本申请为申请号为201080055805.x，申请日为2010年10月7日，发明名称为“作为前列腺素d合酶抑制剂的苯基噁二唑衍生物”的专利申请的分案申请。本发明涉及苯基噁二唑化合物、它们的制备方法、含有这些化合物的药物组合物及它们在治疗能够通过抑制前列腺素d的合成来调节的疾病中的药物用途。
背景技术：
：变应性鼻炎是最常见的特应性疾病，据估计其发病率占总人口的约5％至约22％，其特征在于打喷嚏、流鼻涕及鼻塞等症状。据信这些症状是由于肥大细胞和其它炎症细胞所释放的多种介质而引起的。现行治疗例如抗组胺药可有效应对打喷嚏和流鼻涕，但对鼻塞几无作用，而鼻塞是影响患者生活质量的关键症状。已显示对患有变应性鼻炎、支气管哮喘、变应性结膜炎及特应性皮炎的患者进行的局部变应原刺激使鼻腔和支气管洗出液、泪液及皮肤腔液中的前列腺素d2(pgd2)水平快速升高。pgd2具有多种致炎作用，例如增加结膜和皮肤中的血管通透性、增加鼻腔气道阻力、使气道变窄及使嗜酸性细胞浸润到结膜和气管中。pgd2是免疫刺激下由肥大细胞产生的花生四烯酸的主要环氧化酶产物。[lewis,ra,soterna,diamondpt,austenkf,oatesja,robertsljii,prostaglandind2generationafteractivationofratandhumanmastcellswithanti-ige,j.immunol.129,1627-1631,1982]。活化的肥大细胞即pgd2的主要来源是哮喘、变应性鼻炎、变应性结膜炎、变应性皮炎等疾病中促进变应性应答的关键因素之一。[brightlingce,braddingp,pavordid,wardlawaj,newinsightsintotheroleofthemastcellinasthma,clin.exp.allergy33,550-556,2003]。在巯基化合物存在下，通过前列腺素d合酶(prostaglandindsynthase,pgds)的催化作用，pgh2即类前列腺素的共同前体发生异构化，由此形成pgd2。pgds酶具有两种同工型即l-pgds和h-pgds。h-pgds是一种胞质酶，其分布在外周组织中且位于抗原呈递细胞、肥大细胞、巨核细胞及th2淋巴细胞中。产物pgd2的作用通过g蛋白偶联受体来介导：d前列腺素(dp)和crth2。参见(1)prostaglandindsynthase:structureandfunction.t.uradeando.hayaishi,vitaminandhormones,2000,58,89-120(2)j.j.murray,n.engl.j.med.,1986sept.25；315(13):800；及(3)uradeetal.,j.immunology168:443-449,2002。抛开理论的束缚，对pgd2形成的抑制应该对鼻塞具有作用，因此应该对变应性鼻炎具有治疗益处。另外，申请人相信，pgds抑制剂应该对多种其它适应症如支气管哮喘、与年龄相关的黄斑变性(amd)和/或慢性阻塞性肺病(copd)具有治疗益处。与年龄相关的黄斑变性(amd)是一种由于黄斑变性而导致精细中央视觉丧失的变性和进行性眼病。在欧洲和美国，amd是导致年龄在50岁以上的患者失明的最常见原因。慢性阻塞性肺病(copd)是一种涉及慢性支气管炎和肺气肿的进行性炎性疾病。症状包括气流受限、粘液产生过多、咳嗽、运动能力下降及生活质量下降。pgds抑制剂已被报道。据报道化合物hql-79是一种弱的pgds抑制剂且在豚鼠和大鼠模型中具有抗哮喘作用(matsusshita,etal.,jpn.j.pharamcol.78:11,1998)。据称化合物曲尼司特(tranilast)是一种pgds抑制剂。(inhibitoryeffectoftranilastonprostaglandindsynthesase.k.ikai,m.jihara,k.fujii,andy.urade.biochemicalpharmacology,1989,28,2773-2676)。以下公开的专利申请也披露了pgds抑制剂：us2008/0207651a1和us2008/0146569a1：吡啶和嘧啶甲酰胺；jp2007-51121：嘧啶甲酰胺；wo2007/007778：苯并咪唑衍生物；w02008/122787：哌嗪(硫代)甲酰胺；及w02005/094805：亚胺和酰胺衍生物。技术实现要素：本发明涉及式(i)化合物：其中r1是氢或c1-c6烷基；r2是氢、卤素或c1-c3烷基；及r3是羟基烷基；或其药用盐。本发明另一个方面是含有药物有效量的式(i)化合物和药用载体的药物组合物。本发明另一个方面涉及通过向需要治疗的患者给药式(i)化合物来治疗变应性和/或炎性疾病，尤其是变应性鼻炎、哮喘、慢性阻塞性肺病(copd)和/或与年龄相关的黄斑变性(amd)等疾病的方法。本发明另一个方面是制备式(i)化合物的方法。具体实施方式术语定义如上文所用及在本发明说明书通篇中所用，下列术语，除非另有说明，应该被理解为具有以下含义：「烷基」是指含有1至约20个碳原子的直链或支链脂族烃基。优选的烷基含有1至约12个碳原子。更优选的烷基是低级烷基。「支链」是指与线性烷基链连接的一个或多个低级烷基基团如甲基、乙基或丙基。「低级烷基」是指在可为直链或支链的线性烷基链中含有1至约4个碳原子。「羟基烷基」是指oh-烷基-。优选的羟基烷基是羟基(c1-c6)烷基-。代表性的羟基烷基包括1-羟基-1-甲基乙基。「本发明化合物」及等价表述意在包括如上所述的式(i)化合物。当提及中间体时，无论其本身是否要求保护，均意在包括它们的盐、n-氧化物和溶剂化物，这视上下文而定。「卤代」或「卤素」是指氟、氯、溴或碘。优选的卤代或卤素是氟或氯。「患者」包括人类和其它哺乳动物。「药用盐」是指本发明化合物的无毒性的无机和有机酸加成盐及碱加成盐。这些盐可在所述化合物的最终分离和纯化阶段原位制备或如下制备：使经纯化的呈游离碱形式的化合物与合适的有机或无机酸反应且分离由此形成的盐。在一些情况下，所述化合物本身能够使分子中的碱性位点发生自身质子化且形成两性的内盐。「合适的偶联剂」是指适于使胺与羧酸发生反应的试剂。合适的偶联剂包括但不限于dmtmm、羰基二咪唑(cdi)、tbtu、dcc、鏻盐和脲鎓盐。代表性的酸加成盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、枸橼酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘甲酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐、氨磺酸盐、丙二酸盐、水杨酸盐、丙酸盐、亚甲基-二-β-羟基萘甲酸盐、龙胆酸盐、羟乙磺酸盐、二对甲苯酰酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、环己基氨磺酸盐和月桂基磺酸盐。参见例如s.m.berge,etal.,“pharmaceuticalsalts”,j.pharm.sci.,66,1-19(1977)，将其引入本申请作为参考。碱加成盐也可通过让以酸形式存在的纯化后化合物与合适的有机碱或无机碱分别反应，然后分离所形成的盐来制备。碱加成盐包括药用金属盐和胺盐。合适的金属盐包括钠、钾、钙、钡、锌、镁及铝盐。一种优选的碱加成盐是钠盐或钾盐。合适的无机碱加成盐是从金属的碱制备的，该金属碱包括氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝、氢氧化锂、氢氧化镁，及氢氧化锌。合适的胺的碱加成盐是从一些胺制得的，这些胺具有足够的碱性以形成一种稳定的盐，尤其包括医药化学中经常使用的那些胺，因为它们具有适合于医学用途的低毒性和可接受性。氨、乙二胺、n-甲基葡糖胺、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱、n,n’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、二乙醇胺、普鲁卡因、n-苯甲基苯乙基胺、二乙基胺、哌嗪、三(羟甲基)-氨基甲烷、四甲基氢氧化铵、三乙胺、二苯甲胺、苯丙胺、二氢松香胺、n-乙基哌啶、苯甲胺、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、乙基胺、碱性氨基酸如赖氨酸和精氨酸，及二环己基胺。本发明优选实施方案是式(i)化合物，其中r1是氢；r2是氢；及r3是羟基烷基；或其药用盐。本发明另一个优选实施方案是式(i)化合物，其中r1是c1-c6烷基；r2是氢；及r3是羟基烷基；或其药用盐。本发明另一个优选实施方案是式(i)化合物，所述化合物是：2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)[1,2,4]噁二唑-3-基]苄基酰胺；2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸((s)-1-{3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-1,2,4-噁二唑-3-基]-苯基}-乙基)-酰胺；或2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸((r)-1-{3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-1,2,4-噁二唑-3-基]-苯基}-乙基)-酰胺；或其药用盐。应该理解的是，本发明包括所述优选实施方案的所有合适组合。本发明在其范围内还包括药物组合物，其含有药物有效量的本发明化合物与药用载体的混合物。本发明化合物是pgds抑制剂，因此可用于治疗变应性和/或炎性疾病，尤其是变应性鼻炎、哮喘、慢性阻塞性肺病(copd)、慢性鼻鼻窦炎(crs)及与年龄相关的黄斑变性(amd)等疾病。因此，本发明另一个方面涉及对患有变应性鼻炎、哮喘、慢性阻塞性肺病(copd)和/或与年龄相关的黄斑变性(amd)的患者进行治疗的方法，所述方法包括向患者给药药物有效量的式(i)化合物。除上述适应症和疾病外，pgds抑制剂，包括式i化合物，还可用于治疗由pgd2介导的疾病，包括与dp1、dp2、tp和pparγ相关的疾病。上述疾病和障碍包括以下：1)皮肤病，包括特应性皮炎、慢性荨麻疹和潮红(procnatlacadsciu.s.a.2006apr25；103(17):6682-7)；2)消化系统中的变应性疾病，如嗜酸性食管炎；3)神经变性疾病，如阿尔茨海默病和克拉伯病(thejournalofneuroscience,april19,2006,26(16):4383-4393)；4)肌肉疾病，如进行性假肥大性肌营养不良和多发性肌炎(americanjournalofpathology.2009；174:1735-1744)；5)与嗜酸性细胞增加相关的病症或嗜酸性细胞综合征；6)眼睛疾病，如葡萄膜炎、格雷夫斯眼病、变应性结膜炎和青光眼；7)与糖尿病相关的血管损伤，如糖尿病性视网膜病，或与代谢综合征相关的血管损伤(diabetesresclinpract.2007jun；76(3):358-67)；及8)骨骼疾病，如类风湿性关节炎和骨关节炎(jrheumatol2006；33:1167-75)。本申请提及的治疗应该被理解为包括抑制pgds的预防性治疗，及治疗已确诊的急性或慢性症状或与pgds相关的生理状况，以便从根本上治愈患有这些症状的患者，或改善与其相关的生理状况。本申请讨论的生理状况包括一些可能有理由进行抗过敏鼻炎和/或哮喘治疗的临床情况，但并不包括所有情况。本领域内有经验人员很了解那些需要治疗的情况。实际上，本发明化合物可以药用剂型，通过局部性或全身性给药方式施用于人和其它哺乳动物，包括口服、吸入、直肠、鼻腔、口腔、舌下、阴道、结肠、注射(包括皮下、肌内、静脉、皮内、鞘内和硬膜外)、脑池内，及腹膜内给药。应该理解的是，具体的给药途径可随受药者的生理状况而改变。「药用剂型」是指本发明化合物的剂型，包括例如片剂、糖衣丸、粉剂、酏剂、糖浆、包括混悬液在内的液体制剂、喷雾剂、吸入片剂、锭剂、乳液、溶液、颗粒、胶囊和栓剂，及用于注射的液体制剂，包括脂质体制剂。其技术和配方通常可在雷氏药学大全(remington’spharmaceuticalsciences,mackpublishingco.,easton,pa,latestedition)中找到。本发明一个优选的方面提供了一种以药物组合物形式给药的本发明化合物。取决于给药方式和剂型，药用载体包括至少一种以下助剂：药用载体、稀释剂、包衣、佐剂、赋形剂或媒介，如防腐剂、填充剂、崩散剂、润湿剂、乳化剂、乳液稳定剂、混悬剂、等渗剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、着色剂、抗菌剂、抗真菌剂、其它治疗剂、润滑剂、吸附延缓或促进剂、及分配剂。代表性的混悬剂包括乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯和失水山梨糖醇酯、微晶纤维素，偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶，或这些物质的混合物。代表性的预防微生物作用的抗菌剂和抗真菌剂包括对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等。代表性的等渗剂包括糖、氯化钠等。代表性的用于延缓吸收的吸附延缓剂包括单硬脂酸铝和明胶。代表性的用于增加吸收的吸附促进剂包括二甲基亚砜和相关类似物。代表性的稀释剂、溶剂、媒介、增溶剂、乳化剂和乳液稳定剂包括水、氯仿、蔗糖、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、四氢糠醇、苯甲酸苄酯、多元醇、丙二醇、1,3-丁二醇、甘油、聚乙二醇、二甲基甲酰胺、60，60，鲸蜡醇/硬脂醇混合物、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂烷基硫酸钠、失水山梨糖醇脂肪酸酯、植物油(如棉籽油、花生油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)及可注射的有机酯如油酸乙酯等，或这些助剂的合适混合物。代表性的赋形剂包括乳糖、枸橼酸钠、碳酸钙和磷酸二钙。代表性的崩散剂包括淀粉、藻酸及一些络合硅酸盐类。代表性的润滑剂包括硬脂酸镁、月桂基硫酸钠、滑石粉，及高分子量聚乙二醇。药用载体的选择通常取决于活性化合物的化学性质(如可溶性)、给药的特定方式和用药过程中须遵守的规定。适合于口服的本发明药物组合物可制成独立的单元如固体剂型，如每剂含有预定剂量活性成分的胶囊、扁囊剂或片剂，或粉末或颗粒；也可制成液体剂型如溶液或水基或非水基混悬液，或水包油乳液或油包水乳液。活性成分也可制成大丸剂、药糖剂或糊剂。「固体剂型」是指本发明化合物的剂型是固态形式，例如胶囊、片剂、丸剂、粉末、糖衣丸或颗粒。在这种固体剂型中，本发明化合物与至少一种常用的惰性赋形剂(或载体)混合，如枸橼酸钠或磷酸二钙或：(a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，(b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐类、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶，(c)保湿剂，例如甘油，(d)崩散剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯粉或木薯淀粉、藻酸、一些络合的硅酸盐类和碳酸钠，(e)溶液阻滞剂，例如石蜡，(f)吸收促进剂，例如季铵化合物，(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，(h)吸附剂，例如高岭土和膨润土，(i)润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠，(j)遮光剂，(k)缓冲剂，及可在肠道某一部分以缓释方式释放本发明化合物的药物。片剂可以压制或模制的方式制备，还可任选地含有一种或多种辅助成分。压制片剂可通过将活性成分以散粒形式如粉末或颗粒，任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合，再在合适的机器中压制而成。赋形剂如乳糖、枸橼酸钠、碳酸钙、磷酸二钙，崩散剂如淀粉、藻酸及一些与硬脂酸镁、月桂基硫酸钠及滑石粉等润滑剂相结合的复杂硅酸盐类都可以使用。用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物可在合适的机器中模制而制成模制片剂。片剂可任选地包覆或刻痕，也可配制成使所含活性成分得以缓慢或控制性地释放。固体药物组合物也可作为软胶囊和硬胶囊的填充剂，以乳糖或奶糖及高分子量聚乙二醇等为赋形剂。如果需要并为了更均匀的分布，化合物可用微胶囊密封或附着于一种缓释或靶向给药体系，例如生物兼容的、可生物降解的聚合物基质(如聚d,l-乳酸/聚甘醇酸共聚物)、脂质体和微球体并通过一种被称为皮下或肌内贮库的技术进行皮下注射或肌内注射，使该化合物在2周或更长得以持续地缓释。该化合物可以各种方式消毒，例如，用除菌过滤器过滤，或将除菌剂加入无菌固体药物组合，在使用时再溶于无菌水或其它无菌注射介质。「液体剂型」是指欲给患者服用的活性化合物是处于液态，例如药用浊液、溶液、混悬液、糖浆剂和酏剂。除活性化合物之外，液体剂型可含有本领域中常用的惰性稀释剂，例如溶剂、增溶剂和乳化剂等。当使用水基混悬液时，它们可含有乳化剂或促进混悬的试剂。适合于局部给药的药物组合是指以适合于患者局部使用的形式而存在的药剂。可将此药剂配制成本领域内众所周知的局部使用的软膏、油膏、粉剂、喷雾剂和吸入剂、凝胶剂(水基或醇基)、乳膏；或，加入一种基质以贴片形式敷用，使得化合物可经由皮肤障碍控制性释放。当配制成软膏时，活性成分可与石蜡或水溶性软膏基质一起使用。或，活性成分可以水包油乳膏基质配制成乳膏。适合于在眼睛里局部给药的药剂包括滴眼剂，其中活性成分系溶解或混悬于一种合适的载体中，尤其是适合于该活性成分的水性溶剂。适合于在口腔内局部给药的药剂包括调味基质中含有活性成分的锭剂，该基质通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；还包括惰性基质中含有活性成分的芳香锭剂，该惰性基质的例子为明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶；还包括在合适的液体载体中含有活性成分的漱口剂。乳液状药物组合的油相可以已知的方式由已知的成分组成。虽然该油相可仅由一种乳化剂组成，但它最好含有由至少一种乳化剂与一种脂肪或油，或与脂肪和油两者所组成的混合物。在一项优选的实施方案中，一种亲水乳化剂与一种作为稳定剂的亲脂乳化剂一起使用。该乳化剂单独或与稳定剂一起构成乳化蜡，与油和脂肪一起则构成乳化软膏基质，后者形成乳膏药剂的油性分散相。如果需要，乳膏基质的水相可包括例如至少30％w/w的多元醇，即含有两个或两个以上羟基的醇，如丙二醇、丁二醇-1,3、甘露醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇(包括peg400)及其混合物。可取的是，局部应用的药剂应含有一种促进吸收或促进活性成分穿透皮肤或其它受影响部位的化合物。适合于某药物组合的油类或脂肪的选择是基于能否得到所需的性质。因此，优选的乳膏应该是非油脂、不着色及容易洗去的产品并具有合适的稠度以免从软管或其它容器渗漏出来。直链或支链、一元或二元的烷基酯如豆蔻酸二异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸-2-乙基己酯或被称为crodamolcap的支链酯混合物均可使用。取决于所需的性质，这些助剂可单独使用或结合使用。或，也可使用高熔点脂质如白色软石蜡和/或液体石蜡或其它矿物油。适合于直肠或阴道给药的药物组合，是指以适合于患者经由直肠或阴道使用的形式而存在的药剂并且含有至少一种本发明化合物。栓剂是这类药剂的一种优选形式，可将本发明化合物与合适的无刺激性赋形剂或载体如可可脂、聚乙二醇或某种栓剂用蜡混合的方式来制备。这些赋形剂或载体在常温下是固体但在体温下成为液体，因此可在直肠或阴道腔中融化并释放活性组分。以注射方式给药的药物组合可经由肌肉、静脉内、腹膜内和/或皮下进行注射。本发明药物组合可配制在液体溶液中，尤其是生理上兼容的缓冲液如hank溶液或ringer溶液中。此外，该药物组合可配制成固态形式且在使用之前再重新溶解或混悬。冻干的形式也包括在内。此药剂是无菌的且包括乳液、混悬液、水基与非水基注射溶液，可含有混悬剂和增稠剂及抗氧剂、缓冲液、抑菌剂，及使该药剂与预期的受药者的血液等渗并调节至合适ph的溶质。适合于经鼻腔或吸入途径给药的本发明药物组合，是指以适合于患者经鼻腔或吸入途径使用的形式而存在的药物组合。词药物组合可含有粉末状载体，其粒径为例如1至500微米的范围(包括20和500微米之间的范围，以5微米为增量，例如30微米、35微米等)。其载体为液体的合适药物组合，例如作为鼻腔喷剂或滴剂而给药的药物组合，包括活性成分的水溶液或油溶液。适合于以气物剂方式给药的药物组合可按照传统的方法制备并可与其他治疗剂一起给药。通过计量吸入器或任何合适的干粉吸入器，例如wo2004/026380专利申请书和美国第5,176,132号专利所述的eclipse、或都很容易实施吸入治疗。本发明药物组合物所含活性成分的实际剂量水平可以改变，以便确定活性成分的药物有效量，使得患者对某种特定的药物组合物和给药方法产生理想的治疗反应。因此，为任何具体患者选择的剂量水平取决于各种因素，包括所期望的治疗作用、给药途径、所期望的治疗持续时间、疾病的病因和严重性、患者的病情、体重、性别、饮食和年龄、每种活性成分的类型和效价、吸收、代谢和/或排泄的速率及其它因素。患者每日单次或分次服用的本发明化合物的日总剂量可以是，例如，每天按每公斤体重计约0.001至100mg/kg，优选的是0.01至10mgkg。例如，一个成年人每日按每公斤体重计的吸入剂量通常是约0.01至100mg/kg，更佳的是约0.01至10mg/kg；每日按每公斤体重计的口服剂量是约0.01至100mg/kg，更佳的是约0.1至70mg/kg；尤佳的是0.5至10mg/kg；每日按每公斤体重计的静脉内给药剂量是约0.01至50mg/kg，更佳的是0.01至10mg/kg。药物组合物中活性组分的百分比可以改变，但它仍应构成一定的比例，以得到某一合适的剂量。单位剂量药物组合物的含量可以是每日剂量的一部分，由若干单位剂量组成每日剂量。显然，几种单位剂量形式可在几乎同时给药。为了得到理想的治疗效果，可以根据需要而尽量频繁地施用某一剂量。一些患者可能会对较高或较低的剂量迅速地作出反应，也可能会发现低得多的剂量已足以维持。对于另一些患者，可能有必要按照每个具体患者的生理要求，进行每日1至4剂的长期治疗。自不待言，对于另一些患者，将有必要规定每日不超过一剂或两剂。该药剂可用药剂学领域中众所周知的任何方法制备成单位剂量形式。这些方法包括将医药活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体相结合的步骤。通常，这些药剂将活性组分与液体载体或磨得很细的固体载体或这两者一起均匀和密切地结合，然后若有必要，使产品成形。这些药剂可置于单位剂量或多剂量容器内，例如密封的安瓿剂和带胶塞的管形瓶并可在冻干(冷冻干燥)条件下贮存，只需在即将使用之前加入无菌液状载体如注射用水。实时准备的注射溶液和混悬液可从前述的那类无菌粉末、颗粒和片剂制备。本发明化合物可通过应用或改进已知的方法来制备，而已知的方法是指在本申请前使用的方法或在文献中描述的方法，例如r.c.larock在comprehensiveorganictransformations,vchpublishers,1989中描述的那些方法。在下述反应中，可能需要对在最终产物中需要的反应性官能团例如羟基、氨基、亚氨基、巯基或羧基进行保护以使它们不会参与不需要的反应。常规保护基可按照标准操作来使用，例如参见t.w.greene和p.g.m.wuts,protectinggroupsinorganicsynthesis,第3版,johnwiley&sons,inc.,1999。式(i)化合物可如下制备(如以下方案i所示)：在脱水偶联剂如dmtmm存在下，在各种溶剂包括但不限于dmf中，使式xi胺与吡啶基嘧啶基羧酸(其制备如方案ii所示)反应。合适的偶联剂包括但不限于dmtmm、羰基二咪唑(cdi)、tbtu、dcc、鏻盐和脲鎓盐。式(i)化合物还可如下制备(如以下方案ia所示)：在0.1至1.0当量1,5,7-三氮杂二环[4.4.0]癸-5-烯(tbd)存在下，使式xi胺与吡啶基嘧啶基羧酸酯(其制备如方案ii所示)直接偶联。反应可在不存在溶剂或存在所加入的溶剂(包括但不限于醚类、酯类和芳烃类)的情况下进行。使用除tbd外的其它强碱，包括但不限于dbu和四甲基胍，这也得到产物。胺xi可按照方案iii所示的方法来制备。可使苄基溴vii在碱包括但不限于碳酸铯存在下在各种溶剂包括但不限于dmf中与亚氨基二羧酸二叔丁酯反应，得化合物viii。然后可使这些式viii化合物在各种溶剂包括但不限于甲醇中与羟胺反应(在使用羟胺盐如羟胺盐酸盐的情况下使用包括但不限于三乙胺的碱)，得到偕胺肟ix。可使偕胺肟与含有羧基官能团的化合物(包括但不限于羧酸甲酯)在碱包括但不限于碳酸钾存在下在存在或不存在溶剂包括但不限于甲苯的情况下反应(在一些情况下含有羧基官能团的化合物可作为反应溶剂)，得到噁二唑x。然后可将噁二唑x暴露于酸性条件包括但不限于氯化氢的甲醇溶液，得到胺xi。当在胺xi中期望r1烷基取代时，这些胺可按照方案iv(对映异构体富含形式或外消旋形式)使用由ellman开发的叔丁基亚磺酰胺方法学来制备。方案i其中r1、r2和r3如式(i)中所定义方案ia其中r1、r2和r3如式(i)中所定义且r4为c1-c3烷基方案ii方案iii其中r1、r2和r3如式(i)中所定义方案iv其中r1、r2和r3如式(i)中所定义应该理解的是，本发明化合物可含有不对称中心。这些不对称中心可以分别是r构型或s构型。对于本领域专业人士显而易见的是，本发明一些化合物也可显示几何异构现象。应该理解的是，本发明范围包括上述式(i)化合物的各种几何异构体和立体异构体及其混合物，包括外消旋混合物。这样的异构体可通过应用或改进已知的方法如色谱技术和重结晶技术，从它们的混合物中分离出来，或也可从与其中间体对应的异构体分别制备。通过审视以下实施例，本发明化合物、它们的制备方法及它们的生物活性将显得更加明显。这些实施例只是作为例证而提出的，而且不应该被认为是限制本发明范围。本发明化合物是用以下测定鉴定的。质谱(ms)使用micromasslct质谱仪来记录。该方法为正模式电喷雾离子化，其中所扫描的质量m/z为100至1000。300mhz1h核磁共振光谱(1hnmr)在环境温度使用带有asw5mm探头的varianmercury(300mhz)光谱仪来记录。在1hnmr中，化学位移(δ)参照作为内标的四甲基甲硅烷(tms)以百万分数(ppm)来表示。在以下实施例和制备中及在本申请其余部分使用的术语应该具有以下含意：“kg”＝千克，“g”＝克，“mg”＝毫克，“μg”＝微克，“mol”＝摩尔，“mmol”＝毫摩尔，“m”＝摩尔/升，“mm”＝毫摩尔/升，“μm”＝微摩尔/升，“nm”＝纳摩尔/升，“l”＝升，“ml”或“ml”＝毫升，“μl”＝微升，“℃”＝摄氏度，“mp”或“m.p.”＝熔点，“bp”或“b.p.”＝沸点，“mmhg”＝以毫米汞柱计的压强，“cm”＝厘米，“nm”＝纳米，“abs.”＝绝对，“conc.”＝浓的，“c”＝以g/ml计的浓度，“rt”＝室温，“tlc”＝薄层色谱，“hplc”＝高效液相色谱，“i.p.”＝腹膜内，“i.v.”＝静脉内，“s”＝单峰，“d”＝二重峰；“t”＝三重峰；“q”＝四重峰；“m”＝多重峰，“dd”＝双二重峰；“br”＝宽峰，“lc”＝液相色谱，“ms”＝质谱，“esi/ms”＝电喷雾离子化/质谱，“rt”＝保留时间，“m”＝分子离子，“psi”＝磅/平方英寸，“dmso”＝二甲基亚砜，“dmf”＝n,n-二甲基甲酰胺，“dcm”＝二氯甲烷，“hcl”＝盐酸，“spa”＝闪烁迫近测定，“etoac”＝乙酸乙酯，“pbs”＝磷酸盐缓冲盐水，“iupac”＝国际纯粹及应用化学联合会，“mhz”＝兆赫，“meoh”＝甲醇，“n”＝当量，“thf”＝四氢呋喃，“min”＝分钟，“n2”＝氮气，“mecn”或“ch3cn”＝乙腈，“et2o”＝乙醚，“tfa”＝三氟乙酸，“～”＝约，“mgso4”＝硫酸镁，“na2so4”＝硫酸钠，“nahco3”＝碳酸氢钠，“na2co3”＝碳酸钠，“mcpba”＝3-氯过氧苯甲酸，“nmp”＝n-甲基吡咯烷酮，“ps-dcc”＝以聚合物为载体的二环己基碳二亚胺，“lioh”＝氢氧化锂，“ps-trisamine”＝以聚合物为载体的三羟甲基氨基甲烷，“pgh2”＝前列腺素h2，“pgd2”＝前列腺素d2；“pge2”＝前列腺素e2，“hpgds”＝造血型pgd2合酶(hematopoieticpgd2synthase)，“gsh”＝谷胱甘肽(还原型)，“eia”＝酶免疫测定，“kh2po4”＝磷酸二氢钾，“k2hpo4”＝磷酸一氢钾，“fecl2”＝氯化亚铁，“mox”＝甲氧基胺；“etoh”＝乙醇，“dmso”＝二甲基亚砜，“ag2o”＝氧化银(i)，“hatu”＝o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐，“hoat”＝1-羟基-7-氮杂苯并三唑，“dipea”＝n,n-二异丙基乙胺，“hott”＝s-(1-氧化吡啶-2-基)-n,n,n’,n’-四甲基硫脲鎓六氟磷酸盐，“hctu”＝n,n,n’,n’-四甲基-o-(6-氯-1h-苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐，“pybrop”＝溴-三吡咯烷子基-鏻六氟磷酸盐，“lialh4”＝氢化锂铝，“pyaop”＝(7-氮杂苯并三唑-1-基氧基)-三吡咯烷子基-鏻六氟磷酸盐，“tbtu”＝o-苯并三唑-1-基-n,n,n’,n’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐，“nahmds”＝二(三甲基甲硅烷基)氨基钠，“nmp”＝n-甲基吡咯烷-2-酮，“hosa”＝羟胺-o-磺酸，“dmtmm”＝4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物，“tmsn3”＝三甲基甲硅烷基叠氮化物，“tbaf”＝四丁基氟化铵，“tfaa”＝三氟乙酸酐。实施例以下化合物按照与上述类似的方法来制备：实施例12-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-1,2,4-噁二唑-3-基]-苄基酰胺步骤1将3-溴甲基苯甲腈(42.9g，219mmol，1当量)与亚氨基二羧酸二叔丁酯(50g，230.13mmol，1.05当量)和碳酸铯(74.98g，230.13mmol，1.05当量)在n,n-二甲基甲酰胺(dmf)(230ml)中合并。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后在乙醚(500ml)和水(1l)之间分配。水层再用乙醚(250ml)萃取且合并的乙醚层用盐水(2×200ml)洗涤。然后将有机层干燥(mgso4)，过滤且真空浓缩，得到油状物，其缓慢结晶，得到2-[(3氰基苯基)甲基]亚氨基二羧酸1,3二(1,1-二甲基乙基)酯(72g，99％)。ms：333(m+h)，355(m+na)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝1.47(s，18h)，4.79(s，2h)，7.42(t，1h)，7.54-7.60(m，3h)。步骤2将羟胺盐酸盐(23.43g，375mmol，2.5当量)加到2-[(3-氰基苯基)甲基]-亚氨基二羧酸1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯(50g，150mmol，1当量)的甲醇(450ml)溶液中且将混合物在冰水浴中冷却。加入三乙胺(37.87g，375mmol，2.5当量)且将反应混合物搅拌过夜，其中当浴融化时缓慢温热至室温。然后将反应混合物真空浓缩且将残余物在乙酸乙酯(1l)和水(500ml)之间分配。水层再用乙酸乙酯(200ml)萃取且合并的有机层用盐水(200ml)洗涤，用硫酸钠干燥且过滤。然后加入庚烷和甲苯(各为100ml)且将反应混合物真空浓缩，得到2-[[3-[(羟基氨基)亚氨基甲基]苯基]甲基]-亚氨基二羧酸1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯，其为透明胶状物(54.7g，>99％)，所述胶状物不经进一步纯化即直接使用。步骤3将碳酸钾(4.35g，31.46mmol，1.15当量)加到装有2-[[3-[(羟基氨基)亚氨基甲基]苯基]甲基]-亚氨基二羧酸1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯(10g，27.36mmol，1当量)(来自步骤2)的甲苯(30ml)溶液的烧瓶中，然后加入2-羟基-2-甲基丙酸甲酯(3.716g，31.46mmol，1.15当量)。将反应混合物加热至回流。48小时后，将反应混合物在etoac(300ml)和水(200ml)之间分配。etoac用盐水(100ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，然后真空浓缩，得到残余物，其直接使用。将4nhcl的二噁烷(60ml)溶液加到用冰冷却的来自上述反应的残余物(27mmol)在对二噁烷(60ml)中的混合物中。移开冰水浴且将反应混合物温热至室温。6小时后，反应混合物用乙醚(200ml)稀释。过滤收集白色固体，用乙醚(～50ml)洗涤，然后真空干燥，得到3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苄胺盐酸盐(5.84g，两步收率为79％)。ms：234(m+h)。1hnmr(300mhz，dmso)：δ＝1.626(s，6h)，4.13-4.15(d，2h)，6.11(bs，1h)，7.62(t，1h)，7.72(d，1h)，8.02(d，1h)，8.15(s，1h)，8.45(bs，3h)。步骤4将n-甲基吗啉(nmm)(1.12g，11.12mmol，1当量)加到2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸(2.24g，11.12mmol，1当量)和3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苄胺盐酸盐(3g，11.12mmol，1当量)在dmf(50ml)中的混合物中。在室温搅拌5分钟后，加入4-(4,6-二甲氧基-[1，3,5]三嗪-2-基)-4-甲基吗啉-4-鎓氯化物(dmtmm)(3.08g，11.12mmol，1当量)且将反应混合物在室温搅拌3小时。反应混合物用冰水(500ml)稀释且混悬液用etoac(2×300ml)萃取。合并的乙酸乙酯层用盐水(2×100ml)洗涤，用硫酸钠干燥且真空浓缩，得到粗产物，其使用乙酸乙酯/乙醇来重结晶，得到2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-1,2,4-噁二唑-3-基]-苄基酰胺，其为白色结晶固体(1.95g，42％)。注意：收率随偶联配对物(couplingpartner)的纯度和用于重结晶的溶剂而变化。ms：417(m+h)。1hnmr(300mhz，dmso)：δ＝1.62(s，6h)，4.65(d，2h)，6.08(s，1h)，7.54-7.63(m，3h)，7.93(d，1h)，7.99-8.04(m，2h)，8.45(d，1h)，8.79(d，1h)，9.37(s，2h)，9.57(t，1h)。可选择地，偶联可使用cdi(羰基二咪唑)或tbtu来进行。以下显示的偶联可例如在dmf和/或thf中进行。向5l夹套反应器中加入68.89g羧酸和约346mldmf。在22±2℃向该浆液中加入74.9gcdi。将胺(79.87g)溶于约69mldmf中且历时8分钟加入。这使稠厚浆液变为透明黄色/棕色溶液。温度升至35℃。历时20分钟先后缓慢加入庚烷(202ml)和水(596ml)。在加水期间，温度由22℃升至33℃。当搅拌反应混合物时，开始形成晶体。加水(5.15l)。反应混合物用直径为185mm的布氏漏斗过滤且用2×750ml水洗涤。收集滤饼且真空干燥(45℃，压强为100mbar，氮气吹洗)，得到122.15g产物。hplc方法：eclipsexdb苯基柱，3.5微米，4.6×150mm，以254nm检测，梯度：始于5:95:0.1％acn/水/tfa，然后历时8分钟变为70:30:0.1％acn/水/tfa，保持4.5分钟；产物保留时间：6.5分钟。可选择地，偶联可如下所示经由酰氯来进行。向配备有磁力搅拌器、温度控制器和firestone阀门(n2)的100ml三颈圆底烧瓶加入2-[3-(3-氨基甲基苯基)-[1,2,4]-噁二唑-5-基]-丙-2-醇游离碱(600mg，2.57mmol，1当量)、nmp(5ml)和三乙胺(2.25ml)。加入2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-酰氯hcl(0.7g，2.7mmol，约96％酸)。约2.5小时后，反应通过加入甲苯(5ml)和水(5×10ml)来淬灭。将反应混合物过滤且滤饼用甲苯和水洗涤，得到固体(0.85g，收率为79％)。1hnmr(300mhz，d6-dmso)：δ＝1.61(s，6h)，4.64(d，2h)，6.08(s，1h)，7.6(m，3h)，7.95(d，1h)，8.04(m，2h)，8.45(d，1h)，8.8(d，1h)，9.37(s，1h)，9.57(t，1h)实施例1a3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苄胺盐酸盐的可选合成方法方案v方案v-步骤1在20-25℃向配备有顶置机械搅拌器、热电偶探头和氮气冲洗装置的5l夹套玻璃反应器中加入3-氰基苯甲醛(100.0g，0.763mol，1.0当量)和乙醇(标准强度为200)(394.5g，500ml，5v/w份数)。历时30-45分钟经由加料漏斗向混悬液中加入羟胺盐酸盐(159.0g，2.288mol，3.0当量)的水(250ml，2.5份)溶液同时维持温度为20-25℃。加料漏斗用水(20ml)冲洗且将冲洗液加到反应器中。加入约45mlnh2oh·hcl溶液后，固体溶解，得到透明溶液。溶液在10分钟内变得混浊且固体结晶出来，得到混悬液。据信该固体是由于羟胺与醛官能团加成而得到的肟。将混悬液在20-25℃搅拌1小时。历时1.5-2.0小时经由加料漏斗向混悬液中加入碳酸钠(121.25g，1.144mol，1.5当量)的水(390ml，3.9份)溶液同时维持温度为20-22℃。加料漏斗用水(20ml)冲洗且将冲洗液加到反应器中。观察到co2逸出。将混悬液加热至29-30℃且在29-30℃搅拌24小时。历时45-60分钟将水(1.32l，13.2份)加到反应器中同时维持温度为30-32℃。将混悬液加热至76-78℃且在76-78℃保持30-60分钟，得到透明溶液。历时90分钟将溶液冷却至55-60℃。产物在55-60℃结晶出来。将混悬液在55-60℃搅拌60分钟。历时8-12小时将混悬液冷却至20-22℃。将混悬液冷却至2-5℃且在2-5℃搅拌4小时。将混悬液过滤(布氏漏斗，外径为14.5cm)且滤饼用水(250ml，2.5份)洗涤。将滤饼抽吸干燥5小时。将滤饼转移到干燥盘中且真空干燥(25-50托，50℃，n2)60小时，得到127.33g(收率为93.2％)产物，其为白色结晶固体且纯度为99.9％(hplc)。hplc方法：zorbaxeclipsexdbc8柱，5微米，4.6×150mm，25℃，以240nm检测，梯度：在5:95:0.1ch3cn/h2o/tfa保持2分钟，然后历时16分钟变为90:10:0.1ch3cn/h2o/tfa；产物保留时间：3.6-4.4分钟(三个峰)。方案v-步骤2在22-27℃向配备有顶置机械搅拌器、热电偶探头和氮气冲洗装置的5l夹套玻璃反应器中加入n-羟基-3-(羟基亚氨基甲基)苯甲脒(100.0g，0.558mol，1.0当量)和1-甲基吡咯烷-2-酮(nmp)(267.3g，260ml，2.6v/w份数)。历时15-30分钟经由加料漏斗向混悬液中加入2-羟基异丁酸甲酯(197.8g，1.674mol，3.0当量)同时维持温度为25-27℃。将混合物在25-27℃搅拌30-45分钟，得到透明溶液。历时30-60分钟经由加料漏斗向溶液中加入25w％甲醇钠的甲醇溶液(361.7g，1.674mol，3.0当量)同时维持温度为25-27℃。将溶液在29-30℃加热7小时。在29-30℃保持30-45分钟后，溶液变为混悬液。历时30-60分钟经由加料漏斗加入水(1.8l，18份)同时维持温度为22-25℃。混悬液溶解，得到ph为12.2(ph计)的透明溶液。溶液的ph通过历时30-45分钟加入盐酸(37.1w％)(77.4g，0.787mol，1.4当量)来调节至5.0同时维持温度为22-25℃。当用盐酸酸化时，产物结晶出来。冷却至5-10℃且在5-10℃搅拌2小时后，将混悬液过滤(布氏漏斗，内径为27.5cm)且滤饼用水(700ml，7份)洗涤且抽吸干燥7小时。将滤饼转移到干燥盘中且真空干燥(25-50托，50℃，n2)20-24小时，得到132.0g(收率为95.6％)产物，其为白色结晶固体且纯度为99.7％(hplc)。hplc方法：zorbaxeclipsexdbc8柱，5微米，4.6×150mm，25℃，以240nm检测，梯度：在5:95:0.1ch3cn/h2o/tfa保持2分钟，然后历时16分钟变为90:10:0.1ch3cn/h2o/tfa；产物保留时间：10.8分钟。方案v-步骤3在20-25℃向配备有顶置机械搅拌器、热电偶探头和氮气冲洗装置的5l夹套玻璃反应器中加入3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]苯甲醛肟(100.0g，0.404mol，1.0当量)和冰醋酸(1888.2g，1.8l，18v/w份数)。将混悬液加热至28-30℃且搅拌直到得到透明溶液(30-45分钟)。将溶液冷却至22-24℃且历时90-120分钟经由加料漏斗加入锌粉(105.8g，1.618mol，4.0当量)同时维持温度为22-26℃。注意：锌粉加入是放热的。将混悬液在24-26℃搅拌2-3小时。混悬液在n2下(带有n2供给的倒置漏斗)用硅藻土(40g)过滤。固体用etoh(标准强度为200)/h2o(1/1，894.5g，1l，10份)和etoh(标准强度为200)(250ml，197.3g，2.5份)洗涤。将滤液转移到5l反应器中且减压浓缩(45-50托，44-47℃，夹套温度为50-55℃)至体积为约350ml(3.5份)。真空用n2消除且将反应器冷却至22℃。混合物为稠厚混悬液。将甲苯(2162.5g，2.5l，25份)加到反应器中且将混悬液减压浓缩(70-75托，42-47℃，夹套温度为50-55℃)至体积为约350ml(3.5份)。真空用n2消除且在22℃向反应器中加入甲苯(129.8g，150ml，1.5份)。将混悬液在22℃搅拌15-20分钟且将两相分离。上层主要是甲苯且下层含有所需产物的乙酸盐。hplc方法：zorbaxeclipsexdbc8柱，5微米，4.6×150mm，25℃，以240nm检测，梯度：在5:95:0.1ch3cn/h2o/tfa保持2分钟，然后历时16分钟变为90:10:0.1ch3cn/h2o/tfa；产物保留时间：7.9分钟。方案v-步骤4a将2-methf(2-甲基四氢呋喃)(1290.0g，1.5l，15份)加到反应器中。历时30-45分钟经由加料漏斗加入氢氧化铵水溶液(29.5w％)(353.8g，400ml，4份)同时维持温度为20-25℃。将混合物在22-25℃搅拌30-45分钟且将两相分离。水相的ph应该为碱性(观察到的ph为10.9)。有机相用15.3w％氯化钠水溶液(2×442.1g，2×400ml，2×4份)洗涤。注意：15.3w％nacl水溶液通过将nacl(180g)溶于水(1000g)中来制备。将有机相减压浓缩(100-110托，30-34℃，夹套温度为35-40℃)至体积为约900ml(9份)。真空用n2消除且将溶液过滤以除去少量nacl(约400mg)。漏斗用2-methf(86.0g，100ml，1份)冲洗，得到2-[3-(3-氨基甲基苯基)-[1,2,4]-噁二唑-5-基]-丙-2-醇游离碱的2-methf/甲苯溶液(899.0g，1l，10份)。对溶液进行测定(w/w)，得到产物(83.61g，9.3w％)，收率为88.7％且纯度为95.1a％(hplc)；2-methf为68.7w％且甲苯为21.2w％。hplc方法：zorbaxeclipsexdbc8柱，5微米，4.6×150mm，25℃，以240nm检测，梯度：在5:95:0.1ch3cn/h2o/tfa保持2分钟，然后历时16分钟变为90:10:0.1ch3cn/h2o/tfa；产物保留时间：7.8分钟。方案v-步骤4向配备有机械搅拌器、热电偶探头和n2入口的5l反应器中加入thf(1.5l)和2-[3-(3-氨基甲基苯基)-[1,2,4]-噁二唑-5-基]-丙-2-醇acoh(111.27g)。溶液变为混悬液。在冷却(将热电偶设定为15℃)下缓慢加入na2co3(85.73g)的水(600ml)溶液。将反应混合物在室温搅拌约10分钟。历时约12分钟在冷却(将热电偶设定为15℃)下经由滴液漏斗加入一缩二碳酸二叔丁酯(97.1g)的thf(90ml)溶液。将反应混合物温热(将热电偶设定为22℃)。混合物首先呈现为混悬液，然后分离为明显的两层，然后再次变为混悬液。加入乙酸乙酯(750ml)且将混悬液在室温搅拌15分钟。将硅藻土545(25g)加到反应器中且将混合物搅拌15分钟。将浆液转移到4l锥形瓶中。其用硅藻土545(烧结玻璃漏斗，kimax2000ml-125c，装有100g硅藻土545)过滤。硅藻土/锌盐用乙酸乙酯(500ml)洗涤。收集有机层且用1/1h2o/饱和nacl水溶液(2×500ml)洗涤，水层的ph为5-7。将滤液加到洁净的反应器中且为反应器安装一体式蒸馏装置(p＝250托，δp＝5托，将热电偶设定为40℃)。当反应器中的液体体积为约250ml时，压强用n2平衡且冷却反应混合物(将热电偶设定为22℃)。向反应器中加入乙酸乙酯(1500ml)。继续蒸馏(p＝180-200托，δp＝5托，将热电偶设定为50℃)直到反应器中的溶液体积为约500ml。压强用n2平衡且冷却反应混合物(将热电偶设定为22℃)。3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苄基氨基甲酸叔丁酯的收率＝126.46g(定量，乙酸乙酯溶液)。将溶液用于步骤5。hplc方法：zorbaxeclipsexdbc8柱，5微米，4.6×150mm，25℃，以240nm检测，梯度：在5:95:0.1ch3cn/h2o/tfa保持2分钟，然后历时16分钟变为90:10:0.1ch3cn/h2o/tfa；产物保留时间：13.8分钟。方案v-步骤5向配备有机械搅拌器、热电偶和n2入口的5l反应器中加入3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苄基氨基甲酸叔丁酯(126.46g)的乙酸乙酯溶液(来自步骤4)。将溶液冷却(3-15℃)。历时30分钟加入来自气阀瓶的hcl气体(102g)。历时45分钟将反应混合物温热至15℃且形成浆液。将该浆液转移到锥形瓶(1l)中。然后内容物使用布氏漏斗来过滤。滤饼用乙酸乙酯(350ml)冲洗且抽吸干燥。然后将固体转移到干燥盘中且干燥(0.9mmhg，35℃，n2)，得到83.52g固体(步骤3-5的总收率为76.6％)。hplc方法：zorbaxeclipsexdbc8柱，5微米，4.6×150mm，25℃，以240nm检测，梯度：在5:95:0.1ch3cn/h2o/tfa保持2分钟，然后历时16分钟变为90:10:0.1ch3cn/h2o/tfa；产物保留时间：8.0分钟。实施例1b：向带有搅拌器和氮气保护的反应器中加入2-methf(5ml)、酯(500mg)、苄胺(545mg)和1,5,7-三氮杂二环[4,4,0]癸-5-烯(tbd)(97.5mg，0.3当量)，得到黄色混悬液。将反应器置于预加热至79℃的加热器中。将反应混合物搅拌约3小时，然后从加热器中取出，冷却至室温，然后置于冰浴中，搅拌15分钟且过滤。反应器和滤饼用1ml冷的2-methf冲洗。白色滤饼在室温用5×2ml水冲洗且抽吸干燥1.5小时。将白色固体(0.77g)转移到烘箱中且在70℃加热(n2，45mbar)过夜。收率：750mg，77％。另一种后处理方法：使用2-methf(4ml)、酯(300mg)、苄胺(327mg)和1,5,7-三氮杂二环[4,4,0]癸-5-烯(tbd)(58.5mg，0.3当量)的反应完成后，混合物用2ml水分配且冷却。分离有机相，用2ml2-methf稀释，然后用5ml水洗涤。合并的水相用2ml2-methf萃取。将合并的有机相浓缩且干燥。收率：0.57g，97％。hplc方法：eclipsexdbc8柱，5微米，4.6×150mm，35℃，以270nm检测，梯度：在5:95:0.1％acn/水/tfa保持5分钟，然后历时7分钟变为50:50:0.1％acn/水/tfa，保持3分钟；产物保留时间：12.9分钟。实施例22-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸((s)-1-{3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-1,2,4-噁二唑-3-基]-苯基}-乙基)-酰胺步骤1将3-乙酰基苯甲腈(5g，34.4mmol)加到装有(r)-(+)-2-甲基丙-2-亚磺酰胺(3.48g，28.7mmol)和四乙醇钛(iv)(13.1g，57.4mmol)的thf(70ml)溶液的烧瓶中且将反应混合物在75℃加热过夜。冷却反应混合物(-48℃)且历时1小时滴加三仲丁基硼氢化锂(l-selectride)(浓度为1m的thf溶液，57.4ml)。将反应混合物搅拌2小时且温热至室温。然后将反应混合物冷却至0℃且加入甲醇(3ml)。在搅拌下加入盐水(150ml)且混悬液用硅藻土过滤。粗品用乙酸乙酯萃取，干燥(mgso4)，过滤且真空蒸发。粗品通过柱色谱(用庚烷-乙酸乙酯洗脱)来纯化，得到n-[(1s)-1-(3-氰基苯基)乙基]-2-甲基-[s(r)]-丙-2-亚磺酰胺(78％)。ms：251(m+h)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：＝1.22(s，9h)，1.54(d，3h)，3.36(bs，1h)，4.55-4.7(m，1h)，7.43(d，1h)，7.46(d，1h)，7.56-7.6(m，2h)，7.64(s，1h)。步骤2n-羟基-3-[(s)-1-(2-甲基丙-2-亚磺酰基氨基)-乙基]-苯甲脒将羟胺盐酸盐(3.43g，55mmol)和甲醇(70ml)加到装有n-[(1s)-1-(3-氰基苯基)乙基]-2-甲基-[s(r)]-丙-2-亚磺酰胺(5.5g，22mmol)的烧瓶中且将混悬液在冰水浴中冷却。将三乙胺(5.55g，55mmol)加到烧瓶中且将反应混合物温热至室温过夜。将反应混合物减压蒸发且将粗品在水和dcm之间分配。分离有机层，干燥(na2so4)且减压蒸发，得到n-羟基-3-[(s)-1-(2-甲基丙-2-亚磺酰基氨基)-乙基]-苯甲脒(5.48g)。ms：284(m+h)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝1.21(s，9h)，1.52(s，3h)，3.33(s，1h)，3.77(bs，1h)，4.59-4.61(m，1h)，4.88(1h，bs)，7.35-7.37(m，2h)，7.50-7.52(m，1h)，7.64(s，1h)。步骤32-甲基丙-2-亚磺酸((s)-1-{3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-1,2,4-噁二唑-3-基]-苯基}-乙基)-酰胺将2-羟基-2-甲基-丙酸甲酯(20ml)和k2co3(806mg，5.8mmol)加到装有n-羟基-3-[(s)-1-(2-甲基丙-2-亚磺酰基氨基)-乙基]-苯甲脒(1.5g，5.3mmol)的烧瓶中且加热回流6小时。将反应混合物减压蒸发且在水和乙酸乙酯之间分配。分离有机层，干燥(na2so4)且通过快速柱色谱(用庚烷-乙酸乙酯混合物洗脱)来纯化，得到2-甲基丙-2-亚磺酸((s)-1-{3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-1,2,4-噁二唑-3-基]-苯基}-乙基)-酰胺(1.05g)。ms：352(m+h)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝1.22(s，9h)，1.58(d，3h)，1.75(s，6h)，3.48(bs，1h)，4.65(m，1h)，7.45-7.47(m，2h)，8.01(m，1h)，8.08(s，1h)。步骤42-{3-[3-((s)-1-氨基乙基)-苯基]-1,2,4-噁二唑-5-基}-丙-2-醇盐酸盐在0℃将氯化氢的对二噁烷溶液(4n，1.42ml)加到冷却的2-甲基丙-2-亚磺酸((s)-1-{3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-1,2,4-噁二唑-3-基]-苯基}-乙基)-酰胺(1g，2.85mmol)的甲醇(3ml)溶液中且搅拌20分钟。加入乙醚(30ml)，倾析且残余物再用乙醚洗涤。真空干燥残余物，得到2-{3-[3-((s)-1-氨基乙基)-苯基]-1,2,4-噁二唑-5-基}-丙-2-醇盐酸盐(560mg)。ms：231(es+，-oh离子化)。1hnmr(300mhz，dmso)：δ＝1.55(d，3h)，1.63(s，6h)，4.53-4.57(m，1h)，6.1(bs，1h)，7.64(t，1h)，7.76(d，1h)，8.01(d，1h)，8.15(s，1h)，8.56(bs，2h)。步骤5将n-甲基吗啉(nmm)(196mg，1.94mmol)加到2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸(390mg，1.94mmol)和2-{3-[3-((s)-1-氨基乙基)-苯基]-1,2,4-噁二唑-5-基}-丙-2-醇盐酸盐(550mg，1.94mmol)在dmf(20ml)中的混合物中。在室温搅拌5分钟后，加入4-(4,6-二甲氧基-[1,3,5]三嗪-2-基)-4-甲基吗啉-4-鎓氯化物(dmtmm)(537mg，1.94mmol)且将反应混合物在室温搅拌2小时。将反应混合物倒入冰水中且混悬液用etoac(7×100ml)萃取。合并的乙酸乙酯层用盐水(50ml)洗涤，用硫酸钠干燥且真空浓缩，得到粗产物。其通过hplc(c18柱)(用乙腈-水混合物洗脱)来纯化，得到2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸((s)-1-{3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-1,2,4-噁二唑-3-基]-苯基}-乙基)-酰胺，其为无定形玻璃状物(650mg，78％)。ms：431(m+h)。1hnmr(300mhz，dmso)：δ＝1.58(d，3h)，1.62(s，6h)，5.3(m，1h)，7.56(t，1h)，7.7(d，1h)，7.92(m，2h)，8.08(s，1h)，8.43(t，1h)，8.72(d，1h)，8.9(d，1h)，9.47(s，2h)，9.59(d，1h)。[α]d(甲醇)＝+57.2°。实施例32-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸((r)-1-{3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-1,2,4-噁二唑-3-基]-苯基}-乙基)-酰胺步骤1将硫酸氢钾(13.6g，100mmol)加到3-甲酰基苯甲腈(7.21g，55mmol)和(s)-(+)-2-甲基丙-2-亚磺酰胺(6.06g，50mmol)在甲苯(500ml)中的混合物中且在45℃加热2天。将反应混合物过滤，将滤液减压蒸发且通过柱色谱(用乙酸乙酯-庚烷混合物洗脱)来纯化，得到n-[(3-氰基苯基)亚甲基]-2-甲基-[s(s)]-丙-2-亚磺酰胺(9.65g)。ms：235(m+h)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝1.29(s，9h)，7.62(t，1h)，7.79(d，1h)，8.04(d，1h)，8.17(bs，1h)，8.60(s，1h)。步骤2在-45℃历时30分钟将甲基溴化镁(34.3ml浓度为3m的乙醚溶液，102.9mmol)加到n-[(3-氰基苯基)亚甲基]-2-甲基-[s(s)]-丙-2-亚磺酰胺(9.65g，41.18mmol)的dcm溶液(200ml)中且在该温度搅拌4小时。然后移开冷却浴，温热至-10℃且用饱和nahco3(250ml)淬灭。分离有机层且水层再用dcm(100ml)萃取。合并有机萃取物，干燥(na2so4)且减压蒸发，得到2-甲基丙-2-亚磺酸[(r)-1-(3-氰基苯基)-乙基]-酰胺，其为主要产物。ms：251(m+h)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝1.22(s，9h)，1.54(d，3h)，3.35(s，1h)，4.56-4.65(m，1h)，7.42-7.48(m，1h)，7.56-7.59(m，2h)，7.64(s，1h)。步骤3将氯化氢(浓度为4n的对二噁烷溶液，21ml)加到2-甲基丙-2-亚磺酸[(r)-1-(3-氰基苯基)-乙基]-酰胺(10.29g，41.1mmol)的甲醇(21ml)溶液中且在室温搅拌40分钟。然后将反应混合物减压蒸发且将粗品与乙醚一起研磨，得到灰白色固体，其用甲基叔丁基醚和乙醇的混合物进行结晶，得到3-((r)-1-氨基乙基)-苯甲腈盐酸盐，其为主要产物。ms：147(m+h)。1hnmr(300mhz，dmso)：δ＝1.53(d，3h)，4.45-4.52(m，1h)，7.65(t，1h)，7.84-7.91(m，2h)，8.03(s，1h)，8.67(bs，3h)。步骤4将n-甲基吗啉(nmm)(1.01g，10mmol)加到2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸(2g，10mmol)和3-((r)-1-氨基乙基)-苯甲腈盐酸盐(1.82g，10mmol)在dmf(50ml)中的混合物中。在室温搅拌10分钟后，加入4-(4,6-二甲氧基-[1,3,5]三嗪-2-基)-4-甲基吗啉-4-鎓氯化物(dmtmm)(10mmol)且将反应混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物在水(500ml)和乙酸乙酯(300ml)之间分配且水层再用乙酸乙酯(100ml)萃取。合并的乙酸乙酯萃取物用饱和nahco3(100ml)和盐水(100ml)洗涤。将有机层干燥(na2so4)，过滤，然后减压蒸发，得到2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸[(r)-1-(3-氰基苯基)-乙基]-酰胺，其为主要产物(3.2g)且直接用于下一步反应(偕胺肟的形成)。步骤5将羟胺盐酸盐(1.52g，24.2mmol)加到冷却的2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸[(r)-1-(3-氰基苯基)-乙基]-酰胺(3.2g，9.7mmol)的甲醇(40ml)溶液中且将混悬液在冰水浴中冷却。将三乙胺(2.44g，24.2mmol)加到烧瓶中且将反应混合物温热至室温过夜。将反应混合物减压蒸发且将粗品在水和乙酸乙酯之间分配。分离有机层，干燥(na2so4)且减压蒸发。加入甲苯(50ml)和chcl3(50ml)且减压蒸发，得到2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸{(r)-1-[3-(n-羟基甲脒基)-苯基]-乙基}-酰胺(3g)，其为主要产物。ms：363(m+h)。1hnmr(300mhz，dmso)：δ＝1.54(d，3h)，5.18-5.27(m，1h)，5.80(bs，2h)，7.35(t，1h)，7.44(d，1h)，7.54-7.60(m，2h)，7.74(s，1h)，8.45(d，1h)，8.79(d，1h)，9.26(d，1h)，9.35(s，2h)，9.60(s，1h)。步骤62-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸((r)-1-{3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-1,2,4-噁二唑-3-基]-苯基}-乙基)-酰胺将2-羟基-2-甲基-丙酸甲酯(2ml)和k2co3(219mg，1.59mmol)加到装有2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸{(r)-1-[3-(n-羟基甲脒基)-苯基]-乙基}-酰胺(0.5g，1.38mmol)的微波小瓶中且在微波中在180℃加热10分钟。将反应混合物减压蒸发且通过反相hplc来纯化，得到2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸((r)-1-{3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-1,2,4-噁二唑-3-基]-苯基}--乙基)-酰胺，其为主要化合物(110mg)。ms：431(m+h)。1hnmr(300mhz，dmso)：δ＝1.58(d，3h)，1.61(s，6h)，5.27-5.31(m，1h)，6.08(s，1h)，7.53-7.60(m，2h)，7.67(d，1h)，7.91(d，1h)，8.02(t，1h)，8.08(s，1h)，8.45(d，1h)，8.79(d，1h)，9.35-9.39(m，3h)。2-(吡啶-2-基)嘧啶-5-羧酸((r)-1-{3-[5-(1-羟基-1-甲基乙基)-1,2,4-噁二唑-基]-苯基}-乙基)-酰胺也可按照与实施例2类似的方法来制备，但用2-{3-[3-((r)-1-氨基乙基-苯基]-1,2,4-噁二唑-5-基}-丙-2-醇盐酸盐代替2-{3-[3-((s)-1-氨基乙基)-苯基]-1,2,4-噁二唑-5-基}-丙-2-醇盐酸盐。鉴定造血型pgd2合酶抑制剂的体外测定本发明化合物对pgd2合酶的抑制活性可按照以下测定中的任何一种来测试。测定1：荧光偏振测定如pct公开文本wo2004/016223中的实施例ii所述。测定2：酶免疫测定(eia)方法i.测定溶液a.0.1mk2hpo4/kh2po4缓冲液(ph7.4)的制备由1mkh2po4(sigma,目录号p-8709)制备0.1mkh2po4；由k2hpo4粉末(fisher，bp363-500)制备0.1mk2hpo4；将0.1mk2hpo4与0.1mkh2po4混合且将ph调节至7.4。b.0.5％γ-球蛋白的制备将0.1gγ-球蛋白(sigma,目录号g-5009)加到20ml0.1mk2hpo4/kh2po4缓冲液(ph7.4)中且按1ml/瓶等量分装且贮存在-80℃。c.100mmgsh的制备将307mggsh(sigma,目录号g-6529)加到10ml.1mk2hpo4/kh2po4缓冲液(ph7.4)中且贮存在-80℃。d.反应缓冲液的制备：198ml0.1mk2hpo4/kh2po4缓冲液(ph7.4)2mmgsh-由100mmgsh制备0.4g甘油2ml0.5％γ-球蛋白将0.4g甘油和2ml0.5％γ-球蛋白加到198ml0.1mk2hpo4/kh2po4缓冲液(ph7.4)中；在测定前将0.4ml100mmgsh加到19.6ml反应缓冲液中(足够用于两块96孔板)。e.fecl2/枸橼酸终止溶液的制备：(8mg/mlfecl2和0.1m枸橼酸)将40mg新鲜的fecl2(ign,目录号158046)加到5ml0.1m枸橼酸(sigma,目录号c0759)中。f.mox试剂的制备：10％etoh-将1mletoh加到9ml超纯h2o中；将0.1g甲氧基胺(cayman,目录号400036)溶于10％etoh(10ml)中；将0.82g乙酸钠(cayman,目录号400037)加到mox溶液中且溶解。ii.材料和方法二甲基亚砜(dmso；sigma,目录号d2650)前列腺素d2-mox快速eia试剂盒(caymenchemical,目录号500151)在测定前将装有10ml丙酮的聚丙烯管和空的96孔板在冰上冷却。除化合物稀释外，所有操作均在冰上进行。iii.化合物稀释1.在dmso中稀释化合物dmso储备溶液的体积(μl)dmso(μl)化合物浓度(mm)10mm,4μl6μl44mm,3μl6μl1.33331.33mm,3μl6μl0.44440.44mm,3μl6μl0.14810.148mm,3μl6μl0.04940.049mm,3μl6μl0.01650.016mm,3μl6μl0.00552.将2μl上述各种浓度的化合物在96孔板中稀释到38μl反应缓冲液中且混合。iv.酶和底物溶液的制备1.0.39ng/μl酶溶液的制备(加入化合物后的最终浓度为0.35ng/μl)。将4μl(4mg/ml)人h-pgds与396μl反应缓冲液混合(所得到的酶浓度为40μgml)。将46.8μl(40μgml)h-pgds加到4.753ml反应缓冲液中(所得到的总体积为4.8ml)。2.底物溶液(pgh2)的制备：将0.375ml0.1mg/mlpgh2加到1.625ml丙酮中。v.酶反应：1.在冰上将60μl酶溶液加到u形底聚丙烯板的化合物孔和阳性对照孔(不含有化合物)中；2.将60μl反应缓冲液和6.6μl5％dmso反应缓冲液加到板的阴性对照孔中；3.将6.6μl化合物在反应缓冲液中的稀释液加到化合物孔中且混合；4.将6.6μl5％dmso反应缓冲液加到阳性对照孔中；5.将板在冰中培养至少30分钟；6.在冰上将20μl底物(pgh2)溶液加到u形底96孔板的化合物孔、阴性对照孔及阳性对照孔中；7.在冷室内将板干燥约25-28分钟；8.将45μl上述酶溶液转移到装有干pgh2的96孔板中且混合3次。在冰上培养1分钟；9.向每个孔中加入45μlfecl2溶液且混合；10.加入90μlmox溶液且混合；11.在60℃培养30分钟；和12.样品用eia缓冲液稀释2500倍。vi.eia测定测定按照eia试剂盒(由cayman提供)中的规程来进行。样品中的总pgd2浓度(pgml)通过eia试剂盒(caymenchemical,目录号500151)来确定。pgd2的量如下计算：阳性对照百分比(％)按照以下公式来计算：阳性对照百分比(％)＝(化合物值-阴性对照值)/(阳性值-阴性对照值)×100化合物值＝由含有化合物的样品的eia测定标准曲线得到的pgd2浓度(pgml)阴性对照值＝由不含有酶的样品的eia测定标准曲线得到的pgd2浓度(pgml)阳性对照值＝由含有酶但不含有化合物的样品的eia测定标准曲线得到的pgd2浓度(pgml)ic50值如下确定：使用针对ic50曲线的4参数逻辑模型，进行excel拟合，得到当y＝1/2y最大值时的x值。结果本发明范围内的化合物在荧光偏振测定或eia测定中当浓度范围为约1纳摩尔浓度至约30微摩尔浓度、优选为约1纳摩尔浓度至约1微摩尔浓度且更优选为约1纳摩尔浓度至约100纳摩尔浓度时实现50％抑制。实施例hpgdseiaic50(nm)solidsol(μm)112135.9211854.932629.4本发明还可实施为其它具体形式而不背离其主旨或基本属性。当前第1页12