水包油型复方安普霉素纳米乳的制作方法
【专利摘要】水包油型复方安普霉素纳米乳，属于医药【技术领域】，其重量百分比组成为：安普霉素1%～18%、大黄提取物1%～20%、表面活性剂15%～40%、助表面活性剂1%～25%、油1%～20%、蒸馏水20%～80%。本发明的复方安普霉素抑菌纳米乳的乳液粒径分布较窄，体系透明、稳定性好，有较低的表面张力，具有很好的流动性，服用方便。而大黄提取物与安普霉素复合，抑菌效果更佳，制成纳米乳，更容易被机体吸收，可减少药物的用量和使用次数。
【专利说明】水包油型复方安普霉素纳米乳
【技术领域】
[0001]本发明属于医药【技术领域】，具体涉及一种新型抑菌药物一水包油型复方安普霉素纳米乳。
【背景技术】
[0002]安普霉素又名阿普拉霉素，是一种由黑暗链霉菌产生的氨基糖苷类新兽用抗生素。安普霉素于20世纪80年代由美国开发成功，对革兰氏阴性菌特别是对其他抗生素耐药的大肠杆菌和沙门氏杆菌等致病菌有相当强的抗菌作用，对革兰氏阳性菌(某些链球菌)、密螺旋体和某些支原体也有较好的抗菌作用。安普霉素的特点是抗菌谱广、不易产生抗药性，可用于鸡大肠杆菌、沙门氏杆菌和支原体引起的感染。作为药物型饲料添加剂，安普霉素能明显促进增重和提高饲料转化率，在畜禽养殖领域具有广泛应用。安普霉素肌注吸收迅速，但内服给药吸收差。
[0003]除现有制剂类型不理想外，单独使用安普霉素作用效果单一，不能获得更为理想的疗效。因此，研究更具优势的复方制剂非常必要。
【发明内容】
[0004]基于现有技术中存在的缺陷与不足，本发明的目的旨在提供一种水包油型复方安普霉素纳米乳。
[0005]为实现上述目的 ，本发明采取了如下技术方案:一种水包油型复方安普霉素纳米乳，其重量百分比组成为:安普霉素1%~18%、大黄提取物1%~20%、表面活性剂15%~40%、助表面活性剂1%~25%、油1%~20%、蒸馏水20%~80%。
[0006]作为优选方案，所述纳米乳的重量百分比组成为:安普霉素1%~14%、大黄提取物1%~10%、表面活性剂15%~30%、助表面活性剂1%~10%、油5%~20%、蒸馏水25%~65%。
[0007]作为更优选的方案，所述纳米乳的重量百分比组成为:安普霉素7.6%、大黄提取物6.3%、表面活性剂24%、助表面活性剂4%、油13%，其余为水。
[0008]所述油选自大豆油、肉桂醛、甲酸乙酯、油酸乙酯、脂肪酸甘油脂、蓖麻油、菜籽油、亚油酸、丁酸乙酯、肉豆蘧酸异丙酯、乙酸乙酯和油酸。
[0009]所述表面活性剂为聚氧乙烯40氢化蓖麻油(RH-40)、蓖麻油聚氧乙烯(40)醚(EL-40)、吐温80或泊洛沙姆188中的任意一种或与span80的混合物。这些表面活性剂对人体低毒、无刺激，安全性高。
[0010]所述助表面活性剂选自乙醇、1，2-丙二醇、聚乙二醇400和丙三醇。助表面活性剂除具有助溶作用外，其作用主要还是为了调整表面活性剂的亲水亲油平衡值(HLB)，使得油水界面张力进一步降低，增大界膜的油水性和刚性。助表面活性剂掺入到界面膜中，能够促进形成曲率半径很小的膜，扩大纳米乳的乳区面积。
[0011]本发明的纳米乳可通过以下步骤制备:取安普霉素、表面活性剂和助表面活性剂搅拌均匀，然后滴入大黄提取物的水溶液；初期滴加大黄提取物水溶液时体系会变粘稠，随着大黄水溶液的逐渐增加，体系黏稠度增大；当大黄提取物水溶液的量增大到一定程度后，体系由油包水变为水包油型，其黏度会突然转稀，即得到无色透明的水包油型复方安普霉素纳米乳，其乳液粒径介于22.2~60.1nm之间，平均粒径为39.2nm。本发明制得的纳米乳可制成口服液直接口服，也可进一步包封在胶囊中或制成冻干粉。
[0012]上方中，大黄提取物由中药大黄经煎煮、渗漉、回流、蒸馏、沉淀、静置、过滤、浓缩、干燥等步骤提取而来，为棕色或深棕色粉末。大黄，寥科植物掌叶大黄(Rheum palmatumL.)、唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim, ex Balf.)或药用大黄(Rheum officinaleBaill.)的干燥根及根茎。大黄味苦，性寒，归脾、胃、大肠、肝、心包经，能泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经，可用于治疗实热便秘、积滞腹痛、泻痢不爽、湿热黄疸、血热吐衄、目赤、咽肿、肠痈腹痛、痈肿疔疮、瘀血经闭、跌打损伤等,外治水火烫伤、上消化道出血。酒大黄善清上焦血分热毒，用治目赤咽肿、齿龈肿痛；熟大黄泻下力缓、泻火解毒，用于火毒疮疡；大黄炭凉血化瘀止血，用于血热有瘀出血者。将大黄提取物与安普霉素复配，能够进一步提高安普霉素的抑菌能力，增强其抑菌稳定性。
[0013]纳米乳(nanoemuls1n)又称微乳(microemuls1n),是由水、油、表面活性剂和助表面活性剂等自发形成的透明或半透明的均相分散体系。一般来说，纳米乳分为三种类型，即水包油型纳米乳(0/W)、油包水型纳米乳(W/0)以及双连续型纳米乳(B.C)。纳米乳具有许多其它制剂无可比拟的优点:①为各向同性的透明液体，属热力学稳定系统，经热压灭菌或离心也不能使之分层；②工艺简单，制备过程不需特殊设备，可自发形成，纳米乳粒径一般为I~10nm 黏度低，可减少注射时的疼痛具有缓释和靶向作用；⑤提高药物的溶解度，减少药物在体内的酶解，可形成对药物的保护作用并提高胃肠道对药物的吸收，提高药物的生物利用度。 [0014]与现有技术相比，本发明提供的复方安普霉素纳米乳具有以下优点:
(I)本发明的复方安普霉素抑菌纳米乳的乳液粒径分布较窄，体系透明、稳定性好，有较低的表面张力，具有很好的流动性，服用方便。
[0015](2)大黄提取物与安普霉素复合，抑菌效果更佳。
[0016](3) 口服给药后能够克服首过效应，促进药物的胃肠道吸收，使大黄提取物与安普霉素能迅速被网状内皮细胞吞噬，可使药物迅速起效，并维持恒定的血药浓度及药理效应，提高药物的生物利用度，增强药效、减少药物的用量和使用次数，疗效更佳、药效更为稳定。
[0017](4)纳米乳的制备方法非常简单，耗能低，促使药品更易于推广。
[0018](5)制剂可作为口服液口服，也可利用胶囊包封或经冻干粉技术冻干成粉，应用方式灵活丰富。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1是实施例1中水包油型复方安普霉素纳米乳的透射电镜照片；
图2是实施例1中水包油型复方安普霉素纳米乳的粒径分布图。
【具体实施方式】
[0020]下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
[0021]实施例1一种水包油型复方安普霉素纳米乳，其重量百分比组成为:安普霉素7.6%、大黄提取物6.3%、EL-40(表面活性剂)24%、乙醇(助表面活性剂)4%、乙酸乙酯(油)13%、蒸馏水45.1%。
[0022]称取6.3g大黄提取物溶解于45.1g蒸馏水中；称取安普霉素7.6g、EL_40 24g、乙醇4g在室温(25 0C )条件下搅拌均匀，然后缓慢滴入溶解有大黄提取物的蒸馏水。随着蒸馏水量的增加，体系黏度增大；当加入蒸馏水的量使体系由油包水变为水包油油型纳米乳时，体系粘稠度从最粘稠的状态变稀，此时产生的即是无色透明的复方安普霉素纳米乳。
[0023]实施例2
一种水包油型复方安普霉素纳米乳，其重量百分比组成为:安普霉素5.3%、大黄提取物9.5%、EL-40 (表面活性剂)25%、1，2-丙二醇(助表面活性剂)15%、油酸乙酯(油)14%、蒸馏水31.2% ο
[0024]其制备方法参照实施例1。
[0025]实施例3
一种水包油型复方安普霉素纳米乳，其重量百分比组成为:安普霉素1.2%、大黄提取物4.3%、RH-40 (表面活性剂)30%、丙三醇(助表面活性剂)15%、肉豆蘧酸异丙酯(油)19%、蒸懼水30.5%。
[0026]其制备方法参照实施例1。
[0027]实施例4
一种水包油型复方安普霉素纳米乳，其重量百分比组成为:安普霉素5.1%、大黄提取物9.7%、RH-40 (表面活性剂)30%、乙醇(助表面活性剂)5%、大豆油(油)17%、蒸馏水33.2%。
[0028]其制备方法参照实施例1。
[0029]实施例5
一种水包油型复方安普霉素纳米乳，其重量百分比组成为:安普霉素3.9%、大黄提取物8.4%、吐温80 (表面活性剂)28%、丙三醇(助表面活性剂)13%、菜籽油(油)12%、蒸馏水34.7%。
[0030]其制备方法参照实施例1。
[0031]实施例6
一种水包油型复方安普霉素纳米乳，其重量百分比组成为:安普霉素4.2%、大黄提取物10.1%、吐温80 (表面活性剂)28%、PEG-400 (助表面活性剂)4%、油酸(油)12.5%、蒸馏水41.2%。
[0032]其制备方法参照实施例1。
[0033]实施例7
一种水包油型复方安普霉素纳米乳，其重量百分比组成为:安普霉素1%、大黄提取物20%、RH-40 (表面活性剂)15%、丙三醇(助表面活性剂)1%、肉豆蘧酸异丙酯(油)1%、蒸馏水62%。
[0034]其制备方法参照实施例1。
[0035]实施例8 一种水包油型复方安普霉素纳米乳，其重量百分比组成为:安普霉素18%、大黄提取物1%、RH-40 (表面活性剂)20%、I, 2-丙二醇(助表面活性剂)8%、乙酸乙酯(油)20%、蒸馏水33%。[0036]其制备方法参照实施例1。
[0037]实施例9
一种水包油型复方安普霉素纳米乳，其重量百分比组成为:安普霉素4.5%、大黄提取物2.5%、EL-40 (表面活性剂)40%、乙醇(助表面活性剂)25%、大豆油(油)8%、蒸馏水20%。
[0038]其制备方法参照实施例1。
[0039]实施例10
一种水包油型复方安普霉素纳米乳，其重量百分比组成为:安普霉素1%、大黄提取物1%、泊洛沙姆188 (表面活性剂)10%、span80 (表面活性剂)5%、丙三醇(助表面活性剂)1%、肉桂醛(油)2%、蒸馏水80%。
[0040]其制备方法参照实施例1。
[0041]实施例11试验例 (一)粒径分析
在透射电子显微镜下对实施例1-10的纳米乳产品进行观察，发现液滴呈类球形，分散性好，无粘连。图1是实施例1水包油型复方安普霉素纳米乳的透射电镜照片。对实施例1的纳米乳利用马尔文粒度分析仪进行检测，检测结果如图2所示，从图中可以看出，乳液粒径分布在22.2~60.1nm之间，平均粒径为39.2nm。 [0042](二)稳定性分析
取实施例1-10的纳米乳产品分别进行高速离心试验、光稳定性试验、温度稳定性试验等，观察本发明的复方安普霉素纳米乳的稳定性，确认是否有分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象出现。
[0043](三)高速离心试验
取样品装入离心管中，以15000 r/min的转速离心10 min。离心后对样品进行观察,发现各实施例样品在离心后依然能够保持离心前的澄清透明状态，未出现分层、浑浊或晶体析出等现象。
[0044](四)光稳定性试验
取各实施例样品装入无色透明的小玻璃瓶中，密封，放置于正常光照条件下10d，分别于ld、2d、4d、6d、8d、10d取样观察。结果表明，在1d观察期内，各实施例样品均保持澄清透明状态，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。
[0045](五)温度稳定性试验
取各实施例样品，每各实施例分三份，装入无色透明的玻璃瓶中，密封。将各分样品分别放置于4°C、室温(25°C)和40°C环境中留样考察30d，每隔5d取样观察。结果表明，在30d观察期内，实施例1-10的复方安普霉素纳米乳在三种温度条件下均保持澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。
[0046](六)长期稳定性试验
将3批纳米乳密封于棕色玻璃瓶内，置于(25±2)°C、相对湿度(60±5)%条件下12个月，分别于0、3、6、9和12个月时取样，考察纳米乳的性状及含量变化，并参考文献统计分析方法，计算复方安普霉素纳米乳抑菌药物的有效期。试验结果表明在长期试验条件下，复方安普霉素纳米乳抑菌药物的外观一直保持澄明、均一，未见分层、色变、絮凝和破乳等现象；体系中的安普霉素和大黄提取物含量随时间延长而逐渐降低，其含量一时间变化曲线提供的线性回归方程，计算出复方安普霉素纳米乳抑菌药物的有效期为37.22个月(以时间短者为标准)。
[0047](七)毒性试验
以市售安普霉素片剂为对比药剂，按照新药非临床安全性评价方法进行急性毒性试验:重复给药毒性试验、遗传毒性试验(包括Ames试验、小鼠骨髓微核试验、体外培养哺乳动物细胞染色体突变试验)、生殖毒性试验(一般生殖毒性试验、致畸敏感期毒性试验、围产期毒性试验)、致癌试验、免疫毒性试验和局部刺激性试验，试验结果如下:
本品对小鼠急性毒性实验结论:与市售安普霉素片剂对比，复方安普霉素纳米乳未出现计量内不良反应及死亡。
[0048]本发明产品的Ames试验、小鼠精子畸形试验和 睾丸染色体畸变试验等遗传毒性试验的结果均为阴性。
[0049]大鼠30d喂养本发明产品的结果表明:与市售安普霉素片剂对比，在试验期内，复方安普霉素纳米乳计量内各实验组动物生长发育良好，体重、摄食量、血常规、血生化、脏器系数等指标均在正常范围内，病理组织学检查亦未见异常。
[0050]本品长期毒性实验结论:与市售安普霉素片剂对比，在试验期内，复方安普霉素纳米乳计量内，本药品在连续灌胃给药三个月未见大鼠不良反应，各项检查指标均在正常范围内，病理检查其主要脏器及靶器官均未见该药引起的中毒性病理改变。
【权利要求】
1.一种水包油型复方安普霉素纳米乳，其特征在于，所述纳米乳的重量百分比组成为:安普霉素1%~18%、大黄提取物1%~20%、表面活性剂15%~40%、助表面活性剂1%~25%、油1%~20%、蒸馏水20%~80%。
2.如权利要求1所述的水包油型复方安普霉素纳米乳，其特征在于，所述纳米乳的重量百分比组成为:安普霉素1%~14%、大黄提取物1%~10%、表面活性剂15%~30%、助表面活性剂1%~10%、油5%~20%、蒸馏水25%~65%。
3.如权利要求2所述的水包油型复方安普霉素纳米乳，其特征在于，所述纳米乳的重量百分比组成为:安普霉素7.6%、大黄提取物6.3%、表面活性剂24%、助表面活性剂4%、油13%，其余为水。
4.如权利要求3所述的水包油型复方安普霉素纳米乳，其特征在于，所述油选自大豆油、肉桂醛、甲酸乙酯、油酸乙酯、脂肪酸甘油脂、蓖麻油、菜籽油、亚油酸、丁酸乙酯、肉豆蘧酸异丙酯、乙酸乙酯和油酸。
5.如权利要求1-4任一所述的水包油型复方安普霉素纳米乳，其特征在于，所述表面活性剂为聚氧乙烯40氢化蓖麻油、蓖麻油聚氧乙烯(40)醚、吐温80或泊洛沙姆188中的任意一种或与span80的混合物。
6.如权利要求5所述的水包油型复方安普霉素纳米乳，其特征在于，所述助表面活性剂选自乙醇、1，2-丙二醇、聚乙二醇400和丙三醇。
【文档编号】A61P31/04GK104027408SQ201410202582
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年5月14日 优先权日:2014年5月14日
【发明者】孙江宏, 王胜乐, 管倩 申请人:河南牧翔动物药业有限公司