专利名称：猪牙皂总皂苷的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种猪牙皂总皂苷的制备方法。
背景技术：
癌症和白血病(又称血癌)是严重威胁人类生命的恶性疾病，占死亡人数的第一、二位，世界各国虽然都投入了极大的人力和资金，进行攻克研究，并取得了一定进展，但目前仍无理想的治疗药物及方法，目前临床对早、中、晚期癌症患者多采用手术，手术加放、化疗，手术加中药及放、化疗加中药等多种不同的治疗方法，这些方法虽具有一定治疗效果，能部分缓解症状，延长患者的生命，但放化疗对人体易造成严重创伤，在已有治疗的药物中，有的药物毒副作用较大，有的价格昂贵，亦有的疗效欠佳，真正获得满意疗效的抗癌药物为数不多，因此，研制高效低毒、质量可控的抗癌及治疗白血病的药物，具有重要的临床价值和广阔的市场前景。中医药是一 个伟大的医学宝库，在治疗疑难病和慢性病方面具有独特的优势，猪牙皂的抗白血病作用，是从100余种中药中筛选发现的，猪牙皂和大皂角分别为豆科植物阜荚Gleditsia sinensis Lam.的干燥不育果实和成熟果实,具有祛痰开鸾，散结消肿之功效，临床主要用于治疗中风口噤，昏迷不醒，癫痫痰盛等(中国药典2005年版，化学工业出版社，2005年版，222)。猪牙皂和大皂角均富含皂苷类成分，现已从猪牙皂正丁醇部位中分离、鉴定出十九个五环三萜型皂荚皂苷(J.Nat.Prod.1999,62 (5):740-745 ；Chem.Pham.Bull.1999,47 (3):388-393 ；J.Nat.Prod.1999,62 (6):877-881 ；Phytochemistry, 1999,52:715-722)。公开号为CN101537036A的中国发明专利申请中公开一种皂荚皂苷提取物及其制备方法与应用，其存在以下缺陷:提取得到的皂荚皂苷提取物中总皂苷含量不高，药效不理想，尚有改进的空间。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种猪牙皂总皂苷的制备方法。本发明是通过以下技术方案实现的:一种猪牙皂总皂苷的制备方法，步骤如下:(I)猪牙皂提取的前处理:取干燥猪牙皂药材，粉碎为粗粉，备用；(2)猪牙皂总皂苷的水煎提取工艺:取上述猪牙皂粗粉，加入去离子水10倍量(重量倍数)，煎煮2小时，滤过；药渣再加入8倍量(重量倍数)的水,煎煮2小时，滤过；药渣再加入8倍量(重量倍数)的水，煎煮2小时，滤过；合并三次滤液，减压浓缩得相对密度为1.10 1.15 (60。。测)的药液，备用；(3)猪牙皂总皂苷的正丁醇萃取:取上述药液，用水的饱和正丁醇溶液萃取3次，合并正丁醇提取液，减压回收正丁醇至相对密度为1.15^1.20 (60°C)，得正丁醇提取物；(4)猪牙皂总皂苷的大孔树脂纯化分离:取上述正丁醇提取物，加6倍量的水(重量倍数)，微热使充分溶解，放冷，滤过，收集滤液，加入DlOl大孔树脂柱(需预先处理，处理方式为常规处理方式)内，先用蒸馏水洗脱至近无色，然后用10%乙醇(体积分数)洗脱至近无色，再用70 %乙醇(体积分数)洗脱，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩得相对密度为1.20-1.25 (60°C)的稠膏，60 65°C减压干燥，即得猪牙皂总皂苷，其总皂苷含量达80%以上。利用本发明的猪牙皂总皂苷的制备方法提取得到的猪牙皂总皂苷，为浅棕黄色粉末，味辛、咸，具有皂苷的刺激性气味，总皂苷含量达80%以上，可以用于治疗急、慢性白血病；具体应用时，可以与淀粉充分混匀制成胶囊。本发明的方法与公开号为CN101537036A中公开的工艺相比较，改进之处如下:(I)制备方法方面的比较:本发明的制备方法:原料采用水提取、正丁醇萃取和大孔树脂DlOl纯化，洗脱剂为水、10%乙醇和70%乙醇，收集70%乙醇洗脱物，经回收干燥后得猪牙皂总皂苷，其总皂苷含量达80%以上。原专利工艺:原料经水或85%乙醇提取，提取物上大孔树脂柱AB-8，洗脱剂为水、20乙醇、40%乙醇、60%乙醇，收集40%和60%乙醇洗脱物，经回收干燥后得猪牙皂提取物，提取物中总皂苷含量约达65%。(2)药效方面的比较: 试验结果表明，本发明的纯化分离后的样品对K562、NB4及S18tl的抑制作用明显优于原专利工艺样品，其具体实验结果见实施例二、实施例四:猪牙皂总皂苷对K562、NB4细胞抑制作用的研究:猪牙皂总皂苷I和2及对照药物阿霉素对K562、NB4细胞的增殖有显著的抑制作用，且随着药物浓度的增加及作用时间的延长，其对肿瘤细胞的抑制率逐渐增强。猪牙皂总皂苷I对K562、NB4细胞的增殖抑制作用优于猪牙皂总皂苷2。猪牙皂总皂苷对小鼠S18tl肉瘤抑瘤作用研究:猪牙皂总皂苷I (本专利工艺)高中剂量组对S18tl肉瘤的生长具有明显的抑制作用，其抑制率分别为39.5%和34.2%，低剂量组未见明显抑制作用。猪牙皂总皂苷2 (原专利工艺)高剂量组对S18tl肉瘤的生长具有明显的抑制作用，其抑制率为31.2%，中低剂量组未见明显抑制作用。本工艺提取的总皂苷I对S180的抑制作用明显优于较原专利工艺总皂苷2。
图1:测定样品中刺囊酸和齐墩果酸的空白干扰图，其中，图1:图1-1纯溶剂甲醇峰；图1-2:对照品；图1-3:供试品。图2-1:刺囊酸的标准曲线。图2-2:齐墩果酸的标准曲线。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明。实施例一猪牙皂总皂苷制备方法的优化1、水煎提取的研究资料(I)水煎条件的确定:在对猪牙皂水煎工艺的优选中，以总皂苷收率为指标，对影响提取率的加水量、提取次数、提取时间进行了三因素三水平的正交试验，优选确定了适宜的水煎提取条件，其正交优选试验的具体试验方法为:准确称取猪牙皂粗粉100g，共称9份，分别按表I中试验安排的水煎条件进行9次水煎试验，将各试验液浓缩定容至IOOml量瓶中，按总皂苷的测定方法分别测定各提取样品中总皂苷的含量，试验因素及水平表见表1，9次正交试验的安排及其结果见表2。乙醚沉淀法测定总皂苷含量:取各次试验溶液IOml (相当生药量10g)，水浴蒸干，残渣加甲醇30ml，微热使溶解，放冷，滤过，滤液在充分搅拌下，缓缓加入3倍量的乙醚，力口完后继续搅拌10分钟，密封，置阴凉处静置24h，倾出上清夜，沉淀抽滤至干，并用甲醇:乙醚(1:2)混合溶剂IOml洗涤，挥干溶剂，60 65°C真空干燥，称重，计算各样品中总皂苷的提取总量。表I试验因素及水平表
权利要求
1.种猪牙皂总皂苷的制备方法，其特征在于:步骤如下: (1)猪牙皂提取的前处理:取干燥猪牙皂药材，粉碎为粗粉，备用； (2)猪牙皂总皂苷的水煎提取工艺:取上述猪牙皂粗粉，加入去离子水10倍量，煎煮2小时,滤过；药渣再加入8倍量的水，煎煮2小时，滤过；药渣再加入8倍量的水，煎煮2小时，滤过；合并三次滤液，减压浓缩得相对密度为1.10 1.15的药液，备用； (3)猪牙皂总皂苷的正丁醇萃取:取上述药液，用水的饱和正丁醇溶液萃取3次，合并正丁醇提取液，减压回收正丁醇至相对密度为1.15 1.20，得正丁醇提取物； (4)猪牙皂总皂苷的大孔树脂纯化分离:取上述正丁醇提取物，加6倍量的水，充分溶解，滤过，收集滤液，加入DlOl大孔树脂柱内，先用蒸馏水洗脱至近无色，然后用10%乙醇洗脱至近无色，再用70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩得相对密度为1.20-1.25的稠膏，60 65°C减压干燥，即 得猪牙皂总皂苷。
全文摘要
本发明公开了一种猪牙皂总皂苷的制备方法，其特征在于步骤如下(1)取干燥猪牙皂药材，粉碎为粗粉(2)取猪牙皂粗粉，加入去离子水，煎煮，滤过；提取三次，合并滤液，减压浓缩得药液；(3)取上述药液，用水的饱和正丁醇溶液萃取3次，合并正丁醇提取液，减压回收，得正丁醇提取物；(4)取上述正丁醇提取物，加水溶解，滤过，收集滤液，加入D101大孔树脂柱内，先用蒸馏水洗脱至近无色，然后用10%乙醇洗脱至近无色，再用70％乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，减压干燥，即得猪牙皂总皂苷。利用该方法提取得到的猪牙皂总皂苷，为浅棕黄色粉末，味辛、咸，具有皂苷的刺激性气味，总皂苷含量达80%以上，可以用于治疗急、慢性白血病。
文档编号A61K36/483GK103083388SQ20121059474
公开日2013年5月8日 申请日期2012年12月31日 优先权日2012年12月31日
发明者赵渤年, 张新军, 贾元印, 李贵海 申请人:山东省中医药研究院