一种抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体及其应用；一种产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO：C201326。本发明制备的抗人FcεRⅠα单克隆抗体可与人IgE高亲和力受体FcεRⅠα结合，可应用于检测细胞表面FcεRⅠα的表达，该单克隆抗体对于与肥大细胞和嗜碱性粒细胞相关性疾病如变应性皮炎、皮肌炎、银屑病等的预防和治疗有重要意义，有较大的临床应用价值。本发明提供的杂交瘤细胞株长势良好，胞体大小均一，浑亮，透亮，分裂旺盛，有无限分裂的增生能力。
CCTCC NO:C201326
2013.03.11
【专利说明】—种抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物工程领域，特别涉及一种抗人Fe SR I α亚基单克隆抗体及其应用，以及分泌所述抗人Fe SR I α亚基单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
【背景技术】
[0002]IgE(免疫球蛋白Ε)受体是过敏反应的重要介导物。肥大细胞和嗜碱性粒细胞是I型变态反应性疾病和一些肥大细胞相关性疾病如变应性皮炎、皮肌炎、银屑病等的主要效应细胞。过敏原与其特异性IgE结合形成的复合物与肥大细胞和嗜碱性粒细胞等细胞表面IgE受体结合后使IgE受体发生微聚集，触发信号传导，包括蛋白激酶激活、磷脂酰肌醇水解和Ca2+流动等，引起细胞介质和细胞因子合成、黏附分子表达增加和细胞伸展、膜皱折形成最终导致细胞脱颗粒，释放血管活性物质及某些酶类引起平滑肌收缩、黏液分泌、血压降低和组织损伤。IgE受体有高、低亲和力两种，Fe ε R I (IgE高亲和力受体)是其高亲和力受体，主要分布于肥大细胞和嗜碱粒细胞，嗜酸性粒细胞表面也有少量表达。α亚单位是Fee R I与IgE的结合部位。因此，抗Fe ε R I α亚基抗体是一种重要的抗体，其对研究Fe ε R I表达与疾病的关系、探索经Fe ε R I介导的肥大细胞活化或抑制机制、研究IgE及其抗体或拮抗剂、Fe ε R I及其抗体或拮抗剂等方面有极大的作用。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题就是针对现有的抗人Fe SR I α亚基单克隆抗体特异性不强、免疫效果不佳的问题，提供一种特异性强，可大量生产的抗人Fe eR I α亚基单克隆抗体及其应用，以及一种分泌该抗人Fe eR I α亚基单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之一是:一种杂交瘤细胞株，所述细胞株保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C201326。
[0005]本发明还提供如上所述的杂交瘤细胞株的子代细胞。该杂交瘤细胞长势良好，大小均一，浑亮，透亮，分裂旺盛，有无限分裂的增生能力。
[0006]本发明还提供上述杂交瘤细胞株在制备抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体中的应用。所述应用为本领域常规的应用，较佳地为利用所述杂交瘤细胞株分泌或制备抗人Fe ε RI α亚基单克隆抗体。
[0007]为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之二是:一种抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体，该单克隆抗体由上述杂交瘤细胞株分泌产生。
[0008]为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之三为:一种如上所述抗人Fe ε R
Iα亚基单克隆抗体的制备方法，所述制备方法包括以下步骤:
[0009](I)体外培养本发明所述杂交瘤细胞株得到培养液；
[0010](2)将步骤(I)所得培养液离心，收集上清纯化即得抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体。
[0011]其中步骤(I)所述的体外培养为本领域常规的体外培养技术，所述培养的温度优选地为37°C，培养的时间优选地为24小时，其中步骤(2)所述离心的速度优选地为3000rpm，离心的时间优选地为5分钟。收集上清液，即得纯化的小鼠抗人Fe eR I α亚基单克隆抗体。其中所述的纯化技术为本领域常规的纯化技术，较佳地为利用市售可得的单克隆抗体纯化试剂盒进行纯化处理。
[0012]本发明还公开了一种人Fe eR I α亚基单克隆抗体的制备方法，该制备方法包括以下步骤:
[0013](I)用人Fee Rla亚基重组蛋白免疫小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，脾细胞与骨髓细胞的细胞数量融合比例为5:1?10:1筛选出对人Fe SR I α亚基有反应性的杂交瘤细胞；
[0014](2)将所得杂交瘤细胞进行体外传代培养和扩大培养后，从杂交瘤细胞上清液或从注射杂交瘤细胞后的动物腹水内获取抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体。
[0015]其中步骤(I)所述免疫小鼠的脾细胞与骨髓细胞融合的比例为本领域常规的融合比例，所述脾细胞与骨髓细胞的融合比例更佳地为:8:1?10:1，优选地为10:1。其中所述骨髓细胞为本领域常规的骨髓细胞，骨髓细胞较佳地为SP2/0细胞。
[0016]其中步骤(2)所述的体外传代培养为本领域常规的体外传代培养技术，所述体外传代培养的时间较佳地为六个月以上。其中所述抗人Fe eR I a亚基单克隆抗体的获取方法为本领域常规的获取方法，所述方法较佳地包括:取8周龄左右BALB/c小鼠，腹腔注射
0.3?0.5ml石蜡油，2周后腹腔注射I X 16个步骤(I)得到的杂交瘤细胞，注射7?10天后取2?3ml腹水，3000rpm离心3 min，收集上清液，即得纯化的小鼠抗人Fe ε R I a亚基单克隆抗体。
[0017]本发明制备所得抗人Fe eR I a亚基单克隆抗体能够特异性地与人Fe eR Ia亚基相结合，因此该单克隆抗体可用于制备Fe eR I a亚基表达的检测试剂，定性或定量检测细胞中人Fe SR I a亚基的表达。
[0018]为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之四是:一种细胞人Fe ε R I a亚基表达的检测方法，该检测方法包括以下步骤:
[0019](I)将本发明所述抗人Fe SR I a亚基单克隆抗体与待检测的分离的细胞或该细胞的裂解液进行接触；
[0020](2)通过免疫荧光分析方法、流式细胞术分析方法、免疫印迹分析方法、ELISA分析方法、免疫组织化学分析方法或免疫沉淀分析方法来判断是否有阳性反应。
[0021]其中步骤(I)所述的细胞为本领域常规使用的细胞。所述细胞较佳地为真核细胞或原核细胞，更佳地为哺乳动物细胞，优选地为来源于人、小鼠或猴的细胞。
[0022]其中步骤(2)所述免疫荧光分析方法为本领域常规的免疫荧光分析方法，其中所述的细胞培养板为本领域常规的细胞培养板，较佳地为96孔细胞培养板。其中所述离心的速度较佳地为1000 rpm，离心的时间较佳地为5min ;所述细胞的浓度较佳地为5 X 16个/ml ;接种于96孔细胞培养板，每孔细胞的接种量较佳地为100 μ I ;每孔中抗人Fe ε R Iα亚基单克隆抗体的加入量较佳地为100?150 μ g，温浴的温度较佳地为20?30°C，温浴的时间较佳地为8?12小时，洗涤后弃上清，每孔加入荧光标记的抗鼠IgG抗体进行温浴，所述抗体优选地为羊抗鼠IgG(H+L)荧光抗体，温浴时间较佳地为30分钟，温浴的温度较佳地为室温，所述室温通常是指20?30°C，荧光显微镜观察结果。
[0023]其中步骤(2)所述流式细胞术分析方法为本领域常规的流式细胞术分析方法，其中所述离心的速度较佳地为1000 rpm，离心的时间为5 min ;所述细胞的浓度较佳地为
2X 15个/ml ;细胞中抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体的加入量较佳地为100?150 μ g，温浴的温度较佳地为4°C，温浴的时间为45分钟，洗涤后弃上清，加入荧光标记的抗鼠IgG抗体进行温浴，所述抗体优选地为羊抗鼠IgG (H+L)-PE荧光抗体，温浴的温度较佳地为4°C，温浴的时间为45分钟，洗涤后弃上清，上机检测。
[0024]为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之五是:如上所述的抗人Fe ε R Iα亚基单克隆抗体在制备抗变应性皮炎、皮肌炎或银屑病药物中的用途。
[0025]本发明所述的药物为一种组合物，所述组合物至少包括一种活性成分:即本发明所述单克隆抗体和一种药用载体。在该药物组合物中，本发明所述单克隆抗体可以单独或和其他化合物一起作为活性成分，其中所述的“活性成分”是指具有预防或治疗变应性皮炎、皮肌炎或银屑病的功能。所述的药用载体包括药学上可接受的赋形剂、填充剂、稀释剂坐寸ο
[0026]在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
[0027]本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0028]本发明的积极进步效果在于:本发明制备的抗人Fe ε R I α单克隆抗体可与人IgE高亲和力受体Fe ε R I α结合，可应用于检测细胞表面人Fe ε R I α的表达，该单克隆抗体对于与肥大细胞和嗜碱性粒细胞相关性疾病如变应性皮炎、皮肌炎、银屑病等的防治有重要意义，有极高的基础研究价值和临床应用价值。本发明提供的杂交瘤细胞株长势良好，胞体大小均一，浑亮透亮，分裂旺盛，有无限分裂的增生能力。
[0029]牛物材料的保藏
[0030]本发明提供的杂交瘤细胞株已于2013年3月11日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址:中国.武汉.武汉大学邮编:430072，该培养物名称为杂交瘤细胞Β5Β4，该杂交瘤细胞的保藏编号为CCTCC NO:C201326。
【专利附图】
【附图说明】
[0031]图1流式细胞术筛选杂交瘤细胞株阳性克隆图。
[0032]图2 Western blot鉴定抗人Fee R I α亚基单克隆抗体结果图。
[0033]图3抗人Fe eR I α亚基单克隆抗体检测扁桃体组织中肥大细胞结果图。
【具体实施方式】
[0034]下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。实施例中所述的“室温”是指进行试验的操作间的温度，一般为20?40°C。
[0035]实施例中所用的仪器及试剂来源如下所述:
[0036]流式细胞仪购自Beckman公司，突光显微镜购自Olympus公司；
[0037]人Fe SR I α亚基重组蛋白购自湖南远泰公司；
[0038]弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂购自Sigma公司；
[0039]DMEM、胎牛血清、HAT培养基和HT培养基购自Gibco公司；
[0040]FITC标记的羊抗鼠IgG(H+L)荧光抗体、羊抗鼠IgG(H+L) -PE荧光抗体、HRP标记的羊抗小鼠IgG抗体、二甲基亚枫、聚乙二醇和牛血清白蛋白购自Sigma公司；
[0041]小鼠骨髓瘤细胞SP2/0购自中科院细胞所；
[0042]DAB显色液和磷酸盐缓冲液购自碧云天公司；
[0043]苏木素染液购自BASO公司，NAb Protein G Spin Kit购自Pierce公司。
[0044]实施例1抗人Fe eR I α亚基的单克隆抗体以及分泌该抗体的杂交瘤细胞株Β5Β4的制备
[0045]1.动物免疫
[0046]用人FceR I α亚基重组蛋白免疫6周龄体重18_20g Balb/c雌性小鼠(购买自湖南斯莱克景达实验动物有限公司):取0.5ml人Fe eR I α亚基重组蛋白(该重组蛋白的浓度为0.lyg/ml)与等体积弗氏完全佐剂混合充分乳化后，经背腹部皮下多点注射0.5ml每只，间隔3周，取0.5ml人Fe ε R I α亚基重组蛋白(该重组蛋白的浓度为
0.1 μ g/ml)加等体积弗氏不完全佐剂混合充分乳化后，第二次腹腔注射0.5 ml每只。间隔2周后进行第三次免疫，间隔2周后进行第四次免疫，间隔3周后进行第五次免疫，间隔3周后进行第六次免疫，方法皆同第二次，在细胞融合前3天,取人Fe ε R I α亚基重组蛋白50 Ug腹腔注射，做最后免疫。
[0047]2.细胞融合
[0048]取上述免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)按数量比10:1的比例，在无血清的DMEM(Gibco)培养基中混匀，1500 rpm离心8 min，去除培养基，加入0.7ml体积百分比为50%的PEG (购买自Sigma)作为融合剂，在37°C水浴下使其融合2 min，用无血清的DMEM培养基终止融合后1000 rpm离心5 min，沉淀用HAT培养基悬浮，分装到96孔含有饲养细胞的细胞板中，每孔添加量为200μ 1，37°C，5% CO2的细胞培养箱中培养。
[0049]3.杂交瘤细胞阳性孔筛选及其克隆
[0050]细胞培养箱中培养7天后，用HAT培养液进行半量换液，2周后用HT培养液换液，3周后可换为同量的DMEM培养液，待融合细胞覆盖孔底面积25%?50%时，采用常规ELISA方法筛选阳性孔，选择强阳性反应的细胞孔，进行有限稀释法克隆化培养，获得分泌抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体的杂交瘤细胞株Β5Β4。经6个月体外传代及30?50次反复冻存复苏后细胞株均能良好生长，并稳定分泌抗体。杂交瘤细胞株经扩大培养后用于腹水制备和液氮保存。将所得杂交瘤细胞株Β5Β4提交到中国典型培养物保藏中心进行保藏(保藏地址:中国.武汉.武汉大学邮编:430072)，其保藏编号为CCTCC NO:C201326。
[0051]4.单克隆抗体腹水制备及纯化
[0052]取8周龄左右BALB/c小鼠，腹腔注射0.5ml石蜡油，2周后腹腔注射I X 16个分泌抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体的Β5Β4细胞(上述步骤3制备所得)，注射7天后可见小鼠腹部明显膨大，采小鼠腹水，3000 rpm离心3 min，收集上清液，即为抗人Fe ε R Iα亚基单克隆抗体(将所得抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体命名为:MAb_B5B4)，用NAbProtein G Spin Kit (购买自pierce)纯化后_70°C保存,利用ELISA法测定所得抗体的效价。所得Fe ε R I α亚基单克隆抗体的滴度为1:106，其浓度为0.72mg/ml。
[0053]利用ELISA法测定所得抗体的效价，该效价检测方法为:将人Fe ε Rl α亚基重组蛋白用抗原包被液(碳酸盐缓冲液50 mmol/L,pH 9.6)稀释至终浓度5 μ g/ml，每孔100 μ I包被96孔酶标板，4°C过夜。吸去过量的包被抗原，加人用PBS稀释的5%脱脂奶粉，37°C封闭30min ;将纯化的MAb-B5B4抗体用PBST溶液(其中吐温_20的百分比含量为0.1%)按体积比分别为 1:400，1:800，1:1600.1:3200，1:6400，1:12800 进行稀释，以每孔 100 μ I 加人酶标板中；37°C孵温Ih ;用PBST溶液洗去过量的一抗(此处的一抗为MAb—B5B4抗体)，加人1:1000 (体积比)稀释的HRP标记羊抗小鼠IgG抗体，每孔100 μ I，37°C孵温I h ；TMB显色，450 nm测定吸光度值，表示抗原抗体反应的强弱，ELISA检测结果表明所得MAb—B5B4抗体的滴度高达1:12000。
[0054]实施例2杂交瘤细胞株B5B4分泌的抗人Fe SR I α亚基单克隆抗体的鉴定
[0055]1.流式细胞术筛选杂交瘤细胞株阳性克隆
[0056]取对数生长期的CH03D10细胞(中国仓鼠卵巢细胞，长征医院检验科赠予)，磷酸盐缓冲液(PBS)洗漆，1000 rpm/min,离心5 min ;弃上清液，I %牛血清白蛋白-磷酸盐缓冲液(BSA-PBS，所述百分比为质量百分比)调整细胞浓度为2X 15个/ml ;取I ml CH03D10细胞加入100 μ I纯化的抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体(实施例1制备所得)，4°C孵育45 min, PBS洗漆2次,离心1000 rpm/min, 5 min,弃上清,加入100 μ I工作浓度的羊抗鼠IgG (H+L) -PE突光抗体，4°C孵育45 min, PBS洗漆2次,离心1000rpm/min, 5min,弃上清,力口入0.5 ml PBS混匀后上机检测。
[0057]结果显示杂交瘤细胞分泌的抗人Fe eR I α亚基单克隆抗体与表达人Fe ε R Iα亚基的CH03D10细胞能够发生极高的特异性结合反应，该抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体与CH03D10细胞的结合率高达88.4%，其结果如图1(A)(为散射光结果图)和图1(B)(结合率结果图)所示。
[0058]2.免疫荧光法检测抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体
[0059]取对数期生长的CH03D10细胞，PBS洗涤，离心1000 rpm/min, 5 min ；1 %BSA-PBS (所述百分比为质量百分比)调整细胞浓度为5 X 16个/ml ;接种于96孔细胞培养板，每孔10(^1;加入多聚甲醛固定，每孔加入10(^1抗人？(^1? I α亚基单克隆抗体(MAb_B5B4，所加入的抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体是实施例1制备所得，其浓度为
1.14mg/ml)，室温过夜后弃上清，PBS洗2次；弃上清，每孔加入100 μ I FITC标记的羊抗鼠IgG(H+L)荧光抗体，室温下作用30 min, PBS洗涤2次，荧光显微镜观察结果。
[0060]结果显示:抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体MAb_B5B4可与CH03D10细胞特异性彡口口 ?
[0061]3.Western blot鉴定抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体
[0062]由表达人Fe ε R I α亚基的CH03D10细胞裂解所制备的蛋白，进行SDS-PAGE电泳，按常规电转移至聚偏二氟乙烯膜(PVDF)膜上，经过5%脱脂奶粉封闭lh，加抗人Fe ε RI α亚基单抗100μ 1，4°C孵育过夜。加入HRP标记的羊抗鼠IgG抗体100 μ 1，室温孵育Ih,显色后观察结果。
[0063]结果表明抗人FceR I α亚基单克隆抗体MAb_B5B4对转移至PVDF膜上的CH03D10细胞提取物在相对分子质量47KD处呈现特异性的反应带，结果如图2所示。
[0064]实施例3抗人Fe eR I α亚基单克隆抗体MAb_B5B4的应用
[0065]将来源于人体组织的扁桃体组织切片于58°C烘箱中烘烤I h，从烘箱中取出组织切片后立即依次放入二甲苯I中15 min，二甲苯II中15 min ;将组织切片依次在无水乙醇、95%乙醇、75%乙醇溶液中浸泡一分钟，再用蒸馏水洗两次；将组织片于PH6.0枸橼酸修复液中微波热修复15 min，然后冷却至室温；将组织切片PBS洗涤三次后，甩掉并擦干组织切片上组织周围的液体，平放于湿盒中，滴加50μ I的3%过氧化物酶阻断剂过氧化氢于组织上，避光反应20 min ；PBS洗涤三次后，甩掉并擦干切片上组织周围的液体，滴加封闭液(5% BSA-PBS，所述百分比为质量百分比)50μ I室温20 min ;弃组织片上封闭液后，用PBS洗涤三次后，滴加1:200稀释的0.7 mg/ml抗人Fe eR I α亚基单克隆抗体MAb_B5B4(所述抗体为实施例1制备所得)250 μ 1，4°C过夜孵育；将4°C过夜的组织切片用PBS洗涤三次去除未结合一抗，然后加入羊抗鼠IgG-辣根过氧化物酶50 μ I室温孵育30 min ;将组织切片于PBS中洗涤三次去除未结合二抗，甩掉并擦干切片上组织周围的液体，平放于湿盒中，加入50μ I的DAB显色液(1:50体积稀释)，光学显微镜下控制显色，当看到阳性结果时将片子放入自来水中终止反应，并在流水中冲洗至少lOmin。
[0066]将组织切片放入苏木素溶液中30 s后，放入蒸馏水中反蓝，自来水冲洗10 min ；将组织切片依次在75%乙醇、95%乙醇、无水乙醇中浸泡I min;将组织片二甲苯透明后，中性树胶封片，显微镜下观察，其结果如图3所示。图3的结果表明:本发明制备的抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体与组织中的肥大细胞能够特异性结合，因此本发明的杂交瘤细胞株Β5Β4分泌的抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体MAb_B5B4可用于制备Fe ε R I α亚基表达的检测试剂，定性或定量检测细胞中人Fe ε R I α亚基的表达。
[0067]实施例4杂交瘤细胞株Β5Β4体外培养
[0068]取实施例1制备所得杂交瘤细胞株Β5Β4，利用DMEM培养基(购买自Gibco)，37°C，培养24小时,3000rpm离心5min,收集上清液,用NAb Protein G SpinKit (购买自Pierce公司)纯化后即得抗人Fe eR I α亚基单克隆抗体。经实施例1所述ELISA法测定所得抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体效价，该抗体的滴度为:1:12800，将所得抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体置于_70°C保存。
[0069]应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
【权利要求】
1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C201326o
2.—种抗人Fee R I α亚基单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株分泌产生。
3.—种如权利要求2所述抗人Fe ε R I α亚基单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤: (1)体外培养权利要求1所述杂交瘤细胞株得到培养液； (2)将步骤(I)所得培养液离心，收集上清纯化即得抗人Feε R I α亚基单克隆抗体。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(I)所述培养的温度为37°C，培养的时间为24小时。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述离心的速度为3000rpm,离心的时间为5分钟。
6.—种细胞人Fe eR I α亚基表达的检测方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤: (1)将权利要求2所述抗人Feε R I α亚基单克隆抗体与待检测的分离的细胞或该细胞的裂解液进行接触； (2)通过免疫荧光分析方法、流式细胞术分析方法、免疫印迹分析方法、ELISA分析方法、免疫组织化学分析方法或免疫沉淀分析方法来判断是否有阳性反应。
7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤(I)所述细胞是真核细胞。
8.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述免疫荧光分析方法包括以下步骤:取对数期生长期的目的细胞，PBS洗涤，离心收集细胞；将细胞接种于细胞培养板，加入多聚甲醛固定，每孔加入权利要求2所述抗人Fe eR I α亚基单克隆抗体，温浴，洗涤后弃上清，每孔加入荧光标记的抗鼠IgG抗体，荧光显微镜观察结果。
9.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述流式细胞术分析方法包括以下步骤:取对数期生长期的目的细胞，PBS洗涤，离心收集细胞；在细胞中加入权利要求2所述抗人Fe eR I α亚基单克隆抗体，温浴，洗涤后离心弃上清，加入荧光标记的抗鼠IgG抗体，上机检测结果。
10.如权利要求2所述的抗人Feε R I α亚基单克隆抗体在制备抗变应性皮炎、皮肌炎或银屑病药物中的用途。
【文档编号】A61P17/06GK104293738SQ201410461484
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年9月11日 优先权日:2013年9月11日
【发明者】李莉, 王娟 申请人:李莉, 王娟