阿魏酰低聚糖及其制备方法及应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种具有抗肿瘤和免疫增强活性的阿魏酰低聚糖及其制备方法及用途。具体方法为：向60g/L麦麸液中添加10g/L木聚糖和1g/L蛋白胨制得培养基；利用该培养基进行液态发酵，控制起始发酵pH4.0、起始温度33℃，在发酵至36h时，将pH和温度分别调控为6.0和29℃，发酵至84h，制得阿魏酰低聚糖。本发明制得的阿魏酰低聚糖具有抗肿瘤活性及免疫增强活性，可用作制备保健食品及天然药物，同时也提升了麦麸利用的附加值。
【专利说明】阿魏酰低聚糖及其制备方法及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及ー种具有抗肿瘤和免疫增强活性的阿魏酰低聚糖及其制备方法和用途，属于天然药物领域。
【背景技术】
[0002]阿魏酰低聚糖(FOs)是ー类广泛存在于禾本科植物中的不同糖链位置上的羟基与阿魏酸(FA)羧基酯化形成的功能性低聚糖。FOs具有阿魏酰基与亲水性的低聚糖基团，兼具水溶性和耐热性。目前的研究主要集中在其制备方法及抗氧化的生物活性上，由于FOs具有较强的抗氧化性和生物活性，其抗氧化活性强于阿魏酸及膳食纤维，对Fe2+、H2O2和羟自由基具有较强的清除能力，FOs还具有抑制金黄色葡萄球菌的生长、増殖双歧杆菌和对蛋白非酶糖基化反应具有抑制作用等功能，因而，FOs在保健食品和医药エ业中具有广阔的应用前景，但其体内生物活性有待深入研究，低聚糖的生物活性与其结构有着密切的关系，FOs组分及聚合度对抗肿瘤活性及免疫增强活性的影响未见报道。
【发明内容】
[0003]有鉴于此，提供ー种具有抗肿瘤和免疫增强活性的阿魏酰低聚糖及其制备方法和用途实为必要。
[0004]ー种具有抗肿瘤和免疫增强活性的阿魏酰低聚糖，由以下方法制得:
[0005](I)配置培养基:向60g/L麦麸液中添加10g/L木聚糖和lg/L蛋白胨；
[0006](2)发酵培养基:利用该培养基进行液态发酵，控制起始发酵pH4.0、起始温度33°C，在发酵至36h时，将pH和温度分别调控为6.0和29°C，发酵至84h，制得阿魏酰低聚糖。
[0007]上述阿魏酰低聚糖由聚合度分别为6、5、4，由分子量分别为1118、986、854的阿魏酰阿拉伯糖基木六糖(FAX6)、阿魏酰阿拉伯糖基木五糖(FAX5)、阿魏酰阿拉伯糖基木四糖(FAX4)构成。
[0008]上述具有抗肿瘤和免疫增强活性的阿魏酰低聚糖在制备抗肿瘤药物中增强免疫保健品中的用途。
[0009]本发明提供一种制备阿魏酰低聚糖的方法，由其制得的阿魏酰低聚糖具有抗肿瘤活性及免疫增强活性，将阿魏酰低聚糖在保健食品及医药中的应用变为现实，同时也提升了麦麸利用的附加值。
【具体实施方式】
[0010]下面结合具体实施例对本发明进行进ー步说明
[0011]制备具有抗肿瘤和免疫增强活性的阿魏酰低聚糖，具体方法为:向60g/L麦麸液中添加10g/L木聚糖和lg/L蛋白胨制得培养基；利用该培养基进行液态发酵，控制起始发酵pH4.0、起始温度33 °C，在发酵至36h时，将pH和温度分别调控为6.0和29°C，发酵至84h，制得阿魏酰低聚糖。
[0012]经液相色谱及气相色谱分析表明，上述阿魏酰低聚糖由木糖、阿拉伯糖和阿魏酸三种成分组成；紫外光谱分析表明，FOs在MOPS缓冲液中在325nm处具有最大值；红外光谱分析表明，FOs中存在羟基、酯键及阿拉伯糖基等特征基团；电喷雾电离质谱分析表明，FOs聚合度分别为6、5、4，由分子量分别为1118、986、854的阿魏酰阿拉伯糖基木六糖(FAX6)、阿魏酰阿拉伯糖基木五糖(FAX5)、阿魏酰阿拉伯糖基木四糖(FAX4)构成。
[0013]阿魏酰低聚糖抗肿瘤及免疫增强活性药效学实验
[0014]一、FOs体外抗肿瘤活性实验
[0015]1.受试药物的配制
[0016]精密称取样品FOs，加入DMSO溶解，在37°C超声条件下充分稀释成均匀溶液，按比例稀释，浓度范围为1000ug/ml-7.8ug/ml。
[0017]2.肿瘤细胞株的培养
[0018]细胞株BGC-823和H印G2采用添加10%胎牛血清的RPM1-1640培养液，细胞株A549采用添加10%胎牛血清的F-12Nutrient Mixture培养液，在37.(TC、空气浓度95%和CO2浓度5%的条件下培养。
[0019]3.细胞生长抑制实验
[0020]将处于对数生长期的细胞BGC-823、H印G2和A549采用0.02% EDTA消化，制成细胞悬液。以I X IO5的细胞浓度加入96孔培养板100 u I/孔，设三重复孔，置于37°C 5% CO2培养箱内培养。培养24小时后，分别加入终浓度水平从1000ug/ml-7.8ug/ml的样品FOs，培养48小吋。然后加5mg/ml MTT溶液20 yl/孔，于37°C继续培养4h，弃去全部上清，カロ入DMSO100 u I/孔，微型振荡器 上振5min，使结晶完全溶解，用酶联仪570nn波长处测定吸光度值(A)，计算细胞抑制率。生长抑制率用量效曲线计算的IC5tl(与对照品相比使细胞生长下降50%的药物浓度)来表示，采用SPSS18.0统计软件进行统计评价。
[0021 ] 4.FOs对细胞株生长抑制作用
[0022]FOs在体外对人肝癌细胞H印G2、人胃癌细胞BGC-823、人肺腺癌细胞A549的生长均具有一定的抑制作用，且生长抑制率随药物浓度的増加呈上升趋势，如表1、2、3所示。当药物浓度达到1000 u g/mL吋，FOs对各癌细胞株的抑制活性都最高，且对人肝癌细胞H印G2的生长抑制效果最好。
[0023]表IFOs对人肝癌细胞H印G2生长抑制作用
[0024]
【权利要求】
1.ー种具有抗肿瘤和免疫增强活性的阿魏酰低聚糖，由以下方法制得: (1)配置培养基:向60g/L麦麸液中添加10g/L木聚糖和lg/L蛋白胨； (2)发酵培养基:利用该培养基进行液态发酵，控制起始发酵pH4.0、起始温度33°C，在发酵至36h吋，将pH和温度分别调控为6.0和29°C，发酵至84h，制得阿魏酰低聚糖。
2.如权利要求1所述阿魏酰低聚糖，其特征在于:由聚合度分别为6、5、4，分子量分别为1118、986、854的阿魏酰阿拉伯糖基木六糖(FAX6)、阿魏酰阿拉伯糖基木五糖(FAX5)、阿魏酰阿拉伯糖基木四糖(FAX4)构成。
3.如权利要求1所述具有抗肿瘤和免疫增强活性的阿魏酰低聚糖在制备抗肿瘤药物中的应用。
4.如权利要求1所述具有抗肿瘤和免疫增强活性的阿魏酰低聚糖在制备增强免疫保健品中的应用。
【文档编号】A61P37/04GK103450290SQ201310354823
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2013年8月15日 优先权日:2013年8月15日
【发明者】余晓红, 顾振新, 李成, 申玉香, 李凤伟 申请人:盐城工学院