一种用于减轻化疗副作用的复合益生菌制剂的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于减轻化疗副作用的复合益生菌制剂，其特征在于：所述的复合益生菌制剂由以下益生菌按照一定的活菌数量混合而成：短双歧杆菌∶嗜酸乳杆菌∶干酪乳杆菌∶嗜热链球菌=1∶1-3∶1-3∶1-3，且混合后的复合益生菌制剂的总活菌数量为200-800亿。这是一种能够有效减轻病人因化疗产生的副作用的复合益生菌制剂。
【专利说明】-种用于减轻化疗副作用的复合益生菌制剂
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种复合益生菌制剂，特别是一种用于减轻化疗副作用的复合益生菌 制剂。
【背景技术】
[0002] 作为治疗肿瘤的有效手段，化疗在临床上得到了广泛的应用。但有些化疗药物(如 5-Fu)在杀死肿瘤细胞的同时往往也会伤及正常细胞，尤其是生长速度较快的肠粘膜细胞、 造血干细胞等等，而使得患者承受严重的副作用。一般临床表现为严重腹泻，肠粘膜损伤， 机体消瘦，精神不振和免疫力下降等。现有研究表明，双歧杆菌能有效地保护肠粘膜屏障， 抑制肠粘膜通透性增高。乳杆菌能调节机体细胞免疫，恢复肠道菌群，减轻病人患腹泻的机 率。链球菌可以阻止肠道免受有害菌的定植等。这三种菌都已在医疗领域中得到了一定程 度的应用，但目前国内尚无用于减轻化疗副作用的复合益生菌制剂。
【发明内容】
[0003]本发明是为了解决现有技术所存在的上述不足，提出一种能够有效减轻病人因化 疗产生的副作用的复合益生菌制剂。
[0004] 本发明的技术解决方案是：一种用于减轻化疗副作用的复合益生菌制剂，其特征 在于：所述的复合益生菌制剂由以下益生菌按照一定的活菌数量混合而成： 短双歧杆菌：嗜酸乳杆菌：干酪乳杆菌：嗜热链球菌=1 :1-3 :1-3 :1-3,且混合后的复 合益生菌制剂的总活菌数量为200-800亿。
[0005]本发明同现有技术相比，具有如下优点： 本种用于减轻化疗副作用的复合益生菌制剂，其所有的菌株均来源于人体，经经筛选、 驯化和组方验证，安全性高，具有良好的生态互助性，安全性高，临床应用有保障。它在减轻 化疗所致的肠道菌群失调、肠炎的辅助营养调整方面有显著效果，能明显改善肠道菌群的 微生态失调，降低内毒素，增强肠道的屏障功能。因此这种复合益生菌制剂作为肠内微生 态营养制剂，用于化疗病人的肠内营养制剂的产品开发，其使用十分广泛。它的活菌数用量 大，属于医用食品，无剂量限制，无毒副作用，使用方便，可作为营养组件和其他营养素一起 用于临床病人的营养治疗，让患者在平时饮食的过程中就能完成辅助治疗，能够大大减轻 患者痛苦。
【具体实施方式】
[0006]下面将说明本发明的【具体实施方式】。
[0007] 所述的复合益生菌制剂由以下益生菌按照一定的活菌数量混合而成：将短双歧 杆菌AreFe)、嗜酸乳杆菌（ZacioAaciBw1S 干酪乳杆菌 (LacioAaciBw1Scasei)、嗜热链球菌（StrepiococciAs 按照活菌数量为 1 : 1-3 :1-3 :1-3的比例混合，并且要保证混合后的复合益生菌制剂的总活菌数量为200-800 亿。
[0008]实施例I 将50亿活菌数量的短双歧杆菌、50亿活菌数量的嗜酸乳杆 菌（ZacioAaciBw1S<3--Υ￡/ο/7Α27?5·)、50 亿活菌数量的干酪乳杆菌（ZacioAaciBw1Scasei) 和50亿活菌数量的嗜热链球菌（^irepiococcM 进行混合，最终获得的复 合益生菌制剂的总活菌数量为200亿。
[0009]实施例2 将100亿活菌数量的短双歧杆菌（5Wo知Cteriws 、200亿活菌数量的嗜酸 乳杆菌（ZacioAaci#W5· 、200 亿活菌数量的干酪乳杆菌（ZacioAaciBws casei)和200亿活菌数量的嗜热链球菌（SirepiococciAs 进行混合，最终获 得的复合益生菌制剂的总活菌数量为700亿。
[0010]实施例3 将80亿活菌数量的短双歧杆菌（feV^c^acieriw? 、240亿活菌数量的嗜酸乳杆 菌（ZacioAaciBw1S<3--Υ￡/ο/7Α27?5·)、240 亿活菌数量的干酪乳杆菌（ZacioAaciBw1Scasei) 和240亿活菌数量的嗜热链球菌（^irepiococcMiAerffioMWm)进行混合，最终获得的复 合益生菌制剂的总活菌数量为800亿。
[0011] 下面是针对本申请所述复合制剂的微生物学试验和动物实验。其中微生物实验包 括菌种的代谢产物检测、耐药性检测、质粒检测等，动物试验包括模型试验和急毒试验。
[0012] 对化疗动物模型作用的研究 取上述短双歧杆菌（沿·侃oAacteritt?AreFe)、嗜酸乳杆菌（ZacioAaciBw1S、干酪乳杆菌（ZacioAaciBw1Scasei)、嗜热链球菌（SirepiococcWs 分别培养，收集菌体后使用生理盐水配制成混合菌悬液。选用SPF级SD大 鼠随机分为4组，分别为正常组，5-Fu+生理盐水组，5-Fu+低剂量益生菌组，5-Fu+高剂量益 生菌组。大鼠每天按剂量30mg/kg腹腔注射5-Fu，正常组不注射。低剂量组每只大鼠每天 灌胃益生菌IXIO8CFU,高剂量组为IXIO9CFU,正常组和5-Fu组灌胃等体积生理盐水。化 疗时间总共5天，益生菌干预总共8天，大鼠于第8天处死。应用PCR-DGGE技术测定肠道菌 群变化，计算物种丰度指数（S)，Shannon-Wiener指数（H'），物种均勻度指数（E)。结果表 明，高剂量组和低剂量组在肠道菌群丰度指数、Shannon-Wiener指数（H'）和物种均匀度指 数上与正常组均无显著差异(见表1 )，但显著区别于5-Fu组。同时，高剂量组与低剂量组在 血浆内毒素含量(见表2)、小肠粘膜厚度、绒毛高度和隐窝深度(见表3)以及体重变化(见 表4)方面均与5-Fu组有极显著差异0°〈0. 01 )，但同时与正常组也有显著差异0°〈0. 01 )。 病理切片显示，与5-Fu组相比，高剂量组与低剂量组其脾脏淋巴细胞明显增多，组织充血 和纤维化现象明显减轻。但与正常组相比仍有差距。高剂量组与低剂量组之间在本试验所 有指标中均未出现明显差异。
[0013] 益生菌菌株特性检测 采用试剂盒分别检测4株益生菌是否产硝酸还原酶，在BASM液体培养基上检测是否产 生氨基脱羧酶，使用血平板检测是否产溶血素。使用药敏纸片法分别检测各益生菌的耐药 性。使用质粒提取试剂盒分别提取4株菌的质粒并电泳检测是否含有质粒。4株益生菌耐 药性检测结果见表5,敏感性判定标准使用CLSI抗菌药物敏感性试验标准。氨基酸脱羧酶 检测表明，只有嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌为阳性，其余为阴性。同时，在硝酸还原酶检测、溶 血素检测和质粒检测中，所测菌株均为阴性(见表6 )。
[0014] 益生菌急性毒性试验 4株益生菌分别培养后，离心收集菌体并使用生理盐水制成混合菌悬液。选用雄性SD大鼠20只，随机分为2组，每组10只，其中实验组一次性灌胃大剂量5XIO9CFUAiI益生菌 悬液lml，对照组灌胃等体积生理盐水，然后连续观察7天，动物于第8天处死。每天记录 其体重变化，平均进食量，死亡数量，精神状态以及排泄和分泌物的分泌情况。动物于灌胃 后第8天，腹腔注射水合氯醛麻醉后，于腹腔主静脉采血，使用丙二醛测定试剂盒检测血清 中MDA浓度。菌手术取出肝脏，使用谷胱甘肽检测试剂盒检测肝脏谷胱甘肽含量。无菌 手术分别取等量肝、心、肾、脾组织。匀浆机打碎后，取100μL组织液分别涂布LIM培养基、 BS培养基和Lbs培养基37°C厌氧培养48h，检测细菌易位。结果表明，大剂量灌服益生菌 后，与对照组相比，大鼠体重明显增加，没有出现死亡，各脏器经解剖观察未发现明显病变， 大鼠精神状态无异常，无细菌易位，无腹泻情况。血清MAD和肝脏GSH含量与对照组相比均 无明显差异。具体结果见表7。
[0015] 表1大鼠肠道菌群生物多样性分析
【权利要求】
1. 一种用于减轻化疗副作用的复合益生菌制剂，其特征在于：所述的复合益生菌制剂 由以下益生菌按照一定的活菌数量混合而成： 短双歧杆菌：嗜酸乳杆菌：干酪乳杆菌：嗜热链球菌=1 :1-3 :1_3 :1-3,且混合后的复 合益生菌制剂的总活菌数量为200-800亿。
【文档编号】A61P1/00GK104398538SQ201410585415
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年10月28日 优先权日:2014年10月28日
【发明者】袁杰力, 吴英韬 申请人:大连医科大学