兽用疫苗用双相油乳佐剂及其制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种兽用疫苗用双相油乳佐剂，包括矿物油、吐温80、司盘80、丙二醇、聚乙烯酸和单油酸甘油酯，各物质的重量百分比分别为：矿物油为84.5%—88.5%、吐温80为2.5%—3.5%、司盘80为2.5%—3.5%、丙二醇为2.5%—3.5%、聚乙烯酸为2%—2.5%、单油酸甘油酯为2%—2.5%。本发明还公开了一种兽用疫苗用双相油乳佐剂的制作方法。本发明稳定性好，副反应小，而且可以提供长久稳定的免疫保护，本发明佐剂采用一步乳化法制备疫苗，工艺简化，非常适合市场推广使用。
【专利说明】兽用疫苗用双相油乳佐剂及其制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种兽用疫苗用双相油乳佐剂及其制作方法。
【背景技术】
[0002]兽用疫苗用油乳佐剂，是一种先于或与抗原同时使用，能够增强机体的非特异性免疫能力及抗原的免疫原性，而自身不具备抗原特性的物质。油乳佐剂疫苗是使用矿物油和乳化剂作为免疫增强剂的的疫苗，是目前国内外疫苗市场上产品最多的类型之一，油乳佐剂疫苗可分为三种剂型:油包水(W/0)型、水包油(0/W)型和水包油包水(W/0/W)型。
[0003]油包水(W/0)型疫苗可以获得较高水平的免疫应答，且免疫保护期较长，但是也存在的较大的缺陷:粘度大，不利于注射，且常常导致严重的动物副反应，例如免疫动物体温身高，不进食，注射部位浮肿、硬结、坏死等。水包油(0/W)型疫苗粘度低，易注射，但是难以获得满意的免疫应答水平，在疫苗市场上使用较少。
[0004]水包油包水(W/0/W)剂型疫苗同时具有W/0型和0/W型的优点，常规的做法是先制备W/0型疫苗，再经第二次分散到水相中制备而成。目的是降低黏度，既便于注射又具有良好的免疫原性。但制备技术上难度较大，疫苗稳定性差。
【发明内容】
[0005]基于此，针对上述问题，有必要提出一种制备工艺简单、粘度低、稳定性好、副作用小的兽用疫苗用双相油乳佐剂。
[0006]为解决上述技术问题，本发明提供了一种兽用疫苗用双相油乳佐剂，包括矿物油、吐温80、司盘80、丙二醇、聚 乙烯酸和单油酸甘油酯，各物质的重量百分比分别为:矿物油为 84.5%—88.5%、吐温 80 为 2.5%—3.5%、司盘 80 为 2.5%—3.5%、丙二醇为 2.5%—3.5%、聚乙烯酸为2% — 2.5%、单油酸甘油酯为2% — 2.5%。
[0007]在优选的实施例中，所述矿物油为食品或医药级的白油。
[0008]在优选的实施例中，所述矿物油、吐温80、司盘80、丙二醇、聚乙烯酸和单油酸甘油酯的重量百分比依次为88.5%、2.5%、2.5%、2.5%、2%、2%。
[0009]在优选的实施例中，所述矿物油、吐温80、司盘80、丙二醇、聚乙烯酸和单油酸甘油酯的重量百分比依次为84.5%、3.5%、3.5%、3.5%、2.5%、2.5%。
[0010]在优选的实施例中，所述矿物油、吐温80、司盘80、丙二醇、聚乙烯酸和单油酸甘油酯的重量百分比依次为86.5%、3.1%、3.1%、3.1%、2.1%、2.1%。
[0011]为解决上述技术问题，本发明还提出一种兽用疫苗用双相油乳佐剂的制作方法，包括以下步骤:
取重量百分比为84.5%—88.5%的矿物油、2.5% — 3.5%的吐温80、2.5% — 3.5%的司盘80,2.5% — 3.5%的丙二醇、2% — 2.5%的聚乙烯酸、2% — 2.5%的单油酸甘油酯，称量后备用；将矿物油加入反应罐内进行搅拌，搅拌的转速控制为86—96转/分，搅拌28—40分钟后，将矿物油升温到35°C—40°C ；向反应罐里依次加入称量备用的司盘80、聚乙烯酸和单油酸甘油酯，继续搅拌，搅拌的转速控制为86— 96转/分，搅拌28— 40分钟后，将反应罐内冷却至常温；
向反应罐内依次加入称量备用的吐温80和丙二醇，继续搅拌28—40分钟后静置，搅拌的转速控制为86— 96转/分；
将静置后反应罐内的混合液体采用0.45微米滤膜过滤，即可制作出兽用疫苗用双相油乳佐剂。
[0012]在优选的实施例中，搅拌的时间均为30分钟，搅拌的转速为88转/分。
[0013]在优选的实施例中，反应罐及其他原料均置于无粉尘、无杂物的环境。
[0014]在优选的实施例中，还包括以下步骤:清洗反应罐，将反应罐内清洗至无粉尘、无杂物的环境。
[0015]本发明的有益效果是:
(1)本技术方案所提出的兽用疫苗用双相油乳佐剂，剂型为水包油包水，其性能略优于法国赛比克公司的垄断产品206佐剂，是目前唯一一个可以替代进口双相油乳佐剂的国产佐剂，采用本发明双相油乳佐剂可以在提高疫苗的品质的同时降低兽用疫苗厂家的生产成本；
(2)该佐剂与抗原配制成的疫苗稳定性好，副反应小，而且可以提供长久稳定的免疫保护，本发明佐剂采用一步乳化法制备疫苗，工艺简化，非常适合市场推广使用；
(3)本佐剂在性能上的优势主要表现在以下两个方面:
a.稳定性优于国内外同类产品，37°C可稳定保存至少30天，相比法国赛比克公司206佐剂37°C 15天的稳定性而言，本发明双相油乳佐剂可以进一步提高疫苗产品的稳定性，更利于疫苗对免疫动物提供长期保护；
b.口蹄疫疫苗是兽用疫苗的第一大苗，本发明双相油乳佐剂配置的口蹄疫疫苗免疫猪抗体略高于法国赛比克206佐剂配置的口蹄疫疫苗。
【具体实施方式】
[0016]下面对本发明的实施例进行详细说明。
[0017]实施例1:
一种兽用疫苗用双相油乳佐剂，包括矿物油、吐温80、司盘80、丙二醇、聚乙烯酸和单油酸甘油酯，各物质的重量百分比分别为:矿物油为88.5%、吐温80为2.5%、司盘80为
2.5%、丙二醇为2.5%、聚乙烯酸为2%、单油酸甘油酯为2%。所述矿物油为食品或医药级的白油。
[0018]本实施例1所述兽用疫苗用双相油乳佐剂的制作方法，包括以下步骤:
步骤一，取重量百分比为88.5%的矿物油、2.5%的吐温80、2.5%的司盘80、2.5%的丙二醇、2%的聚乙烯酸、 2%的单油酸甘油酯，称量后备用；
步骤二，将矿物油加入反应罐内进行搅拌，搅拌的转速控制为86—96转/分，搅拌28—40分钟后，将矿物油升温到35°C—40°C ；
步骤三，向反应罐里依次加入称量备用的司盘80、聚乙烯酸和单油酸甘油酯，继续搅拌，搅拌的转速控制为86— 96转/分，搅拌28— 40分钟后，将反应罐内冷却至常温；
步骤四，向反应罐内依次加入称量备用的吐温80和丙二醇，继续搅拌28—40分钟后静置，搅拌的转速控制为86— 96转/分；
步骤五，将静置后反应罐内的混合液体采用0.45微米滤膜过滤，即可制作出本实施例1所述的兽用疫苗用双相油乳佐剂。
[0019]在上述步骤中，搅拌的时间最好均控制为30分钟，搅拌的转速最好均控制为88转/分。反应罐及其他原料最好均置于无粉尘、无杂物的环境。在使用反应罐之前，最好先清洗反应罐，将反应罐内清洗至无粉尘、无杂物的环境。
[0020]实施例2:
一种兽用疫苗用双相油乳佐剂，包括矿物油、吐温80、司盘80、丙二醇、聚乙烯酸和单油酸甘油酯，各物质的重量百分比分别为:矿物油为84.5%、吐温80为3.5%、司盘80为
3.5%、丙二醇为3.5%、聚乙烯酸为2.5%、单油酸甘油酯为2.5%。所述矿物油为食品或医药级的白油。
[0021]本实施例2所述兽用疫苗用双相油乳佐剂的制作方法，包括以下步骤:
步骤一，取重量百分比为84.5%的矿物油、3.5%的吐温80、3.5%的司盘80、3.5%的丙二醇、2.5%的聚乙烯酸、2.5%的单油酸甘油酯，称量后备用；
步骤二，将矿物油 加入反应罐内进行搅拌，搅拌的转速控制为86—96转/分，搅拌28—40分钟后，将矿物油升温到35°C—40°C ；
步骤三，向反应罐里依次加入称量备用的司盘80、聚乙烯酸和单油酸甘油酯，继续搅拌，搅拌的转速控制为86— 96转/分，搅拌28— 40分钟后，将反应罐内冷却至常温；
步骤四，向反应罐内依次加入称量备用的吐温80和丙二醇，继续搅拌28—40分钟后静置，搅拌的转速控制为86— 96转/分；
步骤五，将静置后反应罐内的混合液体采用0.45微米滤膜过滤，即可制作出本实施例2所述的兽用疫苗用双相油乳佐剂。
[0022]在上述步骤中，搅拌的时间最好均控制为30分钟，搅拌的转速最好均控制为88转/分。反应罐及其他原料最好均置于无粉尘、无杂物的环境。在使用反应罐之前，最好先清洗反应罐，将反应罐内清洗至无粉尘、无杂物的环境。
[0023]实施例3:
一种兽用疫苗用双相油乳佐剂，包括矿物油、吐温80、司盘80、丙二醇、聚乙烯酸和单油酸甘油酯。各物质的重量百分比分别为:矿物油为86.5%、吐温80为3.1%、司盘80为
3.1%、丙二醇为3.1%、聚乙烯酸为2.1%、单油酸甘油酯为2.1%。所述矿物油为食品或医药级的白油。
[0024]本实施例3所述兽用疫苗用双相油乳佐剂的制作方法，包括以下步骤:
步骤一，取重量百分比为86.5%的矿物油、3.1%的吐温80、3.1%的司盘80、3.1%的丙二醇、2.1%的聚乙烯酸、2.1%的单油酸甘油酯，称量后备用；
步骤二，将矿物油加入反应罐内进行搅拌，搅拌的转速控制为86—96转/分，搅拌28—40分钟后，将矿物油升温到35°C—40°C ；
步骤三，向反应罐里依次加入称量备用的司盘80、聚乙烯酸和单油酸甘油酯，继续搅拌，搅拌的转速控制为86— 96转/分，搅拌28— 40分钟后，将反应罐内冷却至常温；
步骤四，向反应罐内依次加入称量备用的吐温80和丙二醇，继续搅拌28—40分钟后静置，搅拌的转速控制为86— 96转/分；步骤五，将静置后反应罐内的混合液体采用0.45微米滤膜过滤，即可制作出本实施例3所述的兽用疫苗用双相油乳佐剂。
[0025]在上述步骤中，搅拌的时间最好均控制为30分钟，搅拌的转速最好均控制为88转/分。反应罐及其他原料最好均置于无粉尘、无杂物的环境。在使用反应罐之前，最好先清洗反应罐，将反应罐内清洗至无粉尘、无杂物的环境。
[0026]发明人对本发明所述双向油乳佐剂与市面上使用的206佐剂进行了如下对比试验。 [0027]1、材料和方法
1.1疫苗:猪口蹄疫O型灭活疫苗(0/GX/09-7株+0/XJ/10-11株)(206佐剂)，猪口蹄疫O型灭活疫苗(0/GX/09-7株+0/XJ/10-11株)(本发明所述兽用疫苗用双相油乳佐剂)。
[0028]1.2 攻毒用毒株:0/GX/09_7 株乳鼠毒(105_25ID5(l/0.2ml)。
[0029]1.3试验动物:购自无口蹄疫流行地区的猪，35kg以上，试验前采血，选乳鼠中和抗体滴度≤1:4或细胞中和抗体滴度≤1:8或液相阻断ELISA抗体效价≤1:8和3ABC抗体检测为阴性的健康易感猪用于试验。
[0030]1.4抗体检测试剂盒:兰州兽医研究所生产的口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒。
[0031]1.5 方法
1.5.1安全检验:用30-40日龄健康易感仔猪(乳鼠中和抗体滴度< 1:4或细胞中和抗体滴度< 1:8或液相阻断ELISA抗体效价< 1:8和3ABC抗体检测为阴性)2头，各两侧耳根后肌肉分点注射疫苗4ml (2头份)，每侧2ml，逐日观察14日，均不得出现口蹄疫症状或由疫苗引起的异常反应。
[0032]1.5.2抗体检测:疫苗免疫后7天、14天、21天和28天分别采血，分清血清，用液相阻断ELISA法检测抗体。
[0033]1.5.3效力检验:两种疫苗各用体重40kg左右的健康易感猪(乳鼠中和抗体滴度(1:4或细胞中和抗体滴度≤1:8或液相阻断ELISA抗体效价≤1:8和3ABC抗体检测为阴性)15头。分为3组，每组5头。将待检疫苗分为I头份(2ml)、l/3头份(0.67ml)、l/9头份(0.22ml) 3个剂量组，每一剂量组分别于耳根后肌肉注射5头猪。接种后28日，连同条件相同的对照猪2头，每头猪耳根后肌肉注射0/GX/09-7乳鼠毒2ml (含IO3ID5tlX连续观察10日。对照猪均应至少有I蹄出现水泡会溃疡。免疫猪出现任何口蹄疫症状即判为不保护。出现发病猪后要及时进行隔离。根据免疫猪的保护数，按Reed-Muench法计算被检疫苗的PD5tl。
[0034]2、实验结果
2.1安全检验结果:未出现口蹄疫症状或由疫苗引起的异常反应。
[0035]2.2抗体检测结果和效力检验结果见下表
表1:本发明所述双向油乳佐剂疫苗抗体检测结果和效力检验结果
【权利要求】
1.一种兽用疫苗用双相油乳佐剂，其特征在于，包括矿物油、吐温80、司盘80、丙二醇、聚乙烯酸和单油酸甘油酯，各物质的重量百分比分别为:矿物油为84.5%—88.5%、吐温80为2.5%—3.5%、司盘80为2.5%—3.5%、丙二醇为2.5% — 3.5%、聚乙烯酸为2% — 2.5%、单油酸甘油酯为2% — 2.5%。
2.根据权利要求1所述的兽用疫苗用双相油乳佐剂，其特征在于，所述矿物油为食品或医药级的白油。
3.根据权利要求1或2所述的兽用疫苗用双相油乳佐剂，其特征在于，所述矿物油、吐温80、司盘80、丙二醇、聚乙烯酸和单油酸甘油酯的重量百分比依次为88.5%、2.5%、2.5%、2.5%、2%、2%。
4.根据权利要求1或2所述的兽用疫苗用双相油乳佐剂，其特征在于，所述矿物油、吐温80、司盘80、丙二醇、聚乙烯酸和单油酸甘油酯的重量百分比依次为84.5%、3.5%、3.5%、3.5%、2.5%、2.5%。
5.根据权利要求1或2所述的兽用疫苗用双相油乳佐剂，其特征在于，所述矿物油、吐温80、司盘80、丙二醇、聚乙烯酸和单油酸甘油酯的重量百分比依次为86.5%、3.1%、3.1%、3.1%、2.1%、2.1%。
6.一种如权利要求1或2所述兽用疫苗用双相油乳佐剂的制作方法，其特征在于，包括以下步骤:
取重量百分比为84.5%—88.5%的矿物油、2.5% — 3.5%的吐温80、2.5% — 3.5%的司盘80,2.5% — 3.5%的丙二醇、2% — 2.5%的聚乙烯酸、2% — 2.5%的单油酸甘油酯，称量后备用；将矿物油加入反应罐内进行搅拌，搅拌的转速控制为86—96转/分，搅拌28—40分钟后，将矿物油升温到35°C—40°C ； 向反应罐里依次加入称量备用的司盘80、聚乙烯酸和单油酸甘油酯，继续搅拌，搅拌的转速控制为86— 96转/分，搅拌28— 40分钟后，将反应罐内冷却至常温； 向反应罐内依次加入称量备用的吐温80和丙二醇，继续搅拌28—40分钟后静置，搅拌的转速控制为86— 96转/分； 将静置后反应罐内的混合液体采用0.45微米滤膜过滤，即可制作出兽用疫苗用双相油乳佐剂。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，搅拌的时间均为30分钟，搅拌的转速为88转/分。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，反应罐及其他原料均置于无粉尘、无杂物的环境。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，还包括以下步骤: 清洗反应罐，将反应罐内清洗至无粉尘、无杂物的环境。
【文档编号】A61P37/04GK103610641SQ201310619292
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年11月29日 优先权日:2013年11月29日
【发明者】吴福文 申请人:绵阳高新区百诺吉生物科技有限公司