专利名称：一种大叶茜草素及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种大叶茜草素及其制备方法，同时还涉及其在制备降血糖药物方面的应用及制备治疗糖尿病药物方面的应用，属于天然药物领域。
背景技术：
糖尿病(diabetes)是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征。糖尿病主要分为两种类型I型糖尿病(即胰岛素依赖型糖尿病)和II型糖尿病(即非胰岛素依赖型糖尿病)。临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状。糖尿病(血糖)一旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈。国外给它的别名叫〃沉默的杀手"(Silent Killer)，特别是〃成人型糖尿病〃。四十岁以上的中年 人染患率特别高，一旦患上〃糖尿病〃，将减少寿命十年之多，可能发生的并发症遍及全身。所有的糖尿病并发症可以通过严格血糖控制，从最大程度上进行预防，如果糖尿病患者能将自己的血糖水平控制在接近正常的血糖范围内，则糖尿病并发症就不会出现，或者出现得比较晚并且程度也较轻。多年来糖尿病的治疗药物以西药为主，长期以来主要集中于磺脲类与双胍类药物。但这些药物存在着低血糖症和胃肠道反应等不良反应，因而寻找高效低毒的降糖药仍是医药专家追求的目标。由于传统中药及天然植物药具有相对安全和价格低廉、作用温和持久和可延缓并发症等优点，不失为寻找降糖新药的一条重要途径，因此开发中药及天然植物药作为降糖药可以提供更广泛的糖尿病治疗药物来源，而中药中有效的降血糖成分更是目前研究开发的热点。茜草，俗名血见愁、小活血、活血草、锯子草、拉拉藤、小血藤，为茜草科植物茜草(Rubia cordifolia L.)的干燥根及根莖。菌草科菌草属植物全世界有60余种,主要分布于亚洲、欧洲、美洲和非洲。我国有24种10变种，遍布全国各地，尤以西南地区种类最多。茜草分布甚广，但至今仍以陕西、山西和河南为主产区，茜草性寒味苦，归心肝经，具有凉血止血、祛风除湿、祛淤通经、活血祛瘀、止咳祛痰之功效，主治吐血、衄血、血热崩漏、闭经、跌打损伤。茜草中主要含有水溶性的环已肽系列物、脂溶性成分蒽醌及其糖苷、萘醌及其糖苷，此外还含有萜类、β -谷留醇、脂肪酸化合物和微量元素。大叶茜草素是茜草中提取、分离出来的一种化合物，目前，主要用于胃肠痉挛、胃肠炎、肠蛔虫症、胆道蛔虫症、胆石症及其它胆道疾病引起的疼痛的治疗，但对大叶茜草素其它方面药理活性未见研究报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种大叶茜草素。为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是提供一种大叶茜草素，由以下方法制备获得茜草原药材经石油醚加热回流提取；回收石油醚，得到提取物；将提取物经硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测合并组分，经S印hadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿石油醚甲醇=5:5:1洗脱，再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，热乙醇结晶即得。本发明的目的还在于提供一种大叶茜草素的制备方法。
本发明所采用的技术方案还在于提供一种大叶茜草素的制备方法，由以下方法制备获得取茜草原药材，用5 15倍量的石油醚加热回流提取2(T40min ;回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物经过硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测，合并富含大叶茜草素组分，后经S印hadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿石油醚甲醇=5 5 I洗脱，然后再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，最后用热乙醇重结晶得到大叶茜草素。所述的茜草原药材经干燥处理。本发明的目的还在于提供一种大叶茜草素在制备降血糖药物方面的应用。本发明所采用的技术方案还在于提供了一种大叶茜草素在制备降血糖药物方面的应用。本发明的目的还在于提供一种大叶茜草素在制备治疗糖尿病药物方面的应用。本发明所采用的技术方案还在于提供了一种大叶茜草素在制备治疗糖尿病药物方面的应用。四氧嘧啶(Alloxan)是胰岛β细胞毒剂，可选择性的损伤多种动物的胰岛β细胞，进而引起糖尿病。小鼠四氧嘧啶糖尿病模型造模方法简便，形成率高，是最常见的糖尿病动物模型。对于四氧嘧啶小鼠糖尿病模型的稳定性研究中，主要是通过四氧嘧啶溶液，在注射后所致糖尿病，一定时间内检测小鼠血清中血糖值。糖尿病时，机体内糖原合成过程中的某些酶活性低下，糖原合成减少，表现为肝糖原含量减少。另外，糖尿病同时可造成组织的氧化损伤，表现为肝组织中的超氧化物歧化酶(SOD)降低和丙二醛(MDA)的含量的升高。还可引起脂类代谢障碍，表现为血清甘油三酯(TG)、血清总胆固醇(TC)的升高。本发明以四氧嘧啶诱导小鼠β细胞损伤，造成糖尿病模型后，以化合物大叶茜草素溶液灌胃，检测小鼠血清中的空腹血糖值、餐后血糖值、TC含量、TG含量、肝糖原含量、SOD和MDA值。实验表明化合物大叶茜草素高剂量组和中剂量组作用显著，能有效降低四氧嘧啶致高血糖小鼠的血糖值、TC值、TG值和MDA含量，且能显著的升高小鼠血清的SOD活力值以及增加组织肝糖原含量，证明大叶茜草素具有很好的降血糖以及治疗糖尿病作用。通过采用本发明的方法处理所得的化合物大叶茜草素，可以制成各种制剂，包括栓剂、片剂、丸剂、颗粒剂、膜剂、微囊剂、滴丸剂、气雾剂、酒剂、糖浆剂、口服液等。茜草是一种很常见的中药材，在自然界中分布广泛，因此，化合物大叶茜草素的原料容易得到，成本很低。本发明制备大叶茜草素的方法操作简单、工序较少，便于工业化的推广。实验表明，化合物大叶茜草素具有良好的降血糖作用，化合物大叶茜草素在制备降血糖药物方面及制备治疗糖尿病药物方面有着很好的应用。
具体实施例方式实施例I
本实施例的大叶茜草素，是从茜草中提取后洗脱得到的，具体制备方法如下取干燥的茜草原药材，用5倍量的石油醚加热回流提取40min ;回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物经过硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测，合并富含大叶茜草素组分，后经S印hadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿石油醚甲醇=5 5 :1洗脱，然后再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，最后用热乙醇重结晶得到大叶茜草素。实施例2本实施例的大叶茜草素，是从茜草中提取后洗脱得到的，具体制备方法如下取干燥的茜草原药材，用10倍量的石油醚加热回流提取30min ;回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物经过硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测，合并富含大叶茜草素组分，后经S印hadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿石油醚甲醇=5 5 :1洗脱，然后再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，最后用热乙醇重结晶得到大叶茜草素。实施例3
本实施例的大叶茜草素，是从茜草中提取后洗脱得到的，具体制备方法如下取干燥的茜草原药材，用15倍量的石油醚加热回流提取20min ;回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物经过硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测，合并富含大叶茜草素组分，后经S印hadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿石油醚甲醇=5 5 :1洗脱，然后再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，最后用热乙醇重结晶得到大叶茜草素。实施例4本实施例为化合物大叶茜草素的治疗糖尿病作用的实验，采用小鼠四氧嘧啶糖尿病模型。实验选取雄性小鼠，体重22±2g。仪器UV-2000型紫外可见分光光度计(尤尼可上海仪器有限公司)；CS_H1型混合器(北京博励阳科技公司)；LRH-150生化培养箱(上海一恒科技有限公司)；Multiskan MK3酶标仪(热电上海仪器有限公司)JGL-16高速离心机(江苏金坛市中大仪器厂)；各种规格移液器等。试剂Alloxan (alfa asear公司批号2244_11_3);阿卡波糖片(杭州中美华东制药有限公司批号080105);葡萄糖测定试剂盒(上海荣盛生物技术有限公司批号20080705);血清总胆固醇(TC)测定试剂盒(上海北海生物技术工程有限公司批号BH20510);血清甘油三酯(TG)测定试剂盒(上海北海生物技术工程有限公司批号BH20612);肝糖原检测试剂(南京建成生物工程研究所批号20090604);丙二醛(MDA)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所批号20090604) ;S0D测定试剂盒(南京建成生物工程研究所批号20090727)，其他试剂均为分析纯。小鼠适应7d后，随机分组，选取10只作为空白对照组，其余小鼠作为糖尿病造模组。糖尿病造模组于禁食不禁水12h后，按80mg/kg —次性尾静脉注射4%四氧嘧啶致糖尿病。小鼠正常饮食饮水96h后，禁食不禁水6h，称重，眼眶静脉取血，分离血清。以血糖值大于11. lmmol/L作为成功造模的标准，根据血糖值均衡原则将造模成功的小鼠分成6组，每组10只，分别为空白组、模型组、阿卡波糖阳性对照组、大叶茜草素高、中、低三个剂量组。
分组后对阿卡波糖阳性对照组和大叶茜草素高、中、低三个剂量组每天灌胃相应的药物，阿卡波糖阳性对照组每天灌胃75mg/kg，化合物大叶茜草素高剂量组每天灌胃200mg/kg,中剂量组每天灌胃100mg/kg,低剂量组每天灌胃50mg/kg。空白对照组和模型组每天灌胃一定量的CMC-Na，给药8d后禁食6h，摘眼球取血分离血清测定空腹血糖值、TC含量、TG含量、MDA和SOD值。血糖值、TC、TG、肝糖原含量、SOD和MDA的测定均按照试剂盒的要求进行，实验数据x±S表示，实验统计采用spssll. O统计软件进行单因素方差分析。(I)化合物大叶茜草素高、中、低剂量对四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖值、餐后血糖值、肝糖原含量的影响(结果见表I)表I数据显示与模型组比较，大叶茜草素高剂量和中剂量空腹血糖值和餐后血糖值均显示有显著性降低，降血糖作用明显，低剂量组作用则不显著。肝糖原含量高剂量组和中剂量组也有显著性差异，且高剂量组升高肝糖原含量作用优于中剂量组；低剂量组无显著升高糖原含量作用。因此，大叶茜草素高、中剂量有显著的治疗糖尿病作用，低剂量不·明显。与阿卡波糖阳性对照组比较各剂量组均无显著性差异，说明剂量组有较好的降血糖和餐后血糖效果，与阿卡波糖相差不大，因此说明化合物大叶茜草素有降血糖作用，且在一定剂量下作用显著。表I大叶茜草素对糖尿病小鼠的治疗作用(i±S)
权利要求
1.一种大叶茜草素，其特征在于，由以下方法制备获得茜草原药材经石油醚加热回流提取；回收石油醚，得到提取物；将提取物经硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测合并组分，经S印hadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿石油醚甲醇=5:5:1洗脱，再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，热乙醇结晶即得。
2.一种如权利要求I所述的大叶茜草素的制备方法，其特征在于，由以下方法制备获得取茜草原药材，用5 15倍量的石油醚加热回流提取2(T40min ;回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物经过硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测，合并富含大叶茜草素组分，后经S印hadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿石油醚甲醇=5 5 1洗脱，然后再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，最后用热乙醇重结晶得到大叶茜草素。
3.根据权利要求2所述的一种大叶茜草素的制备方法，其特征在于，所述的茜草原药材经干燥处理。
4.大叶茜草素在制备降血糖药物方面的应用。
5.大叶茜草素在制备治疗糖尿病药物方面的应用。
全文摘要
本发明公开了一种大叶茜草素及其制备方法，由以下步骤制得取茜草原药材，用5~15倍量的石油醚加热回流提取20~40min；回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物经过硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测，合并富含大叶茜草素组分，后经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿石油醚甲醇=551洗脱，然后再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，最后用热乙醇重结晶得到大叶茜草素。本发明同时公开了大叶茜草素在制备降血糖药物方面的应用及制备治疗糖尿病药物方面的应用。实验表明，大叶茜草素能有效降低四氧嘧啶致高血糖小鼠的血糖值、TC、TG值和MDA含量，能显著升高小鼠的SOD活力值和肝糖原含量。
文档编号A61K31/352GK102875517SQ201210381008
公开日2013年1月16日 申请日期2012年10月8日 优先权日2012年10月8日
发明者康文艺, 张伟 申请人:河南大学