取代的4‑苯基哌啶及其制备和用途的制作方法
本申请要求于2014年4月30日提交的第61/986,578号美国临时申请的优先权，其内容通过引用并入本文。
在本申请中，某些出版物在括号中引用。这些出版物的完整引用可以在权利要求之前找到。这些出版物的公开内容通过引用整体并入本申请，以便更充分地描述本发明所涉及的现有技术。
本发明由在国立卫生研究院资助的基金号NS067594和NS074476的政府支持下进行。政府对本发明有一定的权利。
背景技术：
年龄相关性黄斑变性(AMD)是发达国家中失明的主要原因。据估计，全世界有6290万人患有最普遍的萎缩性(干性)AMD；其中800万是美国人。由于预期寿命延长和目前的人口增长，到2020年，这一数字预计将增长三倍。目前没有FDA批准的干性AMD疗法。考虑到治疗的缺乏和高流行性，用于干性AMD的药物的开发是非常重要的。临床上，萎缩性AMD代表缓慢进展的神经退行性病症，其中专门的神经元(视杆细胞和视锥细胞)在称为黄斑的视网膜的中心部分死亡(1)。组织病理学和临床成像研究表明，干性AMD中的光感受器变性是由位于光感受器下方并为这些光感受神经元细胞提供关键的代谢支持的视网膜色素上皮(RPE)中的异常情况所引发。实验和临床数据表明，RPE中细胞毒性自发荧光的脂质-蛋白-类视黄醇聚集体(脂褐质)的过度累积是干性AMD的主要触发因素(2-9)。除了AMD之外，脂褐素的显著累积是斯特格氏病(STGD)的标志，斯特格氏病是遗传性青少年期发作的黄斑变性。RPE脂褐质的主要细胞毒性成分是双视黄酸吡啶鎓A2E(图1)。其他细胞毒性的双视黄酸类为isoA2E、atRAL di-PE和A2-DHP-PE(40,41)。A2E和其他脂褐质双视黄酸类(例如A2-DHP-PE，即A2-二氢吡啶-磷脂酰乙醇胺，atRALdi-PE，即全反式视黄醛二聚体-磷脂酰乙醇胺)的形成在感光细胞中以非酶促方式开始，并被认为是正常运行的视循环的副产物。
A2E是全反式视黄醛与磷脂酰乙醇胺的缩合产物，并且如图4所示，可以被认为是正常运行的视循环的副产物，所述缩合以非酶促的方式发生于视网膜中(10)。光诱导的11-顺式视黄醛向其全反式形式的异构化是介导光感知的信号传导级联反应的第一步。视循环是暴光后一连串的再生视色素(与视蛋白结合的11-顺式视黄醛)的生化反应。
由于细胞毒性双视黄酸类在正常运行的视循环过程中形成，所以对视循环的部分药理学抑制可能提供一种治疗干性AMD和以脂褐质过度累积为特征的其他疾病的策略(25-27,40,41)。
技术实现要素：
本发明提供了一种具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
R1、R2、R3、R4和R5各自独立地为H、卤素、CF3或C1-C4烷基，
其中R1、R2、R3、R4或R5中的两个或更多个不是H；
R6是H、OH或卤素；且
B是取代或未取代的杂双环，
其中当R1为CF3、R2为H、R3为F、R4为H、且R5为H时，或当R1为H、R2为CF3、R3为H、R4为CF3、且R5为H时，或当R1为Cl、R2为H、R3为H、R4为F、且R5为H时，或当R1为CF3、R2为H、R3为F、R4为H、且R5为H时，或当R1为CF3、R2为F、R3为H、R4为H、且R5为H时，或当R1为Cl、R2为F、R3为H、R4为H、且R5为H时，则B不是
附图说明
图1为一种视网膜脂褐质的细胞毒性成分—双视黄酸A2E的结构。
图2为一种视网膜脂褐质的细胞毒性成分—双视黄酸atRAL di-PE(全反式视黄醛二聚体-磷脂酰乙醇胺)的结构。R1和R2是指各种脂肪酸组分。
图3为一种视网膜脂褐质的细胞毒性成分—双视黄酸A2-DHP-PE的结构。
图4为视循环和A2E的生物合成。当全反式视黄醛的一部分逃离视循环(黄色框)并与磷脂酰乙醇胺进行非酶促反应形成A2E前体(即A2-PE)时，A2E生物合成开始。该循环是通过将血清视黄醇摄取到RPE(灰色框)得以保持。
图5为RBP4-TTR-视黄醇复合物的三维结构。四聚体的TTR显示为蓝色、浅蓝色、绿色和黄色(大的画框区域)。RBP显示为红色(未画框区域)，视黄醇显示为灰色(小的画框区域)(28)。
图6为一种视黄酸RBP4拮抗剂芬维A胺(即[N-(4-羟基-苯基)视黄酰胺，4HRP])的结构。
图7为用于表征破坏视黄醇诱导的RBP4-TTR相互作用的RBP4拮抗剂的基于HTRF的测定形式示意图。
图8为化合物81对Abca4-/-小鼠眼睛中双视黄酸累积的治疗效果(P＝0.006；非成对t-检验)。
图9为化合物81处理的和溶媒处理的Abca4-/-小鼠中的血清RBP4水平。
具体实施方式
本发明提供了具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
R1、R2、R3、R4和R5各自独立地为H、卤素、CF3或C1-C4烷基，
其中R1、R2、R3、R4或R5中的两个或更多个不是H；
R6是H、OH或卤素；且
B是取代或未取代的杂双环，
其中当R1为CF3、R2为H、R3为F、R4为H、且R5为H时，或当R1为H、R2为CF3、R3为H、R4为CF3、且R5为H时，或当R1为Cl、R2为H、R3为H、R4为F、且R5为H时，或当R1为CF3、R2为H、R3为F、R4为H、且R5为H时，或当R1为CF3、R2为F、R3为H、R4为H、且R5为H时，或当R1为Cl、R2为F、R3为H、R4为H、且R5为H时，则B不是
本发明还提供了具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
R1、R2、R3、R4和R5各自独立地为H、卤素、CF3或C1-C4烷基，
其中R1、R2、R3、R4或R5中的两个或更多个不是H；
R6是H、OH或卤素；且
B是取代或未取代的杂双环，
其中当R1为CF3、R2为H、R3为F、R4为H、且R5为H时，或当R1为H、R2为CF3、R3为H、R4为CF3、且R5为H时，或当R1为Cl、R2为H、R3为H、R4为F、且R5为H时，或当R1为CF3、R2为H、R3为F、R4为H、且R5为H时，或当R1为CF3、R2为F、R3为H、R4为H、且R5为H时，或当R1为Cl、R2为F、R3为H、R4为H、且R5为H时，则B不是
在一些实施方式中，所述化合物
其中当R1为CF3、R2为H、R3为F、R4为H、且R5为H时，或当R1为H、R2为CF3、R3为H、R4为CF3、且R5为H时，或当R1为Cl、R2为H、R3为H、R4为F、且R5为H时，或当R1为CF3、R2为H、R3为F、R4为H、且R5为H时，或当R1为CF3、R2为F、R3为H、R4为H、且R5为H时，或当R1为Cl、R2为F、R3为H、R4为H、且R5为H时，则B不是
在一些实施方式中，所述化合物或其药学上可接受的盐
其中当R1为CF3、R2为H、R3为F、R4为H、且R5为H时，或当R1为H、R2为CF3、R3为H、R4为CF3、且R5为H时，或当R1为Cl、R2为H、R3为H、R4为F、且R5为H时，或当R1为CF3、R2为H、R3为F、R4为H、且R5为H时，或当R1为CF3、R2为F、R3为H、R4为H、且R5为H时，或当R1为Cl、R2为F、R3为H、R4为H、且R5为H时，则B不是
在一些实施方式中，所述化合物具有以下结构：
在一些实施方式中，所述化合物中
R1、R2、R3、R4、R5和R6各自独立地为H、Cl、F或CF3。
在一些实施方式中，所述化合物中
R1为CF3，R2为F，R3为F，R4为H，且R5为H；或
R1为CF3，R2为F，R3为H，R4为H，且R5为H；或
R1为CF3，R2为F，R3为H，R4为F，且R5为H；或
R1为CF3，R2为H，R3为F，R4为F，且R5为H；或
R1为CF3，R2为H，R3为H，R4为H，且R5为F；或
R1为CF3，R2为H，R3为F，R4为H，且R5为H；或
R1为CF3，R2为H，R3为H，R4为Cl，且R5为H；或
R1为CF3，R2为Cl，R3为H，R4为H，且R5为H；或
R1为H，R2为CF3，R3为H，R4为CF3，且R5为H；或
R1为Cl，R2为H，R3为H，R4为F，且R5为H；或
R1为Cl，R2为F，R3为H，R4为H，且R5为H。
在一些实施方式中，所述化合物中B具有以下的结构：
其中
α、β、χ和δ各自独立地不存在或存在，并且当存在时每个都是键；
X是C或N；
Z1是N；
Z2是N或NR7，
其中R7是H、C1-C4烷基或氧杂环丁烷；
Q是取代或未取代的5、6或7元环结构。
在一些实施方式中，所述化合物中B具有以下结构：
其中当α存在时，那么Z1和Z2为N，X为N，β存在，且χ和δ不存在；以及
当α不存在时，那么Z1为N，Z2为N-R7，X为C，β和δ存在，且χ不存在。
在一些实施方式中，所述化合物中B具有以下结构：
其中
n是0-2的整数；
α、β、χ、δ和各自独立地不存在或存在，并且当存在时各自是键；
Z1是N；
Z2是N或N-R7，
其中R7是H、C1-C10烷基或氧杂环丁烷；
X是C或N；和
Y1、Y2、Y3和每次出现的Y4各自独立地为CR8、CH2或N-R9，
其中
R8是H、卤素、OCH3、CN或CF3；以及
R9是H、CN、氧杂环丁烷、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、(C1-C4烷基)(C3-C6环烷基)、(C1-C6烷基)-OCH3、(C1-C6烷基)-CF3、C(O)-(C1-C6烷基)、C(O)2-(C1-C6烷基)、C(O)-NH2、C(O)NH-(C1-C6烷基)、C(O)-(C6芳基)、C(O)-(C6杂芳基)、C(O)-吡咯烷、C(O)-哌啶、C(O)-哌嗪、(C1-C6烷基)-CO2H、(C1-C6烷基)-CO2(C1-C6烷基)或SO2-(C1-C6烷基)。
在一些实施方式中，所述化合物中B具有以下结构：
其中
n为0；
R7是H、C1-C4烷基或氧杂环丁烷；
Y1和Y3各自为CH2；以及
Y2是N-R9，
其中
R9是H、CN、氧杂环丁烷、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、(C1-C4烷基)(C3-C6环烷基)、(C1-C6烷基)-OCH3、(C1-C6烷基)-CF3、C(O)-(C1-C6烷基)、C(O)2-(C1-C6烷基)、C(O)-NH2、C(O)NH-(C1-C6烷基)、C(O)-(C6芳基)、C(O)-(C6杂芳基)、C(O)-吡咯烷、C(O)-哌啶、C(O)-哌嗪、(C1-C6烷基)-CO2H、(C1-C6烷基)-CO2(C1-C6烷基)或SO2-(C1-C6烷基)。
在一些实施方式中，所述化合物中B具有以下结构：
其中
n为1；
R7是H、C1-C4烷基或氧杂环丁烷；
Y1、Y2和Y4各自为CH2；且
Y3是N-R9，
其中
R9是H、CN、氧杂环丁烷、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、(C1-C4烷基)(C3-C6环烷基)、(C1-C6烷基)-OCH3、(C1-C6烷基)-CF3、C(O)-(C1-C6烷基)、C(O)2-(C1-C6烷基)、C(O)-NH2、C(O)NH-(C1-C6烷基)、C(O)-(C6芳基)、C(O)-(C6杂芳基)、C(O)-吡咯烷、C(O)-哌啶、C(O)-哌嗪、(C1-C6烷基)-CO2H、(C1-C6烷基)-CO2(C1-C6烷基)或SO2-(C1-C6烷基)。
在一些实施方式中，所述化合物中B具有以下结构：
其中
n为1；
R7是H、C1-C4烷基或氧杂环丁烷；
Y1、Y3和Y4各自为CH2；以及
Y2是N-R9，
其中
R9是H、CN、氧杂环丁烷、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、(C1-C4烷基)(C3-C6环烷基)、(C1-C6烷基)-OCH3、(C1-C6烷基)-CF3、C(O)-(C1-C6烷基)、C(O)2-(C1-C6烷基)、C(O)-NH2、C(O)NH-(C1-C6烷基)、C(O)-(C6芳基)、C(O)-(C6杂芳基)、C(O)-吡咯烷、C(O)-哌啶、C(O)-哌嗪、(C1-C6烷基)-CO2H、(C1-C6烷基)-CO2(C1-C6烷基)或SO2-(C1-C6烷基)。
在一些实施方式中，所述化合物中B具有以下结构：
在一些实施方式中，所述化合物中
R9为H、CN、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、t-Bu、CH2CH(CH3)2、CH2C(CH3)3、CH2CF3、CH2CH2CF3、CH2OCH3、CH2CH2OCH3、
在一些实施方式中，所述化合物中
R9为SO2-CH3、C(O)-CH3、C(O)-CH2CH3、C(O)-CH2CH2CH3、C(O)-CH(CH3)2、C(O)-CH2CH(CH3)2、C(O)-t-Bu、C(O)-OCH3,C(O)-NHCH3、
在一些实施方式中，所述化合物中
R7为H、CH3、CH2CH3、CH(CH3)2或
在一些实施方式中，所述化合物中B具有以下结构：
其中
Y1、Y2、Y3和Y4各自独立地为CR8或N，
其中每个R8独立地为H、卤素、OCH3、CN或CF3。
在一些实施方式中，所述化合物中B具有以下结构：
在一些实施方式中，所述化合物中每个R8为CN或OCH3。
在一些实施方式中，所述化合物下述结构：
或所述化合物的药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，所述化合物具有以下结构：
或所述化合物的药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，所述化合物具有以下结构：
或所述化合物的药学上可接受的盐。
本发明提供了包含任何一种上述化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明提供了一种治疗患有以视网膜过量累积脂褐质为特征的疾病的受试者的方法，所述方法包括给予所述受试者有效量的任何一种上述化合物。
本发明提供了包含本发明的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明提供了一种治疗患有以视网膜中过量累积脂褐质为特征的疾病的受试者的方法，所述方法包括给予所述受试者有效量的本发明化合物或本发明的组合物。
在一些实施方案中，所述疾病的进一步特征在于双视黄酸介导的黄斑变性。
在一些实施方案中，化合物的量为有效降低受试者的RBP4的血清浓度。
在一些实施方案中，化合物的量可以有效降低受试者的脂褐质中双视黄酸的视网膜浓度。
在一些实施方案中，双视黄酸是A2E。在一些实施方案中，双视黄酸是isoA2E。在一些实施方案中，双视黄酸是A2-DHP-PE。在一些实施方案中，双视黄酸是atRALdi-PE。
在一些实施方案中，以视网膜中过量累积脂褐质为特征的疾病是年龄相关性黄斑变性。
在一些实施方案中，以视网膜中过量累积脂褐质为特征的疾病是干性(萎缩性)年龄相关性黄斑变性。
在一些实施方案中，以视网膜中过量累积脂褐质为特征的疾病是斯特格氏病(Stargardt disease)。
在一些实施方案中，以视网膜中过量累积脂褐质为特征的疾病是Best病。
在一些实施方案中，以视网膜中过量累积脂褐质为特征的疾病是成人卵黄样黄斑病变。
在一些实施方案中，以视网膜中过量累积脂褐质为特征的疾病是类似斯特格氏病的黄斑营养不良。
在一些实施方案中，受试者是哺乳动物。在一些实施方案中，哺乳动物是人。
在一些实施方案中，R9为H、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、(C1-C4烷基)-CF3、(C1-C4烷基)-OCH3、(C1-C4烷基)-卤素、SO2-(C1-C4烷基)、SO2-(C1-C4烷基)-CF3、SO2-(C1-C4烷基)-OCH3、SO2-(C1-C4烷基)-卤素、C(O)-(C1-C4烷基)、C(O)-(C1-C4烷基)-CF3、C(O)-(C1-C4烷基)-OCH3、C(O)-(C1-C4烷基)-卤素、C(O)-NH-(C1-C4烷基)、C(O)-N(C1-C4烷基)2、(C1-C4烷基)-C(O)OH、C(O)-NH2或氧杂环丁烷。
在一些实施方案中，R9为H、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、t-Bu、CH2OCH3、CH2CF3、CH2Cl、CH2F、CH2CH2OCH3、CH2CH2CF3、CH2CH2Cl、CH2CH2F或
在一些实施方案中，R9为SO2-CH3、SO2-CH2CH3、SO2-CH2CH2CH3、SO2-CH(CH3)2、SO2-CH2CH(CH3)2、SO2-t-Bu、SO2-CH2OCH3、SO2-CH2CF3、SO2-CH2Cl、SO2-CH2F、SO2-CH2CH2OCH3、SO2-CH2CH2CF3、SO2-CH2CH2Cl、SO2-CH2CH2F或
在一些实施方案中，R9为C(O)-CH3、C(O)-CH2CH3、C(O)-CH2CH2CH3、C(O)-CH(CH3)2、C(O)-CH2CH(CH3)2、C(O)-t-Bu、C(O)-CH2OCH3、C(O)-CH2CF3、C(O)-CH2Cl、C(O)-CH2F、C(O)-CH2CH2OCH3、C(O)-CH2CH2CF3、C(O)-CH2CH2Cl、C(O)-CH2CH2F、
在一些实施方案中，所述化合物具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，B具有以下结构：
本发明提供了包含本发明化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明提供了用于治疗患有以视网膜中过量累积脂褐质为特征的疾病的哺乳动物的方法，其包括给哺乳动物施用有效量的本发明化合物或本发明的组合物。
在所述方法的一些实施方式中，其中所述疾病的进一步特征在于双视黄酸介导的黄斑变性。
在该方法的一些实施方案中，其中所述化合物的量可以有效降低哺乳动物中RBP4的血清浓度。
在所述方法的一些实施方案中，其中所述化合物的量可以有效降低哺乳动物脂褐质中双视黄酸的视网膜浓度。
在该方法的一些实施方案中，其中双视黄酸是A2E。在该方法的一些实施方案中，其中双视黄酸是isoA2E。在该方法的一些实施方案中，其中双视黄酸是A2-DHP-PE。在该方法的一些实施方案中，其中双视黄酸是atRAL di-PE。
在该方法的一些实施方案中，其中所述以视网膜中过量累积脂褐质为特征的疾病是年龄相关性黄斑变性。
在该方法的一些实施方案中，其中所述以视网膜中过量累积脂褐质为特征的疾病是干性(萎缩性)年龄相关性黄斑变性。
在该方法的一些实施方案中，其中所述以视网膜中过量累积脂褐质为特征的疾病是斯特格氏病。
在该方法的一些实施方案中，其中所述以视网膜中过量累积脂褐质为特征的疾病是Best病。
在该方法的一些实施方案中，其中所述以视网膜中过量累积脂褐质为特征的疾病是成人卵黄样黄斑病变。
在该方法的一些实施方案中，其中所述以视网膜中过量累积脂褐质为特征的疾病是类似斯特格氏病的黄斑营养不良。
在一些实施方案中，双视黄酸介导的黄斑变性是年龄相关性黄斑变性或斯特格氏病。
在一些实施方案中，双视黄酸介导的黄斑变性是年龄相关性黄斑变性。
在一些实施方案中，双视黄酸介导的黄斑变性是干性(萎缩性)年龄相关性黄斑变性。
在一些实施方案中，双视黄酸介导的黄斑变性是斯特格氏病。
在一些实施方案中，双视黄酸介导的黄斑变性是Best病。
在一些实施方案中，双视黄酸介导的黄斑变性是成人卵黄样黄斑病变。
在一些实施方案中，双视黄酸介导的黄斑变性是类似斯特格氏病的黄斑营养不良。
双视黄酸介导的黄斑变性可以包括脂褐质沉积物在视网膜色素上皮中的累积。
本文所用的“双视黄酸脂褐质”是含有细胞毒性双视黄酸的脂褐质。细胞毒性双视黄酸包括但不限于A2E、isoA2E、atRALdi-PE和A2-DHP-PE(图1、2和3)。
本发明提供了包含3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基部分的非视黄醇哌啶化合物。该特征显著增加了效力并改善了分子的药代动力学特性。
本发明提供了包含3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基部分的非视黄醇哌啶化合物。该特征显著增加了效力并改善了分子的药代动力学特性。
本发明提供了包含二取代或三取代的苯基部分的非视黄醇哌啶化合物。该特征显著增加了效力并改善了分子的药代动力学特性。
除非另有说明，当本发明化合物的结构包括不对称碳原子时，应当理解该化合物以外消旋体、外消旋混合物和分离的单一对映体形式存在。这些化合物的所有这些异构形式明确地包括在本发明中。除非另有说明，每个立体碳可以是R或S构型。因此应当理解，除非另有说明，由这种不对称性产生的异构体(例如，所有对映异构体和非对映异构体)包括在本发明的范围内。这样的异构体可以通过经典的分离技术和通过立体化学控制的合成(例如"Enantiomers,Racemates and Resolutions",J.Jacques,A.Collet,S.Wilen,Pub.John Wiley&Sons,NY,1981中所述的那些技术)以基本上纯的形式获得。例如，可以通过手性柱上的制备型色谱法进行解析。
本发明还旨在包括存在于本文公开的化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但质量数不同的那些原子。举例来说，但不用于限制，氢的同位素包括氚和氘。碳的同位素包括C-13和C-14。
应当注意，当遍及本申请的结构中的碳的任何符号在没有进一步注释的情况下使用时，其旨在表示碳的所有同位素，例如12C、13C或14C。此外，任何含有13C或14C的化合物可以具体地具有本文公开的任何化合物的结构。
还应注意的是，当遍及本申请的结构中的氢的任何符号在没有进一步注释的情况下使用时，旨在表示氢的所有同位素，例如1H、2H或3H。此外，任何含有2H或3H的化合物可以具体地具有本文公开的任何化合物的结构。
同位素标记的化合物通常可以使用合适的同位素标记试剂代替所用的非标记的试剂并通过本领域技术人员已知的常规技术来制备。
术语“取代”、“取代的”和“取代基”是指如上所述的官能团，其中包含的连接到氢原子的一个或多个键被连接到非氢原子或非碳原子的键所代替，而条件是保持正常效价，并且所述取代产生稳定的化合物。被取代的基团还包括其中与碳原子或氢原子连接的一个或多个键被一个或多个连接到杂原子的键(包括双键或三键)代替的基团。取代基的实例包括上述官能团和卤素(即F、Cl、Br和I)、烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基和三氟甲基)、羟基、烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基和异丙氧基)、芳氧基(例如苯氧基)、芳基烷氧基(例如苄氧基(即苯基甲氧基)和对三氟甲基苄氧基(即4-三氟甲基苯基甲氧基)、杂芳氧基、磺酰基(例如三氟甲磺酰基、甲磺酰基和对甲苯磺酰基)、硝基、亚硝酰基、巯基、硫烷基(例如甲基硫烷基、乙基硫烷基和丙基硫烷基)、氰基、氨基(例如氨基、甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基和二乙基氨基)和羧基。当公开或要求保护多个取代基部分时，取代的化合物可以独立地被一个或多个公开的或要求保护的取代基部分单取代或多取代。独立取代的是指(两个或更多个)取代基可以相同或不同。
在本发明方法所使用的化合物中，除非另有具体定义，取代基可以是取代的或未取代的。
在本发明方法所使用的化合物中，烷基、杂烷基、单环、双环、芳基、杂芳基和杂环基团可以通过采用可供选择的非氢基团代替一个或多个氢原子而被进一步取代。这些可供选择的非氢基团包括但不限于卤素、羟基、巯基、氨基、羧基、氰基和氨基甲酰基。
应当理解，本领域普通技术人员可以选择本发明方法所使用的化合物上的取代基和取代模式，以提供化学上稳定的且可以由易得的起始材料通过本领域已知的技术易于合成的化合物。如果取代基本身被多于一个基团取代，应当理解只要能得到稳定的结构，这些多个基团可以在相同的碳上或不同的碳上。
在选择用于本发明方法中的化合物时，本领域普通技术人员应认识到，根据公知的化学结构连接原则来选择各种取代基，即R1、R2等。
本文中所用的“烷基”旨在包括具有指定碳原子数的支链和直链饱和脂肪族烃基。因此，如在“C1-Cn烷基”中的C1-Cn被定义为包括具有1、2...、n-1或n个成直线或分支排列的碳原子，具体包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、异丙基、异丁基、仲丁基等。一个具体实施方式可以为C1-C12烷基、C2-C12烷基、C3-C12烷基、C4-C12烷基等。一个具体实施方式可以为C1-C8烷基、C2-C8烷基、C3-C8烷基、C4-C8烷基等。“烷氧基”表示通过氧桥连接的上述烷基。
术语“烯基”是指含有至少一个碳-碳双键和至多可能存在的最大数目的非芳香碳碳双键的直链或支链非芳香烃基。因此，C2-Cn烯基被定义为包括具有1、2...、n-1或n个碳的基团。例如，C2-C6烯基的意思是分别具有2、3、4、5或6个碳原子以及至少一个碳-碳双键和例如在C6烯基的情况下至多3个碳-碳双键的烯基。烯基包括乙烯基、丙烯基、丁烯基和环己烯基。如以上关于烷基的部分所述，烯基的直链、支链或环状部分可能含有双键，并且如果指明为取代的烯基，则烯基的直链、支链或环状部分可能被取代。一个实施方式可以为C2-C12烯基或C2-C8烯基。
术语“炔基”是指含有至少一个碳-碳三键和至多可能存在的最大数目的非芳香碳碳三键的直链或支链烃基。因此，C2-Cn炔基被定义为包括具有1、2...n-1或n个碳的基团。例如，C2-C6炔基的意思是具有2或3个碳原子和1个碳-碳三键、或具有4或5个碳原子和至多2个碳-碳三键、或具有6个碳原子和至多3个碳-碳三键的炔基。炔基包括乙炔基、丙炔基和丁炔基。如以上关于烷基的部分所述的，炔基的直链或支链部分可能含有三键，并且如果指明为取代的炔基，则炔基的直链或支链部分可能被取代。一个实施方式可以为C2-C12炔基或C3-C8炔基。
烷基可以是未取代的或被一个或多个取代基取代，所述取代基包括但不限于卤素、烷氧基、烷硫基、三氟甲基、二氟甲基、甲氧基和羟基。
本文所用的“C1-C4烷基”包括支链和直链C1-C4烷基。
本文所用的“杂烷基”包括在主链或支链中具有至少1个杂原子的支链和直链饱和脂肪族烃基。
本文所用的“环烷基”包括三至八个总碳原子或这个范围内的任何数目的碳原子的烷烃环(即环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基)。
本文所用的“杂环烷基”是指含有1-4个选自O、N和S的杂原子的5-10元非芳香环，并且包括双环基团。因此，“杂环基”包括但不限于以下基团：咪唑基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢吡喃基、二氢哌啶基、四氢噻吩基等。如果杂环含有氮，则应理解其相应的N-氧化物也包括在该定义中。
如本文所用，“芳基”旨在表示在每个环中至多10个原子的任何稳定的单环、双环或多环碳环，其中至少一个环是芳香族的，并且可以是未取代的或取代的。这种芳基元素的实例包括但不限于：苯基、对甲苯基(4-甲基苯基)、萘基、四氢萘基、茚满基、菲基、蒽基或苊基。在芳基取代基是双环并且一个环是非芳香环的情况下，应当理解连接是通过芳香环完成的。
术语“烷基芳基”是指如上所述的烷基，其中包含的一个或多个与氢连接的键被如上所述的与芳基连接的键替代。应当理解，“烷基芳基”通过来自烷基的键与核心分子连接，并且芳基作为烷基上的取代基。芳烷基部分的实例包括但不限于苄基(苯基甲基)、对三氟甲基苄基(4-三氟甲基苯基甲基)、1-苯基乙基、2-苯基乙基、3-苯基丙基、2-苯基丙基等。
本文所用的术语“杂芳基”表示每个环中具有最多10个原子的稳定的单环、双环或在多环，其中至少一个环是芳香环且含有选自由O、N和S构成的组中的1～4个杂原子。双环芳香杂芳基包括但不限于(a)稠合到具有一个氮原子的6元芳香(不饱和)杂环的苯基、吡啶、嘧啶或哒嗪(pyridizine)环；(b)稠合到具有两个氮原子的5元或6元芳香(不饱和)杂环的苯基、吡啶、嘧啶或哒嗪环；(c)稠合到具有一个氮原子以及一个氧原子与一个硫原子二者之一的5元芳香(不饱和)杂环的苯基、吡啶、嘧啶或哒嗪环；或(d)稠合到具有选自O、N或S的一个杂原子的5元芳香(不饱和)杂环。这一定义范围之内的杂芳基包括但不限于：苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋吖基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、二氢吲哚基、吲哚基、吲嗪基(indolazinyl)、吲唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、萘吡啶基、噁二唑基、噁唑基、噁唑啉、异噁唑啉、氧杂环丁基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并吡啶基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、氮杂环丁烷基、氮杂环丙烷基、1,4-二氧己环基、六氢氮杂环庚三烯基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并噁唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、二氢异恶唑基、二氢异噻唑基、二氢噁二唑基、二氢噁唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氢氮杂环丁烷基、亚甲二氧基苯甲酰基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吖啶基、咔唑基、噌啉基、喹喔啉基、吡唑基、吲哚基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、异噁唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基、异喹啉基、噁唑基、异噁唑基、吲哚基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、四氢喹啉。在杂芳取代基是双环并且一个环是非芳香环或者不包含杂原子的情况下，应当理解，连接是分别通过芳香环或通过含杂原子的环完成的。如果杂芳基含有氮原子，应理解其相应的N-氧化物也包括在该定义中。
本文所用的“单环”包括至多10个原子的任何稳定的多环碳环，并且其可以是未取代或取代的。这种非芳香单环成分的实例包括但不限于：环丁基、环戊基、环己基和环庚基。这种芳香单环成分的实例包括但不限于苯基。本文所用的“杂单环”包括含有至少一个杂原子的任何单环。
本文所用的“双环”包括至多10个原子的稠合至多达10个原子的多环碳环的任何稳定的多环碳环，其中每个环独立地为未取代或取代的。这种非芳香双环成分的实例包括但不限于十氢萘。这种芳族双环成分的实例包括但不限于萘。本文所用的“杂双环”包括含有至少一个杂原子的任何双环。
术语“苯基”旨在表示含有六个碳的芳族六元环及其任何取代的衍生物。
术语“苄基”旨在表示直接连接到苯环的亚甲基。苄基是一个氢被苯基取代的甲基及其任何取代的衍生物。
术语“吡啶”旨在表示具有包含5个碳原子和1个氮原子的六元环的杂芳基及其任何取代的衍生物。
术语“吡唑”旨在表示具有包含三个碳原子和彼此相邻的两个氮原子的五元环的杂芳基及其任何取代的衍生物。
术语“吲哚”旨在表示具有与苯环稠合的五元环的杂芳基，其中五元环含有直接连接到苯环的1个氮原子。
术语“氧杂环丁烷”旨在表示含有三个碳原子和一个氧原子的非芳香四元环及其任何取代的衍生物。
本发明方法中使用的化合物可以通过有机合成中公知的且本领域普通技术人员熟悉的技术制备。然而，这些可能不是合成或获得所需化合物的唯一方法。
本发明的化合物可以通过Vogel’s Textbook of Practical Organic Chemistry,A.I.Vogel,A.R.Tatchell,B.S.Furnis,A.J.Hannaford,P.W.G.Smith,(Prentice Hall)5th Edition(1996)、March's Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure,Michael B.Smith,Jerry March,(Wiley-Interscience)5thEdition(2007)和其中的文献所描述的技术制备，上述资料通过引用并入本文。然而，这些可能不是合成或获得所需化合物的唯一方法。
本发明的化合物可以通过本文所述的技术制备。用于制备实施例1-103的合成方法用于制备在本文实施方案中描述的另外的哌啶化合物。
连接到本文公开的化合物的芳香环的各种R基团可以通过标准方法，例如在Advanced Organic Chemistry:Part B:Reaction and Synthesis,Francis Carey and Richard Sundberg,(Springer)5th ed.Edition.(2007)中所述的那些方法，加入到环中，上述文献内容通过引用并入本文。
本发明的另一方面包括作为药物组合物的本发明化合物。
本文所用的术语“药物活性剂”是指适于施用于受试者并在疾病的治疗、治愈、缓解、诊断或预防中提供生物活性或其他直接效果或影响受试者的结构或任何功能的任何物质或化合物。药物活性剂包括但不限于Physicians’Desk Reference(PDR Network,LLC；64th edition；November 15,2009)和“Approved Drug Products with Therapeutic Equivalence Evaluations”(U.S.Department Of Health And Human Services,30thedition,2010)中描述的物质和化合物，上述文献通过引用并入本文。具有羧酸侧基的药物活性剂可以根据本发明使用标准酯化反应和现成的且化学合成领域的普通技术人员已知的方法进行修饰。当药物活性剂不具有羧酸基团时，普通技术人员应能够设计并将羧酸基团引入药物活性剂中，只要酯化不干扰药物活性剂的生物活性或效果，随后就可以进行酯化。
本发明的化合物可以是盐的形式。本文所用的“盐”是本发明化合物的盐，其已经通过制备化合物的酸式盐或碱式盐而被改性。在用于治疗疾病的化合物的情况下，所述盐是药学上可接受的。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基(例如胺)的无机酸盐或有机酸盐、酸性残基(如苯酚)的碱金属盐或的有机盐。盐可以使用有机酸或无机酸制备。这样的酸式盐为氯化物、溴化物、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、磺酸盐、甲酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐等。酚盐是碱土金属盐、钠盐、钾盐或锂盐。在这方面，术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物与无机和有机酸或碱的相对无毒的加成盐。这些盐可以在本发明化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过使游离碱或游离酸形式的纯化的本发明化合物与合适的有机或无机酸或碱单独反应并分离由此形成的盐来制备。代表性的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘二甲酸盐(napthylate)、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐和月桂基磺酸盐等。(参见例如Berge et al.(1977)"Pharmaceutical Salts",J.Pharm.Sci.66:1-19)。
本文公开的所有化合物包括盐或药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明任何上述化合物的药学上可接受的盐或盐。
本文中所用的“治疗”是指预防、减缓、停止或逆转疾病或感染的进展。治疗也具有改善疾病或感染的一种或多种症状的意思。
本发明的化合物可以以各种形式施用，本文详述的那些形式也包括在内。采用所述化合物的治疗可以是联合疗法或辅助疗法的一个组成部分，即对需要药物的受试者或患者采用另一种用于该疾病的药物与一种或多种本发明化合物进行联合治疗，或同时给予需要药物的受试者或患者一种或多种本发明化合物和另一种用于该疾病的药物。该联合疗法可以是顺序疗法，其中首先用一种药物治疗患者，然后施用另一种药物或同时施用两种药物。根据所使用的剂型，这些药物可以通过相同的途径或通过两种或更多种不同的施用途径独立地施用。
本文所用的“药学上可接受的载体”是用于将本发明化合物递送至动物或人的药学上可接受的溶剂、悬浮剂或溶媒。载体可以是液体或固体，并且根据计划的给药方式进行选择。脂质体也是药学上可接受的载体。
在治疗中施用的化合物的剂量应根据诸如特定化疗剂的药效学特征及其施用模式和途径，接受者的年龄、性别、代谢率、吸收效率、健康和体重，症状的性质和程度，所施用的同时治疗的种类，治疗频率和所需的治疗效果的因素变化。
用于本发明方法的化合物的剂量单位可以包括单一化合物或与其他试剂的混合物。化合物可以以口服剂型给药，如片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂、酏剂、酊剂、混悬剂、糖浆剂和乳剂。化合物还可以以静脉内(推注或输注)、腹膜内、皮下或肌内形式给药，或通过例如注射、局部施用或其他方法直接引入到感染部位内或感染部位上，所有均使用药学领域普通技术人员公知的剂型。
用于本发明方法的化合物可以与合适的药物稀释剂、增量剂、赋形剂或载体(本文中统称为药学上可接受的载体)混合施用，所述药学上可接受的载体根据预期的给药形式和常规药物实践进行适当选择。该单位的形式适于口服、直肠、局部、静脉内或直接注射或肠胃外给药。化合物可以单独施用或与药学上可接受的载体混合施用。该载体可以是固体或液体，并且载体的类型通常基于所使用的给药类型来选择。活性剂可以以片剂或胶囊、作为团聚粉末的脂质体或液体形式共同给药。合适的固体载体的实例包括乳糖、蔗糖、明胶和琼脂。胶囊或片剂易于配制并且可以容易地吞咽或咀嚼；其他固体形式包括颗粒和散装粉末。片剂可以含有合适的粘结剂、润滑剂、稀释剂、崩解剂、着色剂、调味剂、流动诱导剂和熔化剂。合适的液体剂型的实例包括水、药学上可接受的油脂、醇或其他有机溶剂(包括酯)中的溶液或悬浮液，乳液，糖浆或酏剂，悬浮液、溶液和/或由非泡腾颗粒重构的悬浮液以及由泡腾颗粒重构的泡腾制剂。这种液体剂型可以含有例如合适的溶剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、稀释剂、甜味剂、增稠剂和熔化剂。口服剂型任选地含有调味剂和着色剂。肠胃外和静脉内形式还可以包括矿物质和其他材料以使所述形式与注射或所选择的递送系统的类型相容。
用于制备可用于本发明的剂型的技术和组合物描述于以下参考文献中：7Modern Pharmaceutics,Chapters 9and 10(Banker&Rhodes,Editors,1979)；Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets(Lieberman et al.,1981)；Ansel,Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms 2nd Edition(1976)；Remington's Pharmaceutical Sciences,17th ed.(Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985)；Advances in Pharmaceutical Sciences(David Ganderton,Trevor Jones,Eds.,1992)；Advances in Pharmaceutical Sciences Vol.7.(David Ganderton,Trevor Jones,James McGinity,Eds.,1995)；Aqueous Polymeric Coatings for Pharmaceutical Dosage Forms(Drugs and the Pharmaceutical Sciences,Series 36(James McGinity,Ed.,1989)；Pharmaceutical Particulate Carriers:Therapeutic Applications:Drugs and the Pharmaceutical Sciences,Vol 61(Alain Rolland,Ed.,1993)；Drug Delivery to the Gastrointestinal Tract(Ellis Horwood Books in the Biological Sciences.Series in Pharmaceutical Technology；J.G.Hardy,S.S.Davis,Clive G.Wilson,Eds.)；Modem Pharmaceutics Drugs and the Pharmaceutical Sciences,Vol 40(Gilbert S.Banker,Christopher T.Rhodes,Eds.)。所有上述出版物通过引用并入本文。
片剂可以含有合适的粘结剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、流动诱导剂和熔化剂。例如，对于片剂或胶囊剂量单位形式的口服给药，活性药物组分可以与口服、无毒、药学上可接受的惰性载体结合，例如乳糖、明胶、琼脂、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、甘露醇、山梨醇等。合适的粘结剂包括淀粉、明胶、天然糖如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶(如阿拉伯胶、黄蓍胶或海藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。
用于本发明方法的化合物也可以以脂质体递送系统的形式施用，例如小单层囊泡、大单层囊泡和多层囊泡。脂质体可以由多种磷脂形成，例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。化合物可以作为组织靶向乳剂的组分施用。
本发明方法中使用的化合物也可以偶联至作为可靶向药物载体或作为前药的可溶性聚合物。这样的聚合物包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天门冬酰胺酚(polyhydroxyethylaspartamidephenol)或用棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸。此外，化合物可以与一类用于实现药物控制释放的生物可降解聚合物偶联，例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基酰化物和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。
明胶胶囊可以含有活性成分化合物和粉末状载体，例如乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。类似的稀释剂可用于制备压制片剂。片剂和胶囊都可以制成速释产品或缓释产品以使药物在数小时内连续释放。压制片剂可以具有糖衣或膜包衣以掩盖任何不愉快的味道并保护片剂免受空气的影响，或者具有肠溶包衣以在胃肠道中选择性崩解。
对于液体剂型的口服给药，口服药物组分与任何口服、无毒、药学上可接受的惰性载体如乙醇、甘油、水等组合。合适的液体剂型的实例包括水、药学上可接受的油脂、醇或其他有机溶剂(包括酯)中的溶液或悬浮液，乳液，糖浆或酏剂，悬浮液、溶液和/或由非泡腾颗粒重构的悬浮液以及由泡腾颗粒重构的泡腾制剂。这种液体剂型可以含有例如合适的溶剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、稀释剂、甜味剂、增稠剂和熔化剂。
用于口服给药的液体剂型可以含有着色剂和调味剂以增加患者的接受性。通常，水、合适的油、盐水、葡萄糖水溶液和相关的糖溶液和二醇如丙二醇或聚乙二醇是用于胃肠外溶液的合适的载体。用于肠胃外给药的溶液优选含有活性成分的水溶性盐、合适的稳定剂以及缓冲物质(如果需要)。抗氧化剂例如单独的亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸或其组合是合适的稳定剂。还使用柠檬酸及其盐和EDTA钠。此外，肠胃外溶液可以含有防腐剂，例如苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯和氯丁醇。合适的药物载体在本领域的标准参考文献Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company中进行了描述。
用于本发明方法的化合物还可以通过使用合适的鼻内媒介物以鼻内形式施用，或者使用本领域普通技术人员公知的那些形式的经皮皮肤贴剂通过经皮途径施用。为了以经皮递送系统的形式施用，在整个给药方案中，剂量施用通常是连续的而不是间断的。
肠胃外和静脉内形式还可以包括矿物质和其他材料，以使所述形式与注射类型或所选择的递送系统的类型相容。
本文公开的每个实施例被预期为适用于每个其他公开的实施例。因此，本文所述的各种要素的所有组合都在本发明的范围内。
通过参考下面的实验细节会更好地理解本发明，但是本领域技术人员应容易地理解，详细的具体实验仅仅是对权利要求中更充分地描述的本发明的说明。
实验详情
材料和方法
用于视黄醇诱导的RBP4-TTR相互作用的TR-FRET测定
所需RBP4拮抗剂的结合替代视黄醇并诱导对RBP4-TTR相互作用的阻碍，导致FRET信号的减少(图7)。在该测定中使用细菌表达的MBP-RBP4和未标记的TTR。为了用于TR-FRET测定，使用pMAL-c4x载体在Gold(DE3)pLysS大肠杆菌菌株(Stratagene)中表达麦芽糖结合蛋白(MBP)标记的人RBP4片段(氨基酸19-201)。细胞裂解后，使用配备有5ml MBP Trap HP柱的ACTA FPLC系统(GE Healthcare)从可溶性级分中纯化重组RBP4。人类未标记的TTR购自Calbiochem。使用CisBio生产的HTRF Cryptate Labeling试剂盒并根据制造商的建议直接采用Eu3+穴状化合物-NHS来标记未标记的TTR。在白色低容量384孔板(Greiner-Bio)中进行HTRF测定，最终测定体积为16μl/孔。反应缓冲液含有10mM Tris-HCl pH7.5、1mM DTT、0.05％NP-40、0.05％Prionex、6％甘油和400mM KF。每个反应含有60nM MBP-RBP4和2nM TTR-Eu以及与d2(Cisbio)缀合的26.7nM抗MBP抗体。该测定中测试化合物的滴定是在1μM视黄醇存在下进行的。所有反应在黑暗中在昏暗的红光下组装并包裹于铝箔中在+4℃孵育过夜。在SpectraMax M5e Multimode Plate Reader(Molecular Device)中测量TR-FRET信号。在337nm处激发荧光并且每孔读取两个读数：读数1是针对从Eu(K)到d2(337nm激发，668nm发射，计数延迟75微秒，计数窗口100微秒)的时间门控能量转移，读数2是针对Eu(K)时间门控荧光(337nm激发，620nm发射，计数延迟400微秒，计数窗口400微秒)。TR-FRET信号表示为荧光强度比率：Flu665/Flu620×10000。
闪烁亲近RBP4结合测定
从管状蛋白尿患者的尿中纯化的未标记的人RBP4购自Fitzgerald Industries International。使用来自Pierce的EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Biotinylatio试剂盒根据制造商的建议将未标记的人RBP4生物素化。在96孔板(OptiPlate，PerkinElmer)和SPA缓冲液(1X PBS，pH 7.4，1mM EDTA，0.1％BSA，0.5％CHAPS)中进行结合实验，最终测定体积为每孔100μl。反应混合物含有10nM 3H-视黄醇(48.7Ci/mmol；PerkinElmer)、0.3mg/孔链霉亲和素-PVT珠、50nM生物素化的RBP4和测试化合物。在20μM未标记的视黄醇存在下测定非特异性结合。在黑暗中在昏暗的红光下组装反应混合物。将板用透明胶带(TopSeal-A：96孔微板，PerkinElmer)密封，包裹在铝箔中，并使其在室温下平衡6小时，接着在+4℃下孵育过夜。使用TopCount NXT计数器(Packard Instrument Company)测量放射性计数。
制备用于合成哌啶化合物的中间体的一般方法(GP)
条件：A1)羧酸、HBTU、Et3N、DMF；A2)羧酸、EDCI、HOBt、i-Pr2NEt、DMF；A3)酰氯、Et3N、CH2Cl2。
用于羧酰胺形成的一般方法(GP-A1)：将胺I(1当量)、所需羧酸(1当量)、三乙胺(Et3N)(3当量)和2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)(1.5当量)在DMF(0.25M)中的混合物在室温下搅拌，直到通过LC-MS完成反应。将混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机提取物用H2O、盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶层析法(典型洗脱液包括己烷与EtOAc的混合物或者CH2Cl2与CH2Cl2/CH3OH/浓NH4OH的90:9:1混合物的混合物)纯化，得到所需的羧酰胺II。通过1H NMR和质量分析验证产物结构。
用于羧酰胺形成的一般方法(GP-A2)：将胺I(1当量)、所需羧酸(1当量)、N,N-二异丙基乙胺(i-Pr2NEt)(3当量)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)(1.5当量)和羟基苯并三唑(HOBt)(1.5当量)在DMF(0.25M)中的混合物在室温下搅拌，直至通过LC-MS完成反应。将混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机提取物用H2O、盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶层析法(典型洗脱液包括己烷与EtOAc的混合物或者CH2Cl2与CH2Cl2/CH3OH/浓NH4OH的90:9:1混合物的混合物)纯化，得到所需的羧酰胺II。通过1HNMR和质量分析验证产物结构。
用于羧酰胺形成的一般方法(GP-A3)：将胺I(1当量)、Et3N(3当量)和酰氯(1当量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物在环境温度下搅拌，直至通过LC-MS完成反应。将混合物用H2O、盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶层析法(典型洗脱液包括己烷与EtOAc的混合物或者CH2Cl2与CH2Cl2/CH3OH/浓NH4OH的90:9:1混合物的混合物)纯化，得到所需的羧酰胺II。通过1H NMR和质量分析验证产物结构。
制备(4-苯基哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮甲酰胺IV的一般方法
条件：B)酰氯、Et3N、CH2Cl2。
用于羧酰胺形成的一般方法(GP-B)：将胺III(1当量)、所需酰氯(1当量)和三乙胺(Et3N)(3当量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物从0℃搅拌至室温，直到通过LC-MS完成反应。将混合物用H2O稀释并用CH2Cl2萃取。将合并的有机提取物用H2O、盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶层析法(典型洗脱液包括己烷与EtOAc的混合物或者CH2Cl2与CH2Cl2/CH3OH/浓NH4OH的90:9:1混合物的混合物)纯化，得到所需的羧酰胺IV。通过1H NMR和质量分析验证产物结构。
制备(4-苯基哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮磺酰胺V的一般方法
条件：C)磺酰氯、i-Pr2NET、CH2Cl2。
用于磺酰胺形成的一般方法(GP-C)：将胺III(1当量)、所需磺酰氯(1当量)和i-Pr2NET(3当量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物从0℃搅拌至室温，直到通过LC-MS完成反应。将混合物用H2O稀释并用CH2Cl2萃取。将合并的有机提取物用H2O、盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶层析法(典型洗脱液包括己烷与EtOAc的混合物或者CH2Cl2与CH2Cl2/CH3OH/浓NH4OH的90:9:1混合物的混合物)纯化，得到所需的磺酰胺V。通过1H NMR和质量分析验证产物结构。
制备烷基化(4-苯基哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮VI的一般方法
条件：D)醛或酮、NaBH(OAc)3、CH2Cl2。
用于磺酰胺形成的一般方法(GP-D)：将胺III(1当量)、所需醛或酮(1.5当量)和HOAc(6当量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物在室温下搅拌16小时。向其中加入三乙酰氧基硼氢化钠(NaBH(OAc)3)，将混合物在室温下搅拌，直到通过LC-MS完成反应。混合物用饱和NaHCO3水溶液稀释，并用CH2Cl2萃取。将合并的有机提取物用H2O、盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶层析法(典型洗脱液包括己烷与EtOAc的混合物或者CH2Cl2与CH2Cl2/CH3OH/浓NH4OH的90:9:1混合物的混合物)纯化，得到所需的胺VI。通过1H NMR和质量分析验证产物结构。
制备(4-苯基哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮羧酰胺VIII的一般方法
条件：E)酰氯、Et3N、CH2Cl2。
用于羧酰胺形成的一般方法(GP-E)：将胺VII(1当量)、所需酰氯(1当量)和三乙胺(Et3N)(3当量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物从0℃搅拌至室温，直到通过LC-MS完成反应。将混合物用H2O稀释并用CH2Cl2萃取。将合并的有机提取物用H2O、盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶层析法(典型洗脱液包括己烷与EtOAc的混合物或者CH2Cl2与CH2Cl2/CH3OH/浓NH4OH的90:9:1混合物的混合物)纯化，得到所需的羧酰胺VIII。通过1H NMR和质量分析验证产物结构。
制备(4-苯基哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮磺酰胺IX的一般方法
条件：F)磺酰氯、i-Pr2NET、CH2Cl2。
用于磺酰胺形成的一般方法(GP-F)：将胺VII(1当量)、所需磺酰氯(1当量)和i-Pr2NET(3当量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物从0℃搅拌至室温，直到通过LC-MS完成反应。将混合物用H2O稀释并用CH2Cl2萃取。将合并的有机提取物用H2O、盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶层析法(典型洗脱液包括己烷与EtOAc的混合物或者CH2Cl2与CH2Cl2/CH3OH/浓NH4OH的90:9:1混合物的混合物)纯化，得到所需的磺酰胺IX。通过1H NMR和质量分析验证产物结构。
制备烷基化(4-苯基哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮X的一般方法
条件：G)醛或酮、NaBH(OAc)3、CH2Cl2。
用于磺酰胺形成的一般方法(GP-G)：将胺VII(1当量)、所需醛或酮(1.5当量)和HOAc(6当量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物在室温下搅拌16小时。向其中加入三乙酰氧基硼氢化钠(NaBH(OAc)3)，将混合物在室温下搅拌直到通过LC-MS完成反应。混合物用饱和NaHCO3水溶液稀释，并用CH2Cl2萃取。将合并的有机提取物用H2O、盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶层析法(典型洗脱液包括己烷与EtOAc的混合物或者CH2Cl2与CH2Cl2/CH3OH/浓NH4OH的90:9:1混合物的混合物)纯化，得到所需的胺X。通过1H NMR和质量分析验证产物结构。
制备(4-苯基哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮羧酰胺XII的一般方法
条件：H)酰氯、Et3N、CH2Cl2。
用于羧酰胺形成的一般方法(GP-H)：将胺XI(1当量)、所需酰氯(1当量)和三乙胺(Et3N)(3当量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物从0℃搅拌至室温，直到通过LC-MS完成反应。将混合物用H2O稀释并用CH2Cl2萃取。将合并的有机提取物用H2O、盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶层析法(典型洗脱液包括己烷与EtOAc的混合物或者CH2Cl2与CH2Cl2/CH3OH/浓NH4OH的90:9:1混合物的混合物)纯化，得到所需的羧酰胺XII。通过1H NMR和质量分析验证产物结构。
制备(4-苯基哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮磺酰胺XIII的一般方法
条件：I)磺酰氯、i-Pr2NET、CH2Cl2。
用于磺酰胺形成的一般方法(GP-I)：将胺XI(1当量)、所需磺酰氯(1当量)和i-Pr2NET(3当量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物从0℃搅拌至室温，直到通过LC-MS完成反应。将混合物用H2O稀释并用CH2Cl2萃取。将合并的有机提取物用H2O、盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶层析法(典型洗脱液包括己烷与EtOAc的混合物或者CH2Cl2与CH2Cl2/CH3OH/浓NH4OH的90:9:1混合物的混合物)纯化，得到所需的磺酰胺XIII。通过1H NMR和质量分析验证产物结构。
制备烷基化(4-苯基哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮XIV
条件：J)醛或酮、NaBH(OAc)3、CH2Cl2。
用于磺酰胺形成的一般方法(GP-J)：将胺XI(1当量)、所需醛或酮(1.5当量)和HOAc(6当量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物在室温下搅拌16小时。向其中加入三乙酰氧基硼氢化钠(NaBH(OAc)3)，将混合物在室温下搅拌，直到通过LC-MS完成反应。混合物用饱和NaHCO3水溶液稀释，并用CH2Cl2萃取。将合并的有机提取物用H2O、盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶层析法(典型洗脱液包括己烷与EtOAc的混合物或者CH2Cl2与CH2Cl2/CH3OH/浓NH4OH的90:9:1混合物的混合物)纯化，得到所需的胺XIV。通过1H NMR和质量分析验证产物结构。
4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(5)的制备
步骤A：将4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(1,1.0g,5.02mmol)在THF(30mL)中的溶液冷却至-78℃。在30分钟内滴加LiHMDS(1.0M的THF溶液，6.52mL)。将反应在-78℃下搅拌1小时，然后在30分钟内滴加N-苯基双(三氟甲烷磺酰亚胺)(2.52g,7.05mmol)在THF(5.0mL)中的溶液。将混合物在0℃下搅拌3小时，然后在减压下浓缩。将残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置，24g Redisep柱，0％-100％EtOAc的己烷溶液)得到浅黄色油状物4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2)(1.50g,90％)：1H NMR(300MHz,CDCl3)5.75(br s,1H),4.05–4.02(m,2H),3.64–3.60(m,2H),2.44–2.42(m,2H),1.46(s,9H)。
步骤B：将DME(120mL)中4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2,3.50g,10.6mmol)、3-氟-(2-三氟甲基)苯基硼酸(2.19g,10.6mmol)、Pd(PPh3)4(1.22g,1.06mmol)和2M Na2CO3(62mL)的混合物加热至80℃并保持6小时。将混合物冷却至环境温度，并用5％LiCl水溶液(100mL)稀释。混合物用EtOAc(3×50mL)萃取，合并的有机提取物用盐水(2×50mL)洗涤，并减压浓缩。将残余物在CH2Cl2(100mL)中稀释，并通过300mL硅胶塞，用10％EtOAc的己烷溶液(800mL)洗脱。将所得滤液减压浓缩，并在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置，80gRedisep柱，0％至50％EtOAc的己烷溶液)得到浅黄色油状物4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(3)(2.39g,69％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)7.75–7.61(m,1H),7.49–7.36(m,1H),7.17(d,J＝7.8Hz,1H),5.63–5.54(m,1H),3.97–3.86(m,2H),3.57–3.45(m,2H),2.31–2.18(m,2H),1.42(s,9H)。
步骤C：将EtOH(100mL)中4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(3,4.7g,13.6mmol)和10％Pd/C(1.0g)的混合物在H2(30psi)气氛中、于环境温度下放置18小时。将混合物通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到透明油状物4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4)(4.80g,>99％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)7.72–7.60(m,1H),7.46(d,J＝8.1Hz,1H),7.30(dd,J＝12.3,8.1Hz,1H),4.18–4.00(m,2H),3.11–2.95(m,1H),2.92–2.64(m,2H),1.76–1.51(m,4H),1.42(s,9H)。
步骤D：向4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4,4.70g,13.6mmol)的CH2Cl2(40mL)溶液中加入2N HCl(2.0M的Et2O溶液,40mL)。将混合物在环境温度下搅拌18小时，并用Et2O(100mL)稀释。通过过滤收集产生的沉淀得到白色粉末4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基哌啶盐酸盐(5,3.69g,96％)：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)9.09–8.80(m,2H),7.83–7.70(m,1H),7.44–7.29(m,2H),3.42–3.31(m,2H),3.29–3.15(m,1H),3.14–2.95(m,2H),2.11–1.91(m,2H),1.89,1.76(m,2H)；ESI MS m/z 248[M+H]+。
4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶(8)的制备
步骤A：将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(6,57.4g,185mmol)、1-溴-3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯(48.5g,185mmol)、Pd(PPh3)4(21.5g,18.5mmol)和2M的Na2CO3(150mL)在DME(500mL)中的混合物加热至80℃保持16小时。将混合物冷却至环境温度，并用5％LiCl水溶液(100mL)稀释。将混合物用EtOAc(3×200mL)萃取，合并的有机提取物用盐水(2×200mL)洗涤并减压浓缩。将残余物在CH2Cl2(100mL)中稀释，并通过300mL硅胶塞，采用10％EtOAc的己烷溶液(800mL)洗脱。将所得滤液减压浓缩，并在硅胶上层析(IscoCombiFlash Rf装置，3×330g Redisep柱，0％至50％EtOAc的己烷溶液)得到白色固体4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(7)(59.0g,92％)：1H NMR(300MHz,CDCl3).7.34–7.28(m,1H),6.93(m,1H),5.55(br,1H),4.01(br,2H),3.60(m,2H),2.30(m,2H),1.50(s,9H)；MS(ESI+)m/z 308[M+H–C4H8]+。
步骤B：将4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(7,59.0g,162.3mmol)和10％Pd/C(5.0g)在EtOH(200mL)中的混合物在H2(30psi)气氛中环境温度下放置72小时。将混合物通过硅藻土过滤，滤液在减压下浓缩得到白色固体4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8)(57.9g,97％)：1H NMR(300MHz,CDCl3).7.36–7.28(m,1H),7.12(m,1H),4.24(br,2H),3.06(m,1H),2.80(m,2H),1.78–1.52(m,4H),1.48(s,9H)；MS(ESI+)m/z 310[M+H–C4H8]+。
4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(11)的制备
步骤A：将4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2,1.10g,3.32mmol)、5-氟-(2-三氟甲基)苯基硼酸(0.69g,3.32mmol)、Pd(PPh3)4(0.384g,0.332mmol)和2M Na2CO3(20mL)在DME(50mL)中的混合物加热至80℃并保持6小时。冷却混合物至环境温度，通过硅藻土垫过滤除去产生的固体。将滤液用盐水溶液(4×50mL)洗涤并减压浓缩。所得残余物在硅胶上进行层析(Isco CombiFlash Rf装置，40g Redisep柱，0％至80％EtOAc的己烷溶液)得到透明油状物4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.542g,48％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6).7.80(dd,J＝8.4,6.0Hz,1H),7.42–7.27(m,2H),5.62(br s,1H),3.97–3.87(m,2H),3.51(t,J＝5.7Hz,2H),2.34–2.23(m,2H),1.42(s,9H)。
步骤B：将4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(9,0.542g,1.58mmol)和HCl(2N的Et2O溶液，10mL)在CH2Cl2(20mL)中的混合物在环境温度下搅拌18小时。将反应混合物用Et2O(30mL)稀释，通过过滤收集产生的沉淀得到白色固体4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(10)(0.393g,88％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).9.26–9.00(m,2H),7.84(dd,J＝8.7,5.4Hz,1H),7.46–7.36(m,1H),7.24(dd,J＝9.3,2.4Hz,1H),5.67(br s,1H),3.76–3.64(m,2H),3.27(t,J＝5.1Hz,2H),2.70–2.40(m,2H)。
步骤C：将4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(10,0.393g,1.41mmol)和PtO2(0.095mg,0.42mmol)在EtOAc(14mL)中的混合物在环境温度下并使用H2气囊通入氢气的情况下搅拌18小时。将混合物通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩并溶解在CH2Cl2(4mL)中。向该溶液中加入HCl(2N的Et2O溶液,4.0mL)，将产生的混合物在环境温度下搅拌20分钟。将所得悬浮液用Et2O(20mL)稀释，通过过滤收集固体，得到白色固体4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(11)(309mg,78％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6).8.81(br s,2H),7.80(dd,J＝9.3,6.0Hz,1H),7.39–7.26(m,2H),3.43–3.30(m,1H,与H2O重合),3.24–2.97(m,3H),2.11–1.90(m,2H),1.88–1.75(m,2H)；ESI MS m/z 248[M+H]+。
4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶盐酸盐(14)的制备
步骤A：将4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2,1.18g,3.56mmol)、2-氯-3-氟苯基硼酸(0.621g,3.56mmol)、Pd(PPh3)4(0.411g,0.356mmol)和2M Na2CO3(20mL)在DME(50mL)中的混合物在80℃加热6小时。冷却混合物至环境温度，通过硅藻土垫过滤除去产生的固体。将滤液用盐水溶液(4×50mL)洗涤并减压浓缩。将所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置，40g Redisep柱，0％至80％EtOAc的己烷溶液)，得到透明油状物4-(2-氯-3-氟苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)羧酸叔丁酯(12)(0.579g,52％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6).7.43–7.31(m,2H),7.16–7.10(m,1H),5.81–5.72(m,1H),4.03–3.93(m,2H),3.53(t,J＝5.7Hz,2H),2.41–2.31(m,2H),1.43(s,9H)。
步骤B：将4-(2-氯-3-氟苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(12,0.488g，1.41mmol)和PtO2(0.109g,0.48mmol)在EtOAc(15mL)中的混合物在环境温度下并使用H2气囊通入氢气的情况下搅拌18小时。将混合物通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩并溶于CH2Cl2(4mL)中。向该溶液中加入HCl(2N的Et2O溶液，4.0mL)，将所得混合物在环境温度下搅拌20分钟。将所得悬浮液用Et2O(20mL)稀释，通过过滤收集固体，得到透明半固体4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(13)(0.471g，95％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6)7.43–7.19(m,3H),4.17–4.01(m,2H),3.20–3.03(m,1H),2.95–2.68(m,2H),1.79–1.65(m,2H),1.58–1.45(m,2H),1.41(s,9H)。
步骤C：在N2气氛下，向4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(13,0.520g，1.66mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中加入HCl(2N的Et2O溶液,10mL)，将溶液在环境温度下搅拌18小时。用Et2O(20mL)稀释反应混合物。通过过滤收集产生的沉淀并用Et2O洗涤，得到白色固体4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶盐酸盐(14)(309mg,74％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).8.81–8.55(m,2H),7.47–7.37(m,1H),7.36–7.27(m,1H),7.21–7.13(m,1H),3.43–3.20,(m,3H),3.17–2.97(m,2H),2.00–1.73(m,4H)。
4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶盐酸盐(17)的制备
步骤A：将4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2,1.10g，3.3mmol)、2-氯-5-氟苯基硼酸(0.58g,3.3mmol)、Pd(PPh3)4(0.38g,0.33mmol)和2M Na2CO3(20mL)在DME(50mL)中的混合物在80℃加热6小时。冷却混合物至环境温度，通过硅藻土垫过滤除去产生的固体。将滤液用盐水溶液(4×50mL)洗涤并减压浓缩。将所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置，40g Redisep柱，0％-80％EtOAc的己烷溶液)，得到透明油状物4-(2-氯-5-氟苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)羧酸叔丁酯(15)(0.57g,55％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)7.53–7.46(m,1H),7.23–7.14(m,2H),5.79–5.74(m,1H),4.00–3.92(m,2H),3.52(t,J＝5.7Hz,2H),2.40–2.32(m,2H),1.43(s,9H)。
步骤B：向4-(2-氯-5-氟苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(15,0.573g,1.84mmol)的CH2Cl2(11mL)溶液中加入HCl(2.0N的Et2O溶液,11.0mL)，并将混合物在环境温度下搅拌18小时。将反应混合物用Et2O(30mL)稀释，通过过滤收集产生的沉淀得到白色固体4-(2-氯-5-氟苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(16)(0.267g,80％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).9.15(br s,2H),7.54(dd,J＝9.0,5.4Hz,1H),7.29–7.17(m,1H),7.14(dd,J＝9.3,3.0Hz,1H),5.84–5.79(m,1H),3.76–3.68(m,2H),3.28(t,J＝5.7Hz,2H),2.62–2.53(m,2H)；ESI MS m/z 212[M+H]+。
步骤C：将4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(16,0.310g,1.31mmol)、PtO2(0.085g,0.37mmol)和HOAc(71μL,1.31mmol)在EtOAc(12mL)中的混合物在环境温度下H2(1atm)气氛中搅拌18小时。将反应混合物用EtOAc(50mL)和CH3OH(5mL)稀释，通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩并溶于CH2Cl2(5mL)。向该溶液中加入HCl(2.0N的Et2O溶液,2.0mL)，将混合物在环境温度下搅拌5分钟。所得悬浮液用Et2O(20mL)稀释，通过过滤收集固体得到灰白色固体4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶盐酸盐(17)(215mg,48％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).8.93–8.20(m,2H),7.58–7.48(m,1H),7.22–7.12(m,1H),7.11–7.01(m,1H),3.43–3.30(m,2H),3.29–3.16(m,1H),3.14–2.89(m,2H),2.01–1.68(m,4H)；ESI MS m/z 214[M+H]+。
4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(20)的制备
步骤A：将4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2,1.10g,3.32mmol)和(3,5-双三氟甲基)苯基)硼酸(1.42g,3.32mmol)、Pd(PPh3)4(0.38g,0.33mmol)和2M Na2CO3(20mL)在DME(50mL)中的混合物在80℃加热6小时。冷却混合物至环境温度，通过硅藻土垫过滤除去产生的固体。将滤液用盐水溶液(4×50mL)洗涤并减压浓缩。将所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置，40gRedisep柱，0％至80％EtOAc的己烷溶液)，得到黄色油状物4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(18)(0.891g,68％)：1HNMR(300MHz,DMSO-d6).8.09–8.04(m,2H),8.00–7.96(m,1H),6.53–6.42(m,1H),4.09–4.00(m,2H),3.55(t,J＝5.7Hz,2H),2.60–2.52(m,2H),1.43(s,9H)。
步骤B：向4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(18,0.891g,2.25mmol)的CH2Cl2(11mL)溶液中加入HCl(2.0N的Et2O溶液，11.0mL)，并将混合物在环境温度下搅拌18小时。将反应混合物用Et2O(30mL)稀释，通过过滤收集产生的沉淀得到白色固体4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(19)(0.452g,60％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).9.34(br s,2H),8.14–8.09(m,2H),8.08–8.04(m,1H),6.59–6.53(m,1H),3.83–3.74(m,2H),3.38–3.25(m,2H),2.83–2.71(m,2H)；ESI MS m/z 296[M+H]+。
步骤C：将4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(19,452mg,1.37mmol)、甲酸铵(0.863g,13.7mmol)和10％Pd/C(0.332g)在CH3OH(10mL)中的混合物加热回流7小时。将混合物冷却至环境温度，并通过硅藻土过滤。浓缩滤液，将所得残余物在CH2Cl2(8mL)和CH3OH(2mL)中稀释。向该溶液中加入HCl(2.0N的Et2O溶液，6mL)。通过过滤收集产生的固体，得到白色固体4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(20)(376mg,82％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).9.05–8.58(m,2H),8.03–7.97(m,1H),7.95–7.87(m,2H),3.44–3.29(m,2H,与H2O重合),3.19–2.88(m,3H),2.09–1.80(m,4H)；ESI MS m/z 298[M+H]+。
4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(23)的制备
步骤A：将4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2,1.20g,3.62mmol)和6-氟-(2-三氟甲基)苯基硼酸(0.528g,2.53mmol)、Pd(PPh3)4(0.292g,0.253mmol)和2M Na2CO3(20mL)在DME(30mL)中的混合物在80℃加热4小时。将混合物冷却至环境温度，用EtOAc(50mL)稀释，并通过硅藻土垫过滤。有机滤液用饱和碳酸氢钠溶液(2×30mL)、H2O(30ml)洗涤并减压浓缩。将所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Companion装置，40g Redisep柱，0％至10％EtOAc的己烷溶液)，得到透明油状物4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(21)(0.479g,39％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.66–7.51(m,3H),5.68(s,1H),4.04–3.82(m,2H),3.67–3.39(m,2H),2.39–2.02(m,2H),1.43(s,9H)。
步骤B：将4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(21,0.479g,1.41mmol)和PtO2(0.095g,0.42mmol)在EtOAc(15mL)中的混合物以及HOAc(82μL,1.4mmol)在H2(1atm)气氛中、于环境温度下搅拌72小时。将混合物用EtOAc(50mL)稀释并经硅藻土过滤。浓缩滤液，残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Companion装置，24g Redisep柱，0％至15％EtOAc的己烷溶液)得到白色固体4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(22)(0.219g,45％)：1HNMR(300MHz,DMSO-d6).7.62–7.48(m,3H),4.15–3.94(m,1H),3.10–2.94(m,2H),2.93–2.67(m,2H),2.00–1.79(m,2H),1.67–1.55(m,2H),1.42(s,9H)。
步骤C：向4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(22,0.219g,0.63mmol)的CH2Cl2(4mL)溶液中加入2N HCl(2.0N的Et2O溶液,4mL)，并将混合物在环境温度下搅拌4小时。用Et2O(50mL)稀释反应混合物。通过过滤收集固体，得到灰白色固体4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(23)(158mg,88％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).8.82(br s,1H),8.50(br s,1H),7.66–7.48(m,3H),3.42–3.33(m,2H),3.24–2.95(m,3H),2.35–2.15(m,2H),1.87–1.74(m,2H)；ESI MS m/z 248[M+H]+。
4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(28)的制备
步骤A：将3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯胺(24,1.0g,5.07mmol)在48％HBr水溶液(8mL)和H2O(8mL)中的悬浮液在-5℃下搅拌5分钟。保持-5℃的条件下向所述悬浮液中滴加NaNO2(350mg,5.07mmol)的10mL水溶液。将所得混合物在-5℃下搅拌1小时，然后分批加入CuBr(1.09g,7.63mmol)，将所得悬浮液升温至室温。4小时后，将所得溶液用己烷(3×75mL)萃取。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将所得残余物在硅胶上进行层析(40g Redisep柱，纯己烷)得到浅黄色液体1-溴-3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯(25)(1.01g,68％)。1H NMR(300MHz,CDCl3).7.34–7.28(m,1H),6.99–6.85(m,1H)。
步骤B：将1-溴-3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯(25,0.200g,0.76mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.237g,0.76mmol)、Pd(dppf)(0.056g,0.077mmol)和2N Na2CO3(2mL,4mmol)在DME(3mL)中的混合物加热至85℃并保持5小时。将混合物用H2O(50mL)稀释，并用CH2Cl2(3×75mL)萃取。合并的有机物用Na2SO4干燥，减压浓缩，所得残余物在硅胶上层析(24g Redisep柱，0-25％EtOAc的己烷溶液)得到淡黄色油状物4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(26)(0.325g,90％)。1H NMR(300MHz,CDCl3).6.92–6.80(m,1H),6.78–6.68(m,1H),5.58(s,1H),4.06–3.94(m,2H),3.69–3.53(m,2H),2.36–1.24(m,2H),1.50(s,9H)。
步骤C：将4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(26,0.750g,2.11mmol)和10％Pd/C(1.0g)在EtOH(50mL)中的混合物在环境温度下H2气氛中搅拌24小时。将混合物通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到白色固体4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(27)(535mg,82％)。1H NMR(300MHz,CDCl3).6.97–6.85(m,1H),6.85–6.69(m,1H),4.37–4.16(m,2H),3.23–3.05(m,2H),2.89–2.71(m,2H),1.86–1.51(m,4H),1.48(s,9H)。
步骤D：将4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(27,0.590g,1.61mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液和HCl(2.0N的Et2O溶液)在环境温度下搅拌18小时。将生成的固体过滤得到白色固体4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(28)(0.309g,63％)。1H NMR(300MHz,CDCl3).7.01–6.94(m,1H),6.94–6.76(m,1H),3.82–3.60(m,2H),3.42–3.02(m,3H),2.22–1.99(m,4H)。
(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(30)的制备
步骤A：向4-(3-氟-2-三氟甲基)苯基哌啶盐酸盐(5，0.080g,0.28mmol)、6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(0.098g,0.67mmol)和二异丙基乙胺(0.15mL,0.85mmol)的DMF(5.3mL)溶液中加入EDCI(0.065mg,0.34mmol)和HOBt(46mg,0.34mmol)，将混合物在环境温度下搅拌24小时。将混合物用H2O(30mL)稀释，并用EtOAc(4×30mL)萃取。将合并的有机提取物用饱和盐水溶液(4×30mL)洗涤，并减压浓缩至干。将所得残余物在硅胶上进行层析(Isco CombiFlash Rf装置，12g Redisep柱，含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％至10％CH3OH的CH2Cl2溶液)，得到白色固体3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)羧酸叔丁酯(29)(66mg,47％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).13.20–12.78(m,1H),7.73–7.59(m,1H),7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.37–7.24(m,1H),4.90–4.60(m,2H),4.53–4.43(m,2H),3.60–3.48(m,2H),3.28–2.98(m,2H),2.85–2.69(m,1H),2.65–2.50(m,2H,与溶剂重合),1.87–1.56(m,4H),1.42(s,9H)；ESI MS m/z497[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(29，0.066g，0.13mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入HCl(2mL，2.0N的Et2O溶液)。将混合物在环境温度下搅拌18小时，用Et2O(30mL)稀释，过滤收集生成的固体得到白色固体(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(30)(0.027g,47％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6) .9.46–9.20(m,2H),7.74–7.61(m,1H),7.46(d,J＝8.1Hz,1H),7.37–7.25(m,1H),4.70–4.44(m,2H),4.34–4.22(m,2H),3.50–3.10(m,4H),2.93–2.76(m,3H),1.86–1.60(m,4H)；ESI MS m/z 468[M+H]+。
((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(32)的制备
步骤A：向4-(3-氟-2-三氟甲基)苯基哌啶盐酸盐(5，0.080g,0.28mmol)、5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(0.098g,0.67mmol)和二异丙基乙胺(0.15mL,0.85mmol)的DMF(5.3mL)溶液中加入EDCI(0.065mg,0.34mmol)和HOBt(46mg,0.34mmol)，将混合物在环境温度下搅拌24小时。将混合物用H2O(30mL)稀释，并用EtOAc(4×30mL)萃取。将合并的有机提取物用饱和盐水溶液(4×30mL)洗涤，并减压浓缩至干。将所得残余物在硅胶上进行层析(Isco CombiFlash Rf装置，12g Redisep柱，含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％至10％CH3OH的CH2Cl2溶液)，得到白色固体3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)羧酸叔丁酯(31)(0.109g,77％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).13.20–12.78(m,1H),7.73–7.59(m,1H),7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.37–7.24(m,1H),4.90–4.60(m,2H),4.53–4.43(m,2H),3.60–3.48(m,2H),3.28–2.98(m,2H),2.85–2.69(m,1H),2.65–2.50(m,2H,与溶剂重合),1.87–1.56(m,4H),1.42(s,9H)；ESI MSm/z 497[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)羧酸叔丁酯(31，0.148g,0.30mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入HCl(2mL,2.0N的Et2O溶液)。将混合物在环境温度下搅拌18小时，用Et2O(30mL)稀释，过滤收集生成的固体得到白色固体((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(32)(0.097g,75％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6) .9.46–9.20(m,2H),7.74–7.61(m,1H),7.46(d,J＝8.1Hz,1H),7.37–7.25(m,1H),4.70–4.44(m,2H),4.34–4.22(m,2H),3.50–3.10(m,4H),2.93–2.76(m,3H),1.86–1.60(m,4H)；ESI MS m/z 468[M+H]+。
((4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮三氟乙酸盐(34)的制备
步骤A：向4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(9,41.1g,113mmol)的CH2Cl2(50mL)溶液中加入TFA(50mL)。将混合物在环境温度下搅拌1小时，并减压浓缩。将残余物溶解于DMF(240mL)中，向此溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(72.4g，560mmol)，接着加入6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸(30.1g，113mmol)和HBTU(74.7g，169mmol)。将混合物在环境温度下搅拌16小时，用EtOAc(1L)稀释并用H2O(1.4L)洗涤。有机层用盐水(3×600mL)洗涤，Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将所得残余物在硅胶上层析(30-80％EtOAc的己烷溶液)得到白色固体3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(33)(41.2g，71％)：1H NMR(300MHz,CDCl3).10.47(br,1H),7.37–7.29(m,1H),7.15(m,1H),4.74(br,2H),4.60(s,2H),3.66(br,2H),3.23(m,1H),3.02(br,2H),2.72(m,2H),1.91–1.65(m,4H),1.89–1.66(m,4H),1.49(s,9H)；MS(ESI+)m/z 515[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(33，41.2g，80.0mmol)的CH2Cl2(150mL)溶液中加入TFA(70mL)。将混合物在环境温度下搅拌16小时，然后减压浓缩得到灰白色固体((4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)(40.0g,>99％)。该物质未经光谱表征直接使用。
(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮三氟乙酸盐(36)的制备
步骤A：向4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(9,41.1g,113mmol)的CH2Cl2(50mL)溶液中加入TFA(50mL)。将混合物在环境温度下搅拌1小时，并减压浓缩。将残余物溶解于DMF(240mL)中，向此溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(72.4g,560mmol)，接着加入5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸(30.1g,113mmol)和HBTU(74.7g,169mmol)。将混合物在环境温度下搅拌16小时，用EtOAc(1L)稀释并用H2O(1.4L)洗涤。有机层用盐水(3×600mL)洗涤，Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将所得残余物在硅胶上层析(30-80％EtOAc的己烷溶液)得到白色固体3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(35)(0.068g,80％)：1H NMR(300MHz,CDCl3).10.23(br,1H),7.36–7.28(m,1H),7.15(m,1H),4.86(br,2H),4.62(s,2H),3.72(br,2H),3.27–2.74(m,5H),1.90–1.64(m,4H),1.48(s,9H)；MS(ESI+)m/z 515[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(35,41.2g,80.0mmol)在CH2Cl2(150mL)中的混合物加入TFA(70mL)。将混合物在环境温度下搅拌16小时，然后减压浓缩。将残余物溶于CH2Cl2中，所得溶液用饱和NaHCO3洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将所得残余物在硅胶上层析(0-20％CH3OH的CH2Cl2溶液)得到白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)(0.052g,95％)：1H NMR(300MHz,CDCl3.).7.36–7.27(m,1H),7.14(m,1H),4.92(m,2H),4.04(s,2H),3.27–2.69(m,7H),1.89–1.65(m,4H)；MS(ESI+)m/z415[M+H]+。
(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮盐酸盐(38)的制备
步骤A：向4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(9,0.100g,0.27mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中加入TFA(2mL)。将混合物在环境温度下搅拌1小时，并减压浓缩。将残余物溶解于DMF(2mL)中，向该溶液中加入5-(叔丁氧基羰基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-甲酸(0.073g,0.28mmol)、HBTU(0.191g,0.43mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.11g,0.864mmol)。将混合物在环境温度下搅拌16小时，并用EtOAc稀释，盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。将所得残余物在硅胶上层析(0-90％EtOAc的己烷溶液)得到白色固体3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-羧酸叔丁酯(37)(0.132g,91％)：1H NMR(300MHz,CDCl3).10.39(br,1H),7.38–7.30(m,1H),7.15–7.08(m,1H),4.80–4.26(m,6H),3.26–3.20(m,2H),2.92(br,1H),1.96–1.66(m,4H),1.51(s,9H)；MS(ESI+)m/z 501[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-羧酸叔丁酯(37,0.132g,0.26mmol)和CH2Cl2(1mL)的混合物中加入TFA(1mL)。将混合物在环境温度下搅拌2小时，减压浓缩。将残余物溶于CH2Cl2中，溶液用饱和NaHCO3洗涤，Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。将所得残余物在硅胶上层析(0-20％CH3OH的CH2Cl2溶液)得到白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)(0.070g,66％)：1HNMR(500MHz,CDCl3).7.36–7.31(m,1H),7.12(m,1H),4.82(br,1H),4.38(br,1H),4.11(s,2H),4.09(s,2H),3.24(m,2H),2.89(br,1H),1.93–1.68(m,4H)；MS(ESI+)m/z401[M+H]+。
(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(40)的制备
步骤A：向4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶盐酸盐(14，0.796g,3.18mmol)、6-(叔丁氧基羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(0.935g,3.50mmol)和二异丙基乙胺(1.7mL,9.76mmol)在DMF(30mL)中的混合物中加入EDCI(0.853g,4.45mmol)和HOBt(0.601g,4.45mmol)。将混合物在环境温度下搅拌120小时，减压浓缩，所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlashRf装置，40g Redisep柱，0％至100％乙酸乙酯的己烷溶液)得到白色固体3-(4-(2-氯-3-(氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(39)(0.694g,47％)：1H NMR(300MHz,CDCl3).7.24–7.18(m,1H),7.06–7.00(m,2H),4.93–4.42(m,3H),3.67–3.65(m,2H),3.39–3.01(m,3H),2.73–2.70(m,2H),2.14–1.94(m,2H),1.71–1.68(m,2H),1.49–1.44(m,11H)；ESI MS m/z 463[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(2-氯-3-(氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(39,0.694g,1.50mmol)的CH2Cl2(7mL)溶液中加入2M HCl的Et2O(16mL)溶液。将混合物在环境温度下搅拌6小时，并用Et2O(30mL)稀释，产生的固体通过过滤收集得到灰白色固体(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(40)(0.509g,94％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).13.18(br s,1H),9.31(br s,2H),7.38–7.23(m,3H),4.69–4.65(m,2H),4.49–4.21(m,2H),3.39–3.11(m,4H),2.99–2.84(m,3H),1.94–1.54(m,4H)；ESI MS m/z 363[M+H]+。
(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(42)的制备
步骤A：向4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶盐酸盐(14，90mg,0.36mmol)、5-(叔丁氧基羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(96mg,0.36mmol)和二异丙基乙胺(0.19mL,1.08mmol)在DMF(7.8mL)中的混合物中加入EDCI(83mg,0.43mmol)和HOBt(58mg,0.43mmol)。将所得溶液在环境温度下搅拌24小时。反应混合物用H2O(30mL)稀释，通过过滤收集生成的沉淀。将得到的固体在硅胶上层析(Isco CombiFlashRf装置，12g Redisep柱，含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％至5％CH3OH的CH2Cl2溶液)得到白色泡状物3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)羧酸叔丁酯(41)(139mg,82％)：1HNMR(500MHz,DMSO-d6).13.11–12.91(m,1H),7.39–7.32(m,1H),7.30–7.22(m,2H),5.28–5.13(m,1H),4.75–4.60(m,1H),4.49–4.36(m,2H),3.65–3.53(m,2H),3.33–3.25(m,1H,与H2O重合),3.24–3.08(m,1H),2.91–276(m,1H),2.67(t,J＝5.5Hz,2H),1.91–1.75(m,2H),1.67–1.50(m,2H),1.41(s,9H)；ESI MS m/z 463[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)羧酸叔丁酯(41,125mg,0.27mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入HCl(2.0N的Et2O溶液,2mL)。将混合物在环境温度下搅拌18小时。将反应混合物用Et2O(20mL)稀释，通过过滤收集产生的固体得到白色固体(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(42,93mg,86％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).9.37(br s,2H),7.42–7.21(m,3H),5.31–5.13(m,1H),4.74–4.57(m,1H),4.25–4.14(m,2H),3.44–3.14(m,4H,与H2O重合),3.00–2.75(m,3H),1.93–1.77(m,2H),1.70–1.47(m,2H)缺少N-H吡唑；ESI MS m/z 363[M+H]+。
(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(44)的制备
步骤A：向4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(11，93mg,0.33mmol)、6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(88mg,0.33mmol)和二异丙基乙胺(0.17mL,0.99mmol)的DMF(6.0mL)溶液中加入EDCI(76mg,0.40mmol)和HOBt(54mg,0.40mmol)。将所得溶液在环境温度下搅拌24小时。将反应混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和盐水溶液(4×20mL)洗涤，并减压浓缩至干。将所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置，12g Redisep柱，含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％至5％MeOH的CH2Cl2溶液)得到白色膜状物3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(43)(110mg,67％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)13.16–12.76(m,1H),7.82–7.71(m,1H),7.62–7.50(m,1H),7.33–7.18(m,1H),4.92–4.76(m,1H),4.74–4.59(m,1H),4.53–4.39(m,2H),3.54(t,J＝5.7Hz,2H),3.21–3.01(m,2H),2.86–2.69(m,1H),2.66–2.53(m,2H),1.83–1.62(m,4H),1.42(s,9H)；ESIMS m/z 497[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(43,107mg,0.21mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入HCl(2N的Et2O溶液,2mL)。将混合物在环境温度下搅拌18小时。将反应混合物用Et2O(20mL)稀释，通过过滤收集产生的固体得到白色固体(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(44)(66mg,71％)：1H NMR(500MHz,DMSO-d6).13.52–13.13(m,1H),9.41(br s,2H),7.77(dd,J＝9.0,5.7Hz,1H),7.62–7.50(m,1H),7.32–7.21(m,1H),5.00–4.83(m,1H),4.75–4.58(m,1H),4.37–4.19(m,2H),3.41–3.24(m,2H,与H2O重合),3.22–3.04(m,2H),2.94–2.73(m,3H),1.86–1.64(m,4H)；ESI MS m/z 397[M+H]+。
(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(46)的制备
步骤A：向4-(5-氟-2-三氟甲基)苯基哌啶盐酸盐(11,90mg,0.32mmol)、5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(85mg,0.32mmol)和二异丙基乙胺(0.17mL,0.96mmol)的DMF(5.8mL)溶液中加入EDCI(74mg,0.38mmol)和HOBt(52mg,0.38mmol)。所得溶液在室温下搅拌24小时。反应混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc萃取(3×30mL)。合并的有机提取物用饱和的盐水溶液(4×20mL)洗涤并减压浓缩至干。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％至5％CH3OH的CH2Cl2溶液)得到白色膜状物3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(45)(120mg,80％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)12.96(br s,1H),7.76(dd,J＝9.0,5.7Hz,1H),7.61–7.51(m,1H),7.30–7.18(m,1H),5.34–5.16(m,1H),4.76–4.58(m,1H),4.53–4.38(m,2H),3.65–3.52(m,2H),3.22–3.01(m,2H),2.60–2.43(m,3H,与溶剂重合),1.83–1.65(m,4H),1.42(s,9H)；ESI MS m/z 497[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(45,120mg,0.24mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入HCl(2N in Et2O,2mL)。混合物在环境温度下搅拌18小时。再加入HCl(2N的Et2O溶液,1mL)并在环境温度下搅拌混合物3小时。反应混合物用Et2O(20mL)稀释，通过过滤收集生产的固体得到白色固体(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(46):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)9.54–9.19(m,2H),7.84(dd,J＝9.0,5.7Hz,1H),7.60–7.51(m,1H),7.32–7.20(m,1H),5.32–5.12(m,1H),4.78–4.60(m,1H),4.29–4.16(m,2H),3.43–3.30(m,2H,与H2O重合),3.26–3.06(m,2H),2.95(t,J＝5.4Hz,2H),2.89–2.72(m,1H),1.84–1.65(m,4H)缺失N-H吡唑；ESI MS m/z 397[M+H]+。
(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(48)的制备
步骤A：向4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶盐酸盐(17,70mg,0.28mmol)、6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(104mg,0.39mmol)和二异丙基乙胺(0.15mL,0.84mmol)的DMF(5.4mL)溶液中加入EDCI(65mg,0.34mmol)和HOBt(45mg,0.34mmol)。所得溶液在室温下搅拌18小时。反应混合物用H2O(20mL)稀释并用EtOAc萃取(4×20mL)。合并的有机提取物用饱和的盐水溶液(9×20mL)、H2O(2×20mL)洗涤并减压浓缩至干。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,0％to 100％EtOAc的己烷溶液)得到白色固体3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(47)(57mg,44％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)13.16–12.78(m,1H),7.48(dd,J＝9.0,5.7Hz,1H),7.28(dd,J＝10.5,3.3Hz,1H),7.17–7.05(m,1H),4.90–4.59(m,2H),4.53–4.40(m,2H),3.62–3.48(m,2H),3.28–3.07(m,2H),2.92–2.73(m,1H),2.64–2.50(m,2H,与溶剂重合),1.93–1.69(m,2H),1.68–1.49(m,2H),1.42(S,9H)；ESI MS m/z 463[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(47,57mg,0.12mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入HCl(2N的Et2O溶液,2mL)。混合物在环境温度下搅拌18小时。反应混合物减压浓缩得到白色固体(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(48)(43mg,87％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.42(br s,2H),7.49(dd,J＝8.7,5.4Hz,1H),7.28(dd,J＝10.2,3.0Hz,1H),7.16–7.07(m,1H),4.71–4.43(m,2H),4.32–4.23(m,2H),3.38–3.14(m,4H,与H2O重合),2.91–2.72(m,3H),1.89–1.73(m,2H),1.69–1.50(m,2H),缺少N-H pryazole；ESI MS m/z 363[M+H]+。
(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(50)的制备
步骤A：向4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶盐酸盐(17,70mg,0.28mmol)、5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(89mg,0.34mmol)和二异丙基乙胺(0.15mL,0.84mmol)的DMF(5.4mL)溶液中加入EDCI(64mg,0.34mmol)和HOBt(45mg,0.34mmol)。所得溶液在室温下搅拌24小时。反应混合物用H2O(20mL)稀释并用EtOAc萃取(4×20mL)。合并的有机提取物用饱和的盐水溶液(8×20mL)、H2O(20mL)洗涤,并减压浓缩至干。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12gRedisep柱,0％to100％EtOAc在己烷中的溶液)得到白色固体3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(49)(78mg,60％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.96(s,1H),7.48(dd,J＝8.7,5.4Hz,1H),7.34–7.21(m,1H),7.16–7.06(m,1H),5.28–5.11(m,1H),4.77–4.57(m,1H),4.53–4.38(m,2H),3.66–3.52(m,2H),3.30–3.04(m,2H,与H2O重合),2.92–2.61(m,3H),1.92–1.74(m,2H),1.69–1.49(m,2H),1.41(s,9H)；ESI MS m/z 462[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(49,78mg,0.17mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入HCl(2N的Et2O溶液,2mL)。混合物在环境温度下搅拌18小时。反应混合物减压浓缩得到白色固体(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(50)(64mg,94％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.19(br s,2H),7.49(dd,J＝8.7,5.4Hz,1H),7.27(dd,J＝10.2,3.0Hz,1H),7.17–7.07(m,1H),5.34–5.05(m,1H),4.79–4.56(m,1H),4.38–4.19(m,2H),3.44–3.07(m,4H,与H2O重合),3.01–2.76(m,3H),1.92–1.73(m,2H),1.71–1.50(m,2H),缺失N-H吡唑；ESI MS m/z 363[M+H]+。
((4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(52)的制备
步骤A：向4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(20,100mg,0.31mmol)、6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(96mg,0.36mmol)和二异丙基乙胺(0.16mL,0.90mmol)的DMF(5.6mL)溶液中加入EDCI(69mg,0.36mmol)和HOBt(49mg,0.36mmol)。所得溶液在室温下搅拌18小时。反应混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc萃取(3×30mL)。合并的有机提取物用饱和的盐水溶液(4×30mL)洗涤并减压浓缩至干。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％至5％CH3OH的CH2Cl2溶液)得到白色膜状物3-(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(51)(76mg,45％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.13–12.77(m,1H),8.02–7.98(m,2H),7.96–7.91(m,1H),4.91–4.59(m,2H),4.53–4.41(m,2H),3.60–3.46(m,2H),3.21–3.03(m,2H),2.85–2.69(m,1H),2.63–2.54(m,2H,与溶剂重合),1.97–1.78(m,2H),1.77–1.58(m,2H),1.42(s,9H)；ESI MS m/z 547[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(51,75mg,0.14mmol)的CH2Cl2(1mL)溶液中加入HCl(2N的Et2O溶液,1mL)。混合物在环境温度下搅拌18小时。反应混合物用Et2O(50mL)稀释并浓缩得到黄色固体(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(52)(79mg,>99％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.37(br s,2H),8.05–7.86(m,3H),4.75–4.44(m,2H),4.39–4.18(m,2H),3.42–3.25(m,2H,与H2O重合),3.20–3.03(m,2H),2.95–2.75(m,3H),2.03–1.80(m,2H),1.79–1.62(m,2H),缺失N-H吡唑；ESI MS m/z 447[M+H]+。
(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(54)的制备
步骤A：向4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(20,100mg,0.30mmol)、5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(81mg,0.30mmol)和二异丙基乙胺(0.18mL,0.90mmol)的DMF(5.6mL)溶液中加入EDCI(69mg,0.36mmol)和HOBt(49mg,0.36mmol)。所得溶液在室温下搅拌18小时。反应混合物用H2O(30mL)稀释。通过过滤收集生成的沉淀得到白色固体3-(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(53)(142mg,86％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.95(s,1H),8.03–7.97(m,2H),7.95–7.90(m,1H),5.31–5.13(m,1H),4.76–4.58(m,1H),4.52–4.39(m,2H),3.64–3.53(m,2H),3.20–3.03(m,2H),2.87–2.61(m,3H),1.97–1.81(m,2H),1.78–1.58(m,2H),1.41(s,9H)；ESIMS m/z 547[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(53,142mg,0.26mmol)在1:1MeOH/CH2Cl2(2mL)的溶液中加入HCl(2N in Et2O,2mL)。混合物在环境温度下搅拌18小时。反应混合物用Et2O(20mL)稀释，通过过滤收集生成的固体得到灰白色固体(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(54)(127mg,>99％):1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.28(br s,2H),8.02–7.98(m,2H),7.96–7.92(m,1H),5.30–5.09(m,1H),4.78–4.55(m,1H),4.28–4.14(m,2H),3.43–3.28(m,2H,与H2O重合),3.26–3.07(m,2H),3.02–2.90(m,2H),2.89–2.75(m,1H),2.00–1.82(m,2H),1.80–1.61(m,2H),缺失N-H吡唑；ESI MS m/z 447[M+H]+。
(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(56)的制备
步骤A：向4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(20,83mg,0.29mmol)、6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(78mg,0.29mmol)和二异丙基乙胺(0.15mL,0.88mmol)的DMF(6.3mL)溶液中加入EDCI(67mg,0.35mmol)和HOBt(47mg,0.35mmol)。所得溶液在室温下搅拌18小时。反应混合物用H2O(20mL)稀释，通过过滤收集生成的固体。所得固体在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％至5％MeOH的CH2Cl2溶液)得到透明膜状物3-(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(55)(95mg,65％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)13.27–12.72(m,1H),7.63–7.45(m,3H),4.86–4.56(m,2H),4.55–4.38(m,2H),3.63–3.43(m,2H),3.27–3.00(m,2H),2.92–2.41(m,3H,与溶剂重合),2.13–1.84(m,2H),1.80–1.61(m,2H),1.42(s,9H)；ESI MSm/z496[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(55,94mg,0.19mmol)的CH2Cl2(3mL)溶液中加入HCl(2N in Et2O,3mL)。混合物在环境温度下搅拌18小时。反应混合物用Et2O(20mL)稀释，并减压浓缩所得混合物得到白色固体(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(56)(80mg,97％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)9.39–9.26(m,2H),7.63–7.47(m,3H),4.76–4.40(m,1H),4.35–4.25(m,2H),3.78–3.39(m,4H),3.25–3.08(m,2H),2.91–2.78(m,3H),2.11–1.88(m,2H),1.81–1.66(m,2H)；ESI MS m/z 397[M+H]+。
(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(58)的制备
步骤A：向4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(20,100mg,0.30mmol)、5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(81mg,0.30mmol)和二异丙基乙胺(0.18mL,0.90mmol)的DMF(5.6mL)溶液中加入EDCI(69mg,0.36mmol)和HOBt(49mg,0.36mmol)。所得溶液在室温下搅拌18小时。反应混合物用H2O(30mL)稀释。通过过滤收集产生的沉淀得到白色固体3-(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(53)(142mg,86％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.95(s,1H),8.03–7.97(m,2H),7.95–7.90(m,1H),5.31–5.13(m,1H),4.76–4.58(m,1H),4.52–4.39(m,2H),3.64–3.53(m,2H),3.20–3.03(m,2H),2.87–2.61(m,3H),1.97–1.81(m,2H),1.78–1.58(m,2H),1.41(s,9H)；ESIMS m/z 547[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(53,142mg,0.26mmol)在1:1MeOH/CH2Cl2(2mL)的溶液中加入HCl(2N in Et2O,2mL)。混合物在环境温度下搅拌18小时。反应混合物用Et2O(20mL)稀释，通过过滤收集产生的沉淀得到灰白色固体(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(54)(127mg,>99％):1HNMR(500MHz,DMSO-d6)9.28(br s,2H),8.02–7.98(m,2H),7.96–7.92(m,1H),5.30–5.09(m,1H),4.78–4.55(m,1H),4.28–4.14(m,2H),3.43–3.28(m,2H,与H2O重合),3.26–3.07(m,2H),3.02–2.90(m,2H),2.89–2.75(m,1H),2.00–1.82(m,2H),1.80–1.61(m,2H),缺失N-H吡唑；ESI MS m/z 447[M+H]+。
(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(60)的制备
步骤A：向4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(28,500mg,1.66mmol)、6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(443mg,1.66mmol)和二异丙基乙胺(36μL,2.04mmol)的DMF(5mL)悬浮液中加入HBTU(1.10g,2.49mmol)。将所得混合物在环境温度下搅拌18小时。反应用H2O(50mL)稀释并用EtOAc萃取(3×75mL)。合并的有机提取物用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物在硅胶上层析(40gRedisep柱,0–100％EtOAc的己烷溶液)得到白色固体3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(59)(200mg,23％).1H NMR(300MHz,CDCl3)7.017–6.876(m,1H),6.876–6.741(m,1H),5.306(s,1H),4.632(s,2H),3.776–3.581(m,2H),2.762–2.631(m,2H),1.986–1.653(m,4H),1.500(s,9H),1.399–1.189(m,4H)。
步骤B：向3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸盐(59,94mg,0.19mmol)的CH2Cl2(3mL)溶液中加入HCl(2.0N HCl的Et2O溶液,3mL)。混合物在环境温度下搅拌18小时。反应混合物用Et2O(20mL)稀释，将所得混合物减压浓缩得到白色固体(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(60)(80mg,97％)。
(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(62)的制备
步骤A：向4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(28,500mg,1.66mmol)、5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(443mg,1.66mmol)和二异丙基乙胺(36μL,2.04mmol)的DMF(5mL)悬浮液中加入HBTU(1.10g,2.49mmol)。将所得混合物在环境温度下搅拌18小时。反应用H2O(50mL)稀释并用EtOAc萃取(3×75mL)。合并的有机提取物用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物在硅胶上层析(40gRedisep柱,0–100％EtOAc的己烷溶液)得到白色固体3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(61)(200mg,23％)。
步骤B：向3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(61,94mg,0.19mmol)的CH2Cl2(3mL)溶液中加入HCl(2.0N HCl的Et2O溶液,3mL)。混合物在环境温度下搅拌18小时。将反应混合物用Et2O(20mL)稀释，用饱和NaHCO3溶液洗涤，并减压浓缩得到白色固体(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(62)(80mg,97％):1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.73(s,1H),7.487–7.336(m,2H),5.193–5.008(m,1H),4.76–4.58(br s,1H),3.75(s,2H),3.25–3.04(m,2H),2.94–2.84(m,1H),2.84–2.71(br s,1H),2.60–2.53(m,2H),1.89–1.58(m,4H)；ESI MS m/z 415.1[M+H]+。
实施例1：1-(3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(63)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E1，将((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(30)和乙酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(20mg,73％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.18–12.83(m,1H),7.73–7.60(m,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),7.35–7.26(m,1H),4.91–4.49(m,4H),3.71–3.57(m,2H),3.25–3.06(m,2H),2.85–2.48(m,3H,与溶剂重合),2.12–2.05(m,3H),1.83–1.66(m,4H)；ESIMS m/z 439[M+H]+。
实施例2：(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(64)的制备
步骤A：按照一般方法GP-C，将(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(32)和甲烷磺酰氯转化为白色固体(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(23mg,41％):mp243–246℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.03(br s,1H),7.69–7.60(m,1H),7.46(d,J＝7.5Hz,1H),7.33–7.26(m,1H),5.30–5.21(m,1H),4.72–4.62(m,1H),4.41–4.24(m,2H),3.52–3.39(m,2H),3.27–3.09(m,2H),2.95(s,3H),2.85–2.74(m,3H),1.85–1.61(m,4H)；ESI MS m/z 475[M+H]+。
实施例3：3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(65)的制备
步骤A：向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(75mg,0.28mmol)的THF(2.3mL)溶液中加入LiOH·H2O(23mg,0.56mmol)的H2O(1.5mL)溶液。将混合物搅拌20分钟并用2N HCl中和。减压浓缩所述混合物。所得残余物在N2气氛下用DMF(3.0mL)稀释。向此混合物中加入4-(3-氟-2-三氟甲基)苯基哌啶盐酸盐(5,78mg,0.28mmol)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐(245mg,0.556mmol)和二异丙基乙胺(107mg,0.834mmol)。混合物在环境温度下搅拌18小时。所得混合物用H2O(20mL)稀释。混合物用EtOAc(4×30mL)萃取。将合并的有机层用5％氯化锂溶液(4×20mL)洗涤并减压浓缩。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,0％to 50％EtOAc的己烷溶液)得到橙色膜状物(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(87mg,66％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.13–9.10(m,1H),7.75–7.62(m,2H),7.52–7.46(m,1H),7.38–7.25(m,1H),5.30–5.17(m,1H),4.78–4.64(m,1H),3.42–3.28(m,3H,与H2O重合),3.11–2.92(m,1H),1.98–1.70(m,4H)；ESI MS m/z 471[M+H]+。
步骤B：向(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(87mg,0.19mmol)和氰化锌(43mg,037mmol)的DMF(2.0mL)溶液中通入Ar气10分钟。向该溶液中加入Pd(PPh3)4(21mg,0.019mmol)，密封容器，并微波加热至130℃保持30分钟。混合物用饱和碳酸氢钠溶液(30mL)稀释并用EtOAc萃取(3×30mL)。将合并的有机提取物减压浓缩至干。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,0％至70％EtOAc的己烷溶液)并冷冻干燥得到白色固体3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(52mg,67％):mp 188–190℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.54–9.51(m,1H),8.13(dd,J＝9.5,1.0Hz,1H),7.81(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H),7.71–7.65(m,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(dd,J＝12.5,8.5Hz,1H),5.17–5.09(m,1H),4.78–4.70(m,1H),3.44–3.28(m,2H,与H2O重合),3.09–3.00(m,1H),1.97–1.75(m,4H)；ESI MS m/z 418[M+H]+。
实施例4：3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(66)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E2，将((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(30)和异氰酸甲酯转化为白色固体3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(32mg,41％):mp165–170℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.03–12.85(m,1H),7.70–7.62(m,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(dd,J＝12.0,8.0Hz,1H),6.58–6.49(m,1H),5.19–5.06(m,2H),4.76–4.62(m,2H),3.63–3.50(m,2H),3.27–3.09(m,2H),2.86–2.72(m,1H),2.64(t,J＝5.5Hz,2H),2.59–2.54(m,3H),1.84–1.59(m,4H)；ESI MS m/z 454[M+H]+。
实施例5：(5-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(67)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D，将(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(32)和乙醛转化为白色固体(5-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(2.5mg,2％):1H NMR(500MHz,CD3OD)7.64–7.53(m,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,1H),7.13(dd,J＝12.0,8.5Hz,1H),4.90–4.72(m,2H,与H2O重合),3.62(br s,2H),3.34–3.17(m,2H,与溶剂重合),2.92–2.78(m,5H),2.68(q,J＝7.0Hz,2H),1.96–1.74(m,4H),1.20(t,J＝7.5Hz,3H),缺失NH-吡唑；ESI MS m/z 425[M+H]+。
实施例6：3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸酯(68)的制备
步骤A：按照一般方法GP-B1，将(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(32)和氯甲酸甲酯转化为白色固体3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸酯(62mg,60％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.11–12.94(m,1H),7.68–7.61(m,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(dd,J＝12.5,8.5Hz,1H),5.33–5.16(m,1H),4.74–4.60(m,1H),4.56–4.41(m,2H),3.68–3.58(m,5H),3.26–3.08(m,2H),2.85–2.74(m,1H),2.70(t,J＝5.5Hz,2H),1.85–1.59(m,4H)；ESI MS m/z 455[M+H]+。
实施例7：(5-(环丙基甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(69)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D1，将(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(32)和环丙烷甲醛转化为白色固体(5-(环丙基甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(33mg,81％):1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.92–12.73(m,1H),7.69–7.61(m,1H),7.45(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(dd,J＝12.0,8.5Hz,1H),5.13–5.00(m,1H),4.73–4.60(m,1H),3.60–3.46(m,2H),3.25–3.03(m,2H),2.83–2.64(m,5H),2.41–2.33(m,2H),1.85–1.59(m,4H),0.94–0.83(m,1H),0.52–0.44(m,2H),0.14–0.08(m,2H)；ESI MS m/z 451[M+H]+。
实施例8：3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-腈(70)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D2，将(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(32)和溴化氢转化为白色固体3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-腈(35mg,70％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)13.26–13.05(m,1H),7.68–7.61(m,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(dd,J＝12.5,8.5Hz,1H),5.32–5.20(m,1H),4.71–4.61(m,1H),4.44–4.29(m,2H),3.46(t,J＝5.5Hz,2H),3.27–3.09(m,2H),2.87–2.73(m,3H),1.85–1.59(m,4H)；ESI MS m/z422[M+H]+。
实施例9：(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(71)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D2，将(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(32)和2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯转化为白色固体(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(71mg,64％):mp 144–151℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.99–12.81(m,1H),7.68–7.61(m,1H),7.45(d,J＝8.0Hz,1H),7.38–7.26(m,1H),5.20–5.08(m,1H),4.69–4.61(m,1H),3.82–3.69(m,2H),3.50–3.30(m,2H,与H2O重合),3.24–3.06(m,2H),2.92(t,J＝6.5Hz,2H),2.83–2.73(m,1H),2.70(t,J＝5.5Hz,2H),1.86–1.58(m,4H)；ESI MS m/z 479[M+H]+。
实施例10：(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(72)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D2，将(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(32)和3-溴-1,1,1-三氟丙烷转化为白色固体(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(26mg,32％):mp152–159℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.93–12.75(m,1H),7.69–7.61(m,1H),7.47–7.43(m,1H),7.29(dd,J＝12.0,8.5Hz,1H),5.11–5.00(m,1H),4.71–4.62(m,1H),3.58–3.44(m,2H),3.25–3.06(m,2H),2.83–2.61(m,7H),2.58–2.46(m,1H,与溶剂重合),1.84–1.59(m,4H)；ESIMS m/z 493[M+H]+。
实施例11：(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氢-3aH-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(73)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G2，将((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(30)和溴代乙基甲基醚转化为灰白色固体4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氢-3aH-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(28mg,56％):mp147–151℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.82(br s,1H),7.65–7.27(m,3H),5.18–5.09(m,1H),4.75–4.60(m,1H),3.51–3.45(m,2H),3.27–3.11(m,6H),2.84–2.70(m,8H),1.87–1.63(m,4H)；ESI MS m/z 475[M+H]+。
实施例12：4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(74)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D1，将(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(32)和3-氧杂环丁烷转化为白色泡沫状物4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(30mg,29％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.04(br s,1H),7.48–7.42(m,1H),7.20–7.17(m,1H),7.06–7.02(m,1H),5.22–4.81(m,2H),4.74(d,J＝6.6Hz,4H),3.89–3.81(m,1H),3.62(br s,2H),3.31–3.24(m,1H),3.21–2.68(m,5H),1.91–1.72(m,5H)；ESI MS m/z 453[M+H]+。
实施例13：(6-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(75)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(30)和乙醛转化为白色固体(6-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(21mg,31％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.74(br s,1H),7.72–7.65(m,1H),7.48–7.27(m,2H),4.92–4.63(m,2H),3.68–3.04(m,4H),2.90–2.39(m,7H),1.74–1.55(m,4H),1.18–1.02(m,3H)；ESI MS m/z 425[M+H]+。
实施例14：(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(76)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(30)和溴代三氟甲基丙烷转化为白色固体4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(19mg,15％):mp 162–166℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.78(br s,1H),7.72–7.65(m,1H),7.48–7.27(m,2H),4.92–4.63(m,2H),3.57–3.53(m,2H),3.27–3.09(m,2H),2.88–2.39(m,9H),1.77–1.72(m,4H)；ESI MS m/z 493[M+H]+。
实施例15：(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氢-3aH-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(77)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(30)和溴代乙基甲基醚转化为白色固体4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氢-3aH-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(23mg,30％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.72(br s,1H),7.67–7.62(m,1H),7.46(d,J＝8.1Hz,1H),7.33–7.27(m,1H),4.92–4.63(m,2H),3.57–3.48(m,4H),3.27–3.05(m,5H),2.81–2.49(m,7H),1.77–1.72(m,4H)；ESI MS m/z 455[M+H]+。
实施例16：3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-腈(78)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G2，将((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(30)和溴化氰转化为白色固体3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-腈(38mg,53％):mp 194–198℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.98(br s,1H),7.68–7.65(m,1H),7.47(d,J＝7.8Hz,1H),7.34–7.27(m,1H),4.92–4.63(m,2H),4.48–4.40(m,2H),3.43–3.38(m,2H),3.27–3.05(m,2H),2.88–2.71(m,3H),1.77–1.72(m,4H)；ESI MS m/z422[M+H]+。
实施例17：(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(79)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(30)和3-氧杂环丁酮转化为白色固体(4-(3-氟-2-(三氟甲基)哌啶-1-基)(6-氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(30mg,39％):mp148–151℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.77(br s,1H),7.70–7.63(m,1H),7.47(d,J＝8.1Hz,1H),7.34–7.27(m,1H),4.91–4.47(m,6H),3.71–3.66(m,1H),3.47–3.34(m,2H),3.28–3.06(m,2H),2.93–2.78(m,1H),2.74–2.53(m,2H),1.91–1.78(m,2H),1.89–1.55(m,4H)；ESI MS m/z 453[M+H]+。
实施例18：(6-(环丙基甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(80)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(30)和环丙烷甲醛转化为白色固体(6-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(23mg,34％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.74(br s,1H),7.72–7.65(m,1H),7.47(d,J＝7.8Hz,1H),7.34–7.27(m,1H),4.92–4.63(m,2H),3.59–3.53(m,2H),3.32–3.09(m,2H),2.90–2.39(m,7H),1.81–1.62(m,4H),0.92–0.85(m,1H),0.52–0.48(m,2H),0.14–0.10(m,2H)；ESI MS m/z 451[M+H]+。
实施例19：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(81)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和乙酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(29.2g,80％):1H NMR(500MHz,CDCl3)δ10.59(br,1H),7.36–7.29(m,1H),7.15(m,1H),4.81(br,2H),4.77and 4.65(s,2H),3.85(br,1H),3.68(m,1H),3.26–2.69(m,5H),2.21and2.19(s,3H),1.89–1.73(m,4H)MS(ESI+)m/z 457[M+H]+。
实施例20：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-基)乙酮(82)的制备
步骤A：按照一般方法GP-B1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和乙酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-基)乙酮(0.046g,85％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.15(br,1H),7.36–7.27(m,1H),7.15(m,1H),5.33–4.72(m,4H),3.90–3.73(m,2H),3.30–2.76(m,5H),2.20(s,3H),1.89–1.70(m,4H)；MS(ESI+)m/z 457[M+H]+。
实施例21：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)乙酮(83)的制备
步骤A：按照一般方法GP-B1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和乙酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)乙酮(0.045g,72％):1H NMR(500MHz,CDCl3)10.92(br,1H),7.37–7.32(m,1H),7.12(m,1H),4.81–4.21(m,6H),3.29–2.88(m,3H),2.18and2.16(s,3H),1.97–1.70(m,4H)；MS(ESI+)m/z 443[M+H]+。
实施例22：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)丙烷-1-酮(84)的制备
步骤A：按照一般方法GP-H1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和丙酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)丙烷-1-酮(37mg,51％):mp>260℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.38–7.30(m,1H),7.13–7.10(m,1H),4.99–4.61(m,5.5H),4.46–4.19(m,0.5H),3.46–2.72(m,3H),2.42–2.35(m,2H),1.99–1.92(m,2H),1.82–1.57(m,2H),1.35–1.16(m,3H),缺失N-H吡唑；ESI MS m/z 457[M+H]+。
实施例23：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)-2-甲基丙烷-1-酮(85)的制备
步骤A：按照一般方法GP-H1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和异丁酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)-2-甲基丙烷-1-酮(29mg,38％):mp 249–253℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.21,(br s,1H),7.81–7.68(m,1H),7.57–7.47(m,1H),4.83–3.65(m,6H),3.29–2.67(m,4H),1.82–1.61(m,4H),1.05(d,J＝9Hz,6H)；ESI MS m/z 471[M+H]+。
实施例24：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)-3-甲基丁烷-1-酮(86)的制备
步骤A：按照一般方法GP-H1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和异戊酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)-3-甲基丁烷-1-酮(42mg,54％):1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.37–7.28(m,1H),7.17–7.08(m,1H),4.95–4.53(m,5.5H),4.43–3.90(m,0.5H),3.34–2.70(m,3H),2.30–2.19(m,3H),1.98–1.89(m,2H),1.80–1.58(m,2H),1.05–0.94(m,6H)缺失N-H吡唑；ESI MS m/z 485[M+H]+。
实施例25：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(87)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和乙醛转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(35mg,36％):mp 185–190℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.793(s,1H),7.903–7.609(m,1H),7.60–7.40(m,1H),5.24–4.93(m,1H),4.85–4.49(m,1H),3.45(s,2H),3.13(s,2H),2.96–2.71(m,1H),2.61(s,4H),2.58–2.52(m,1H),1.84–1.57(br s,4H),1.19–0.97(t,3H)；ESI MS m/z 433.1[M+H]+。
实施例26：(5-(环丙基甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(88)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和环丙烷甲醛转化为白色固体(5-(环丙基甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(38mg,37％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),7.80–7.66(m,1H),7.54–7.45(m,1H),5.19–5.03(br s,1H),4.73–4.58(m,1H),3.66–3.46(br s,1H),3.22–3.05(br s,2H),2.85–2.63(m,4H),1.83–1.59(br s,4H),0.99–0.82(br s,1H),0.58–0.43(m,2H),0.21–0.07(br s,2H)；ESI MS m/z469.2[M+H]+。
实施例27：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(89)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和3-氧杂环丁酮转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(28mg,27％):mp212–215℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.847(s,1H),7.796–7.684(m,1H),7.546–7.458(m,1H),5.151(d,1H),4.737–4.554(m,3H),4.554–4.423(m,2H),3.755–3.600(m,1H),3.379(s,2H),3.222–3.050(br s,2H),2.844–2.643(m,3H),1.898–1.515(br s,4H)；ESI MS m/z 471.2[M H]+。
实施例28：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-新戊基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(90)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和特戊醛转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-新戊基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(11mg,10％):mp 203–210℃；
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.789(s,1H),7.821–7.681(m,1H),7.553–7.424(m,1H),5.216–5.064(br s,1H),4.755–4.579(br s,1H),3.686–3.546(m,2H),3.172–3.070(m,2H),2.845–2.710(m,1H),2.249(s,2H),1.799–1.612(m,4H),0.864(s,9H)；ESIMS m/z 485.2[M H]+。
实施例29：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸甲酯(91)的制备
步骤A：按照一般方法GP-B1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和氯甲酸甲酯转化为白色固体3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸甲酯(21mg,20％):mp 248–252℃；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.924(s,1H),7.763–7.692(m,1H),7.540–7.472(m,1H),5.358–5.152(br s,1H),4.754–4.605(br s,1H),4.650–4.418(m,2H),3.705–3.581(m,6H),3.119–3.100(m,3H),2.860–2.731(m,4H),1.296–1.237(m,6H)；ESI MS m/z473.1[M+H]+。
实施例30：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(92)的制备
步骤A：按照一般方法GP-B2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和异氰酸甲酯转化为白色固体3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(28mg,36％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.895(s,1H),7.780–7.692(m,1H),7.538–7.472(m,1H),6.579–6.490(m,1H),5.202–5.086(m,1H),4.743–4.622(m,1H),4.465–4.332(m,2H),3.630–3.499(m,2H),3.209–3.095(m,2H),2.849–2.730(m,1H),2.673–2.602(m,2H),2.602–2.542(m,3H),1.912–1.588(m,5H)；ESI MS m/z 472.2[M+H]+。
实施例31：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(93)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和1,1,1-三氟-3-溴丙烷转化白色固体为(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(24mg,21％):mp 190–195℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.939–12.764(m,1H),7.847–7.665(m,1H),7.591–7.417(m,1H),5.213–4.965(m,1H),4.729–4.555(m,1H),3.637–3.456(m,2H),3.223–3.039(br s,2H),2.853–2.698(m,5H),2.698–2.623(m,2H),2.596–2.522(m,1H),1.859–1.589(m,4H)；ESI MS m/z 511.1[M+H]+。
实施例32：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(94)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和2-甲氧基溴代乙烷转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(24mg,23％):mp179–182℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.805(s,1H),7.824–7.654(m,1H),7.563–7.438(m,1H),5.085(s,1H),4.660(s,1H),3.517(s,4H),3.268(s,3H),3.187–3.063(m,2H),2.906–2.604(m,6H),1.885–1.550(m,4H)；ESI MSm/z 473.2[M+H]+。
实施例33：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-腈(95)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和溴化氰转化为白色固体3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-腈(95mg,quant.):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.115(s,1H),7.833–7.627(m,1H),7.627–7.409(m,1H),5.188–5.067(m,1H),4.558–4.469(m,1H),4.374(s,2H),3.538–3.404(m,2H),3.074–2.98(br s,2H),2.877–2.805(m,2H),1.801–1.694(br s,4H)；ESI MS m/z 440[M+H]+。
实施例34：(4-(3,4-二氟-2(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(96)的制备
步骤A：按照一般方法GP-J1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和乙醛转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(36mg,76％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.140–12.832(m,1H),7.879–7.669(m,1H),7.669–7.408(m,1H),5.271–3.901(m,2H),3.901–3.559(m,4H),3.216–3.013(m,2H),2.960–2.684(m,3H),1.854–1.569(m,4H),1.162–1.005(m,3H)；ESI MS m/z 429.2[M+H]+。
实施例35：(5-(环丙基甲基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(97)的制备
步骤A：按照一般方法GP-J1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和环丙烷甲醛转化为白色固体((5-(环丙基甲基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(36mg,76％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.101–12.818(m,1H),7.887–7.665(m,1H),7.665–7.423(m,1H),5.223–3.923(m,2H),3.923–3.594(m,4H),3.258–3.667(m,3H),2.667–2.533(m,2H),1.827–1.606(m,4H),0.988–0.793(m,1H),0.598–0.417(m,2H),0.235–0.087(m,2H)；ESI MS m/z 455.1[M+H]+。
实施例36：(5-(环丙基甲基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(98)的制备
步骤A：按照一般方法GP-J1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和3-氧杂环丁酮转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(氧杂环丁烷-3-基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(39mg,74％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.105–12.925(m,1H),7.874–7.651(m,1H),7.602–7.442(m,1H),5.250–4.509(m,1H),4.245–3.601(m,5H),3.221–3.074(m,1H),3.016–2.723(m,3H),2.596–2.518(m,2H),1.854–1.610(m,4H)；ESI MS m/z 457.1[M+H]+。
实施例37：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-新戊基-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(99)的制备
步骤A：按照一般方法GP-J1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和特戊醛转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-新戊基-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(25mg,46％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.060–12.840(m,1H),7.840–7.440(m,2H),5.315–4.473(m,1H),4.210–3.642(m,5H),3.272–2.728(m,3H),2.555(s,2H),1.867–1.597(m,4H),0.905(s,9H)；ESI MS m/z 471.2[M+H]+。
实施例38：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-甲酰胺(100)的制备
步骤A：按照一般方法GP-H2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和异氰酸甲酯转化为白色固体3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)甲酰胺(55mg,53％):mp>260℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.449–12.960(m,1H),7.719–7.620(m,1H),7.620–7.379(m,1H),6.272(s,1H),5.454–3.850(m,6H),3.240–2.737(m,3H),2.623(s,3H),1.979–1.523(m,4H；ESI MS m/z 458.1[M+H]+。
实施例39：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-羧酸甲酯(101)的制备
步骤A：按照一般方法GP-H1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和氯甲酸甲酯转化为白色固体3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-羧酸甲酯(30mg,55％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.503–13.110(br s,1H),7.310–7.721(m,1H),7.587–7.471(m,1H),4.808–4.531(br s,1H),4.531–4.370(m,4H),3.673(s,3H),3.277–3.102(m,2H),3.012–2.722(br s,1H),1.851–1.621(m,4H)；ESI MS m/z 459.2[M+H]+。
实施例40：(5-苯甲酰-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(102)的制备
步骤A：按照一般方法GP-H1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和苯甲酰氯转化为白色固体(5-苯甲酰-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(30mg,55％):mp>260℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.697–13.007(m,1H),7.867–7.668(m,1H),7.668–7.545(m,2H),7.545–7.384(m,4H),5.416–3.891(m,6H),3.248–2.620(m,3H),1.923–1.524(m,4H)；ESI MS m/z 505[M+H]+。
实施例41：(4-(3,4-二氟-2(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(α-吡啶甲酰基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(103)的制备
步骤A：按照一般方法GP-H1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和α-吡啶甲酰氯转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(α-吡啶甲酰基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(13mg,22％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)13.632–13.061(m,1H),8.722–8.139(m,1H),8.140–7.908(m,1H),7.908–7.684(m,2H),7.684–7.398(m,2H),5.115–4.428(m,5H),3.316–2.598(m,3H),1.927–1.133(m,5H)；ESI MS m/z 506.1[M+H]+。
实施例42：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-烟酰基-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(104)的制备
步骤A：按照一般方法GP-H1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和烟酰氯转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-烟酰基-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(34mg,59％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.589–13.123(br s,1H),8.807(s,1H),8.140–7.991(m,1H),7.843–7.678(m,1H),7.628–7.364(m,2H),5.433–3.721(m,6H),3.257–2.701(m,3H),1.933–1.522(m,4H)；ESI MS m/z506.1[M+H]+。
实施例43：(4-(3,4-二氟-2(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-异烟酰基-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(105)的制备
步骤A：按照一般方法GP-H1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和异烟酰氯转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-异烟酰基-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(14mg,24％):mp>260℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.420–13.120(m,1H),8.770–8.620(m,2H),7.833–7.679(m,1H),7.612–7.369(m,3H),5.410–3.820(m,6H),3.240–3.060(m,2H),1.860–1.530(m,4H),1.290–1.190(m,1H)；ESI MS m/z506.1[M+H]+。
实施例44：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(106)的制备
步骤A：按照一般方法GP-H2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和1-吡咯胺基甲酰氯转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(22mg,38％):mp>260℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.389–13.022(m,1H),7.858–7.407(m,2H),5.439–3.846(m,6H),3.412–3.326(m,4H),3.253–2.742(m,3H),1.868–1.638(m,8H)；ESI MS m/z 498.2[M+H]+。
实施例45：4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(107)的制备
步骤A：按照一般方法GP-J2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(16mg,28％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.274–12.902(m,1H),7.343–7.681(m,1H),7.601–7.441(m,1H),5.368–3.811(m,6H),3.695–3.520(m,2H),3.273–2.71(m,3H),1.906–1.571(m,4H)；ESI MS m/z 483.1[M+H]+。
实施例46：(4-(3,4-二氟-2(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(108)的制备
步骤A：按照一般方法GP-J2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和1,1,1-三氟-3-溴丙烷转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-1,4,5,6-四氢-吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(13mg,22％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.091–12.860(m,1H),7.837–7.651(m,1H),7.638–7.430(m,1H),5.271–4.038(m,7H),3.899–3.673(m,4H),3.210–3.059(m,2H),2.955–2.681(br s,1H),1.869–1.558(m,4H)；ESI MS m/z 497[M+H]+。
实施例47：(4-(3,4-二氟-2(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(109)的制备
步骤A：按照一般方法GP-J2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和2-甲氧基-溴乙烷转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(14mg,22％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.070–12.860(m,1H),7.852–7.648(m,1H),7.616–7.449(m,1H),5.365–3.596(m,6H),3.560–3.413(m,2H),3.298–3.219(m,4H),3.219–3.047(m,2H),2.937–2.832(m,3H),1.843–1.576(m,5H)；ESIMS m/z 459.2[M+H]+。
实施例48：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-腈(110)的制备
步骤A：按照一般方法GP-J2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和溴化氰转化为白色固体3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-腈(23mg,79％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.623–13.172(m,1H),7.850–7.664(m,1H),7.664–7.470(m,1H),5.552–3.846(m,6H),3.271–2.652(m,3H),2.042–1.503(m,4H)；ESI MS m/z 426[M+H]+。
实施例49：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(111)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和乙醛转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(13mg,21％):mp 207–210℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.90(br s,0.25H),12.71(br s,0.75H),7.78–7.70(m,1H),7.50–7.49(m,1H),4.87–4.85(m,1H),4.68–4.66(m,1H),3.48–3.45(m,2H),3.14–3.13(m,2H),2.78–2.77(m,1H),2.61–2.55(m,6H,与DMSO峰部分融合),1.76–1.70(m,4H),1.07(t,J＝7.0Hz,3H)；ESI MS m/z443[M+H]+。
实施例50：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酰胺(112)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和异氰酸甲酯转化为灰白色固体3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酰胺(6mg,27％):mp220–225℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.05(br s,0.25H),12.85(br s,0.75H),7.79–7.70(m,1H),7.51–7.48(m,1H),6.61–6.60(m,0.75H),6.55–6.54(m,0.25H),4.86–4.84(m,1H),4.68–4.65(m,1H),4.47–4.42(m,2H),3.54–3.50(m,2H),3.14–3.13(m,2H),2.78–2.77(m,1H),2.59–2.56(m,5H,partialy merged with DMSO peak),1.76–1.67(m,4H)；ESI MS m/z 472[M+H]。
实施例51：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(113)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和甲醛转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(18mg,55％):mp 210–211℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.91(br s,0.25H),12.72(br s,0.75H),7.79–7.70(m,1H),7.50–7.49(m,1H),4.88–4.86(m,1H),4.67–4.65(m,1H),3.43–3.40(m,2H),3.15–3.13(m,2H),2.77–2.76(m,1H),2.65–2.60(m,4H),2.36(s,3H),1.76–1.69(m,4H)；ESI MS m/z429[M+H]+。
实施例52：3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(114)的制备
步骤A：按照一般方法GP-C，将(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(32)和异氰酸甲酯转化为白色固体3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(32mg,41％):mp 165–170℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.03–12.85(m,1H),7.70–7.62(m,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(dd,J＝12.0,8.0Hz,1H),6.58–6.49(m,1H),5.19–5.06(m,2H),4.76–4.62(m,2H),3.63–3.50(m,2H),3.27–3.09(m,2H),2.86–2.72(m,1H),2.64(t,J＝5.5Hz,2H),2.59–2.54(m,3H),1.84–1.59(m,4H)；ESI MS m/z 454[M+H]+。
实施例53：2-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)乙酸(115)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和2-溴乙酸叔丁酯转化为透明玻璃状固体2-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)乙酸叔丁酯(55mg,69％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.94(br s,0.25H),12.71(br s,0.75H),7.37–7.33(m,1H),7.50–7.49(m,1H),4.86–4.84(m,1H),4.68–4.66(m,1H),3.67–3.63(m,2H),3.34–3.30(m,2H,与H2O峰部分融合),3.14–3.13(m,2H),2.59–2.58(m,3H),2.59–2.50(m,2H,与DMSO峰部分融合),1.76–1.70(m,4H),1.43(s,9H)；ESI MS m/z 529[M+H]+。
步骤B：将2-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)乙酸叔丁酯(53mg,0.10mmol)的无水CH2Cl2(3mL)溶液用TFA(3mL)处理，并在室温下N2气氛中搅拌8小时。之后，混合物减压浓缩至干，并用CH2Cl2(10mL)进行溶剂交换。残余物用无水CH2Cl2(10mL)稀释，用MP-碳酸酯(0.50g)处理，并在室温下搅拌15分钟。随后，过滤溶液并用CH2Cl2(2×10mL)洗涤残余物。滤液减压浓缩至干，得到灰白色固体2-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)乙酸(40mg,85％):mp151–153℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.29(br s,0.25H),12.89(br s,0.75H),7.56–7.55(m,1H),7.51–7.50(m,1H),4.87–4.86(m,1H),4.66–4.64(m,1H),4.04–4.02(m,2H),3.76–3.72(m,2H),3.34–3.32(m,2H,与H2O峰部分融合),3.15–3.11(m,4H),2.76–2.74(m,2H),1.76–1.70(m,4H)；ESI MS m/z473[M+H]+。
实施例54：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-羧酸甲酯(116)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和氯甲酸甲酯转化为浅橙色固体3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-羧酸甲酯(30mg,60％):mp238–240℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)13.13(br s,0.25H),12.86(br s,0.75H),7.78–7.70(m,1H),7.51–7.48(m,1H),4.82–4.80(m,1H),4.67–4.65(m,1H),4.54(s,1.5H),4.50(s,0.5H),3.64(s,3H),3.60–3.57(m,2H),3.15–3.13(m,2H),2.79–2.78(m,1H),2.64–2.59(m,2H),1.76–1.68(m,4H)；ESI MS m/z 473[M+H]+。
实施例55：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(117)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和3-氧杂环丁酮转化为灰白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(32mg,50％):mp 206–207℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.96(br s,0.25H),12.76(br s,0.75H),7.80–7.70(m,1H),7.51–7.50(m,1H),4.86–4.84(m,1H),4.68–4.65(m,1H),4.60(可见t,J＝6.5Hz,2H),4.50(可见t,J＝6.0Hz,2H),3.71–3.64(m,1H),3.43–3.38(m,2H),3.15–3.13(m,2H),2.78–2.77(m,1H),2.64–2.60(m,2H),1.79–1.68(m,4H),CH2被溶剂峰掩盖；ESI MS m/z 471[M+H]+。
实施例56：(6-(环丙基甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(118)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和环丙烷甲醛转化为白色固体(6-(环丙基甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(30mg,58％):mp184–185℃；1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.53(dd,J＝17.5,9.0Hz,1H),7.39(dd,J＝9.0,4.0Hz,1H),4.83–4.82(m,1H,与H2O峰部分融合),4.65–4.63(m,1H),3.94–3.92(m,2H),3.29–3.26(m,2H,与CH3OH峰部分融合),3.05–3.03(m,2H),2.90–2.84(m,3H),2.69–2.67(m,2H),1.89–1.81(m,4H),1.04–1.02(m,1H),0.65(d,J＝7.0Hz,2H),0.29–0.27(m,2H),未观察到NH质子；ESI MS m/z469[M+H]+。
实施例57：(4-(3,4-二氟-2(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(119)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和3,3,3-三氟丙醛转化为灰白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(18mg,36％):mp 194–195℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.94(br s,0.25H),12.76(brs,0.75H),7.79–7.70(m,1H),7.50–7.49(m,1H),4.87–4.85(m,1H),4.68–4.66(m,1H),3.57–3.53(m,2H),3.15–3.13(m,2H),2.75(t,J＝7.5Hz,2H),2.69–2.67(m,2H),2.58–2.50(m,5H,与DMSO峰部分融合),1.76–1.68(m,4H)；ESI MS m/z 511[M+H]+。
实施例58：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-腈(120)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和溴化氰转化为白色固体3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-腈(36mg,83％):mp 248–250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.26(br s,0.25H),12.97(br s,0.75H),7.78–7.75(m,1H),7.51–7.49(m,1H),4.85(可见d,J＝8.0Hz,1H),4.68–4.66(m,1H),4.47–4.40(m,2H),3.43–3.40(m,2H),3.16–3.14(m,2H),2.77–2.72(m,3H),1.77–1.71(m,4H)；ESI MSm/z 440[M+H]+。
实施例59：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)-2-甲基丙烷-1-酮(121)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和异丁酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H吡唑并[3,4-c]pyridin-6-基)-2-甲基丙烷-1-酮(29mg,62％):mp228–229℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.12(br s,0.25H),12.87(br s,0.75H),7.79–7.70(m,1H),7.50–7.48(m,1H),4.88–4.86(m,1H),4.68–4.56(m,3H),3.70(s,2H),3.15–3.13(m,2H),2.99–2.97(m,1H),2.79–2.77(m,1H),2.70–2.64(m,2H),1.76–1.68(m,4H),1.04–1.01(m,6H)；ESI MS m/z 485[M+H]+。
实施例60：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)丙烷-1-酮(122)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和丙酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)丙烷-1-酮(35mg,63％):mp182–187℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)13.15–13.10(m,0.25H),12.87(br s,0.75H),7.76–7.72(m,1H),7.51–7.49(m,1H),4.85–4.83(m,1H),4.68–4.57(m,3H),3.69(s,0.5H),3.63(s,1.5H),3.15–3.13(m,2H),2.79–2.77(m,1H),2.68–2.55(m,2H,与DMSO峰部分融合),2.46–2.38(m,2H),1.76–1.71(m,4H),1.02(t,J＝7.5Hz,3H)；ESI MS m/z 471[M+H]+。
实施例61：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)-3-甲基丁烷-1-酮(123)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和3-甲基丁酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)-3-甲基丁烷-1-酮(37mg,63％):mp184–188℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.13–13.11(m,0.25H),12.87–12.84(m,0.75H),7.79–7.70(m,1H),7.51–7.49(m,1H),4.89–4.86(m,1H),4.67–4.57(m,3H),3.67–3.64(m,2H),3.15–3.13(m,2H),2.79–2.77(m,1H),2.68–2.64(m,2H),2.55–2.51(m,1H,与DMSO峰部分重合),2.02(pent,J＝7.0Hz,1H),1.76–1.70(m,4H),1.26(t,J＝7.0Hz,1H),0.92–0.90(m,6H)；ESI MS m/z 499[M+H]+。
实施例62：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(124)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和1-溴-2-甲氧基乙烷转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(33mg,48％):mp 171–173℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.91(br s,0.25H),12.71(br s,0.75H),7.78–7.70(m,1H),7.51–7.48(m,1H),4.85(可见d,J＝11.0Hz,1H),4.66(可见d,J＝11.0Hz,1H),3.57–3.49(m,4H),3.25(s,3H),3.16–3.11(m,2H),2.77–2.58(m,7H),1.76–1.68(m,4H)；ESI MS m/z 473[M+H]+。
实施例63:(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(125)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯转化为灰白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(39mg,72％):mp 192–193℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.00(brs,0.25H),12.76(br s,0.75H),7.80–7.70(m,1H),7.50–7.48(m,1H),4.85(可见d,J＝11.0Hz,1H),4.66(可见d,J＝11.0Hz,1H),3.79(s,1.5H),3.75(s,0.5H),3.42–3.35(m,2H),3.15–3.13(m,2H),2.87(t,J＝6.0Hz,2H),2.78–2.76(m,1H),2.64–2.62(m,2H),1.79–1.68(m,4H)；ESI MS m/z 497[M+H]+。
实施例64：(4-(3,4-二氟-2(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-新戊基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(126)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA盐(34)和特戊醛转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-新戊基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(28mg,49％):mp218–220℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)12.90(br s,0.25H),12.67(br s,0.75H),7.75–7.70(m,1H),7.49(dd,J＝8.0,4.0Hz,1H),4.88(可见d,J＝12.0Hz,1H),4.67(可见d,J＝10.0Hz,1H),3.61(s,1.5H),3.59(s,0.5H),3.15–3.13(m,2H),2.78–2.76(m,1H),2.71(t,J＝5.5Hz,2H),2.64–2.58(m,2H),2.25(s,2H),1.79–1.68(m,4H),0.88(s,9H)；ESI MS m/z485[M+H]+。
实施例65：(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(127)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G2，将(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(60)和溴乙基甲基醚转化为白色固体(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(32mg,41％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.85(m,1H),7.48(m,2H),5.12(m,1H),4.67(m,1H),3.50(m,4H),3.01–3.32(m,5H),2.73(m,7H),3.63–3.50(m,2H),1.62(m,4H)；ESI MS m/z 473[M+H]+。
实施例66：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(哌啶-1-羰基)-1,4,5,6四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(128)的制备
步骤A：按照一般方法GP-H2，将(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和哌啶-1-甲酰氯转化为白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(哌啶-1-羰基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(45mg,77％):mp 236–237℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.26(br s,0.6H),13.06(br s,0.4H),7.79–7.70(m,1H),7.56–7.50(m,1H),5.25–5.23(m,0.4H),4.65–4.62(m,0.6H),4.57(s,2H),4.47(s,2H),4.17–3.91(m,1H),3.26–3.03(m,6H),3.01–2.73(m,1H),1.80–1.71(m,4H),1.53–1.49(m,6H)；ESI MS m/z 512[M+H]+。
实施例67：(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(129)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G2，将(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(60)和3-溴-1,1,1-三氟丙烷转化为白色固体(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(41mg,51％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.83(m,1H),7.43(m,2H),5.12(m,1H),4.67(m,1H),3.53(m,2H),2.50–3.12(m,11H),1.68(m,4H)；ESI MS m/z511[M+H]+。
实施例68：3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-羧酸甲酯(130)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E2，将(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(52)和氯甲酸甲酯转化为灰白色固体3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-羧酸甲酯(7mg,20％):mp253–254℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.12(br s,0.25H),12.86(brs,0.75H),7.45–7.38(m,2H),4.84–4.82(m,1H),4.68–4.66(m,1H),4.54–4.51(m,2H),3.64(s,3H),3.60–3.58(m,2H),3.20–3.13(m,2H),2.79–2.77(m,1H),2.65–2.62(m,2H),1.76–1.72(m,4H)；ESI MS m/z 473[M+H]+。
实施例69：1-(3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(131)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E1，将(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(52)和乙酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(0.087g,41％):1H NMR(300MHz,CDCl3)11.01(br,1H),6.93(m,1H),6.78(m,1H),4.84–4.66(m,4H),3.85–3.67(m,2H),3.34–2.68(m,5H),2.22and 2.19(s,3H),1.89–1.66(m,4H)；MS(ESI+)m/z 457[M+H]+.77(m,1H),2.65–2.62(m,2H),1.76–1.72(m,4H)；ESI MS m/z 473[M+H]+。
实施例70：3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(132)的制备
步骤A：向4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.246g,0.675mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入HCl(2M HCl的乙醚溶液,10mL)。搅拌混合物6小时，蒸发，将得到的固体溶于DMF(4mL)。在单独的烧瓶中，向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(0.182g,0.675mmol)的THF(5mL)溶液中加入氢氧化锂水合物(0.028g,0.675mmol)的水(2mL)溶液。将混合物搅拌20分钟，用2N HCl酸化至pH6，并蒸发至干。向该残余物中加入苯并三唑-1-基-氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(0.448g,1.01mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.349g,2.70mmol)和由第一个反应中得到的DMF溶液。将混合物在环境温度下搅拌16小时，然后倒入水中。混合物用乙酸乙酯提取，有机层用盐水洗涤3次，干燥(Na2SO4)，过滤，并减压浓缩。所得残余物在硅胶上层析(0-60％EtOAc的己烷溶液)得到灰白色固体(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(0.115g,34％):1H NMR(300MHz,CDCl3)9.37(m,1H),7.79(dd,J＝9.6,0.9Hz,1H),7.50(dd,J＝9.6,1.7Hz,1H),6.96(d,J＝9.7Hz,1H),6.84–6.77(m,1H),5.77–5.72(m,1H),5.00–4.95(m,1H),3.44–3.29(m,2H),3.01–2.92(m,1H),2.01–1.69(m,4H)；MS(ESI+)m/z489[M+H]+。
步骤B：将(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(0.115g,0.235mmol)、氰化锌(0.055g,0.470mmol)、四(三苯基膦)钯(0.027g,0.0235mmol)和DMF(4mL)的混合物在130℃微波辐射加热30分钟。冷却至环境温度后，将混合物用水(80mL)稀释并用EtOAc(80mL)萃取。提取物用盐水(2×80mL)洗涤,干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。所得残余物在硅胶上层析(0-50％EtOAc的己烷溶液)得到白色固体3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(0.050g,49％):1H NMR(300MHz,CDCl3)9.71(m,1H),7.98(dd,J＝9.5,1.0Hz,1H),7.51(dd,J＝9.5,1.6Hz,1H),6.95(d,J＝9.5Hz,1H),6.84–6.77(m,1H),5.76(m,1H),5.01–4.96(m,1H),3.46–3.31(m,2H),3.03–2.94(m,1H),2.07–1.70(m,4H)；MS(ESI+)m/z436[M+H]+。
实施例71：(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(133)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(52)和乙醛转化为白色固体(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(29mg,67％):mp 149–155℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.766(s,1H),7.481–7.353(m,1H),5.196–5.049(m,1H),4.765–4.569(m,1H),3.558–3.378(m,2H),3.263–3.048(m,2H),2.850–2.715(m,1H),2.664(s,4H),2.575–2.515(m,2H),1.858–1.606(br s,4H),1.121–1.018(m,4H)；ESIMS m/z 443.2[M+H]+。
实施例72：(5-(环丙基甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(134)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(52)和环丙基乙醛转化为白色固体(5-(环丙基甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(29mg,67％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.764(s,1H),7.522–7.347(m,2H),5.225–5.016(br s,1H),4.766–4.580(br s,1H),3.673–3.444(m,2H),3.258–3.034(m,2H),2.868–2.601(m,5H),2.443–2.334(m,2H),1.858–1.620(br s,4H),0.995–0.829(m,1H),0.551–0.410(m,2H),0.195–0.075(m,2H)；ESI MS m/z 469.1[M+H]+。
实施例73：(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(135)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(52)和3-氧杂环丁酮转化为白色固体(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(35mg,67％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.843(s,1H),7.483–7.346(m,1H),5.234–5.065(br s,1H),4.731–4.627(br s,1H),4.627–4.562(m,2H),4.562–4.452(m,2H),3.714–3.643(m,1H),3.473–3.337(br s,2H),3.260–3.058(m,2H),2.850–2.724(m,1H),2.724–2.658(m,2H),2.582–2.516(m,2H),1.876–1.586(br s,4H)；ESI MS m/z471[M+H]+。
实施例74：3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-腈(136)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G2，将(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(52)和溴化氰转化为白色固体3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-腈(16mg,55％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.146–13.060(m,1H),7.508–7.356(m,2H),5.402–4.584(m,2H),4.433–4.327(m,2H),3.536–3.412(m,2H),3.261–3.092(m,2H),2.905–2.728(m,3H),1.884–1.608(m,4H)；ESI MS m/z440[M+H]+。
实施例75：(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(137)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G2，将(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(52)和2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯转化为白色固体(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(16mg,55％):没有观察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.033–12.768(m,1H),7.506–7.333(m,2H),5.290–4.578(m,2H),3.894–3.657(m,2H),3.447–3.320(m,2H),3.256–3.037(m,2H),2.937(s,2H),2.709(s,3H),1.906–1.605(brs,4H)；ESI MS m/z 497[M+H]+。
实施例76：3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸甲酯(138)的制备
步骤A：按照一般方法GP-B2，将(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(60)和氯甲酸甲酯转化为白色固体3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸甲酯(16mg,55％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.11–12.93(m,1H),7.56–7.32(m,2H),5.40–5.16(m,1H),4.81–4.59(m,1H),4.59–4.40(m,2H),3.64(s,5H),3.28–3.03(br s,2H),2.89–2.62(m,3H),1.94–1.61(br s,4H)；ESI MS m/z 472[M+H]+。
实施例77：3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(139)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E2，将(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(52)和异氰酸甲酯转化为白色固体3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(16mg,55％):无透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.043–12.777(m,1H),7.523–7.348(m,2H),6.536(s,1H),5.275–4.595(m,2H),4.536–4.296(m,2H),3.561(s,2H),3.273–3.076(m,2H),2.891–2.706(br s,1H),2.706–2.614(m,2H),2.576(s,3H),1.906–1.585(m,4H)；ESI MS m/z 472[M+H]+。
实施例78：1-(3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(140)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E1，将(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(44)和乙酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(27mg,41％):mp 190–195℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.17–12.85(m,1H),7.79–7.73(m,1H),7.57–7.52(m,1H),7.30–7.22(m,1H),4.94–4.77(m,1H),4.74-4.63(m,1H),4.62–4.51(m,2H),3.73–3.56(m,2H),3.19–3.06(m,2H),2.83–2.53(m,3H),2.14–2.05(m,3H),1.80–1.64(m,4H)；ESI MS m/z 439[M+H]+。
实施例79：(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(141)的制备
步骤A：按照一般方法GP-C，将(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(46)和甲烷磺酰氯转化为白色固体(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(105mg,60％):mp>260℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.03(s,1H),7.76(dd,J＝9.0,6.0Hz,1H),7.55(dd,J＝10.5,2.5Hz,1H),7.28–7.21(m,1H),5.34–5.23(m,1H),4.72–4.64(m,1H),4.43–4.26(m,2H),3.54–3.39(m,2H),3.22–3.09(m,2H),2.94(s,3H),2.86–2.72(m,3H),1.83–1.67(m,4H)；ESI MS m/z 475[M+H]+。
实施例80：3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(142)的制备
步骤A：向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(85mg,0.32mmol)的THF(2.6mL)溶液中加入LiOH一水合物(15mg,0.35mmol)的水(1.8mL)溶液。搅拌混合物20分钟并用2N HCl中和。将混合物减压浓缩。所得残余物用DMF(3.0mL)在N2气氛中稀释。向所得混合物中加入4-(5-氟-2-三氟甲基)苯基哌啶盐酸盐(11,89mg,0.32mmol)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐(280mg,0.63mmol)和二异丙基乙胺(0.17mL,0.95mmol)。混合物在环境温度下搅拌18小时。所得混合物用H2O(20mL)稀释。溶液用EtOAc(3×20mL)萃取。合并的有机层用饱和的盐水溶液(3×20mL)洗涤并减压浓缩。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,0％to 50％EtOAc在己烷中的溶液)得到白色固体(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲(97mg,65％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.16–9.14(m,1H),7.98(dd,J＝10.0,1.0Hz,1H),7.77(dd,J＝8.5,5.5Hz,1H),7.72(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H),7.52(dd,J＝11.0,3.5Hz,1H),7.29–7.23(m,1H),5.31–5.24(m,1H),4.76–4.70(m,1H),3.42–3.32(m,1H),3.27–3.19(m,1H),3.06–2.96(m,1H),1.98–1.75(m,4H)。
步骤B：向(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(97mg,0.21mmol)的DMF(2.2mL)溶液中通入Ar气20分钟。加入氰化锌(48mg,0.41mmol)，向溶液中通入Ar气10min。向溶液中加入Pd(PPh3)4(24mg,0.021mmol)，将容器密封，微波加热至130℃保持30分钟。混合物用饱和碳酸氢钠(10mL)稀释，并用EtOAc(4×30mL)提取。合并的有机提取物减压浓缩至干。所得残余物在硅胶上层析(IscoCombiFlash Rf装置，12g Redisep柱,0％to 50％EtOAc的己烷溶液)并冷冻干燥得到白色固体3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(35mg,41％):mp 190–197℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.54–9.53(m,1H),8.14(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H),7.82(d,J＝9.5,1.5Hz,1H),7.78(dd,J＝9.0,6.0Hz,1H),7.56(dd,J＝10.5,2.5Hz,1H),7.30–7.24(m,1H),5.20–5.10(m,1H),4.73–4.71(m,1H),3.43–3.34(m,1H),3.29–3.20(m,1H),3.08–3.00(m,1H),1.99–1.77(m,4H)；ESI MS m/z 418[M+H]+。
实施例81：1-(3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(143)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E1，将((4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(48)和乙酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(27mg,63％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.99–12.18(m,1H),7.48(dd,J＝9.0,5.5Hz,1H),7.72(dd,J＝10.5,3.5Hz,1H),7.15–7.08(m,1H),4.90–4.74(m,1H),4.73–4.53(m,3H),3.71–3.55(m,2H),3.28–3.10(m,2H),2.87–2.50(m,3H,与溶剂重合),2.12–2.04(m,3H),1.91–1.71(m,2H),1.66–1.52(m,2H)；ESI MS m/z 405[M+H]+。
实施例82：(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(144)的制备
步骤A：按照一般方法GP-C，将(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(50)和甲烷磺酰氯转化为白色固体(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36mg,51％):mp 260–267℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.03(s,1H),7.48(dd,J＝8.5,5.0Hz,1H),7.28(dd,J＝10.5,3.5Hz,1H),7.13–7.08(m,1H),5.30–5.20(m,1H),4.72–4.63(m,1H),4.41–4.24(m,2H),3.53–3.40(m,2H),3.28–3.13
(m,2H),2.93(s,3H),2.89–2.73(m,3H),1.90–1.74(m,2H),1.70–1.51(m,2H)；ESI MSm/z 441[M+H]+。
实施例83：3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(145)的制备
步骤A：向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(73mg,0.27mmol)的THF(2.2mL)溶液中加入LiOH一水合物(13mg,0.30mmol)的水(1.5mL)溶液。将混合物搅拌20分钟，用2N HCl中和，并减压浓缩。所得残余物在N2气氛中采用DMF(2.9mL)稀释。向此混合物中加入4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶盐酸盐(17,68mg,0.27mmol)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐(240mg,0.54mmol)和二异丙基乙胺(0.14mL,0.81mmol)。混合物在环境温度下搅拌18小时。产生的混合物用H2O(20mL)稀释，通过过滤收集产生的沉淀。所得固体在硅胶上层析(IscoCombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,0-50％EtOAc的己烷溶液)得到白色固体(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)甲酮(50mg,42％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.13–9.11(m,1H),7.98(dd,J＝9.5,1.0Hz,1H),7.71(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H),7.50(dd,J＝9.0,5.5Hz,1H),7.28(dd,J＝25,3.0Hz,1H),7.15–7.10(m,1H),5.28–5.20(m,1H),4.76–4.70(m,1H),3.42–3.29(m,2H,与H2O重合),3.07–2.98(m,1H),1.96–1.65(m,4H)。
步骤B：向含有氰化锌(48mg,0.41mmol)的(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)甲酮(50mg,0.21mmol)的DMF(2.0mL)溶液中通入Ar气20分钟。向溶液中加入Pd(PPh3)4(13mg,0.011mmol)，密封容器，并微波加热至130℃保持30分钟。所得混合物用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)稀释，并用EtOAc萃取(4×30mL)。将合并的有机提取物减压浓缩至干。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,0％-50％EtOAc的己烷溶液)并冷冻干燥得白色固体3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(21mg,54％):mp 211–214℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.52–9.50(m,1H),8.13(dd,J＝9.5,1.0Hz,1H),7.81(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H),7.50(dd,J＝9.0,5.5Hz,1H),7.28(dd,J＝10.5,3.5Hz,1H),7.16–7.11(m,1H),5.16–5.11(m,1H),4.78–4.71(m,1H),3.46–3.30(m,2H,与H2O重合),3.11–3.01(m,1H),1.99–1.70(m,4H)；ESI MS m/z 384[M+H]+。
实施例84：(4-(2-氯-3-(氟苯基)哌啶-1-基)(6-环丙基甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(146)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G2，将(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(40)和环丙烷甲醛转化为白色固体(4-(2-氯-3-(氟苯基)哌啶-1-基)(6-环丙基甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(21mg,36％):mp 187–191℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)12.74(br s,1H),7.38–7.24(m,3H),4.96–4.55(m,2H),3.57(s,2H),3.28–3.17(m,2H),2.91–2.38(m,7H),1.91–1.79(m,2H),1.64–1.56(m,2H),0.92–0.85(m,1H),0.52–0.48(m,2H),0.16–0.08(m,2H)；ESI MS m/z 417[M+H]+。
实施例85：3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸甲酯(147)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E1，将(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(40)和氯甲酸甲酯转化为白色固体3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸甲酯(30mg,65％):mp 182–185℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.88(br s,1H),7.39–7.24(m,3H),4.85–4.61(m,2H),4.54–4.49(m,2H),3.64–3.56(m,5H),3.28–3.12(m,2H),2.93–2.75(m,1H),2.61–2.55(m,2H),1.91–1.78(m,2H),1.64–1.55(m,2H)；ESI MS m/z 421[M+H]+。
实施例86：3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-腈(148)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G2，将(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(40)和溴化氰转化为白色固体3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-腈(19mg,35％):mp 182–185℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.98(br s,1H),7.37–7.24(m,3H),4.91–4.65(m,2H),4.47–4.40(m,2H),3.43–3.12(m,4H),2.93–2.69(m,3H),1.91–1.78(m,2H),1.76–1.55(m,2H)；ESI MS m/z 388[M+H]+。
实施例87：(4-(2-氯-3-(氟苯基)哌啶-1-基)(6-氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(149)的制备
步骤A：按照一般方法GP-G1，将(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(40)和3-氧杂环丁酮转化为白色固体(4-(2-氯-3-(氟苯基)哌啶-1-基)(6-氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(17mg,31％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.77(br s,1H),7.37–7.24(m,3H),4.91–4.47(m,6H),3.71–3.61(m,1H),3.47–3.12(m,4H),2.93–2.78(m,1H),2.74–2.53(m,4H),1.91–1.78(m,2H),1.76–1.55(m,2H)；ESI MS m/z 419[M+H]+。
实施例88：1-(3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(150)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E1，将(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(40)和乙酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(14mg,25％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.18–12.83(m,1H),7.41–7.31(m,1H),7.30–7.22(m,2H),4.87–4.74(m,1H),4.73–4.63(m,1H),4.62–4.53(m,2H),3.71–3.58(m,2H),3.31–3.24(m,1H,与H2O重合),3.20–3.12(m,1H),2.90–2.76(m,1H),2.74–2.52(m,2H),2.11–2.07(m,3H),1.89–1.72(m,2H),1.65–1.52(m,2H)；ESI MSm/z 405[M+H]+；HPLC>99％纯度(方法H).(m,3H),4.91–4.47(m,6H),3.71–3.61(m,1H),3.47–3.12(m,4H),2.93–2.78(m,1H),2.74–2.53(m,4H),1.91–1.78(m,2H),1.76–1.55(m,2H)；ESI MS m/z 419[M+H]+。
实施例89：(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基甲酮(151)的制备
步骤A：按照一般方法GP-C，将((4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(40)和甲烷磺酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基甲酮(21mg,34％):mp 247–253℃decomp.；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.03(br s,1H),7.39–7.31(m,1H),7.29–7.22(m,2H),5.28–5.19(m,1H),4.72–4.63(m,1H),4.39–4.28(m,2H),3.50–3.14(m,7H,与H2O重合),2.86–2.79(m,3H),1.91–1.76(m,2H),1.69–1.53(m,2H)；ESI MS m/z 441[M+H]+。
实施例90：(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)甲酮(152)的制备
步骤A：向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(102mg,0.38mmol)的THF(3.1mL)溶液中加入LiOH一水合物(16mg,0.38mmol)的H2O(2.0mL)溶液。将混合物搅拌20分钟并用2N HCl中和。混合物减压浓缩。所得残余物在N2气氛中用DMF(4.0mL)稀释。向所得混合物中加入4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶盐酸盐(14,94mg,0.38mmol)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐(334mg,0.76mmol)和二异丙基乙胺(0.20mL,1.1mmol)。将混合物在环境温度下搅拌18小时。将产生的混合物用H2O(20mL)稀释，通过过滤收集产生的沉淀。所得固体在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,0-50％EtOAc的己烷溶液)得到白色固体(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)甲酮(80mg,48％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.11(br s,1H),8.03–7.95(m,1H),7.71(dd,J＝9.6,1.8Hz,1H),7.43–7.23(m,3H),5.27–5.17(m,1H),4.80–4.69(m,1H),3.48–3.34(m,2H),3.12–2.96(m,1H),2.02–1.59(m,4H)；ESI MS m/z 438[M+H]+。
步骤B：向含有氰化锌(43mg,0.65mmol)的(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)甲酮(80mg,0.18mmol)的DMF(2.0mL)溶液中通入Ar气20分钟。向溶液中加入Pd(PPh3)4(21mg,0.018mmol)，密封容器，微波加热至130℃保持30min。所得混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(4×30mL)萃取。合并的有机提取物减压浓缩至干。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,0％-60％EtOAc的己烷溶液)并冷冻干燥得到白色固体3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(38mg,55％):mp158–163℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.51–9.50(m,1H),8.12(dd,J＝9.5,1.0Hz,1H),7.81(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H),7.41–7.34(m,1H),7.31–7.24(m,2H),5.16–5.09(m,1H),4.78–4.71(m,1H),3.47–3.37(m,2H),3.12–3.03(m,1H),2.00–1.64(m,4H)；ESI MS m/z 384[M+H]+。
实施例91：1-(3-(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(153)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E1，将4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(52)和乙酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(33mg,50％):mp 204–205℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.13–12.82(m,1H),8.01–7.97(m,2H),7.96–7.90(m,1H),4.92–4.79(m,1H),4.75–4.63(m,1H),4.62–4.53(m,2H),3.72–3.58(m,2H),3.18–3.05(m,2H),2.84–2.48(m,3H,与溶剂重合),2.12–2.05(m,3H),1.97–1.78(m,2H),1.76–1.61(m,2H)；ESI MS m/z 489[M+H]+。
实施例92：(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(154)的制备
步骤A：按照一般方法GP-C，将(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(52)和甲烷磺酰氯转化为白色固体(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基-(5-(甲磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(25mg,37％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.02(s,1H),8.01–7.98(m,2H),7.94–7.91(m,1H),5.31–5.24(m,1H),4.73–4.63(m,1H),4.40–4.26(m,2H),3.51–3.41(m,2H),3.21–3.06(m,2H),2.93(s,3H),2.85–2.74(m,3H),1.96–1.80(m,2H),1.79–1.64(m,2H)；ESI MS m/z 525[M+H]+。
实施例93：(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(155)的制备
步骤A：向6-甲氧基-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(66mg,0.30mmol)的THF(2.5mL)溶液中加入LiOH一水合物(25mg,0.60mmol)的H2O(1.6mL)溶液。将混合物搅拌20分钟并用2N HCl中和。将混合物减压浓缩。所得残余物用在N2气氛中用DMF(3.3mL)稀释。向该混合物中加入4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(20,100mg,0.30mmol)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐(266mg,0.60mmol)和二异丙基乙胺(0.16mL,0.90mmol)。将混合物在环境温度下搅拌18小时。产生的混合物用H2O(20mL)稀释并用EtOAc萃取(4×30mL)。合并的有机提取物用饱和的盐水溶液(3×30ml)洗涤并减压浓缩。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,24g Redisep柱,含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％-2％MeOH的CH2Cl2溶液)。所得残余物溶于CH2Cl2(10mL)和己烷(100mL)中。将溶液部分浓缩，通过过滤收集生成的固体得到灰白色固体(4-(3,5-双(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-甲氧基-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)甲酮(80mg,56％):mp146–149℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.55(d,J＝2.0Hz,1H),8.03(s,2H),7.95–7.89(m,2H),7.38(dd,J＝10,2.5Hz,1H),5.40–5.33(m,1H),4.81–4.73(m,1H),3.85(s,3H),3.39–3.31(m,1H,与H2O重合),3.26–3.16(m,1H),3.02–2.93(m,1H),2.03–1.77(m,4H)；ESI MS m/z 473[M+H]+。
实施例94：1-(3-(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(156)的制备
步骤A：按照一般方法GP-E1，将(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(56)和乙酰氯转化为白色固体1-(3-(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(33mg,43％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.26–12.80(m,1H),7.61–7.56(m,1H),7.56–7.47(m,2H),4.87–4.49(m,4H),3.72–3.56(m,2H),3.25–3.04(m,2H),2.84–2.53(m,3H),2.07–1.89(m,5H),1.79–1.64(m,2H)；ESI MS m/z 439[M+H]+。
实施例95：3-(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(157)的制备
步骤A：向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(72mg,0.27mmol)的THF(2.2mL)溶液中加入LiOH一水合物(12mg,0.29mmol)的H2O(1.5mL)溶液。将混合物搅拌20分钟并用2N HCl中和。将混合物减压浓缩。所得残余物在N2气氛中用DMF(2.8mL)稀释。向混合物中加入4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(23,75mg,0.27mmol)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐(236mg,0.53mmol)和二异丙基乙胺(0.14mL,0.80mmol)。将混合物在环境温度下搅拌18小时。生成的混合物用H2O(20mL)稀释并用EtOAc萃取(3×30mL)。合并的有机提取物用饱和的盐水溶液(30mL)洗涤并减压浓缩。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12gRedisep柱,0-50％EtOAc的己烷溶液)得到浅橙色膜状物(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(80mg,64％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.12–9.10(m,1H),8.00–7.95(m,1H),7.74–7.68(m,1H),7.65–7.50(m,3H),5.29–5.15(m,1H),4.82–4.68(m,1H),3.41–3.19(m,2H,与H2O重合),3.07–2.97(m,1H),2.34–2.19(m,1H),2.15–2.02(m,1H),1.93–1.75(m,2H)；ESI MS m/z 472[M+H]+。
步骤B：向含有氰化锌(40mg,0.34mmol)的(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(80mg,0.17mmol)的DMF(2.0mL)溶液中通入Ar气15分钟。向溶液中加入Pd(PPh3)4(19mg,0.017mmol)，密封容器，并微波加热至130℃保持30min(分钟)。混合物用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)稀释并用EtOAc萃取(3×30mL)。合并的有机提取物用饱和的盐水溶液(2×30mL)洗涤并减压浓缩至干。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12gRedisep柱,0％-50％EtOAc的己烷溶液)，然后进行HPLC(Phenomenex Luna C18(2),250.0×50.0mm,15微米,含有0.05％TFA的H2O和含有0.05％TFA的CH3CN)，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，并冷冻干燥得到白色固体3-(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(23mg,33％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.54–9.52(m,1H),8.14–8.11(m,1H),7.82–7.78(m,1H),7.64–7.59(m,1H),7.57–7.50(m,2H),5.17–5.10(m,1H),4.79–4.72(m,1H),3.40–3.24(m,2H,与H2O重合),3.07–2.98127(m,1H),2.30–2.19(m,1H),2.14–2.03(m,1H),1.91–1.79(m,2H)；ESI MS m/z 418[M+H]+。
实施例96：1-(3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(158)的制备
步骤A：向4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.50g,4.53mmol)的1,2-二甲氧基乙烷(25mL)溶液中通入N2气30分钟。加入4-氟-(2-三氟甲基)苯基硼酸(1.13g,5.43mmol)，然后加入2M碳酸钠溶液(2.9mL)。向所得混合物中通入N2气10分钟。加入Pd(PPh3)4(260mg,0.225mmol)，将所得混合物在N2气氛下加热至80℃。72小时后,将所得溶液冷却至环境温度并用5％氯化铝溶液(100mL)稀释。用EtOAc(3×50mL)提取溶液。合并的有机提取物用饱和盐水(2×50mL)洗涤并减压浓缩至干。残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,24g Redisep柱,0％-100％EtOAc的己烷溶液)得到棕色油状物4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.29g,83％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.37–7.08(m,3H),5.57(br s,1H),4.02–3.99(m,2H),3.62–3.58(m,2H),2.32(br s,2H),1.46(s,9H)。
步骤B：向4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.29g,3.74mmol)的乙酸乙酯(20mL)和乙酸(0.22mL)溶液中通入N2。加入二氧化铂(84mg)，向所得悬浮液中通入N2气5分钟。将混合物置于1atm的H2气氛中。18小时后，向反应中通入N2气15分钟，通过硅藻土垫过滤，再次加入二氧化铂(100mg)并在1atm的氢气氛中搅拌。在接下来的64小时中重复过滤和二氧化铂的再次加入三次。反应混合物通过硅藻土过滤。所得滤液用碳酸氢钠溶液洗涤，干燥(Na2SO4)并减压浓缩。残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,24g Redisep柱,0％-100％EtOAc的己烷溶液)得到黄色油状物4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.813g,63％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.37–7.20(m,3H),4.27–4.22(m,2H),3.07–2.99(m,1H),2.85–2.75(m,2H),2.04–1.46(m,13H)。
步骤C：向4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.813g,2.34mmol)的乙醚(6mL)溶液中加入2M HCl的乙醚(10mL)。所得混合物在环境温度下搅拌18小时。将反应混合物减压浓缩，残余物用乙醚(10mL)研磨。通过过滤收集固体得到白色固体4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基哌啶盐酸盐(0.244g,37％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.79(br s,1H),7.59–7.54(m,1H),7.37–7.24(m,2H),3.68–3.64(m,2H),3.27–3.03(m,4H),2.39–2.27(m,2H),2.01–1.96(m,2H)；ESI MS m/z248[M+H]+。
步骤D：在N2气氛下，向4-(4-氟-2-三氟甲基)苯基哌啶盐酸盐(75mg,0.26mmol)、6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(75mg,0.29mmol)和二异丙基乙胺(0.14mL,0.80mmol)的DMF(3mL)溶液中加入EDC(70mg,0.37mmol)和HOBt(49mg,0.36mmol)。所得溶液在环境温度下搅拌24h。反应混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(3×10mL)提取。合并的有机提取物用盐水(1×20mL)洗涤并减压浓缩至干。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,0％-100％乙酸乙酯的己烷溶液)得到白色固体3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(75mg,58％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.04(br s,1H),7.72–7.68(m,1H),7.57–7.49(m,2H),4.84–4.64(m,1H),4.49–4.45(m,2H),3.56–3.53(m,2H),3.08(br s,2H),2.78–2.50(m,4H),1.75(br s,4H),1.42(s,9H)；ESI MS m/z 497[M+H]+。
步骤E：向3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(74mg,0.15mmol)的CH2Cl2(3mL)和甲醇(1mL)溶液中加入2N HCl(2mL,2M HCl的Et2O溶液)。将混合物在环境温度下搅拌4小时。反应混合物用Et2O(30mL)稀释，通过过滤收集产生的固体得到白色固体(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(64mg,98％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.14(s,1H),9.16(br s,2H),7.73–7.68(m,1H),7.59–7.50(m,2H),4.84–4.69(m,1H),4.32–4.25(m,2H),3.26–3.03(m,2H),2.89–2.81(m,2H),2.68–2.48(m,4H),1.73(m,4H)；ESI MS m/z 397[M+H]+。
步骤F：向(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(63mg,0.15mmol)和二异丙基乙胺(70μL,0.40mmol)的DMF(3.0mL)溶液中加入乙醛(11μL,0.15mmol)。将混合物搅拌16小时。减压除去溶剂，残余物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(2×10mL)提取。合并的有机提取物用饱和盐水(1×20mL)洗涤，Na2SO4干燥并减压浓缩至干。所得残余物在硅胶上层析(IscoCombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,0％-100％(含有0.01％NH4OH的10％CH3OH的CH2Cl2溶液)的CH2Cl2溶液)并进一步通过反相色谱纯化(Isco CombiFlash Rf装置，12g Redisep c18金色谱柱(gold column),0％-100％乙腈水溶液)得到白色固体1-(3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(20mg,94％):mp 176–180℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.86(s,1H),7.71–7.68(m,1H),7.56–7.49(m,2H),4.94–4.55(m,3H),3.66–3.62(m,2H),3.10(br s,2H),2.85–2.48(m,4H),2.10–2.08(m,3H),1.73(m,4H)；ESI MS m/z 439[M+H]+。
实施例97：(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(159)的制备
步骤A：在N2气氛下，向4-(4-氟-2-三氟甲基)苯基哌啶盐酸盐(75mg,0.26mmol)、5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(75mg,0.29mmol)和二异丙基乙胺(0.14mL,0.80mmol)的DMF(3.0mL)溶液中加入EDCI(70mg,0.37mmol)和HOBt(49mg,0.36mmol)。所得溶液在环境温度下搅拌16小时。反应混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(3×30mL)提取。合并的有机提取物用盐水(1×30mL)洗涤并减压浓缩至干。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12gRedisep柱,0％-100％乙酸乙酯的己烷溶液)得到白色固体3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(109mg,77％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.96(s,1H),7.70–7.68(m,1H),7.57–7.49(m,2H),5.32–5.13(m,1H),4.74–4.64(m,1H),4.47–4.45(m,2H),3.59(br s,2H),3.22–3.10(m,2H),2.82–2.50(m,3H),1.73(brs,4H),1.42(s,9H)；ESI MS m/z 497[M+H]+。
步骤B：向3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]-吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(85mg,0.17mmol)的CH2Cl2(3mL)和甲醇(1mL)溶液中加入2N HCl(2mL,2M in Et2O)。将混合物在环境温度下搅拌4小时。反应混合物用Et2O(30mL)稀释，并通过过滤收集产生的固体得到灰白色固体(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(78mg,>99％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.14(br s,1H),9.13(br s,2H),7.73–7.67(m,1H),7.58–7.50(m,2H),5.32–4.69(m,3H),4.24(s,2H),3.38(br s,2H),3.21 3.07(m,2H),2.96–2.72(m,3H),1.75(m,4H)；ESI MS m/z 397[M+H]+。
步骤C：向(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(38mg,0.088mmol)和二异丙基乙胺(35μL,0.20mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入甲烷磺酰氯(9μL,0.12mmol)。将混合物在环境温度下搅拌16小时。减压除去溶剂，残余物用H2O(10mL)稀释并用乙酸乙酯(3×10mL)提取。合并的有机提取物被干燥(Na2SO4)并减压浓缩。将所得固体在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,0％-100％(含有0.01％NH4OH的10％CH3OH的CH2Cl2溶液)的CH2Cl2溶液)并冷冻干燥得到白色固体(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(4mg,10％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.05(s,1H),7.73–7.69(m,1H),7.57–7.46(m,2H),5.28–5.24(m,1H),4.70–4.65(m,1H),4.38–4.33(m,2H),3.51–3.45(m,2H),3.22–3.10(m,2H),2.94(s,3H),2.84–2.70(m,3H),1.73(br s,4H)；ESIMS m/z 475[M+H]+。
实施例98：3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(160)的制备
步骤A：向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(81mg,0.30mmol)的THF(2.5mL)溶液中加入LiOH一水合物(14mg,0.30mmol)的H2O(1.7mL)溶液。将混合物搅拌20分钟并用2N HCl中和。减压浓缩该混合物。在N2气氛中将所得残余物用DMF(3.2mL)稀释。向此混合物中加入4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶盐酸盐(85mg,0.30mmol)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐(267mg,0.60mmol)和二异丙基乙胺(0.15mL,0.91mmol)。在环境温度下搅拌混合物18小时。所得混合物用H2O(20mL)稀释，通过过滤收集生成的沉淀。所得固体在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,0-50％EtOAc的己烷溶液)得到橙色膜状物(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(92mg,64％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.13(dd,J＝1.7,0.9Hz 1H),7.98(dd,J＝10,0.9Hz,1H),7.77–7.69(m,2H),7.60–7.47(m,2H),5.30–5.18(m,1H),4.77–4.68(m,1H),3.43–3.34(m,1H),3.28–3.12(m,1H),3.11–2.90(m,1H),1.97–1.69(m,4H)；ESI MS m/z 472[M+H]+。
步骤B：向含有氰化锌(45mg,0.38mmol)的(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(90mg,0.19mmol)的DMF(2.2mL)溶液中通入Ar气15分钟。向此溶液中加入Pd(PPh3)4(22mg,0.019mmol)，密封容器并微波加热至130℃保持30min。混合物用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)稀释并用EtOAc萃取(3×20mL)。合并的有机提取物饱和的盐水溶液(30mL)洗涤并减压浓缩至干。所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep柱,0％-50％EtOAc的己烷溶液)，接着进行HPLC(Phenomenex Luna C18(2),250.0×50.0mm,15微米,含有0.05％TFA的H2O和含有0.05％TFA的CH3CN)，用饱和碳酸氢钠溶液(3×30mL)洗涤，然后冷冻干燥得到白色固体3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(32mg,40％):mp 158–162℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.53(s,1H),8.14(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.82(dd,J＝9.6,1.5Hz,1H),7.77–7.67(m,1H),7.61–7.47(m,2H),5.19–5.04(m,1H),4.80–4.67(m,1H),3.46–3.14(m,2H,与H2O重合),3.12–2.94(m,1H),2.02–1.70(m,4H)；ESIMS m/z 418[M+H]+。
实施例99：3-(3-(4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(161)的制备
步骤A：将(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)硼酸(0.453g,2.02mmol)、4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.669g,2.02mmol)、四(三苯基膦)钯(0.117g,0.1mmol)、碳酸钠(2M,5mL)和1,2-二甲氧基乙烷(10mL)的混合物在80℃微波辐照下加热1.5小时。冷却至环境温度后，混合物用水(80mL)稀释并用乙酸乙酯(80mL)提取。提取物用盐水(2×50mL)洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物在硅胶上层析(0-25％EtOAc的己烷溶液)得到无色油状物4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.614g,84％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.59(d,J＝8.5Hz,1H),7.37–7.22(m,1H),7.22(d,J＝1.68Hz,1H),5.60(br.1H),4.02(br,2H),3.61(br,2H),2.34(br,2H),1.50(s,9H)；MS(ESI+)m/z 306[M+H]+。
步骤B：用H2气囊氢化4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.614g,1.70mmol)、氧化铂(0.200g,0.881mmol)、乙酸(1mL)和乙酸乙酯(15mL)的混合物16小时并过滤。浓缩后，残余物在硅胶上层析(0-30％EtOAc的己烷溶液)得到无色稠油状物4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.302g,48％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.56(d,J＝8.5Hz,1H),7.38(s,1H),7.29(d,J＝1.3Hz,1H),4.26(br,2H),3.04(m,1H),2.80(m,2H),1.80–1.55(m,4H),1.49(s,9H)；MS(ESI+)m/z 308[M+H]+。
步骤C：向4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.302g,0.830mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入HCl溶液(2M HCl的乙醚醚溶液,5mL)。将混合物搅拌4小时并蒸发，所得固体溶于DMF(8mL)中。在单独的烧瓶中，向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(0.224g,0.830mmol)的THF(5mL)溶液中加入氢氧化锂水合物(0.035g,0.830mmol)的水(2mL)溶液。将混合物搅拌20分钟,用2N HCl酸化至PH 6并蒸发至干。向残余物中加入苯并三唑-1-基-氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(0.550g,1.25mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.646g,5.00mmol)和第一个反应中的到的DMF溶液。将混合物在环境温度下搅拌16小时后倒入水中。用乙酸乙酯提取所得混合物，将有机层用盐水洗涤三次，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物在硅胶上层析(0-60％EtOAc的己烷溶液)得到固体(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(0.205g,50％):1H NMR(300MHz,CDCl3)9.38(m,1H),7.79(dd,J＝9.6,0.9Hz,1H),7.60(d,J＝8.5Hz,1H),7.50(dd,J＝9.6,1.7Hz,1H),7.42(d,J＝1.4Hz,1H),7.31(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),5.76–5.71(m,1H),5.01–4.95(m,1H),3.38–3.26(m,2H),3.02–2.92(m,1H),2.01–1.82(m,4H)；MS(ESI+)m/z 489[M+H]+。
步骤D：将(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(0.205g,0.42mmol)、氰化锌(0.099g,0.840mmol)、四(三苯基膦)钯(0.048g,0.042mmol)和DMF(4mL)的混合物在130℃微波辐照下加热30分钟。冷却至室温后，混合物用水(80mL)稀释并用乙酸乙酯(80mL)提取。提取物用盐水(2×80mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。所得残余物在硅胶上层析(0-60％EtOAc的己烷溶液)的到白色固体3-(4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(0.115g,63％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.72(s,1H),7.98(dd,J＝9.5,1.1Hz,1H),7.60(d,J＝8.5Hz,1H),7.51(dd,J＝9.5,1.6Hz,1H),7.41(s,1H),7.31(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),5.77–5.72(m,1H),5.02–4.96(m,1H),3.40(m,2H),3.04–2.94(m,1H),2.06–1.80(m,4H)；MS(ESI+)m/z 434[M+H]+。
实施例100：3-(4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(162)的制备
步骤A：将(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)硼酸(0.453g,2.02mmol)、4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.669g,2.02mmol)、四(三苯基膦)钯(0.117g,0.1mmol)、碳酸钠(2M,5mL)和1,2-二甲氧基乙烷(10mL)的混合物在80℃微波辐照下加热1小时。冷却至环境温度后，混合物用水(80mL)稀释并用乙酸乙酯(80mL)提取。提取物用盐水(2×50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。所得残余物在硅胶上层析(0-30％EtOAc的己烷溶液)得到无色油状物4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.438g,60％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.44–7.34(m,2H),7.09(m,1H),5.49(br。1H),4.01(br,2H),3.60(br,2H),2.30(br,2H),1.50(s,9H)；MS(ESI+)m/z 306[M+H]+。
步骤B：使用气囊将4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.438g,1.21mmol)、氧化铂(0.082g,0.363mmol)、乙酸(0.073g,1.21mmol)和乙酸乙酯(20mL)的混合物氢化20小时并过滤。所得物质在80℃下再次氢化16小时并过滤。浓缩后，残余物在硅胶上层析(0-30％EtOAc的己烷溶液)得到无色稠油状物4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.115g,26％):1H NMR(300MHz,CDCl3)7.42–7.30(m,3H),4.25(br,2H),3.21(m,1H),2.81(m,2H),1.80–1.60(m,4H),1.49(s,9H)；MS(ESI+)m/z 308[M+H]+。
步骤C：向4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.115g,0.316mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入HCl(2M HCl的乙醚溶液,3mL)。将混合物搅拌3小时并蒸发，所得固体溶于DMF(3mL)中。在单独的烧瓶中，向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(0.094g,0.348mmol)的THF(3mL)溶液中加入氢氧化锂水合物(0.015g,0.348mmol)的water(1mL)溶液。将混合物搅拌20分钟，用2N HCl酸化至PH 6并蒸发。向残余物中加入苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(0.210g,0.474mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.163g,1.26mmol)和第一个反应中所得的DMF溶液。将混合物在环境温度下搅拌16小时后倒入水中。用乙酸乙酯提取混合物，有机层用盐水洗涤三次，干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。所得残余物在硅胶上层析(0-60％EtOAc的己烷溶液)得到固体(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(0.076g,49％):1H NMR(300MHz,CDCl3)9.36(m,1H),7.78(dd,J＝9.6,0.9Hz,1H),7.50–7.34(m,4H),5.73–5.68(m,1H),5.00–4.94(m,1H),3.52–3.28(m,2H),2.97(m,1H),2.01–1.74(m,4H)；MS(ESI+)m/z 489[M+H]+。
步骤D：将(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(0.076g,0.156mmol)、氰化锌(0.037g,0.312mmol)、四(三苯基膦)钯(0.018g,0.0156mmol)和DMF(2mL)的混合物在130℃微波辐照下加热30分钟。冷却至室温后，将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL)提取。提取物用盐水(2×50mL)洗涤，Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物在硅胶上层析(0-60％EtOAc的己烷溶液)得到白色固体3-(4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(0.026g,38％):1H NMR(300MHz,CDCl3)9.70(s,1H),7.97(dd,J＝9.5,1.0Hz,1H),7.52–7.32(m,4H),5.74–5.69(m,1H),5.00–4.95(m,1H),3.52–3.31(m,2H),2.99(m,1H),2.06–1.75(m,4H)；MS(ESI+)m/z 434[M+H]+。
实施例101：(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(163)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D1，将(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(42)和甲醛转化为白色固体(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(25mg,32％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.93(m,1H),7.56–7.32(m,3H),5.16(m,1H),4.81(m,1H),2.61-3.42(m,9H),1.94–1.61(m,4H)；ESI MS m/z 391[M+H]+。
实施例102：(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(环丙基甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(164)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D1，将(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(42)和环丙基甲醛转化为白色固体(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(环丙基甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(41mg,65％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.91(m,1H),7.56–7.39(m,3H),5.15(m,1H),4.85(m,1H),3.53(m,2H),3.12(m,1H),2.62-2.35(m,5H),2.43(m,2H),1.87(m,2H),1.63(m,2H),0.98(m,1H),0.55(m,2H),0.021(m,2H)；ESI MS m/z 417[M+H]+。
实施例103：(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(165)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D1，将(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(42)和3-氧杂环丁酮转化为白色固体(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(53mg,62％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.91(m,1H),7.56–7.39(m,3H),5.15(m,1H),4.52-4.85(m,5H),3.53(m,1H),3.12-3.40(m,3H),2.82-265(m,3H),1.72(m,2H),1.53(m,2H)；ESI MS m/z 419[M+H]+。
实施例104：(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(166)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D2，将(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(42)和2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯转化为白色固体(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(56mg,62％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.91(m,1H),7.56–7.39(m,3H),5.15(m,1H),4.73(m,1H),3.82(m,2H),3.32(m,1H),2.89(m,2H),2.65(m,2H),1.89(m,2H),1.56(m,2H)；ESI MS m/z 445[M+H]+。
实施例105：(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(167)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D2，将(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(42)和3-溴-1,1,1-三氟丙烷转化为白色固体(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36mg,43％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.01(m,1H),7.56–7.39(m,3H),5.15(m,1H),4.52(m,2H),3.41(m,2H),2.82(m,3H),1.89(m,2H),1.56(m,2H)；ESI MSm/z 459[M+H]+。
实施例106：(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(168)的制备
步骤A：按照一般方法GP-D2，将(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮盐酸盐(42)和溴乙基甲基醚转化为白色固体(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮as a(53mg,45％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.89(m,1H),7.56–7.39(m,3H),5.15(m,1H),4.52(m,2H),3.51(m,4H),3.23(m,4H),2.72(m,6H),1.89(m,2H),1.56(m,2H)；ESI MS m/z 421[M+H]+。
实施例107：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(哌嗪-1-羰基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(169)的制备
步骤A：将哌嗪-1-羧酸叔丁酯(210mg,1.13mmol)和吡啶(137mg,1.73mmol)的无水CH2Cl2(2mL)溶液在N2气氛下冷却至0℃，用三光气(402mg,1.35mmol)的无水CH2Cl2(2mL)溶液处理并在0℃下搅拌1小时。除去冷却浴，将反应在室温下再搅拌1小时。之后，采用1M盐酸(25mL)稀释混合物并用CH2Cl2(3×20mL)萃取。合并的有机提取物用盐水(20mL)洗涤，Na2SO4干燥，并过滤除去干燥剂。将滤液减压浓缩至干得到白色固体4-(氯羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(280mg,100％):1H NMR(500MHz,CDCl3)δ10.76(br s,1H),7.33(dd,J＝17.0,9.0Hz,1H),7.11(dd,J＝9.0,4.0Hz,1H),4.88–4.52(m,2H),4.69(br s,2H),4.62(s,2H),3.49(可见t,J＝4.5Hz,4H),3.32(可见t,J＝4.5Hz,4H),3.25(可见t,J＝12.5Hz,1H),3.14–2.88(m,2H),1.94(d,J＝12.5Hz,2H),1.72–1.66(m,2H),1.48(s,9H)。
步骤B：在N2气氛中将4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮盐酸盐(50mg,0.11mmol)、N,N,N-二异丙基乙胺(0.05mL,0.3mmol)和DMAP(0.5mg,0.004mmol)的无水CH2Cl2(1mL)溶液冷却至0℃，采用4-(氯羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg,0.12mmol)处理并在0℃下搅拌1小时。除去冷却浴，将反应在室温下再搅拌4小时。之后，混合物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,12g Redisep金色谱柱,0％-10％CH3OH的CH2Cl2溶液)得到白色固体4-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(48mg,71％):1H NMR(500MHz,CDCl3)δ10.76(br s,1H),7.33(dd,J＝17.0,9.0Hz,1H),7.11(dd,J＝9.0,4.0Hz,1H),4.88–4.52(m,2H),4.69(br s,2H),4.62(s,2H),3.49(可见t,J＝4.5Hz,4H),3.32(可见t,J＝4.5Hz,4H),3.25(可见t,J＝12.5Hz,1H),3.14–2.88(m,2H),1.94(d,J＝12.5Hz,2H),1.72–1.66(m,2H),1.48(s,9H)。
步骤C：在N2气氛中将4-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,6-四氢-吡咯并[3,4-c]吡唑-5-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(47mg,0.077mmol)的无水CH2Cl2(1.5mL)溶液冷却至0℃并用TFA(1.5mL)处理。加入完成后，除去冷却浴并在室温下搅拌反应1h。之后，将混合物减压浓缩至干，用CH2Cl2(100mL)稀释，并用2M无水NaOH(2×50mL)洗涤。有机层用Na2SO4干燥，然后过滤除去干燥剂。滤液减压浓缩至干，并将所得残余物在硅胶上层析(Isco CombiFlash Rf装置,120gRedisep柱,0％-40％CH3OH的CH2Cl2溶液)。将合并的柱级分减压浓缩至干，发现其含有残余的TFA(～17％)。所得残余物(21mg)用CH2Cl2(5mL)和CH3OH(1mL)的混合物稀释，用MP-碳酸酯(大孔甲基聚苯乙烯碳酸三乙铵)处理，并在室温下搅拌2小时。之后，过滤混合物并将滤液减压浓缩至干得到白色固体(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(哌嗪-1-羰基)-1,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(13mg,33％):mp153–155℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.20(br s,1H),7.75(dd,J＝18.0,9.0Hz,1H),7.55–7.52(m,1H),4.65–4.51(m,6H),3.24–3.22(m,2H),3.14(t,J＝5.0Hz,4H),2.96–2.80(m,1H),2.70–2.68(m,3H),2.32–2.22(m,1H),1.79–1.70(m,4H),1个不容易观察到的质子；ESI MS m/z 513[M+H]+。
实施例108：取代哌啶化合物的RPB4结合
通过两种体外测定、RBP4结合(SPA)和视黄醇依赖性RBP4-TTR相互作用(HTRF)测试表1中列出的化合物。化合物结合RBP4和/或拮抗视黄醇依赖性RBP4-TTR相互作用(表2)。该活性表明化合物降低血清RBP4和视黄醇的水平。
表1
表2
实施例109：另外的取代哌啶化合物的RPB4结合
本发明的另一方面提供了具有RBP4拮抗剂活性的表1的化合物的类似物。这些类似物含有位于哌啶核心4-位的二取代或三取代的苯环。本文描述的化合物63-162的类似物类似地结合RBP4并拮抗视黄醇依赖性RBP4-TTR相互作用。
通过两种体外测定即RBP4结合(SPA)和视黄醇依赖性RBP4-TTR相互作用(HTRF)测试作为表1中所描述化合物的类似物的另外的哌啶化合物。这些哌啶化合物结合RBP4并拮抗视黄醇依赖性RBP4-TTR相互作用。该活性表明化合物降低血清RBP4和视黄醇的水平。
实施例110：哺乳动物模型中的功效
在野生型小鼠和Abca4-/-小鼠中测试表1中所列化合物的有效性。Abca4-/-小鼠模型证明了脂褐质在RPE中的加速累积，且所述模型被认为是减少脂褐质累积的药物的临床前功效模型。化合物以30mg/kg口服剂量给药3周。在处理的动物中血清RBP4水平降低。A2E/isoA2E和其他双视黄酸的水平在处理的小鼠中减少。A2-DHP-PE和atRAL di-PE的水平也有所降低。
在野生型小鼠和Abca4-/-小鼠中测试作为表1中所描述化合物的类似物的另外的哌啶化合物的效力。Abca4-/-小鼠模型证明了脂褐质在RPE中的加速累积，且所述模型被认为是减少脂褐质累积的药物的临床前功效模型。化合物以30mg/kg口服剂量给药3周。在处理的动物中血清RBP4水平降低。A2E/isoA2E和其他双视黄酸的水平在处理的小鼠中减少。A2-DHP-PE和atRAL di-PE的水平也有所降低。
实施例111：化合物81在哺乳动物模型中的功效
化合物81抑制Abca4-/-小鼠模型中的双视黄酸累积。Abca4-/-小鼠在17周龄时具有～15-19皮摩尔/眼范围内的A2E水平。从17周龄开始，小鼠用25mg/kg的化合物81处理12周。与溶媒处理的对照相比，在化合物81处理的小鼠中，双视黄酸含量降低53％(图8)。该数据与从给药方案开始就完全阻止双视黄酸合成的这一事实一致。减少的双视黄酸累积导致化合物81处理的小鼠中显著的血清RBP4减少(图9)。
实施例112：其他化合物在哺乳动物模型中的功效
化合物34、36和38抑制Abca4-/-小鼠模型中的双视黄酸累积。从17周龄开始，小鼠用25mg/kg的化合物34、36或38处理12周。相对于溶媒处理的对照，在上述化合物处理的小鼠中双视黄酸含量的减少。该数据与从给药方案开始就完全阻止双视黄酸合成的这一事实一致。减少的双视黄酸累积导致上述化合物处理的小鼠中显著的血清RBP4减少。
化合物30、40和42抑制Abca4-/-小鼠模型中的双视黄酸累积。从17周龄开始，小鼠用25mg/kg的化合物30、40或42处理12周。相对于溶媒处理的对照，在上述化合物处理的小鼠中存在双类视黄醇含量的减少。该数据与从给药方案开始就完全阻止双视黄酸合成的这一事实一致。减少的双视黄酸累积导致上述化合物处理的小鼠中显著的血清RBP4减少。
化合物63-80或82-169中的每一个均抑制Abca4-/-小鼠模型中的双视黄酸累积。从17周龄开始，小鼠用25mg/kg的化合物63-80或82-169中的任一种处理12周。相对于溶媒处理的对照，在上述化合物处理的小鼠中存在双类视黄醇含量的减少。该数据与从给药方案开始就完全阻止双视黄酸合成的这一事实一致。减少的双视黄酸累积导致上述化合物处理的小鼠中显著的血清RBP4减少。
实施例113：施用于受试者
将一定量的化合物81施用于患有AMD的受试者的眼睛。所述化合物的量可以有效治疗受试者。
将一定量的化合物81施用于患有斯特格氏病的受试者的眼睛。所述化合物的量可以有效治疗受试者。
将一定量的化合物63-80或82-169中的任一种施用于患有AMD的受试者的眼睛。所述化合物的量可以有效治疗受试者。
将一定量的化合物63-80或82-169中的任一种施用于患有斯特格氏病的受试者的眼睛。所述化合物的量可以有效治疗受试者。
讨论
在发达国家中年龄相关性黄斑变性(AMD)是失明的主要原因。其患病率高于阿尔茨海默病。没有针对最常见的干性AMD的疗法。干性AMD由位于光感受细胞下方并为这些光感受细胞提供关键的代谢支持的视网膜色素上皮(RPE)中的异常所引发。RPE功能障碍在称为黄斑的视网膜的中心部分诱导光感受器的继发性变性。实验数据表明萎缩性AMD视网膜中高水平的脂褐质诱导RPE和相邻光感受器的退化。除了AMD，脂褐质的显著累积是斯特格氏病(STGD)的标志，斯特格氏病是遗传性青少年期发作的黄斑变性。RPE脂褐质的主要细胞毒性成分是双视黄酸吡啶鎓A2E。A2E以非酶促的方式形成在视网膜中，并且可以被认为是正常运行的视循环的副产物。鉴于A2E对RPE和光感受器的确定的细胞毒性影响，对A2E形成的抑制可延迟患有干性AMD和STGD的患者的视力丧失。这表明，小分子视循环抑制剂可以减少视网膜中A2E的形成，并延长患有干性AMD和STGD的患者的RPE和光感受器的存活。视网膜中视循环速率和A2E产生速率取决于全反式视黄醇从血清向RPE的汇集。RPE视黄醇摄取取决于血清视黄醇浓度。血清视黄醇的药理学下调是干性AMD和STGD的有效治疗策略。血清视黄醇在循环中保持为与视黄醇结合蛋白(RBP4)和转甲状腺素蛋白(TTR)结合的三元复合物。在没有与TTR相互作用的情况下，RBP4-视黄醇复合物由于肾小球滤过而快速清除。视黄醇与RBP4的结合的是形成RBP4-TTR复合物所必需的；apo-RBP4不与TTR相互作用。重要的是，RBP4上的视黄醇结合位点在空间上接近介导RBP4-TTR相互作用的界面。不希望受任何科学理论的束缚，本文的数据显示，小分子RBP4拮抗剂从RBP4置换视黄醇并破坏RBP4-TTR相互作用，这将降低血清视黄醇浓度，抑制视网膜对视黄醇的摄取并作为间接视循环抑制剂来减少细胞毒性A2E的形成。
血清RBP4作为药物靶标用于视觉周期的药理学抑制
由于视网膜中视循环速率和A2E产生速率取决于全反式视黄醇从血清向RPE的汇集(图4)，已经表明血清视黄醇的部分药理学下调可能代表了干性AMD治疗目标区域(11)。血清视黄醇结合视黄醇结合蛋白(RBP4)，并在循环中保持为与RBP4和转甲状腺素蛋白(TTR)结合的三元复合物(图5)。在没有与TTR相互作用的情况下，RBP4-视黄醇复合物由于肾小球滤过而从循环中快速清除。此外，受体介导的由血清到视网膜的全反式视黄醇摄取需要RBP4-TTR-视黄醇复合物的形成。
不希望受任何科学理论的束缚，视循环抑制剂可减少干性AMD中毒性双视黄酸的形成并延长RPE和感光细胞存活。视循环速率和A2E产生速率取决于全反式视黄醇从血清向RPE的汇集。由循环到RPE的视黄醇的摄取需要在血清中形成三元视黄醇结合蛋白4(RBP4)-甲状腺素蛋白(TTR)-视黄醇复合物。RBP4上的视黄醇结合位点在空间上接近介导RBP4-TTR相互作用的界面。与血清视黄醇竞争结合RBP4同时阻断RBP4-TTR相互作用的RBP4拮抗剂将减少血清视黄醇，减缓视循环，并抑制细胞毒性双视黄酸的形成。
RBP4代表了用于间接药理学抑制视觉周期和A2E形成的有吸引力的药物目标。RBP4上的视黄醇结合位点在空间上接近介导RBP4-TTR相互作用的界面。与血清视黄醇竞争结合RBP4同时阻断RBP4-TTR相互作用的视黄醇拮抗剂将降低血清RBP4和视黄醇水平，这将导致视网膜对视黄醇的摄取减少。结果是视循环抑制和随后的A2E合成减少。
发现先前被认为是癌症疗法(29)的称为芬维A胺[N-(4-羟基-苯基)视黄酰胺，4HRP](图6)的合成视黄酸结合RBP4，从RBP4置换全反式视黄醇(13)，并破坏RBP4-TTR相互作用(13,14)。
显示芬维A胺降低血清RBP4和视黄醇(15)，抑制眼部全反式视黄醇摄取并减慢视循环(11)。重要的是，芬维A胺的施用减少了过量双视黄酸累积的动物模型(即Abca4-/-小鼠)中A2E的产生(11)。使用芬维A胺的临床前实验验证了RBP4作为干性AMD的药物目标。然而，芬维A胺没有选择性且具有毒性。除了其作为视黄醇结合RBP4的拮抗剂的活性之外，芬维A胺是包括视网膜色素上皮细胞(20)在内的许多细胞类型中非常具有活性的凋亡诱导剂(16-19)。已经提出芬维A胺的不良作用由其作为核受体RAR的配体的作用介导(21-24)。此外，与其他视黄酸类似，据报道芬维A胺刺激小鼠中血管肉瘤的形成。此外，芬维A胺是致畸的，这使得其在育龄期的斯特格氏病患者中的使用存在问题。
由于芬维A胺的安全性可能与具有致盲但不危及生命的病症的个体的长期服用不相容，鉴定新类型的RBP4拮抗剂是非常重要的。本发明的化合物从RBP4中置换视黄醇，破坏视黄醇诱导的RBP4-TTR相互作用，并降低血清REBP4水平。本发明的化合物在过量脂褐质形成的Abca4-/-小鼠模型中抑制双视黄酸积累，这表明其可用于治疗干性AMD和斯特格氏病。
本发明涉及用于治疗黄斑变性和斯特格氏病的小分子。本文公开了小分子作为非视黄酸RBP4拮抗剂在眼部的应用。已表明表2中列出的化合物在体外结合RBP4和/或在生物学显著的浓度下在体外拮抗RBP4-TTR相互作用。本文所述的作为表2中所列化合物的类似物的其他化合物在体外类似地结合RBP4，并在生物学显著的浓度下在体外拮抗RBP4-TTR相互作用。
目前，没有FDA批准的治疗影响数百万患者的干性AMD或斯特格氏病的疗法。一个非处方的、非FDA批准的抗氧化维生素和锌的混合物(AREDS配方)被声称在干性AMD患者的一个子集中是有益的。没有针对斯特格氏病的疗法。本发明鉴定了可用于治疗干性AMD和以脂褐质过度累积为特征的其他病症的非视黄酸RBP4拮抗剂。不希望受任何科学理论的束缚，因为脂褐质的累积似乎是AMD和STGD视网膜中的RPE和光受体死亡的直接原因，因此本文所述的化合物是疾病缓解剂，因为它们直接解决这些疾病的根本原因。本发明提供了新的治疗方法，其将保护AMD和斯特格氏病患者以及患有以脂褐质过度累积为特征的病症的患者的视力。
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