包含与病毒样颗粒偶联的淀粉样β1-6肽及佐剂的组合物的制作方法

包含与病毒样颗粒偶联的淀粉样β1-6肽及佐剂的组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及包含含有Aβ1-6肽的构建体及药学上可接受的佐剂的组合物，该组合物用于治疗罹患痴呆、尤其是阿尔茨海默型痴呆的患者。在一个具体实施方案中，所述含有Aβ1-6肽的构建体由与所述Aβ1-6肽化学偶联的RNA噬菌体Qβ的病毒样颗粒(VLP)组成。
【专利说明】包含与病毒样颗粒偶联的淀粉样β 1-6肽及佐剂的组合物
[0001] 本申请是国际申请号为PCT/EP2011/054735,国际申请日为2011年3月28日的 PCT国际专利申请进入中国阶段后的国家申请号为201180016217. 6,发明名称为"包含与 病毒样颗粒偶联的淀粉样β 1-6肽及佐剂的组合物"的中国专利申请的分案申请。

【技术领域】
[0002] 本发明涉及新的组合物及疫苗，其含有i)包含A β 1-6的构建体及ii)药学上 可接受的佐剂（下文中称为本发明的组合物），以及此类组合物在治疗罹患阿尔茨海默症 (AD)的患者、尤其处于该疾病早期的患者中的用途。

【背景技术】
[0003] 全世界至少1500万人受阿尔茨海默症影响。此疾病的特征在于患者的日常生活 功能的能力的进行性损伤。大多数患者在诊断后的5至10年内死亡。
[0004] 已积累大量证据表明β -淀粉样肽（老年淀粉斑的主要组分）在AD中起病因性 作用。成功缓解AD病的疗法可能包括对脑中β-淀粉样沉积起作用的产品。由免疫系统 主动产生或被动施用的Αβ特异性抗体在Αβ -淀粉样变性的不同转基因小鼠模型中持续 降低斑块负荷。然而，试图刺激AD患者免疫系统产生Αβ抗体的首次临床试验因不可接 受的副作用而中止（所治疗患者中6%出现脑膜脑炎，Orgogozo JM, Gilman S, Dartigues JF, Laurent B, Puel M, Kirby LC, Jouanny P, Dubois B, Eisner L, Flitman S, Michel BF, Boada M, Frank F,Hock C(2003)Subacute meningoencephalitis in a subset of patients with AD after A042immunization. Neurology ;61:46_54)。随后得出结论：在 此试验中，Αβ反应性自体免疫T细胞可能因 TH1淋巴细胞活化而得到激发。TH1反应可能 是佐剂（QS-21)与ΑΝ1792中的T细胞表位组合使用的结果（Lemere及Masliah, 2010, Nat. Rev. Neurol. 6 (2) : 108-120)。因此，需要谨慎选择免疫原及佐剂以在引发适用的免疫反应 的同时避免此等危险反应。


【发明内容】

[0005] 意外的是，用含有A β 1-6肽的构建体观测到较少不良免疫反应及较低微出血发 生率。特别是，用由与A β 1-6肽化学偶联的VLP组成的构建体既未观测到不良免疫反应， 亦未观测到微出血发生率升高。
[0006] 意外地发现，当被施用于罹患痴呆、阿尔茨海默症、与阿尔茨海默症相关的痴呆或 与其相关的病状的人类时，含有A β 1-6肽的构建体可有益地与佐剂组合。
[0007] 已意外地发现，可将佐剂连同含有A β 1-6肽的构建体一起施用而不诱发促炎性 反应，但对该构建体的抗体反应提高。此在年老患者中尤其重要。
[0008] 如本文所定义，"本发明的组合物"是指包含i)含有A β 1-6肽的构建体及ii)药 学上可接受的佐剂的组合物。本发明的组合物可进一步包含可接受的药物载体。
[0009] 根据本发明，Αβ 1-6肽结合于具有固有重复组织的结构的核心颗粒，例如自组装 病毒样颗粒（VLP)。此VLP可由RNA噬菌体的衣壳蛋白（例如RNA噬菌体Q β的衣壳蛋白） 组成。
[0010] 片段Αβ 1-6及本发明所用的含有此类片段的构建体本身已为人所知。Cytos及 Novartis的WO 04/016282描述包含含有噬菌体（诸如Q0 )的重组蛋白的VLP、连接子及 A β 1-6 ( -起形成有序的重复抗原阵列）的构建体。
[0011] 本发明所用的构建体可如WO 04/016282中、尤其是实施例13中所披露的内容加 以制备及纯化，该文献内容以引用的方式并入本专利申请中。
[0012] 根据本发明，VLP结构可经二价连接子与A β 1-6肽化学偶联。此二价连接子可如 WO 04/016282第53页第一段中所述，该文献内容以引用的方式并入本专利申请中。
[0013] 在一个实施方案中，二价连接子是异型双官能交联剂，其含有可与病毒样颗粒或 至少一个病毒样颗粒亚单元（例如其赖氨酸残基的侧链氨基）反应的官能团。二价连接子 可含有能够与A β 1-6肽或与该A β 1-6肽融合的半胱氨酸残基反应的另一官能基。
[0014] 根据本发明，异型双官能交联剂可选自SMPH、Sulfo-MBS、Sulfo-EMCS、 Sulfo-GMBS、 Sulfo-SIAB、 Sulfo-SMPB、 Sulfo-SMCC、 SVSB、 SIA，例如 SPDP 或 Sulfo-LC-SPDP〇
[0015] 在本发明的优选实施方案中，适于产生本发明的组合物的AM-6肽用氨基酸连 接子（例如氨基酸间隔子）进行修饰以便结合VLP。这些Αβ 1-6肽包括但不限于C端融 合于间隔子GGC的A β 1-6。适于与A β 1-6片段N端融合的氨基酸连接子（例如氨基酸间 隔子）包括但不限于序列CGG及CGHGNKS。适于与A β 1-6C端融合的连接子包括但不限于 序列GGC。在一个实施方案中，当连接子与Αβ 1-6片段的C端融合时，C端半胱氨酸被酰 胺化，其被表示为C端"-C0NH2"，该肽的N端是游离的，其被表示为"ΝΗ2-"。在一个具体实 施方案中，含有半胱氨酸残基作为第二连接位点的氨基酸连接子（例如氨基酸间隔子）与 A β 1-6肽C端融合。
[0016] 在一个实施方案中，包含Αβ 1-6肽的构建体由经二价连接子与该Αβ 1-6肽化学 偶联的RNA噬菌体Q β的病毒样颗粒（VLP)组成，且其中所述A β 1-6肽用氨基酸间隔子进 行修饰。
[0017] 在另一具体实施方案中，包含A β 1-6肽的构建体由RNA噬菌体Q β的病毒样颗粒 (VLP)、在其C端与间隔子GGC融合的Αβ 1-6肽组成，其中所述VLP经二价连接子与所述 Aβ 1-6肽化学偶联；该构建体在上文中定义为"本发明的构建体"。
[0018] 在一方面，本发明提供一种疫苗组合物，其包含i)含有A β 1-6肽的构建体及ii) 药学上可接受的佐剂，例如包含本发明的构建体及药学上可接受的佐剂的疫苗组合物。
[0019] 本发明还提供治疗方法。因此，本发明提供用于治疗的本发明的组合物或本发明 的疫苗。在另一方面，本发明提供一种免疫方法，其包括向动物（例如人类）施用本发明的 组合物或本发明的疫苗。
[0020] 佐剂
[0021] 如本文所定义，术语"佐剂"是指当与包含本发明的Αβ 1-6肽的构建体联合（例 如组合）施用时增强对该构建体的免疫反应的药剂。佐剂可通过若干机制（诸如淋巴细胞 募集、B细胞及/或T细胞刺激及/或巨噬细胞刺激）中的任何机制提高免疫反应。
[0022] 根据本发明，佐剂可以是但不限于有机佐剂、无机佐剂、基于油的佐剂或病毒颗粒 (virosome)ο
[0023] 无机佐剂包括但不限于矿物佐剂，例如铝盐或钙盐，诸如磷酸铝、氢氧化铝（在本 文中亦称作Al (OH)3)、硫酸钾铝（亦称作明矾）及磷酸钙。这些佐剂可与或不与其他佐剂 (例如下述佐剂）一起使用。
[0024] 有机佐剂包括但不限于角鲨烯。
[0025] 本发明的佐剂的其他实例包括但不限于MPL (单磷酰基脂质A)、AS03 (由GSK开 发，普盘克斯（Prepandrix) )、AS04(由GSK开发；MPL与氢氧化错、芬迪克斯（Fendrix)、 保落（Cervarix)的组合）、QS21(含有三猫糖苷的阜荚树（Soap bark tree ;Quillaia saponaria))的皂素纯化植物提取物）、AS01 (由GSK开发；脂质体；QS21及MPL)、AS02 (由 GSK开发；QS21及MPL)、LT (大肠杆菌的不耐热性肠毒素 ）、CpG (含有未甲基化CpG序列的 寡核苷酸）及MF59? (购自Novartis)。MF59为角鲨烯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯 及脱水山梨糖醇三油酸酯化合物的亚微米水包油型乳液。
[0026] 尤其适用于本发明的佐剂是例如矿物佐剂或含有角鲨烯的佐剂，例如角鲨烯乳 液，例如MF59。在一个实施方案中，本发明的组合物包含本发明的构建体及（i)MF59或（ii) 错盐（诸如氢氧化错）。
[0027] 佐剂的选择取决于佐剂促进免疫反应的效率、含有该佐剂的组合物（例如含有该 佐剂的疫苗）的稳定性、给药途径、给药方案、待接种疫苗的物种。
[0028] 可组合两种或两种以上佐剂。例如，铝盐可与MPUQS21及/或MF59组合。
[0029] 根据本发明，可向人类患者施用约5至600 yg包含Αβ 1-6肽的构建体（例如本发 明的构建体），例如约5至550 μ g、约50至500 μ g、约100至500 μ g，例如约75至300 μ g，例 如约50至150 μ g，例如约15至125 μ g，例如约25至100 μ g，例如约50 μ g、75 μ g、100 μ g、 150 μ g、200 μ g、300 μ g、400 μ g或450 μ g。因此，本发明的组合物每剂可含有上述量之一 的本发明的构建体。在一个实施方案中，本发明的组合物每剂包含约150 μ g或约450 μ g 本发明的构建体。
[0030] 在一个具体实施方案中，本发明的组合物包含约10至600微升/剂佐剂、例如约 50至500微升/剂佐剂、例如约100至500微升/剂佐剂、例如约100至300微升/剂佐 剂、例如约150至300微升/剂佐剂、例如约125至250微升/剂佐剂、例如约125微升/ 剂或例如约250微升/剂或例如约500微升/剂佐剂。这些量尤其适用于MF59。
[0031] 在一个实施方案中，本发明的组合物包含i)约100至300微升/剂MF59,例如约 125微升/剂、约250微升/剂或约500微升/剂MF59,及ii)约150 μ g包含A β 1-6肽的 构建体，例如150 μ g本发明的构建体。在一个实施方案中，组合物每剂包含（i)约125 μ 1 或约250 μ I MF59及（ii)约150 μ g本发明的构建体。
[0032] 在另一实施方案中，本发明的组合物包含i)约100至500微升/剂MF59,例如 约125微升/剂、250微升/剂、450微升/剂或500微升/剂MF59,及ii)约450 μ g包含 Αβ 1-6肽的构建体，例如450 yg本发明的构建体。在一个实施方案中，组合物每剂包含（i) 约125 μ 1或约250 μ I MF59及（ii)约450 μ g本发明的构建体。
[0033] 在又一实施方案中，本发明的组合物包含i)约125或250微升/剂MF59,及ii) 每剂约50至500 μ g、约100至500 μ g、约150 μ g，例如约200 μ g包含A β 1-6肽的构建体， 例如150 μ g本发明的构建体。
[0034] 在另一实施方案中，将佐剂与包含A β 1-6肽的构建体（例如本发明的构建体）以 约 0· 5:1 (ν/ν)至约 4:1 (ν/ν)，例如约 0· 8:1 (ν/ν)至约 3. 5:1 (ν/ν)，例如约 I: I (ν/ν)至约 2:1 (ν/ν)的比率；例如约I: I (ν/ν)的比率混合。
[0035] 在另一具体实施方案中，本发明的组合物包含约10至900微克/剂佐剂，例如约 50至850微克/剂佐剂，例如约100至800微克/剂佐剂，例如约120至600微克/剂佐 剂，例如约100至550微克/剂佐剂，例如约150至450微克/剂佐剂，例如约50微克/剂， 约100微克/剂，约150微克/剂，或约450微克/剂佐剂。这些量尤其适用于铝盐，例如 明矾或氢氧化铝。在氢氧化铝情况下，该量是以元素铝的重量计。
[0036] 在一个实施方案中，组合物每剂包含⑴约50 μ g或约150 μ g氢氧化铝及 (ii) 150 μ g本发明的构建体。在一个实施方案中，组合物每剂包含（i)约150 μ g或约 450 μ g氢氧化铝及（ii) 450 μ g本发明的构建体。
[0037] 在另一实施方案中，组合物每剂包含（i)约600 μ g或约850 μ g氢氧化铝及（ii) 约450 μ g本发明的构建体。
[0038] 若患者反应较低，则可使用甚至较高的剂型。因此，在另一实施方案中，组合物每 剂包含（i)约600 μ g或约850 μ g氢氧化铝及（ii)约600 μ g本发明的构建体。
[0039] 当将铝盐用作佐剂时，以元素铝计，佐剂与包含A β 1-6肽的构建体的适合比率包 括但不限于1/3、1/2、1/1、2/1、3/1、5/1或6/1 (重量/重量）。
[0040] 佐剂可与包含Αβ 1-6肽的构建体一起以单一组合物形式施用，或可在施用包含 A β 1-6肽的构建体之前、同时或之后施用。
[0041] 配制及施用
[0042] 本发明的组合物可通过本领域已知的各种方法施用，例如通过注射、输注、吸入、 口服或其他适合的物理方法施用。或者，组合物可被肌肉内、静脉内或皮下施用。在具体实 施方案中，本发明的组合物被非肠道施用，例如肌肉内或皮下，例如肌肉内施用。
[0043] 含有本发明的组合物的制剂包括无菌水溶液，例如生理盐水；或非水性溶液及悬 浮液。非水性溶剂的实例为丙二醇、聚乙二醇、植物油（诸如橄榄油），及可注射有机酯，诸 如油酸乙醋。载体或封闭敷料（occlusive dressing)可被用以提高皮肤渗透性及增强抗 原吸收。
[0044] 对于非肠道施用，本发明的含有Αβ 1-6肽的构建体可以以可注射剂量的溶液或 悬浮液形式施用，所述溶液或悬浮液是该构建体在生理学上可接受的稀释剂与药学上可接 受的载体（可为液体，诸如水、油、盐水、甘油或乙醇）中的溶液或悬浮液。可包括其他组分， 诸如湿润剂或乳化剂、表面活性剂、PH值缓冲剂等。其他组分可包括石油，或动物、植物或 合成来源的油，例如花生油、大豆油及矿物油。诸如丙二醇及聚乙二醇的二醇是尤其适用于 例如可注射溶液的载体。
[0045] 施用（例如皮下施用）本发明的组合物的合适制剂为含有磷酸盐缓冲盐水（PBS) 或另一缓冲液的水溶液。举例而言，本发明的组合物含有约〇. 1与lmg/mL之间的本发明 构建体，例如约0. 25与0. 75mg/mL之间的本发明构建体，例如0. 4与0. 6mg/mL之间，例如 0. 5mg/mL本发明的构建体，且无其他赋形剂。在一个实施方案中，本发明提供包含磷酸盐缓 冲盐水（PBS)或另一缓冲液及lmg/mL本发明构建体的水溶液。
[0046] 缓冲液还可含有L-组氨酸。
[0047] 本发明的组合物可进一步含有填充剂，例如蔗糖。可添加盐酸以调节pH值。
[0048] 剂型可冷冻保存或作为冻干物（lyophilisate)保存直至即将被使用。优选地，当 呈冻干物形式时，本发明的组合物含有缓冲剂（诸如L-组氨酸）及填充剂（例如蔗糖）。 在施用前，以适当体积的适当稀释剂（例如水，或右旋糖溶液）重配冻干物以获得所需浓度 的包含A β 1-6肽的构建体。在添加稀释剂后，轻缓地混合溶液且静置直至出现泡沫且溶液 澄清且透明为止。接着将重配的冻干物与适当佐剂混合。优选地，与佐剂混合的重配冻干 物在施用之前在室温下保存不超过4小时。
[0049] 适当稀释剂包括但不限于水（例如蒸馏水）、磷酸盐缓冲生理盐水、林格氏溶液 (Ringer's solutions)、右旋糖溶液、汉克氏溶液（Hank's solution)。在一个实施方案中， 稀释剂本身可以是佐剂。在一个实施方案中，稀释剂是氢氧化铝溶液。
[0050] 优选地，剂型可用注射器经由皮下注射来施用给温血动物，特别是注入腹部。在一 个实施方案中，肌肉内（即经调配用于肌肉内施用）施用组合物（剂型）。在一个实施方案 中，将组合物（剂型）注入上臂。
[0051] 为解冻剂型，可将剂型在环境温度下保存约15分钟与45分钟之间，例如30分钟。 优选地，在取出药物之前，将小瓶轻缓地倒置若干次以便分散潜在不可见颗粒。
[0052] 本发明的包含A β 1-6肽的构建体（例如本发明的构建体）的适合剂型为冻干物， 其在注射用水中重配以获得I. Omg/mL的本发明构建体浓度。此剂型尤其适用于将本发明 的构建体与矿物佐剂（例如氢氧化铝）组合施用。此剂型尤其适用于肌肉内施用本发明的 构建体。
[0053] 为将本发明的包含A β 1-6肽的构建体（例如本发明的构建体）与佐剂MF59组合 施用，剂型是使用适当体积的右旋糖溶液重配的冻干物。
[0054] 可将本发明的组合物制备为可注射剂，例如液体溶液或悬浮液；或适于在注射前 溶解或悬浮于液体媒剂中的固体形式。
[0055] 治疗方法
[0056] 根据本发明，提供了本发明的组合物在用于治疗及/或预防阿尔茨海默症（AD)， 尤其是处于疾病早期的阿尔茨海默症（AD)，或轻度至中度或重度阿尔茨海默症（AD)或与 其相关的病状中的用途。例如，提供了这些组合物在用于治疗或预防痴呆，例如与阿尔茨海 默症相关的痴呆及具有淀粉样血管病变的血管性痴呆中的用途。
[0057] 本发明还提供了本发明的组合物在用于治疗Aβ水平升高的患者（包括但不限于 患有与帕金森氏病相关的痴呆或路易体性痴呆的患者）中的用途。
[0058] 本发明进一步涉及将本发明的组合物用于预防性处理处于产生AD的风险中的个 体，包括但不限于患有轻度认知障碍的个体、具有已知与AD相关的基因型（诸如Αρ 〇Ε4)的 个体、患有第21对染色体三体症（Trisomy 21)的个体及具有指示AD风险的代用标记的个 体。
[0059] 如本文所用，术语"治疗"特别涉及旨在中止引起疾病进展及/或具有症状效应的 病原性过程，或减缓疾病或与其相关的症状的治疗。
[0060] 如本文所用，术语"阿尔茨海默型痴呆"（及"与阿尔茨海默症相关的痴呆"）特别 涉及根据 Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders,第 4 版（DSM-IV) 准则定义的疾病。
[0061] 本发明还涉及治疗人类患者的痴呆、阿尔茨海默症、与阿尔茨海默症相关的痴呆 或与其相关的病状的方法，其包括向有需要的患者施用本发明的组合物。本发明进一步 分别提供了免疫及接种疫苗的方法，其用于预防、治疗及/或减缓人类的痴呆、阿尔茨海默 症、与阿尔茨海默症相关的痴呆或与其相关的病状。
[0062] 注射频率可视患者反应而变。例如，施用频率可由主治医师视患者反应及相应抗 体滴度而变。例如，低反应患者可能需要较频繁施用，而高反应患者可能需要较不频繁的施 用以引发及/或维持相同抗体滴度。
[0063] 注射频率可包括但不限于每年施用1至10次，例如每年2至8次，例如每年施用 6次。
[0064] 在一个实施方案中，约每4至8周、优选约每5至7周、尤其约每6周向有需要的 人类患者施用本发明的组合物。此给药方案可持续约12至16周，例如至约12周。例如， 在0、6、12周施用本发明的组合物。此外，可延长本发明组合物的随后施用的间隔时间。
[0065] 因此，在一个实施方案中，本发明提供了以下给药方案：(a)以约6周的间隔施用 两次或两次以上，接着（b)以约12周的间隔施用两次或两次以上。在一个实施方案中，本 发明提供了以下给药方案：(a)以约6周的间隔（例如在0、6及12周）施用三次，接着（b) 以约12周的间隔（例如在24、36、48及60周）施用两次或两次以上（例如3、4、5次或5 次以上）。
[0066] 此给药方案尤其适于治疗罹患痴呆、阿尔茨海默症或与阿尔茨海默症相关的痴呆 的患者。
[0067] 本发明的组合物在治疗上述病症的效用可在适合的临床研宄（例如实施例中所 述的临床研宄）中证实。
[0068] 尤其是，适合的临床研宄是对阿尔茨海默症患者的随机化、双盲、安慰剂对照平行 研宄，或开放标记研宄。
[0069] 组合及试剂盒
[0070] 包含A β 1-6肽的构建体和佐剂可被包装并提供于同一容器（例如小瓶或预装药 品的注射器）中或可被包装于分开的容器（例如小瓶）中且在使用前混合。包装物（例如 包装（packaging))可包括使用说明，尤其是，当包含Αβ 1-6肽的构建体和佐剂分开包装 时，包装物（例如包装（packaging))通常包括关于在使用之前将其混合的说明。
[0071] 因此，本发明提供一种商业包装，其包含：(a)本发明的组合物或疫苗，及（b)施用 说明。本发明还提供一种商业包装，其包含（a)本发明的构建体，（b)佐剂及（c)使用说明。 在此包装中，构建体可经冻干且佐剂可用作稀释剂。试剂盒也可任选地包含药学上可接受 的稀释剂及/或施用装置（诸如注射器）。
[0072] 本发明还提供一种商业包装，其包含a)含有A β 1-6肽的构建体，例如本发明的构 建体，及b)佐剂，以及（c)关于其同时、分别或依序用于治疗或预防阿尔茨海默症或与其相 关的病症（尤其是阿尔茨海默症）的说明。
[0073] 在另一方面，本发明涉及一种组合，其包含本发明的组合物及至少一种益智剂，优 选一种胆碱醋酶抑制剂，诸如美金刚胺（memantine)。
[0074] 如本文所用，术语"益智剂"包括但不限于益智性植物提取物、钙拮抗剂、胆碱 醋酶抑制剂、二氢麦角毒素（dihydroergotoxin)、脑健顺（nicergoline)、卩比略醋酰胺 (piracetame)、嗓呤衍生物、卩比硫醇（pyritinol)、长春蔓胺（vincamine)及长春西汀 (vinpocetine)〇
[0075] 如本文所用，术语"益智性植物提取物"包括但不限于银杏叶（Ginkgo leaf)提取 物。如本文所用，术语"妈诘抗剂"包括辛那伶（cinnarizine)及尼莫地平（nimodipine)。 如本文所用，术语"胆碱酯酶抑制剂"包括但不限于盐酸冬尼培唑（donepezil hydrochloride)、雷斯替明（rivastigmine)、美金刚胺及氢溴酸加兰他敏（galantamine hydrobromide)。如本文所用，术语"嗓呤衍生物"包括但不限于喷替茶碱（pentifyllin)。
[0076] 根据包装插页提供的信息，银杏叶提取物可以以例如市售形式，例如以商标 Ginkodilat?市售的形式施用。辛那伶可以以例如市售形式，例如以商标Cinnarizin forte-ratiopharm?市售的形式施用。尼莫地平可以以例如市售形式，例如以商标 Nimotop?市售的形式施用。盐酸冬尼培唑可以以例如市售形式，例如以商标Aric印t ?市 售的形式施用。雷斯替明可如US 5, 602, 176中披露的方法来制备。其可以以例如市售形 式，例如以商标Exelon?市售的形式施用。氢溴酸加兰他敏可以以例如市售形式，例如以商 标Reminyl?市售的形式施用。二氢麦角毒素可以以例如市售形式，例如以商标Hydergin ? 市售的形式施用。脑健顺可以以例如市售形式，例如以商标Sermion?市售的形式施用。 吡拉西坦可以以例如市售形式，例如以商标Cerebroforte?市售的形式施用。喷替茶碱 可以以例如市售形式，例如以商标Cosaldon?市售的形式施用。吡硫醇可以以例如市售 形式，例如以商标Enc印habol?市售的形式施用。长春西汀可以以例如市售形式，例如以 商标Cavinton?市售的形式施用。美金刚胺可以以例如市售形式，例如以商标Axura ?或 Namenda?市售的形式施用。
[0077] 由代号、通用名或商品名识别的活性剂的结构可获自标准概要" The Merck Index"的现行版本或数据库，例如Patents International (例如IMS World Publications)。其相应内容以引用的方式并入本文中。
[0078] 因此，本发明也涉及一种组合，其包含本发明的组合物及至少一种选自以下的益 智剂：益智性植物提取物、钙拮抗剂、胆碱酯酶抑制剂、二氢麦角毒素、脑健顺、吡咯醋酰胺、 嘌呤衍生物、吡硫醇、长春蔓胺及长春西汀或美金刚胺，其中活性成分在各情况下是以游离 形式或药学上可接受的盐形式存在，及任选地至少一种药学上可接受的载体，其可同时、分 别或依序使用，尤其适用于治疗痴呆、阿尔茨海默症或与其相关的病症的方法。
[0079] 此组合可为组合制剂。
[0080] 其他药剂可与本发明的组合物组合使用，例如：抗抑郁剂，诸如SSRI、SNRI、NRI ; 抗精神病剂，诸如利培酮；抗糖尿病疗法，诸如胰岛素或二甲双胍（metformin);抗氧化疗 法，诸如司来吉兰（seIegi I ine)、维生素 E ;消炎疗法，诸如NSAID ;降脂剂，诸如抑制素 (statin);激素替代物，诸如雌激素；淀粉样蛋白降低剂，诸如Αβ分泌酶抑制剂；聚集抑制 剂，诸如β折叠阻断剂、螯合剂；免疫调节剂，诸如乙酸格拉替美（glatiramer acetate)。
[0081] 如本文所用，术语"组合制剂"在以下意义上特别定义"多个部分的试剂盒":如上 定义的活性成分可被独立地给药或通过使用不同成分量的不同固定组合给药，即同时或在 不同时间点给药。试剂盒的各部分可例如同时或按时间顺序交错施用，即多个部分的试剂 盒的任何部分在不同时间点以相等或不同时间间隔被施用。优选地，选择时间间隔使得组 合使用各部分时对所治疗的疾病的效果大于仅使用任一种活性成分获得的效果。
[0082] 因此，本发明还提供：
[0083] ?如本文所披露的用于治疗的组合。
[0084] ?如本文所披露的组合在制备用于预防和/或治疗阿尔茨海默症或与其相关的病 症（诸如痴呆），尤其是阿尔茨海默症（例如处于疾病早期）的药物中的用途。
[0085] ?商业包装，其包含本文所披露的组合以及关于其同时、分别或依序用于预防及/ 或治疗阿尔茨海默症或与其相关的病症（诸如痴呆），尤其是阿尔茨海默症（例如处于疾病 早期）的说明。
[0086] 在一个实施方案中，本发明提供了（a)本发明的组合物与（b)组合搭配物的组合。 在本发明的一个实施方案中，组合搭配物（b)为胆碱酯酶抑制剂，特别是雷斯替明或美金 刚胺。
[0087] 若组合搭配物作为独立的剂型被施用，则施用剂量及模式可如包装插页中所规定 的方式进行。特别地，可向患者施用以下剂量的组合搭配物（b):
[0088] 辛那伶可以以约75至约150mg之间的总日剂量向患者施用。
[0089] 尼莫地平可以以约60至约120mg之间的总日剂量向患者施用。
[0090] 盐酸冬尼培唑可以以约5mg与IOmg之间的总日剂量向患者施用。
[0091] 雷斯替明可以以约2mg与约20mg，例如约4mg与约18mg，例如约6mg与约12mg之 间的总日剂量向患者施用。
[0092] 加兰他敏可以以约12mg与24mg之间的总日剂量（例如12mg，每日两次）向患者 施用。
[0093] 二氢麦角毒素可以以其甲磺酸盐形式、以约4mg与IOmg之间（例如约8mg)的总 日剂量向患者施用。
[0094] 脑健顺可以以其酒石酸盐形式、以约4mg与8mg之间的总日剂量通过肌肉内注射 向患者施用。
[0095] 吡拉西坦可以以约1200mg与5000mg之间的总日剂量（例如4800毫克/日）向 患者施用。
[0096] 喷替茶碱可以以约400mg与800mg之间的总日剂量向患者施用。
[0097] 吡硫醇可以以其盐酸盐形式、以约600mg的总日剂量向患者施用。
[0098] 长春西汀可以以约IOmg与15mg之间的总日剂量向患者施用。
[0099] 美金刚胺可以以美金刚胺盐酸盐形式、以约20mg的总日剂量向患者施用。
[0100] 本发明还提供含有本发明的组合物、疫苗或组合的容器。容器可由玻璃或塑料制 成。容器可具有无菌接取孔。本发明范围内所包括的适合容器包括瓶、小瓶、注射器及试管。
[0101] 概述
[0102] 术语"包含"表示"包括"以及"由...组成"，例如"包含"X的组合物可仅由X组 成或可包括其他某物，例如X+Y。
[0103] 关于数值X的术语"约"表示例如x+10%。
[0104] 通过具有说明性且不意在进行进一步限定的以下实施例及权利要求对已充分描 述的本发明进行进一步说明。本领域技术人员将认识到或仅使用常规实验便能确定本文所 述的具体步骤的若干等同物。这些等同物在本发明及权利要求的范围内。 实施例
[0105] 实施例I :向兔肌肉内注射含有本发明的构建体及氢氧化铝（Al (OH) 3)或MF59的 组合物
[0106] 通过在第1日（右后肢大腿肌肉上部）、第14日（左后肢大腿肌肉上部）及第 28日（右后肢大腿肌肉下部）向后肢肌肉内注射来处理六组兔（每组由9只雌兔组成）。 以15(^8本发明的构建体与0.05011^六1(0!1) 3(第1组）、0.15011^六1(0!1)3(第2组）或 0.45011^六1(0!1) 3(第3组）的混合物处理第1、2及3组。以1501^本发明的构建体与 0· 125mL MF59 (第 4 组）、0· 25mL MF59 (第 5 组）或 0· 5mLMF59 (第 6 组）处理第 4、5 及 6 组。MF59体积分别包含5、10. 0或20. Omg角鲨烯，其为MF59中的活性成分。在最后施用后 的14日（第42日）对动物进行尸检。
[0107] 评估以下参数：死亡率/存活率（每日两次）、临床症状（每日，包括肌肉内注射 部位的皮肤反应（给药后约24及48小时））、体重（每周）、食物消耗（每周两次）、血液学 及临床生物化学（处理前期间一次及第42日）、终止时的目视检查、器官重量及注射部位 组织病理学。获取血液样品以便血清分析（处理前期间一次及第20、26、34、39及42日）。 另外，收集血浆（处理前期间一次及第42日）及脑脊液（第42日尸检时）样本。
[0108] 没有观察到死亡，也没有在临床症状、皮肤观测结果、体重（增加）、（相对）食物 消耗、血液学及临床生物化学参数以及尸检结果中观察到任何毒理学相关的变化。
[0109] 在所有经处理的动物中均观察到免疫原性反应。所有组的抗Αβ及抗Q0 (对载 体的反应）IgG均在研宄第34日，即第三次注射后六日，达到最大平均浓度，且在第39及42 日降低。第1至5组（但不包括第6组）的抗AMgG产生显示显著的动物间差异性。抗 QI3免疫反应较抗Αβ免疫反应显示出较小的动物间差异性。对Αβ不反应或反应微弱的 动物反而对Q0有良好反应。对于所测试的两种佐剂（亦即Al (0!1)3或1^59)，最大平均抗 A β IgG浓度均在第一与第二剂之间升高。
[0110] 经本发明的构建体外加氢氧化铝处理的兔的反应主要由巨噬细胞反应的发生率 及严重度的剂量依赖性提高与一些淋巴细胞发炎组成。反应随时间消退，返回至最早注射 (第1日注射）后的背景水平。
[0111] 经本发明的构建体外加 MF59处理的兔（第4、5及6组）的发炎反应发生率以剂 量（而非时间）依赖性方式提高，但未观察到观测结果严重度的提高。
[0112] 此研宄显示，雌性白化种新西兰白兔（Albino New Zealand White rabbit)可良 好耐受三次肌肉内注射的本发明构建体与氢氧化铝或MF59的组合。所有组的抗Αβ及 抗Q β IgG浓度在处理阶段的第34日，即第三次注射后六日，均达到最大平均浓度，且在第 39及42日降低。与经本发明的构建体及Al(OH) 3处理的本发明构建体/Al(OH) 3处理组 相比，共同施用本发明的构建体与MF59产生稍微更高的免疫原性反应（对于抗Αβ与抗 IgG)。任一佐剂的高剂量不会提供优于各自相应中间剂量的任何益处。
[0113] 实施例2 :向猴子肌肉内注射含有本发明的构建体及氢氧化铝（Al(OH)3)或MF59 的组合物
[0114] 本研宄的目标在于用本发明构建体单独或与氢氧化铝或MF59的组合使年老雌性 食蟹猴（cynomolgus monkey;Macaca fascicularis)免疫至少 26 周。在研宄第 1、15、43 及140日对动物给药。
[0115] 分别针对以下研宄进行取样：死亡率、临床观察（包括注射部位的给药后观察）、 体重、神经学评估、神经行为观察、血清学（抗体Αβ及Qf3滴度测定）、用于T细胞刺激的 PBMC采集、蛋白质组学（proteomics)及代谢体学（metabolomic)(分别报导蛋白质组学及 代谢体学结果）、血液学、临床化学及尿分析、所选器官/组织的称重及组织处理、显微观察 (包括脑区的IHC及银染色用以确定淀粉样斑块及CSF分析）。
[0116] 选择以下剂量：
[0117] 表1:所选剂量水平

【权利要求】
1. 一种组合物，其包含i)包含与病毒样颗粒结合的A 0 1-6肽的构建体和ii)药学上 可接受的佐剂。
2. 如权利要求1所述的组合物，其包含5 y g至600 y g的所述包含A 0 1-6肽的构建 体。
3. 如权利要求1或2所述的组合物，其包含150 y g或450 y g的所述包含A 0 1-6肽的 构建体。
4. 如前述任意一项权利要求所述的组合物，其中所述包含AM-6肽的构建体存在于 水溶液中。
5. 如前述任意一项权利要求所述的组合物，其中所述包含AM-6肽的构建体由与该 A0 1-6肽化学偶联的病毒样颗粒（VLP)结构组成。
6. 如权利要求5所述的组合物，其中所述VLP来自RNA噬菌体Q 0，所述A 0 1-6肽在 其C端与间隔子GGC融合，且其中所述VLP经二价连接子与所述A M-6肽化学偶联。
7. -种疫苗，其包含如前述任意一项权利要求所述的组合物。
8. 如权利要求7所述的疫苗，其中所述佐剂是铝盐或MF59。
9. 如权利要求8所述的疫苗，其中所述铝盐是A1 (OH) 3。
10. 如权利要求8所述的疫苗，其中所述疫苗组合物每剂包含约100 y 1至约500 y 1 MF59。
11. 如权利要求10所述的疫苗，其中所述疫苗组合物每剂包含约125 y 1或约250 y 1 MF59。
12. 如权利要求8或9所述的疫苗，其中所述疫苗组合物每剂包含约50 y g至约850 y g 铝盐。
13. 如权利要求12所述的疫苗，其中所述疫苗组合物每剂包含约50 y g、约150 y g、约 450 y g、约 600 y g 或约 850 y g 错盐。
14. 如权利要求7至9中任一项权利要求所述的疫苗，其每剂包含： (i) 约150 y g所述包含A 0 1-6肽的构建体及约150 y g铝盐； (ii) 约450 y g所述包含A 0 1-6肽的构建体及约150 y g铝盐； (iii) 约450 y g所述包含A M-6肽的构建体及约450 y g铝盐； (iv) 约450 y g所述包含A 0 1-6肽的构建体及约600 y g铝盐； (v) 约450 y g所述包含A 0 1-6肽的构建体及约800 y g铝盐； (vi) 约600 y g所述包含A 0 1-6肽的构建体及约600 y g铝盐； (vii) 约600 y g所述包含A 0 1-6肽的构建体及约800 y g铝盐； (viii) 约150 y g所述包含A0 1-6肽的构建体及约250 y 1 MF59 ; (ix) 约450 y g所述包含A 0 1-6肽的构建体及约125 y 1 MF59 ;或 (x) 约450 y g所述包含A 0 1-6肽的构建体及约250 y 1 MF59。
15. -种组合，其包含如权利要求1至6中任一项权利要求所述的组合物，或如权利要 求7至14中任一项权利要求所述的疫苗，以及至少一种选自以下的药剂：益智剂、美金刚 胺、抗抑郁剂、抗精神病剂、抗糖尿病剂、抗氧化剂、消炎剂、降脂剂、激素替代剂、淀粉样蛋 白降低剂、聚集抑制剂、螯合剂及免疫调节剂。
16. 如权利要求1至6中任一项权利要求所述的组合物、如权利要求7-14中任一项权 利要求所述的疫苗、或如权利要求15所述的组合，其用于治疗。
17. 如权利要求1至6中任一项权利要求所述的组合物、如权利要求7-14中任一项权 利要求所述的疫苗、或如权利要求15所述的组合，其用于治疗和/或预防痴呆、阿尔茨海默 症、与阿尔茨海默症相关的痴呆或与其相关的病症。
18. 如权利要求1至6中任一项权利要求所述的组合物、如权利要求7-14中任一项权 利要求所述的疫苗、或如权利要求15所述的组合在制备用于治疗和/或预防痴呆、阿尔茨 海默症、与阿尔茨海默症相关的痴呆或与其相关的病症的药物中的用途。
19. 如权利要求1至6中任一项权利要求所述的组合物、如权利要求7-14中任一项权 利要求所述的疫苗、或如权利要求15所述的组合在制备用于治疗处于产生痴呆、阿尔茨海 默症、与阿尔茨海默症相关的痴呆或与其相关的病症的风险中的个体的药物中的用途。
20. 如权利要求16-19中任一项权利要求所述的用途，其中所述组合物、疫苗或组合以 约6至约12周的间隔施用。
21. 如权利要求16-19中任一项权利要求所述的用途，其中所述组合物、疫苗或组合以 约6周的间隔施用两次或两次以上，接着以约12周的间隔施用两次或两次以上。
22. -种包含A M-6肽的组合物，其用于治疗痴呆、阿尔茨海默症、与阿尔茨海默症相 关的痴呆或与其相关的病状，其中所述组合物以约6周的间隔施用两次或两次以上，接着 以约12周的间隔施用两次或两次以上。
23. -种商业包装，其包含（a)本发明的构建体、（b)佐剂，以及（c)使用说明。
24. -种瓶、小瓶、注射器或试管，其包含如权利要求1至6中任一项权利要求所述的组 合物、如权利要求7-14中任一项权利要求所述的疫苗、或如权利要求15所述的组合。
【文档编号】A61K47/48GK104436212SQ201410789825
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2011年3月28日 优先权日:2010年3月29日
【发明者】P·乌尔里希, K·贝尔, G·因贝特, M-J·霍林格, M-E·里弗, A·格拉夫 申请人:诺华股份有限公司