一种使用益生菌制备用于清除尿毒素的组合物的用途
【专利摘要】本发明涉及一种用于清除尿毒素的益生菌组合物，该益生菌组合物选自：胚芽乳酸杆菌(Lactobacillus?plantarum?BCRC12251)、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus?paracasei?BCRC12188)、嗜热链球菌(Streptococcus?thermophilus?BCRC13869)所组成群组中的任一者，及药学上可接受的载剂、赋形剂、稀释剂、辅剂等；此外，本发明更提供一种用于清除尿毒素的益生菌组合物，该组合物包括：胚芽乳酸杆菌(Lactobacillus?plantarum?BCRC12251)、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus?paracasei?BCRC12188)、嗜热链球菌(Streptococcus?thermophiles?BCRC13869)，及药学上可接受的载剂、赋形剂、稀释剂、辅剂等。另本发明也涉及借由该组合物或益生菌用以清除尿毒素的新颖用途；该尿毒素特别指的是亲蛋白质尿毒素(protein-bound?uremic?toxins)。
【专利说明】—种使用益生菌制备用于清除尿毒素的组合物的用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及益生菌组合物的制备方法及其用途，特别指一种使用益生菌制备用于清除尿毒素的组合物的用途。
【背景技术】
[0002]慢性肾病变(chronic kidney disease, CKD)指的是肾脏功能逐渐丧失的一种疾病，是一个全球性的健康问题，且此病对患者的生活也有很大的影响。慢性肾病变患者失去肾功能之后，原本应该 由肾脏排泄或代谢的物质会逐渐堆积在体内，导致血液中这些物质的浓度增加，因此造成各种器官的毒性；肾衰竭患者体内的尿毒滞留物质(uremicretention solutes, URMs),指的就是会被健康肾脏排除,但是在慢性肾病变疾病发展的过程中逐渐堆积在血液或组织中的各种分子，这些尿毒滞留物质会引起尿毒症(uremia)，因此也被称作尿毒素(uremic toxin)。欧洲毒素工作小组(European Toxin Work Group)依照洗肾时(dialysis)会影响到移除这些滞留物质(URMs)的特征，将URMs分成3类，区分为(I)水溶性小分子化合物(small water-soluble molecules, <500Da):可以很轻易地通过任何透析过滤器；(2)大分子化合物(larger molecules, ^ 500Da):依照滤膜的特征，透析过滤器对这些大分子的通过是有限制的，有时这些大分子也会被称作中分子化合物(middle molecules) ； (3)亲蛋白质化合物(protein-bound solutes):亲蛋白质化合物的透析移除，很大程度上是依赖其结合态和游离态之间的平衡，吸附技术(adsorptivetechniques)也会影响其功效。
[0003]尿毒滞留物质(URMs)的分类可以帮助医学界进一步了解各种尿毒素的特性，以及研究发展更好的治疗方式；长期以来大部分的研究都专注于水溶性小分子化合物(small water-soluble molecules)对肾脏疾病的影响，甚至以其作为评估治疗的依据，但是随着越来越多的研究报告被发表，新的观念逐渐形成，现在认为亲蛋白质化合物(protein-bound solutes)对肾脏疾病的影响更为重要，因此其对肾脏疾病患者治疗的效果也必须重新评估。
[0004]亲蛋白质尿毒素(protein-bound uremic toxins)
[0005]亲蛋白质尿毒素和尿毒症候群(uremic syndrome)有关,并且也可能和慢性肾病变(CKD)的高致死率有关；因此许多研究开始致力于降低血清中亲蛋白质尿毒素的浓度，其降低的方法有两种:(I)减少肠道对亲蛋白质尿毒素的吸收；(2)改善血液中亲蛋白质尿
毒素的清除率。
[0006]硫酸吲哚酌.(indoxyl sulfate, IS)和硫化对甲酌.(p-cresyl sulfate)是两种很重要的亲蛋白质尿毒素；在研究亲蛋白质尿毒素于血液透析(hemodialysis)、血液透析过滤(hemodiafiItration)或腹膜透析(peritoneal dialysis)时的行为时，硫酸口引哚酹(indoxyl sulfate)和硫化对甲酹(p-cresyl sulfate)是最被广泛使用的标记分子(marker molecules);此外硫酸吲哚酌.(indoxyl sulfate)和硫化对甲酌.(p-cresylsulfate)也被认和尿毒症候群(uremic syndrome)的形成,有直接的关联。[0007]目前对于尿毒素的清除主要以透析治疗来清除血液中的水溶性小分子化合物类的尿毒素，然而这些方法皆无法有效的清除血液中的亲蛋白质尿毒素；有些研究甚至显示，透析膜对于水溶性小分子化合物类的尿毒素的清除效果很好，但是对于亲蛋白质尿毒素的清除率却非常的低。
[0008]此外,Marieret al 等人也揭露了一种以口服吸附剂(AST-120，Kremezin; KurehaCorporation, Tokyo, Japan)来治疗慢性肾病变的方法；此方法使用AST_120( —种活性碳吸附剂)，使其在大肠内吸附不同的有机化合物，例如:indoxyl sulfate和p-cresol,以减少身体对于亲蛋白质尿毒素的吸收；但是目前此种口服吸附剂仍在进行临床试验，以确定其最佳效果与适当剂量。
[0009]由此可见，上述现有的清除尿毒素的方法仍有诸多缺失，实非一良善的设计，而亟待加以改良。
【发明内容】
[0010]有鉴于此，本案发明人为克服上述现有清除尿毒素的方法所产生的各项缺点，于是发展出一技术，此技术利用益生菌(probiotics)来清除尿毒素，该尿毒素特别指的是亲蛋白质尿毒素，终于成功研发完成本件制备益生菌组合物及其清除亲蛋白质尿毒素的用途。
[0011]本发明的目的在于提供一种使用益生菌制备用于清除尿毒素的组合物的用途，以克服目前其他方法，如血液透析，无法有效清除血液中亲蛋白质尿毒素的问题。
[0012]本发明提供一种使用益生菌制备用于清除尿毒素的组合物的用途，其中该益生菌组合物可以选自以下群组:胚芽乳酸杆菌(Lactobacillus pi ant arum BCRC12251、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei BCRC12188)、嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus BCRC13869)或幾肠球菌(Enterococcus faecalis)中任一者；该益生菌组合物可用于清除血液中的尿毒素(uremic toxins)。
[0013]其中，该益生菌组合物以由胚芽乳酸杆菌(Lactobacillus pi ant arumBCRC12251)、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei BCRC12188)和嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus BCRC13869)所组成的 Pm-1 益生菌组合物(Probioticmix-1),其清除尿毒素的效果较佳；其中该尿毒素为亲蛋白质尿毒素(protein-bounduremic toxins);该亲蛋白质尿毒素(protein-bound uremic toxins)更进一步为硫酸口引哚酹(indoxyl sulfate)、对甲酹(p-cresol)或酹(phenol) ；Pm-l中益生菌的浓度可为107-10lclCFU/mL ；Pm-l中各益生菌的组成比例为胚芽乳酸杆菌(Lactobacillus pi ant arumBCRC12251)的含量为 40-60%、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei BCRC12188)的含量为 20-30%、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus BCRC13869)的含量为20%-30%。
[0014]虽然目前已有其他的方法来清除血液中的尿毒素,如:血液透析(hemodialysis)和口服吸附剂(AST-120)，但血液透析主要针对的是尿毒素中的小分子化合物，并无法有效的清除血液中的亲蛋白质尿毒素，而口服吸附剂虽然可以减少身体对于亲蛋白质尿毒素的吸收，但是因为目前正在进行临床试验，因此距离其实际的应用仍需等待一段时间；而本发明所提供的Pm-1益生菌组合物，不但具有良好的清除亲蛋白质尿毒素的能力，更拥有比前项技术制备简易和更具经济效益的优点。
【专利附图】
【附图说明】
[0015]图1为本发明喂食小鼠不同菌株，该小鼠血液中indoxyl sulfate的变化图(Control:对照组、Kefir:新竹组克弗尔、Ml:悬浮于 PBS 的 Lb.kef iranofaciens Ml、107:BCRC12251 与 12188 的混和菌液 lxl07CFU/mLU08:BCRC12251 与 12188 的混和菌液lxl08CFU/mL)。
[0016]图2为本发明的单一菌株12188、12251、13869及EF和混合菌株12251+12188、12251+EF、12188+EF 及 12251+12188+13869 清除 indoxyl sulfate 效果的比较图。
[0017]图3为本发明的动物试验流程图；S31:Cisplatin诱发急性肾脏炎大鼠试验的流程图；S32:Cisplatin诱发急性肾脏炎大鼠试验的分析方法。
[0018]图4为本发明试验期间大鼠的体重变化图。(Ctrl:对照组，未注射Cisplatin; Cis:正对照组,注射Cisplatin但未喂食益生菌；Cis+Wk:注射Cisplatin和喂食若兀淀;Cis+Pm-1:注射 Cisplatin 和喂食probiotic mix-1; Cis+Pm-2:注射 Cisplatin和喂食 probiotic mix-2)
[0019]图5为本发明Cisplatin诱发急性肾脏炎大鼠试验中，各组血清与尿液中indoxylsulfate的浓度。(ctrl:对照组,未注射Cisplatin;Cis:正对照组,注射Cisplatin,但未喂食益生菌；Wk:注射Cisplatin和喂食若元锭；Pm_l:注射Cisplatin和喂食probioticmix-1; Pm-2:注射 Cisplatin 和喂食 probiotic mix-2)
[0020]图6为本发明Cisplat in诱发急性肾脏炎大鼠试验中，各组肾脏与肝脏中indoxylsulfate的浓度。(ctrl:对照组,未注射Cisplatin;Cis:正对照组,注射Cisplatin,但未喂食益生菌；Wk:注射Cisplatin和喂食若元锭；Pm_l:注射Cisplatin和喂食probioticmix-1; Pm-2:注射 Cisplatin 和喂食 probiotic mix-2)
[0021]图7为本发明Cisplatin诱发急性肾脏炎大鼠试验中，各组血液生化分析值。(*ρ〈0.05, **ρ〈0.01; ctrl:对照组，未注射 Cisplatin; Cis:正对照组,注射 Cisplatin,但未喂食益生菌；Wk:注射Cisplatin和喂食若元锭；Pm_l:注射Cisplatin和喂食probioticmix-1; Pm-2:注射 Cisplatin 和喂食 probiotic mix-2)
[0022]图8为本发明Cisplatin诱发急性肾脏炎大鼠试验中，各组的尿液分析。(ctrl:对照组，未注射Cisplatin;Cis:正对照组，注射Cisplatin,但未喂食益生菌；Wk:注射Cisplatin 和喂食若兀淀;Pm-1:注射 Cisplatin 和喂食 probiotic mix-1;Pm-2:注射Cisplatin和喂食probiotic mix-2 ;其中图8_E中的c、ab、c、a、bc标示，代表若符号相同则没有统计上的差异。)
[0023]附图标记说明
[0024]S31 Cisplatin诱发急性肾脏炎大鼠试验的流程图。
[0025]S32 Cisplatin诱发急性肾脏炎大鼠试验的分析方法。
【具体实施方式】
[0026]本发明以下面的实施例予以示范阐明，但本发明不受下述实施例所限制。
[0027]实施例一
【权利要求】
1.一种益生菌株在制备清除尿毒素组合物的应用，其特征在于，该益生菌选自以下群组:胚芽乳酸杆菌(Lactobacillus pi ant arum BCRC12251)、副干酿乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei BCRC12188)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilusBCRCl3869)的任一组合，及药学上可接受的载剂、赋形剂、稀释剂、辅剂等。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述尿毒素为亲蛋白质尿毒素(protein-bound uremic toxins)。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于,所述亲蛋白质尿毒素(protein-bounduremic toxins)为硫酸 Π引哚酌.(indoxyl sulfate)、对甲酌.(p-cresol)或酌.(phenol)。
4.一种用于清除尿毒素的益生菌组合物，其特征在于，所述组合物包括:胚芽乳酸杆菌(Lactobacillus pi ant arum BCRC12251)、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracaseiBCRC12188)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophiles BCRC13869),及药学上可接受的载剂、赋形剂、稀释剂、辅剂等。
5.根据权利要求4所述的益生菌组合物，其特征在于，所述尿毒素为亲蛋白质尿毒素(protein-bound uremic toxins)。
6.根据权利要求5所述的益生菌组合物，其特征在于，所述亲蛋白质尿毒素(protein-bound uremic toxins)为硫酸Π引哚酌.(indoxyl sulfate)、对甲酌.(p-cresol)或(phenol)。
7.根据权利要求4所述的益生菌组合物，其特征在于，所述益生菌的浓度为107-1010CFU/mL。
8.根据权利要求4所述的益生菌组合物，其特征在于，所述胚芽乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum BCRC12251)之含量为 40-60%、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei BCRC12188)的含量 20-30%、嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus BCRC13869)的含量为 20%_30%。
【文档编号】A61P13/12GK103919815SQ201310341622
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2013年8月7日 优先权日:2013年1月10日
【发明者】方承猷, 陈保基, 陈明汝, 刘嚞睿 申请人:杏昌医药科技股份有限公司, 陈明汝