牛樟芝萃取物用于制备调节Th17细胞或治疗与Th17细胞调节相关之疾病的药物的用途
【专利摘要】本发明涉及牛樟芝萃取物用于制备调节Th17细胞或治疗与Th17细胞调节相关之疾病的药物的用途。本发明提供一种牛樟芝萃取物用于制备调节Th17细胞的药物的用途，其中该牛樟芝萃取物具有调节Th17细胞的功效。
【专利说明】牛樟芝萃取物用于制备调节Th17细胞或治疗与Th17细胞 调节相关之疾病的药物的用途
【技术领域】
[0001] 本发明系关于一种牛樟芝萃取物的用途，且特别关于一种牛樟芝萃取物用于制备 调节Thl7细胞的药物的用途。
【背景技术】
[0002] Thl7细胞是一群独特的⑶4+T细胞，起初被视为会产生IL-17及IL-17F的T细胞 (Harrington et al.，2〇〇5;Park et al.，2〇〇5;Langrish et al.，2〇〇5)。有别于Thl 与Th2 细胞，Thl7细胞的发展受TGF-β及其他发炎性细胞激素如IL-6、IL-21、IL-I β及IL-23 所调控（Bi and Yang，2012)。除了 IL-17A与IL-17F夕卜，Thl7细胞还可分泌其他指标性的 细胞激素如 IL-21、IL-22、IFN- γ、IL-4、IL-10、IL-9、IL-26、CXCL8 与 CCL20 等（Marwaha et al.，2012)，因而可作用于其他细胞如纤维母细胞、角质细胞、内皮细胞、嗜中性白血球 及记忆性 T 细胞等（Gaffen，2011;Ghoreschi et al.，2011;Wilke et al.，2011)。目前发 现Thl7细胞及其作用分子如IL-17、IL-21、IL-22、GM-CSF及CCL20等与自体免疫疾病及 发炎性疾病的病理发生有关，例如：全身性红斑性狼疮、干癣、类风湿性关节炎、多发性硬化 症、发炎性肠症、过敏、气喘等（Maddur et al.，2012)。
[0003] 牛樟芝（学名为 Antrodia cinnamomea, Antrodia camphorata 或 Taiwanofungus camphoratus)是传统的中草药，为台湾特有的真菌，仅寄生于牛樟树（Cinnamomum kanehirae Hayata(Lauraceae))之实木内或潮湿的表面上（Ao et al. 2009;Lu et al. 2009)。现今已将牛樟芝用于治疗肝炎、癌症、腹痛、腹泻、高血压或是护肝、解毒等用途 上，然而，目前仍不清楚牛樟芝是否具备调节Thl7细胞的功效。
【发明内容】
[0004] 本发明提供一种用于调节Thl7细胞的医药组合物，包括：牛樟芝萃取物为有效 成分，其中该牛樟芝萃取物具有调节Thl7细胞的功效。
[0005] 本发明还提供一种牛樟芝萃取物用于制备调节Thl7细胞的药物的用途，其中该 牛樟芝萃取物具有调节Thl7细胞的功效。
[0006] 本发明更提供一种牛樟芝萃取物用于制备治疗与Thl7细胞调节相关之疾病的药 物的用途，其中该牛樟芝萃取物具有抑制Thl7细胞分化的功效。
【专利附图】
【附图说明】
[0007] 图1显示牛樟芝萃取物ACFB03对Thl7细胞分化的影响，# :p〈0. 01，*** : p〈0. OOl0
[0008] 图2显示牛樟芝萃取物ACFB06对Thl7细胞分化的影响，* :ρ〈0· 05, # :ρ〈0· 01。
[0009] 图3显示牛樟芝萃取物ACFB12对Thl7细胞分化的影响，* :ρ〈0. 05。
[0010] 图4显示牛樟芝萃取物AC06-EA对Thl7细胞分化的影响，* :ρ〈0. 05。
[0011] 图5显示牛樟芝萃取物AC06-A对Thl7细胞分化的影响，# :p〈0. 01。
[0012] 图6显示牛樟芝萃取物ACFB12对全身性红斑性狼疮病人的Thl7细胞活性的影 响，*** :ρ〈〇· 001。
[0013] 图7显示牛樟芝萃取物ACFB12对葛瑞夫氏病（Graves' disease)人的Thl7细胞 活性的影响，:Ρ〈〇· 001。
[0014] 图8显示牛樟芝萃取物ACFB12对咪喹莫特诱发的干癣动物模式的Thl7细胞活性 的影响，*** :Ρ〈〇· 001。
【具体实施方式】
[0015] 在本发明一实施方式中，本发明可提供一种用于调节Thl7细胞的医药组合物。本 发明的用于调节Thl7细胞的医药组合物可包括牛樟芝萃取物为有效成分，但不限于此。
[0016] 于本发明用于调节Thl7细胞的医药组合物中，牛樟芝萃取物可具有调节Thl7细 胞的功效。上述调节Thl7细胞的功效可包括，例如，抑制或促进Thl7细胞分化、增生等，但 不限于此。在一实施例中，上述调节Thl7细胞的功效包括抑制Thl7细胞分化。
[0017] 又，于本发明用于调节Thl7细胞的医药组合物中，上述牛樟芝萃取物可包括牛樟 芝子实体的萃取物或牛樟芝菌丝体的萃取物。
[0018] 上述牛樟芝萃取物可通过对牛樟芝子实体或菌丝体进行萃取工艺而获得，但不限 于此。上述萃取工艺可使用至少一萃取溶剂。
[0019] 在一实施例中，上述牛樟芝萃取物为牛樟芝子实体的萃取物。于此实施例中，牛樟 芝子实体的萃取物可通过对牛樟芝子实体进行萃取工艺而获得，但不限于此。上述萃取工 艺可使用至少一萃取溶剂。
[0020] 而于此实施例中，上述至少一萃取溶剂可包括，但不限于，醇类及/或水等。上述 醇类的例子可包括甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等，但不限于此。在一实施例中，上述醇类为乙 醇，又上述乙醇可包括10-95%的乙醇水溶液，但不限于此。此外，在一特定实施例中，上述 乙醇可为25%、50%或95%的乙醇水溶液。
[0021] 再者，上述用以获得牛樟芝子实体的萃取物的萃取工艺可包括下列步骤，但不限 于此。
[0022] 首先，将牛樟芝子实体与上述至少一萃取溶剂形成混合物后再加热回流。在一实 施例中，加热回流之时间可为约〇. 5-8小时。在一特定实施例中，加热回流之时间可为约1 小时。
[0023] 然后，将上述混合物过滤以获得滤液与滤渣，其中所获得的滤液即为牛樟芝子实 体萃取物。
[0024] 在另一实施例中，上述牛樟芝萃取物为牛樟芝菌丝体的萃取物。于此实施例中，牛 樟芝菌丝体的萃取物可通过对牛樟芝菌丝体进行萃取工艺而获得，但不限于此。上述萃取 工艺可使用至少一萃取溶剂。
[0025] 又于此实施例中，上述至少一萃取溶剂可包括，但不限于，乙酸乙酯或丙酮等，但 不限于此。在一实施例中，至少一萃取溶剂为乙酸乙酯，而在另一实施例中，至少一萃取溶 剂为丙酮。
[0026] 此外，上述用以获得牛樟芝菌丝体的萃取物的萃取工艺可包括下列步骤，但不限 于此。
[0027] 首先，将牛樟芝菌丝体与上述至少一萃取溶剂形成混合物后再加热回流。在一实 施例中，加热回流之时间可为约〇. 5-8小时。在一特定实施例中，加热回流之时间可为约1 小时。
[0028] 然后，将上述混合物过滤以获得滤液与滤渣，其中所获得之滤液即为牛樟芝子菌 丝萃取物。
[0029] 另外，在一实施例中，上述本发明用于调节Thl7细胞的医药组合物可更包括药 学上可接受之载体或盐类。
[0030] 于本发明用于调节Thl7细胞的医药组成物中，上述药学上可接受之载体可包括， 但不限于溶剂、分散媒（dispersion medium)、套膜（coating)、抗菌与抗真菌试剂与一等渗 透压与吸收延迟（absorption delaying)试剂等与药学投予相容者。对于不同的给药方式， 可利用一般方法将药学组合物配制成剂型（dosage form)。
[0031] 又，上述药学上可接受之盐类可包括，但不限于盐类包括无机阳离子，例如，碱金 属盐类，如钠、钾或胺盐，碱土金族盐类，如镁、钙盐，含二价或四价阳离子之盐类，如锌、铝 或锆盐。此外，也可是为有机盐类，如二环己胺盐类、甲基-D-葡糖胺，胺基酸盐类，如精胺 酸、赖氨酸（lysine)、组氨酸、谷氨酰胺。
[0032] 本发明所制备出药物给药可以口服、非口服、经由吸入喷雾（inhalation spray) 或通过植入存器（implanted reservoir)的方式。非口服可包括皮下（subcutaneous)、 皮内（intracutaneous)、静脉内（intravenous)、肌肉内（intramuscular)、关节内 (intraarticular)、动脉（intraarterial)、滑囊（腔）内（intrasynovial)、胸骨内 (intrasternal)、蝴蛛膜下腔（intrathecal)、疾病部位内（intralesional)注射以及灌注 技术。
[0033] 口服成分的形式可包括，但不限定于，药锭、胶囊、乳剂（emulsions)、水性悬浮液 (aqueous suspensions)、分散液（dispersions)与溶液。
[0034] 再者，在一实施例中，本发明用于调节Thl7细胞的医药组合物系可用于与Thl7细 胞调节相关之疾病的治疗，但不限于此。上述与Thl7细胞调节相关之疾病的例子，可包括， 但不限于，全身性红斑性狼疮、葛瑞夫氏病、干癣、类风湿性关节炎、1型糖尿病、桥本氏甲状 腺炎、多发性硬化症、帕金森氏症、炎症性肠病、过敏性疾病、艾滋病、慢性阻塞性肺疾病、动 脉粥样硬化、心肌炎、扩张性心肌病变与癌症等。
[0035] 在另一实施例中，本发明用于调节Thl7细胞的医药组合物系可用于全身性红斑 性狼疮、葛瑞夫氏病或干癣的治疗。上述全身性红斑性狼疮可包括活动型全身性红斑性狼 疮（active systemic lupus erythematosus)，但不限于此。
[0036] 在本发明另一实施方式中，本发明可提供一种牛樟芝萃取物用于制备调节Thl7 细胞的药物的用途，其中上述牛樟芝萃取物可具有调节Thl7细胞的功效。上述调节Thl7 细胞的功效可包括，但不限于，抑制或促进Thl7细胞分化、增生等。在一实施例中，上述调 节Thl7细胞的功效包括抑制Thl7细胞分化。
[0037] 于本发明牛樟芝萃取物用于制备调节Thl7细胞的药物的用途中，牛樟芝萃取物 可包括牛樟芝子实体的萃取物或牛樟芝菌丝体的萃取物。
[0038] 上述牛樟芝萃取物可通过对牛樟芝子实体或菌丝体进行萃取工艺而获得，但不限 于此。上述萃取工艺可使用至少一萃取溶剂。
[0039] 在一实施例中，上述牛樟芝萃取物为牛樟芝子实体的萃取物。于此实施例中，牛樟 芝子实体的萃取物可通过对牛樟芝子实体进行萃取工艺而获得，但不限于此。上述萃取工 艺可使用至少一萃取溶剂。
[0040] 上述至少一萃取溶剂可包括，醇类及/或水等，但不限于此。适合之醇类可包括， 例如甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等，但不限于此。在一实施例中，醇类为乙醇，又乙醇可包括 10-95%的乙醇水溶液，但不限于此。此外，在一特定实施例中，上述乙醇可为25%、50%或95% 的乙醇水溶液。
[0041] 上述用以获得牛樟芝子实体的萃取物的萃取工艺可包括下列步骤，但不限于此。
[0042] 首先，将牛樟芝子实体与上述至少一萃取溶剂形成混合物后再加热回流。在一实 施例中，加热回流之时间可为约〇. 5-8小时。在一特定实施例中，加热回流之时间可为约1 小时。
[0043] 接着，将上述混合物过滤以获得滤液与滤渣，其中所获得之滤液即为牛樟芝子实 体萃取物。
[0044] 在另一实施例中，上述牛樟芝萃取物则为牛樟芝菌丝体的萃取物。于此实施例中， 牛樟芝菌丝体的萃取物可通过对牛樟芝菌丝体进行萃取工艺而获得，但不限于此。上述萃 取工艺可使用至少一萃取溶剂。
[0045] 又于此实施例中，上述至少一萃取溶剂可包括，但不限于，乙酸乙酯或丙酮等，但 不限于此。在一实施例中，至少一萃取溶剂为乙酸乙酯，而在另一实施例中，至少一萃取溶 剂为丙酮。
[0046] 此外，上述用以获得牛樟芝菌丝体的萃取物的萃取工艺可包括下列步骤，但不限 于此。
[0047] 首先，将牛樟芝菌丝体与上述至少一萃取溶剂形成混合物后再加热回流。在一实 施例中，加热回流之时间可为约〇. 5-8小时。在一特定实施例中，加热回流之时间可为约1 小时。
[0048] 然后，将上述混合物过滤以获得滤液与滤渣，其中所获得之滤液即为牛樟芝子菌 丝萃取物。
[0049] 又，在一实施例中，于本发明牛樟芝萃取物用于制备调节Thl7细胞的药物的用途 中，上述调节Thl7细胞的药物系可用于与Thl7细胞调节相关之疾病的治疗，但不限于此。
[0050] 与Thl7细胞调节相关之疾病可包括全身性红斑性狼疮、葛瑞夫氏病、干癣、类风 湿性关节炎、1型糖尿病、桥本氏甲状腺炎、多发性硬化症、帕金森氏症、炎症性肠病、过敏性 疾病、艾滋病、慢性阻塞性肺疾病、动脉粥样硬化、心肌炎、扩张性心肌病变或癌症等，但不 限于此。
[0051] 又，于本发明牛樟芝萃取物用于制备调节Thl7细胞的药物的用途中，上述调节 Thl7细胞的药物系可用于全身性红斑性狼疮、葛瑞夫氏病或干癣的治疗，但不限于此。上述 全身性红斑性狼疮可包括，例如活动型全身性红斑性狼疮。
[0052] 在本发明又另一实施方式中，本发明可提供一种牛樟芝萃取物用于制备治疗与 Thl7细胞调节相关之疾病的药物的用途，其中上述牛樟芝萃取物具有抑制Thl7细胞分化 的功效。在一实施例中，牛樟芝萃取物为前述之牛樟芝萃取物。
[0053] 与Thl7细胞调节相关之疾病的例子，可包括，限于全身性红斑性狼疮、葛瑞夫氏 病、干癣、类风湿性关节炎、1型糖尿病、桥本氏甲状腺炎、多发性硬化症、帕金森氏症、炎症 性肠病、过敏性疾病、艾滋病、慢性阻塞性肺疾病、动脉粥样硬化、心肌炎、扩张性心肌病变 与癌症等。
[0054] 在一实施例中，上述与Thl7细胞调节相关之疾病为全身性红斑性狼疮、葛瑞夫氏 病或干癣。又，上述全身性红斑性狼疮可包括，例如活动型全身性红斑性狼疮。
[0055] 实施例
[0056] 实施例1 :牛樟芝萃取物的制备
[0057] 1.牛樟芝子实体萃取物ACFB03的制备
[0058] ACFB03样品的制备方法描述如下：
[0059] (1)将IOg牛樟芝子实体粉体，加入IOOml的95%乙醇水溶液以形成混合物，且之 后将混合物加热回流1小时。
[0060] (2)将混合物利用离心方式去除于其中的杂质（6000rpm ;20分钟）以收集上清 液，之后以减压浓缩去除于上清液中的溶剂以获得干燥的萃取物。
[0061] (3)加入20ml纯水，且以超声波震荡，以回溶上述萃取物并形成悬浮液。
[0062] (4)将悬浮液进行冷冻干燥，以去除水分。
[0063] (5)收集冷冻干燥的样品共1.67g。代号ACFB03。
[0064] 2.牛樟芝子实体萃取物ACFB06的制备
[0065] ACFB06样品的制备方法描述如下：
[0066] (1)将IOg牛樟芝子实体粉体，加入IOOml的25%乙醇水溶液以形成混合物，且之 后将混合物加热回流1小时。
[0067] (2)将混合物利用离心方式去除于其中的杂质（6000rpm ;20分钟）以收集上清液， 之后以减压浓缩去除于上清液中的溶剂以获得干燥的萃取物。
[0068] (3)加入20ml纯水，且以超声波震荡，以回溶上述萃取物并形成悬浮液。
[0069] (4)将悬浮液进行冷冻干燥，以去除水分。
[0070] (5)收集冷冻干燥的样品共0.59g。代号ACFB06。
[0071] 3.牛樟芝子实体萃取物ACFB12的制备
[0072] ACFB12样品的制备方法描述如下：
[0073] (1)将80g牛樟芝子实体粉体，加入800ml的50%乙醇水溶液以形成混合物，且之 后将混合物加热回流1小时。
[0074] (2)趁热将混合物以滤纸（Toyo, NO. 2)减压过滤，以收集滤液并获得牛樟芝子实 体残留物(滤渣)。持续减压抽滤30分钟以抽干牛樟芝子实体残留物。
[0075] (3)回收上述牛樟芝子实体残留物，并将1600ml的纯水加入其中以形成混合物， 之后将混合物加热回流1小时。
[0076] (4)趁热将混合物以利用滤纸（Toyo, NO. 2)减压过滤，收集滤液。
[0077] (5)收集两次的滤液进行减压浓缩，先浓缩步骤2的滤液，且于浓缩步骤2的滤液 之步骤期间再合并步骤4所得滤液进行减压浓缩，浓缩至合适浓度后进行冷冻干燥，以去 除水分。
[0078] (6)收集冷冻干燥的样品共20. 34g。代号ACFB12。
[0079] 4.牛樟芝菌丝体萃取物AC06-EA (乙酸乙酯萃取物）的制备
[0080] AC06-EA样品的制备方法描述如下：
[0081] (1)将2g牛樟芝菌丝体，加入30ml的乙酸乙酯混合以形成混合物，且之后将混合 物加热回流1小时。
[0082] (2)将混合物利用离心方式去除混合物中的杂质（6000rpm ;10分钟)，再经滤纸 (Toyo, NO. 2)过滤以收集滤液，之后以减压浓缩去除于滤液中的溶剂以获得萃取物。
[0083] (3)收集萃取物样品共0· 32g。代号AC06-EA。
[0084] 5.牛樟芝菌丝体萃取物AC06-A (丙酮萃取物）的制备
[0085] AC06-A样品的制备方法描述如下：
[0086] (1)将2g牛樟芝菌丝体，加入30ml的丙酮混合以形成混合物，且之后将混合物加 热回流1小时。
[0087] (2)将混合物利用离心方式去除混合物中的杂质（6000rpm ;10分钟)，再经滤纸 (Toyo, NO. 2)过滤以收集滤液，之后以减压浓缩去除于滤液中的溶剂以获得萃取物。
[0088] (3)收集萃取物样品共0· 30g。代号AC06-A。
[0089] 实施例2 :牛樟芝子实体萃取物对于抑制Thl7细胞分化能力的评估
[0090] 于本实施例中，透过小鼠脾脏细胞建构的Thl7细胞分化系统，评估实施例1所 得的牛樟芝子实体萃取物（ACFB12、ACFB03、ACFB06)与牛樟芝菌丝体萃取物（AC06-EA与 AC06-A)对于Thl7细胞分化的影响。
[0091] L牛樟芝子实体萃取物ACFB03对于抑制Thl7细胞分化能力的评估将C57BL/6小 鼠（6?8周龄）的脾脏取出并利用筛网磨碎，收集细胞悬浮液即为初级脾脏细胞。接着利 用 IMag magnetic system(BD Pharmingen, San Jose, CA)分离出 CD4+T 细胞，取将细胞以 5 X IO5细胞/孔的密度加入24孔细胞培养盘中，并将细胞分成控制组、负对照组、实验组A、 实验组B、实验组C五组，而各组的详细处理如表1所示。
[0092] 表1、各组别的详细处理
【权利要求】
1. 一种牛樟芝萃取物用于制备调节Thl7细胞的药物的用途，其中该牛樟芝萃取物具 有调节Thl7细胞的功效。
2. 如权利要求1所述的牛樟芝萃取物用于制备调节Thl7细胞的药物的用途，其中该调 节Thl7细胞的功效包括抑制Thl7细胞分化。
3. 如权利要求1所述的牛樟芝萃取物用于制备调节Thl7细胞的药物的用途，其中该牛 樟芝萃取物包括牛樟芝子实体的萃取物或牛樟芝菌丝体的萃取物。
4. 如权利要求3所述的牛樟芝萃取物用于制备调节Thl7细胞的药物的用途，其中该萃 取物为以水、醇类、酯类、烷类或卤烷溶剂萃取而得。
5. 如权利要求4所述的牛樟芝萃取物用于制备调节Thl7细胞的药物的用途，其中该醇 类包括甲醇、乙醇、异丙醇或丁醇。
6. 如权利要求5所述的牛樟芝萃取物用于制备调节Thl7细胞的药物的用途，其中该乙 醇包括10-95%的乙醇水溶液。
7. -种牛樟芝萃取物用于制备治疗与Thl7细胞调节相关之疾病的药物的用途，其中 该牛樟芝萃取物具有抑制Thl7细胞分化的功效。
8. 如权利要求7所述的牛樟芝萃取物用于制备治疗与Thl7细胞调节相关之疾病的药 物的用途，其中该牛樟芝萃取物包括牛樟芝子实体的萃取物或牛樟芝菌丝体的萃取物。
9. 如权利要求7所述的用于制备治疗与Thl7细胞调节相关之疾病的药物的用途，其 中与Thl7细胞调节相关之疾病包括全身性红斑性狼疮、葛瑞夫氏病、类风湿性关节炎、干 癣、1型糖尿病、桥本氏甲状腺炎、多发性硬化症、帕金森氏症、炎症性肠病、过敏性疾病、艾 滋病、慢性阻塞性肺疾病、动脉粥样硬化、心肌炎、扩张性心肌病变或癌症。
10. 如权利要求7所述的用于制备治疗与Thl7细胞调节相关之疾病的药物的用途，其 中与Thl7细胞调节相关之疾病为全身性红斑性狼疮、葛瑞夫氏病或干癣。
【文档编号】A61P37/02GK104367600SQ201410104445
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年3月20日 优先权日:2013年8月13日
【发明者】潘一红, 温淑芳, 李明翰, 姚心然, 吴信颉, 吕亦晃, 蓝忠亮, 陈得源, 林季千, 吕菁 申请人:财团法人工业技术研究院