专利名称：小春花提取物的用途及其制备方法
技术领域：
本发明涉及治疗支气管哮喘的药物，尤其涉及小春花提取物的用途及其制备方法。
背景技术：
小春花为阴地蕨科植物阴地蕨sceptridium ternatum(Tlamb.)Luon。为浙江省常用中药材，具有清热解毒，平肝熄风，止咳，止血，明目祛翳等功效。民间用于治疗小儿高热惊搐、肺热咳嗽、咳血、百日咳、癫狂、痫疾、疮疡肿毒、瘰疬、毒蛇咬伤、目赤火眼、目生翳障等病。目前，对小春花治疗支气 管哮喘的机理研究未见报道。支气管哮喘(哮喘Asthma)是呼吸系统常见病和多发病。且发病率逐年增高，据统计，全世界约有I亿5千5百万人患有哮喘。我国成人发病率为0.7% 1.5%，儿童为0.7% 2.03%，也就是说全国约有1000万 2000万患者，且以青壮年和儿童居多，是对国民的身体素质危害最大的疾病之一。因此积极开发安全有效的支气管哮喘治疗药物一直是我国乃至世界科学家研究的重点。近十多年来，对哮喘的病理病机研究有了很大的进展，认为该病是多种细胞参与的，以嗜酸性细胞(Eos)、肥大细胞反应为主的气道高反应性(AHR)为特征的非特异性气道慢性炎症。近年来，学者们大量的研究工作表明:许多细胞因子参与了 Eos的调控作用，尽管哮喘发病机理复杂，越来越多研究表明Th2细胞在哮喘的发生发展中起了重要作用。它们通过释放Th2型细胞因子如IL-4、IL-5等触发炎性反应，导致Eos在气道募集并活化而引起组胺、白三烯等多种炎性介质的释放。而Thl细胞则具有Th2细胞相反的作用，他们通过释放Thl型细胞因子如IFN-Y、IL-12等拮抗Th2型细胞因子的功能而抑制哮喘反应。目前普遍认为哮喘患者存在Th2占优势的Thl/Th2失平衡。如何通过调节Thl/Th2型细胞之间的平衡已成为哮喘免疫治疗的一个热点。已有研究表明如哮喘动物降低肺泡灌洗液(BALF)中Eos数，增加BALF及外周血中IFN- Y与IL-12水平，降低IL_4、IL-5水平，并可降低气道反应性。另外，白三烯(LTs)是支气管哮喘发生发展过程中的主要炎性反应介质。它不仅能促进炎性反应细胞在呼吸道内聚集，增加血管通透性和粘液分泌，还可以引起呼吸包平滑肌收缩，促进呼吸道结构细胞增殖。当前哮喘治疗仍以激素与β2受体激动剂为主，缺乏更安全、有效的治疗药物，我国学者一直呼吁进行中医中药对哮喘的防治研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种小春花提取物在制备治疗支气管哮喘药物中的用途。本发明的另一目的在于提供小春花提取物的制备方法。为了实现上述发明目的，本发明的技术方案为:小春花提取物在制备治疗支气管哮喘药物中的用途。小春花提取物的制备方法，包括如下步骤:(I)、取小春花全草，晾干、粉碎，备用；回流提取时加入8倍量50% 70%醇溶液，加热回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液；(2)提取物用吸附树脂富集:提取液加入到吸附树脂柱上用水西至淡黄色，用10% 90%的醇类洗下总黄酮，回收醇，干燥得棕色粉末。3、根据权利要求2所述的小春花提取物制备方法，其特征在于:提取溶剂可以是甲醇、丙酮和乙醇；洗脱溶媒可以使10 90%的乙醇；吸附剂可以使聚酰胺、硅胶及氧化招。4、小春花提取物制备成药剂学上能接受的剂型。5、小春花提取物制备成片剂、颗粒剂或胶囊剂。本发明进一步扩大了小春花提取物在药物中的用途，明确了小春花提取物对支气管哮喘的治疗作用，为广大病人提供了新的用药途径；丰富了浙产药材的研究基础，为繁荣我国药材经济作出一定贡献。
图1:ACt对 1g-1 浓度图；图2:cysltl(左)、GAPDH(右)表达溶解曲线；图3 =Cysltl凝胶电泳图(O为标准品，I 8为内参，10 12为cysltl)；图4:cyslt2表达溶解曲线；图5:Cyslt2凝胶电泳图(红色部分为标准品；绿色部分为内参；黄色部分为cyslt2)；图6:小鼠肺组织中白三烯受体ImRNA表达比较；图7:空白组(100X，清晰、正常)；图8:模型组(100 X，支气管扩张明显)；图9:孟鲁司特组(100X，支气管扩张不明显)；图10:高剂量组(100 X，支气管扩张不明显)；图11:中剂量组(100X，支气管扩张明显)；图12:低剂量组(100 X，支气管扩张明显)。
具体实施例方式为了证明小春花提取物对支气管哮喘的治疗作用，申请人设计了科学的动物实验，以验证小春花提取物对支气管哮喘有治疗作用。实施例1:制备小春花提取物采集小春花全草，晾干，取Ikg小春花，粉碎，加8倍量70%乙醇加热回流提取2次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味即得。上述实施例制备得到的小春花提取物可以进一步制备得到，小春花提取物的药物制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂等药剂学上可以接受的各种药物剂型。试验例:(一 )材料与仪器1、动物:清洁级，雌性，BALB/c小鼠60只，6 8周龄，体重20 22g。由浙江省中医药研究院实验动物中心提供及代养。随机分为6组，每组10只。分别为正常对照组、模型对照组，阳性药物对照组，高剂量组，中剂量组，低剂量组。2、仪器:流式细胞仪(Coulter, Beckman 公司)RT_PCR 仪(Stepone Plus,美国ABI公司)Medlabl2.0生物信号处理系统(南京美易科技有限公司)显微镜(EclipSe80i，Nikon公司)3、试剂:小春花(浙江省中医药研究院提供，系野外采集)，孟鲁司特(默沙东公司)卵蛋白(OVA, sigma公司)，免疫佐剂液态招(pierce公司)、莫能霉素、佛波酯及离子霉素(Monensin, PMA, 1nomycin, MultiSciences 公司)、CD3_Pc5 抗体、CD8-FITC 抗体、IL-4-PE 抗体、IFN- Y -PE 抗体(Ebioscience 公司)。(二)小春花提取物的制备取实施例所得小春花提取物，用去离子水稀释至一定浓度，待用。(三)哮喘小鼠模型建立致敏:于第I天和第14天每只小鼠分别腹腔内注射0.2mL(0.08%的0VA0.1mL与等体积佐剂液态铝混合)。激发: 于第24、25、26d将小鼠置于密闭容器(20cmX40cmX50cm)中，以I % OVAlOmL雾化吸入20min，I次/d。激发后研究:在最后I次激发后第2天(第28天)处死小鼠，收集标本进行相关研究。(四)分组及干预方法①正常对照组以生理盐水代替OVA致敏激发，正常口服食物。②模型组:于致死前10天胃内灌服生理盐水。③用药组于致死前10天开始胃内灌服，高、中、低剂量组给于小春花提取物，以小春花生药计高剂量为387mg/20g鼠/d，中剂量为193.5mg/20g鼠/d，低剂量为38.7mg/20g鼠/d。阳性组给于孟鲁司特水溶液，为0.2mg/20g鼠/d。(五)小春花提取物对哮喘小鼠肺功能的影响1、方法将末次激发的老鼠置于密闭容器(体积描记箱)中，如图1。每个体描箱内放置I只小鼠，每轮测量10只小鼠。与压力感受器连接，传感器(TRD5700)记录小鼠呼吸时引起的体描箱内压力变化，由放大器(MAX1420，MAX2270，MAX4371)处理后，信号传输给系统，进行Penh %的计算。计算方法:
权利要求
1.小春花提取物在制备治疗支气管哮喘药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的小春花提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤:(I)、取小春花全草，晾干、粉碎，备用；回流提取时加入8倍量50% 70%醇溶液，加热回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液； (2)提取物用吸附树脂富集:提取液加入到吸附树脂柱上用水西至淡黄色，用10% 90 %的醇类洗下总黄酮，回收醇，干燥得棕色粉末。
3.根据权利要求2所述的小春花提取物制备方法，其特征在于:提取溶剂可以是甲醇、丙酮和乙醇；洗脱溶媒可以使10 90%的乙醇；吸附剂可以使聚酰胺、硅胶及氧化铝。
4.根据权利要求1所述的小春花提取物制备成药剂学上能接受的剂型。
5.根据权利要求4所述的小春花提取物制备成片剂`、颗粒剂或胶囊剂。
全文摘要
本发明涉及治疗支气管哮喘的药物，尤其涉及小春花提取物的用途及其制备方法。本发明公开了小春花提取物在制备治疗支气管哮喘药物中的用途。本发明进一步扩大了小春花提取物在药物中的用途，明确了小春花提取物对支气管哮喘的治疗作用，为广大病人提供了新的用药途径；丰富了浙产药材的研究基础，为繁荣我国药材经济作出一定贡献。
文档编号A61P11/06GK103169739SQ20131004105
公开日2013年6月26日 申请日期2013年1月29日 优先权日2013年1月29日
发明者黄萍, 叶佐武, 杨秀丽, 戴纯辉, 应茵, 羊波, 袁雍 申请人:浙江省立同德医院