化后取出脂质体液体，室温搅拌30 50min混勻； 4)检查脂质体粒径合格； 5)按比例称取葡萄糖溶于PBS缓冲液，加入脂质体液体，置于65 75°C水浴，保温IOmin,微孔滤膜过滤除菌，分装封盖，冻干即得。
3.根据权利要求2所述的用于治疗鸡球虫病的脂质体的制备方法，其特征在于所述PBS缓冲液的pH值为6. 8 7. 2。
4.根据权利要求2所述的用于治疗鸡球虫病的脂质体的制备方法，其特征在于所述微孔滤膜的孔径为O. 45 μ m。
全文摘要
本发明公开了一种用于治疗鸡球虫病的脂质体及其制备方法，该脂质体的组成为托曲珠利、蛋黄卵磷脂、胆固醇、葡萄糖，其制备方法包括以下步骤1)配制磷酸盐缓冲液(PBS)；2)称取托曲珠利、蛋黄卵磷脂、胆固醇，加入乙酸乙酯搅拌溶解，使脂质形成磷脂膜，旋转蒸发除去乙酸乙酯；3)取PBS缓冲液预热后加到磷脂膜中，水浴搅拌水化后取出，室温搅拌30～50min；4)检查脂质体粒径合格；5)称取葡萄糖溶于磷酸盐缓冲液，加入脂质体液体，水浴保温10min，过滤除菌，冻干即得。本发明的脂质体对鸡球虫病有显著疗效，不仅提高了托曲珠利的抗球虫作用，使药物缓慢释放，延长作用时间，还提高了药物稳定性，降低其毒副作用。
文档编号A61P33/02GK102973507SQ20121030413
公开日2013年3月20日 申请日期2012年8月23日 优先权日2012年8月23日
发明者吴红云, 王丽景, 李建正 申请人:郑州后羿制药有限公司