专利名称：四季菜有效部位总黄酮的提取方法
技术领域：
本发明涉及总黄酮的提取方法，具体涉及从四季菜有效部位提取总黄酮的方法。
背景技术：
四季菜(Artemisia laxtiflora Wall)是菊科蒿属的多年生草本植物。又名大力王，鸭脚艾，阴毒草。四季菜资源丰富 ，主要分布在我国的华东、中南、西南等地。其性辛，味甘平，具有清热解毒、养血柔肝、理气化瘀、活血化瘀，祛风止咳等功效。临床上用于治疗慢性肝炎、跌打损伤、头痛、咳嗽、泄泻、便血尿血、月经不调等病症。尤其治疗气滞血瘀、血不养肝之慢性活动性肝炎、迁延性肝炎有显著疗效。对肝硬化、急性重症肝炎亦有较好的效果。四季菜全草中含黄酮、酚类、挥发油、氨基酸、有机酸及糖类化合物。有文献报道，从其茎叶中分离得到的黄酮类具有抗菌、抗霉、解痉、利尿等作用。临床研究表明，四季菜有效成分总黄酮对于慢性肝炎、急性黄疸性病毒性肝炎的治疗有显著疗效。四季菜中的总黄酮对CCl4、乙醇所致的急性肝损伤有明显的保护作用。其总黄酮对肝损伤的保护作用可能与其减少肝脏GSH耗竭，抑制肝脂质过氧化作用有关。也有文献报道，四季菜治疗肝病患者，98%的病例，50天内肝功能恢复正常，仅2%的病例长达70天恢复。先进的提取技术已经应用到中药材提取加工的各个领域，但是，对于四季菜的活性部位总黄酮的提取并未见相关报道。多数仍然采取传统的提取方法，黄酮类成分的提取方法有主要包括溶剂提取、微波提取、超临界萃取、酶浸溃萃取、超声波提取、回流、索氏提取、煎煮法和渗滤等。目前，对四季菜的有效部位总黄酮的提取的相关报道不多，而且未见有用聚酰胺纯化四季菜的总黄酮的相关报道，采用现有提取方法获得的提取物中总黄酮含量低，以芦丁(C27H3tlO16)计在70%以下。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有总黄酮的提取方法得到的提取物中总黄酮含量低的问题，而提供四季菜有效部位总黄酮的提取方法。本发明四季菜有效部位总黄酮的提取方法是通过下列步骤实现一、取40 60kg四季菜中药材放入水中煎煮I 3小时后，收集第一次煎出的煎煮液，再向四季菜药材中加水煎煮I 3小时后，收集第二次煎出的煎煮液，合并两次煎煮液，浓缩成以75 80°C计相对密度为I. 12 I. 14的清膏；二、向步骤一得到的清膏内加水至体积为130 160L，然后加入I. 5 2. 5mol/L的氢氧化钠溶液调pH值至6 7，浸泡12 24小时收集上清液，用3 5mol/L盐酸溶液调上清液PH值至2. O 3. 0，然后静置12 24小时，收集上层液体；三、把步骤二收集的上层液体用预处理的聚酰胺树脂柱纯化，使用6 10个柱体积的水洗脱，然后再用体积浓度为50% 75%，9 11个柱体积的乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液；
四、使用减压蒸馏回收步骤三乙醇洗脱液中的乙醇，再对洗脱液减压浓缩，然后进行减压干燥，得到四季菜有效部位的总黄酮提取物；其中步骤一所述的第一次煎煮中水的质量是四季菜中药材的10 16倍，第二次煎煮中水的质量是四季菜中药材的6 12倍；步骤三中聚酰胺树脂质量与四季菜中药材的质量比为I : (2 4);步骤三中预处理的聚酰胺树脂柱是将聚酰胺树脂装入色谱柱中，用丙酮以O. 2 O. 4BV/h的流速冲洗至洗出液呈无色，再用体积浓度为90 96%，用量为4 6倍柱体积的乙醇以O. 2 O. 4BV/h的流速冲洗，然后倒出乙醇，放入烘箱以80 100°C烘干，得到预处理的聚酰胺树脂柱。通过本发明四季菜有效部位总黄酮的提取方法得到的提取物中总黄酮含量以芦 丁(C27H3tlO16)计，含量不少于80%，提取物单体成分中还有香豆素、脱肠草素等，提高了提取物中总黄酮的含量。按药剂学方法，可以将本发明中四季菜有效部位总黄酮制成适用于临床的口服制剂和非肠道给药的剂型。所说的口服制剂可制成颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸、混悬剂、口服液体制剂当中的一种。所说的非肠道给药剂型可制成注射剂、气雾剂、栓剂或者皮下给药剂型当中的一种。本发明四季菜总黄酮制成各种剂型中，还可加入常规的药物赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂等。本发明主要应用于高纯度总黄酮的制备，所得总黄酮可用于口服制剂以及非肠道给药制剂。
具体实施例方式具体实施方式
一本实施方式四季菜有效部位总黄酮的提取方法按下列步骤实施一、取40 60kg四季菜中药材放入水中煎煮I 3小时后，收集第一次煎出的煎煮液，再向四季菜药材中加水煎煮I 3小时后，收集第二次煎出的煎煮液，合并两次煎煮液，浓缩成以75 80°C计相对密度为I. 12 I. 14的清膏；二、向步骤一得到的清膏内加水至体积为130 160L，然后加入I. 5 2. 5mol/L的氢氧化钠溶液调pH值至6 7，浸泡12 24小时收集上清液，用3 5mol/L盐酸溶液调上清液PH值至2. O 3. 0，然后静置12 24小时，收集上层液体；三、把步骤二收集的上层液体用预处理的聚酰胺树脂柱纯化，使用6 10个柱体积的水洗脱，然后再用体积浓度为50% 75%，9 11个柱体积的乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液；四、使用减压蒸馏回收步骤三乙醇洗脱液中的乙醇，再对洗脱液减压浓缩，然后进行减压干燥，得到四季菜有效部位的总黄酮提取物；其中步骤一所述的第一次煎煮中水的质量是四季菜中药材的10 16倍，第二次煎煮中水的质量是四季菜中药材的6 12倍；步骤三中聚酰胺树脂质量与四季菜中药材的质量比为I : (2 4);步骤三中预处理的聚酰胺树脂柱是将聚酰胺树脂装入色谱柱中，用丙酮以O. 2 O. 4BV/h的流速冲洗至洗出液呈无色，再用体积浓度为90 96%，用量为4 6倍柱体积的乙醇以O. 2 O. 4BV/h的流速冲洗，然后倒出乙醇，放入烘箱以80 100°C烘干，得到预处理的聚酰胺树脂柱。
本实施方式四季菜有效部位的总黄酮提取物中主要成分为黄酮，7-甲氧基香豆素和脱肠草素。
具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤二加入I. 7
2.3mol/L的氢氧化钠溶液调pH值至6 7。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤二加入2mol/L的氢氧化钠溶液调pH值至6 7。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一至三之一不同的是步骤二用
3.5 4. 5mol/L盐酸溶液调上清液pH值至2. O 3. O。其它步骤及参数与具体实施方式
一至三之一相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一至三之一不同的是步骤二用
4.2mol/L盐酸溶液调上清液pH值至2. O 3. O。其它步骤及参数与具体实施方式
一至三之一相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
一至五之一不同的是步骤四所述的减压干燥为喷雾干燥。其它步骤和参数与具体实施方式
一至五之一相同。
具体实施方式
七本实施方式四季菜有效部位总黄酮的提取方法按下列步骤实施一、取50kg四季菜中药材放入水中煎煮I. 5小时后，收集第一次煎出的煎煮液，再向四季菜药材中加水煎煮I. 5小时后，收集第二次煎出的煎煮液，合并两次煎煮液，浓缩至成80°C计相对密度为I. 14的清膏；二、向步骤一得到的清膏内加水至体积为150L，然后加入2mol/L的氢氧化钠溶液调PH值至6，浸泡24小时收集上清液，用4mol/L盐酸溶液调上清液pH值至3. 0，然后静置24小时，收集上层液体；三、把步骤二收集的上层液体用预处理的聚酰胺树脂柱纯化，使用8个柱体积的水洗脱，然后再用体积浓度为75%，10个柱体积的乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液；四、使用减压蒸馏回收步骤三乙醇洗脱液中的乙醇，再对洗脱液减压浓缩，然后进行减压干燥，得到四季菜有效部位的总黄酮提取物；其中步骤一所述的第一次煎煮中水的质量是四季菜中药材的10倍，第二次煎煮中水的质量是四季菜中药材的12倍；步骤三中聚酰胺树脂质量与四季菜中药材的质量比为I :2 ；步骤三中预处理的聚酰胺树脂柱是将聚酰胺树脂装入色谱柱中，用丙酮以O. 3BV/h的流速冲洗至洗出液呈无色，再用体积浓度为95%，用量为5倍柱体积的乙醇以O. 3BV/h的流速冲洗，然后倒出乙醇，放入烘箱以90°C烘干，得到预处理的聚酰胺树脂柱。本实施方式四季菜有效部位的总黄酮提取物主要成分为黄酮、7-甲氧基香豆素和脱肠草素，提取物中总黄酮含量以无水芦丁(C27H3tlO16)计为83%。
权利要求
1.四季菜有效部位总黄酮的提取方法，其特征在于四季菜有效部位总黄酮的提取方法是通过下列步骤实现 一、取40 60kg四季菜中药材放入水中煎煮I 3小时后，收集第一次煎出的煎煮液，再向四季菜药材中加水煎煮I 3小时后，收集第二次煎出的煎煮液，合并两次煎煮液，浓缩成以75 80°C计相对密度为I. 12 I. 14的清膏； 二、向步骤一得到的清膏内加水至体积为130 160L，然后加入I.5 2. 5mol/L的氢氧化钠溶液调pH值至6 7，浸泡12 24小时收集上清液，用3 5mol/L盐酸溶液调上清液PH值至2. O 3. 0，然后静置12 24小时，收集上层液体； 三、把步骤二收集的上层液体用预处理的聚酰胺树脂柱纯化，使用6 10个柱体积的水洗脱，然后再用体积浓度为50% 75%，9 11个柱体积的乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液； 四、使用减压蒸馏回收步骤三乙醇洗脱液中的乙醇，再对洗脱液减压浓缩，然后进行减压干燥，得到四季菜有效部位的总黄酮提取物； 其中步骤一所述的第一次煎煮中水的质量是四季菜中药材的10 16倍，第二次煎煮中水的质量是四季菜中药材的6 12倍； 步骤三中聚酰胺树脂质量与四季菜中药材的质量比为I : (2 4); 步骤三中预处理的聚酰胺树脂柱是将聚酰胺树脂装入色谱柱中，用丙酮以O. 2 0.4BV/h的流速冲洗至洗出液呈无色，再用体积浓度为90 96%，用量为4 6倍柱体积的乙醇以O. 2 O. 4BV/h的流速冲洗，然后倒出乙醇，放入烘箱以80 100°C烘干，得到预处理的聚酰胺树脂柱。
2.根据权利要求I所述的四季菜有效部位总黄酮的提取方法，其特征在于步骤二加入1.7 2. 3mol/L的氢氧化钠溶液调pH值至6 7。
3.根据权利要求I所述的四季菜有效部位总黄酮的提取方法，其特征在于步骤二用3.5 4. 5mol/L盐酸溶液调上清液pH值至2. O 3. O。
4.根据权利要求1、2或3所述的四季菜有效部位总黄酮的提取方法，其特征在于步骤四所述的减压干燥为喷雾干燥。
全文摘要
四季菜有效部位总黄酮的提取方法，它涉及总黄酮的提取方法。它要解决现有总黄酮的提取方法得到的提取物中总黄酮含量低的问题。本发明总黄酮的提取方法一、取四季菜中药材加水煎煮两次，合并两次煎煮液浓缩成清膏；二、清膏中加水，加入氢氧化钠溶液调节pH值，浸泡后收集上清液，用盐酸溶液调上清液pH值，静置后收集上层液体；三、把步骤二收集的上层液体用聚酰胺树脂柱纯化，分别用水和乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；四、减压蒸馏乙醇洗脱液，对洗脱液进行减压浓缩和减压干燥后得到总黄酮提取物。本发明提取物中总黄酮含量以芦丁计，含量不少于80%。本发明主要应用于高纯度总黄酮的制备。
文档编号A61P1/16GK102920765SQ20121049072
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月27日 优先权日2012年11月27日
发明者王丽娜, 李云涛, 任瑞涛, 吴志军, 单钰毓 申请人:哈药集团中药二厂