含有视黄醇或视黄醇衍生物的微针的制作方法

本发明涉及一种能够减少皮肤红斑等副作用，改善视黄醇的稳定性，显示长时间作为目的的效果的视黄醇透皮给药系统，尤其涉及一种含有视黄醇的微针(Microneedle)及其制造方法。

本申请基于2014年07月24日申请的韩国专利申请第10-2014-0094220号要求优先权，并将上述申请的说明书以及附图所公开的全部内容援引到本申请。

背景技术：

视黄醇作为维生素A的一种，在皮肤的表皮细胞维持原来的功能上起重要的作用。具体而言,视黄醇被认为有以下效能：使存在于皮肤细胞的细胞核中间的DNA表达RNA而促进细胞分化,促进弹性蛋白等的生物合成，以减少皱纹且增大皮肤弹性的效能，所述弹性蛋白由在动物的细胞间以纤维状固体存在的硬蛋白的胶原蛋白和由弹性纤维构成。

由此，视黄醇很早开始当作去除皱纹或预防皮肤老化的化妆品开发，在1990年代末以后，世界的化妆品公司跟着发行含有视黄醇的化妆品，并且企业间还发生了激烈的市场抢占竞争。

但是视黄醇产品出现了很多问题。具体而言,虽然视黄醇效果显著，但是在光、温度、氧气等条件下容易被破坏，因此，当作化妆品原料使用时能够到达皮肤内的稳定化最重要。如果因外部因素导致视黄醇成分氧化而变质，则存在不仅没有效果，还有引起副作用的问题。为了解决此问题,存在使用昂贵的特殊容器或将使用条件限制为没有光的场所或者开始使用的化妆品推荐在3个月内全部使用等很多不便。

为了解决这种有关稳定性的问题，以稳定性好的视黄醇乙酸酯和棕榈酸视黄酯等代替使用视黄醇。但是这种视黄醇衍生物不能像视黄醇深入浸透皮肤而合成蛋白质，因此虽然稳定性高但是效果相对小。

另外，视黄醇在皮肤吸收时经常引起红斑等诱发皮肤刺激的问题。

技术实现要素：

发明要解决的课题

因此，本发明要解决的课题是提供一种能够改善视黄醇的皮肤刺激,在给药系统内确保视黄醇的稳定性,视黄醇能够长期显示效果的视黄醇给药系统以及制造这种系统的方法,利用这种系统投给视黄醇的方法。

解决课题的方法

为了解决上述课题,本发明提供一种包括含有视黄醇或视黄醇衍生物的微粒的微针,更优选地,形成上述微针的物质在皮肤内溶解后，微针适用于皮肤时微针溶解或崩坏，导致包含在微针内部的微粒迅速传到皮肤内,并且包含在内部的微粒由于包含缓释高分子，因此，在皮肤内每次少量释放视黄醇或其衍生物。

本发明人研究了多种给药系统，无论哪种系统都很难同时解决上述提到的视黄醇的几种问题。本发明人经过很多努力之后，研究出了通过在皮肤内的溶解性(soluble)微针内含浸由缓释高分子构成且包含视黄醇成分的微粒，从而能够一次性解决视黄醇的稳定性、皮肤刺激、效果持续等问题的卓越的发明。如果将含有视黄醇成分的微粒含浸在溶解性微针中并适用于皮肤,则通过微针在没有疼痛的状态下向皮肤内透过视黄醇成分,并且微针在皮肤内水分溶解，而且含有视黄醇成分的微粒传递到皮肤内。从传递到皮肤内的微粒徐徐释放视黄醇成分，由此能够缓和基于视黄醇的皮肤刺激，并且能够将视黄醇效果最大化。

为了达成上述课题,微针在皮肤内应该是溶解性的,且为了形成溶解性微针可以使用透明质酸(Hyaluronic acid)、羧甲基纤维素钠(Na-CMC,Sodium carboxymethyl cellulose)、乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯共聚物(vinylpyrrolidone vinyl acetate copolymer)、聚乙烯醇(Poly vinyl alcohol)、以及聚乙烯吡咯烷酮(Poly vinyl pyrrolidone)等水溶性高分子；木糖(Xylose)、蔗糖(Sucrose)、麦芽糖(Maltose)、乳糖(Lactose)、海藻糖(Trehalose)等糖类；或它们的混合物。尤其,综合考虑微针的皮肤透过强度、在皮肤内的溶解速度等，优选地使用透明质酸(Oligo-Hyaluronic acid)、羧甲基纤维素钠(Na-CMC,Sodium carboxymethyl cellulose)以及糖类(saccharide)(更优选为,海藻糖(Trehalose))的混合物,更优选地使用还混合下述的甘油(Glycerine)的混合物。

优选地,本发明的微针除了含有视黄醇成分的微粒以及形成微针的上述提到的成分以外，还可以包含增塑剂、表面活性剂、保鲜剂、抗炎剂等。

作为上述增塑剂(plasticizer),例如,可以单独或混合使用乙二醇(Ethylene glycol)、丙二醇(Propylene glycol)、二丙二醇(Dipropylene glycole)、丁二醇(Butylene glycol)、甘油(Glycerine)等多元醇。

在本发明中,由于上述与视黄醇成分一起形成微粒的物质应该是不会在微针的制造过程中溶解或分散而消失，并能够在微粒内抓住视黄醇成分的物质的同时，也应该是在皮肤内能够达到视黄醇成分的缓释(sustained release)的物质。

作为形成这种微粒的物质可以使用缓释高分子,作为缓释高分子可以单独或混合使用聚(乳酸)、聚(乙交酯)、聚(丙交酯-co-乙交酯)、聚酸酐、聚原酸酯、聚醚酯、聚己内酯、单甲氧基聚乙二醇-聚己内酯(MPEG-PCL)、聚酯酰胺、聚(丁酸)、聚(戊酸)、聚氨酯、或它们的共聚物等生物降解性高分子；以及聚丙烯酸酯、乙烯-乙酸乙烯酯聚合物、丙烯酸置换醋酸纤维素、非-分解性聚氨酯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚氟乙烯、聚(乙烯基咪唑)、氯磺酸酯聚烯烃(chlorosulphonate polyolefins)、聚氧化乙烯或它们的共聚物等非-生物降解性高分子,但是本发明并非限定于此。

综合考虑视黄醇成分的稳定化以及在皮肤内的释放性等时,作为上述缓释高分子优选使用聚(乳酸)、聚(乙交酯)、以及聚(丙交酯-co乙交酯)中任意一种以上和单甲氧基聚乙二醇-聚己内酯(MPEG-PCL)的混合物。

为了达到本发明的目的，这种微粒尽可能是骨架(matrix)型或药库(reservoir)型。

能够在本发明中使用的微粒能够通过本发明所属的领域中众所周知的多种方法制造。例如,可以利用溶剂交换法(Solvent exchange method)、溶剂蒸发法(Solvent evaporation method)、膜透析法(Membrane dialysis method)、喷雾干燥法(Spray drying method)等制造能够在本发明中利用的微粒。例如,可以利用文献Journal of Controlled Release 70(2001)1-20以及International Journal of Pharm Tech Research,3(2011)1242-1254中记载的方法。优选地可以通过一般的乳化法(emulsification)和溶剂蒸发法(solvent evaporation)制造。

优选地,本发明的微粒的直径是0.01μm-10μm。如果粒子大小超过10μm，则含浸在微针时针(needle)的强度减弱而皮肤很难透过。本发明的微粒的直径通过激光光散射法(LLS)测定,例如,利用Malvern公司的Zetasizer2000^TM测定。

优选地,本发明的微粒含有微粒总重量的0.01-10重量％的视黄醇或视黄醇衍生物,更优选地含有0.1-5重量％。另外,本发明的微针优选地含有微针总重量0.05-10重量％的这种微粒,更优选地含有0.1-5重量％。

作为能够在本发明中使用的视黄醇衍生物，有视黄醇乙酸酯、棕榈酸视黄酯、视黄醇或它们的混合物,但是本发明并非限定于这种视黄醇衍生物的具体种类。

另外,本发明提供一种黏附如上述微针的视黄醇成分的用于给药(传递用)的微针贴剂(patch)系统。

另外，本发明提供一种含有视黄醇的微针的制造方法，包括(S1)利用上述的缓释高分子制造含有视黄醇或视黄醇衍生物的微粒的步骤以及(S2)通过利用皮肤内溶解性物质制造含有上述微粒的微针的步骤。所述含有视黄醇的微针能够改善视黄醇成分的刺激,确保视黄醇成分的稳定性,能够持续显示效果。

另外，本发明提供一种利用本发明的微针作为特征的，减少视黄醇的皮肤刺激、且达到视黄醇的缓释释放的视黄醇皮肤给药方法。

发明效果

本发明提供一种能够确保视黄醇的稳定性,减少视黄醇的皮肤刺激,能够持续发挥效果的视黄醇透皮给药用微针。另外，本发明提供一种减少皮肤刺激,能够长期发挥视黄醇的效果,且能够确保对光、湿度、温度等非常不稳定的视黄醇的稳定性的，视黄醇给药系统的制造方法。另外，本发明提供一种利用这种微针作为特征的视黄醇的皮肤给药方法。

附图说明

本说明书中附加的以下附图是示出本发明的优选的实施例,且和前述的发明的内容一起起到更加深刻理解本发明的技术思想的作用,因此，本发明并非限定并解释于所述附图上的事项。

图1是表示制造本发明的微针的多种方法中的一个例的图。溶解性微针可以用溶液浇铸法(solution casting)制造,可以将溶液(solution)浇铸(casting)到模具(mold)后利用真空和离心机(centrifuge)向细小模具(mold)填充液体后干燥而制造。形成微针结构体的材料(material)可以使用一般的合成及天然水溶性高分子。

图2表示用于评价本发明的微针的视黄醇释放举动的弗兰兹扩散池(Franz diffusion cell)。

图3是利用安装猪皮肤的弗兰兹扩散池(Franz diffusion cell)而评价的,表示从微针释放视黄醇的评价结果的图表。

图4是表示含有视黄醇其本身(以乳液形态添加)的微针,含有本发明的视黄醇微粒的微针,以及将含有视黄醇微粒的通常的乳膏剂型适用在皮肤后所显示的皮肤刺激程度的照片。

图5是表示含有视黄醇其本身(以乳液形态添加)的微针,含有本发明的视黄醇微粒的微针,以及将含有视黄醇微粒的通常的乳膏剂型在皮肤上反复使用时所显示的皮肤刺激指数的图表。

图6是表示含有本发明的视黄醇微粒的微针及含有视黄醇微粒的通常的乳膏剂型在长期使用后所显示的皱纹改善程度的实验结果。

具体实施方式

以下，为了帮助理解本发明，举实施例等详细说明。但是,本发明的实施例能够变形为其他多种形态,本发明的范围不能解释为限定于下述实施例。本发明的实施例是为了给本领域的具有平均知识的人完整地说明本发明而提供的。

<视黄醇微粒制造>

将聚乳酸(PLA：Poly lactic acid)10g和单甲氧基聚乙二醇-聚己内酯(MPEG-PCL：mono-methoxy poly ethylene glycole-Poly carprolactone)二嵌段共聚物(diblock copolymer)10g溶解在二氯甲烷(Methylene Chloride)100g后，混合视黄醇50C(BASF,视黄醇50％)5g而制造聚合物(polymer)-视黄醇溶液(solution)。在净化水500mL中溶解聚乙烯醇(PVA：Poly vinyl alcohol)2.5g,来制造PVA水溶液。将PVA水溶液500mL以700rpm速度搅拌,且徐徐添加聚合物(polymer)-视黄醇溶液(solution)来制造水包油型乳状液溶液(oil in water emulsion solution)。以700rpm速度搅拌24小时后，作为有机溶剂的二氯甲烷(Methylene chloride)蒸发而制造稳定的视黄醇微粒。利用旋转式汽化器(Rotary evaporator)来完全去除残留的二氯甲烷(Methylene chloride),并且以使视黄醇含量成为总量的3％的方式，将水和有机溶剂一起蒸发而浓缩。

利用液相色谱法(Liquid chromatography)分析的结果,确认视黄醇的含量为2.9％,利用粒度仪(Particle size analyzer)(Malvern Zetasizer2000)^TM分析的结果，微粒的平均大小是450nm。

<含有视黄醇或视黄醇微粒的微针的制造>

如下述表1,制造了含有视黄醇(以乳液形态添加)或视黄醇微粒的微针。

表1

具体而言，按以下方法制造含浸视黄醇(R MN)的溶解性(soluble)微针：将寡聚透明质酸钠(Hyaluronic acid)、羧甲基纤维素钠(Sodium carboxymethyl cellulose)和海藻糖(Trehalose)溶解在净化水后，添加甘油(Glycerin)、HCO-40及视黄醇50C(BASF,视黄醇50％,吐温20 50％),制造油(oil)状的视黄醇乳液(emulsion)。将所制造的视黄醇乳液(emulsion)浇铸(casting)在硅胶微针模具(mold)后,在3000rpm的速度下离心(centrifugation)10分钟，在细小模具(mold)中填充溶液。填充溶液后在干燥烤箱(70℃)中干燥3小时,利用胶膜将微针从硅胶模具分离。

具体而言，按以下方法制造含浸视黄醇微粒(R-MN)的溶解性(soluble)微针。寡聚透明质酸钠(Hyaluronic acid)、羧甲基纤维素钠(Sodium carboxymethyl cellulose)和海藻糖(Trehalose)溶解在净化水后，添加甘油(Glycerin)、HCO-40和视黄醇微粒(视黄醇3％)制造溶液。将制造的溶液浇铸在硅胶微针模具(silicone microneedle mold)后,在3000rpm的速度下离心(centrifugation)10分钟，在细小模具(mold)中填充溶液。填充溶液后在干燥烤箱(70℃)中干燥3小时,利用胶膜将微针从硅胶模具分离。

<视黄醇释放举动>

利用安装猪皮肤的弗兰兹扩散池(Franz diffusion cell)评价了上述制造的微针释放视黄醇(参照图2)。作为受体溶液(acceptor solution)，使用含有1重量％的吐温(Tween)20的磷酸盐缓冲液(PBS)溶液。

即,利用弗兰兹扩散池(Franz diffusion cell),且利用液相色谱法(Liquid Chromatography)测定随时间的猪皮肤组织及受体溶液(acceptor solution)的视黄醇含量。在猪皮肤上黏附含浸视黄醇(乳液)或者视黄醇微粒的微针，使微针浸透猪皮肤内溶化后(黏附时间:2小时,温度:32℃)去除微针。将通过微针吸收视黄醇的猪皮肤放入弗兰兹扩散池(Franz diffusion cell)中,确认随时间视黄醇从猪皮肤向受体溶液释放的举动。其结果在图3显示。

如图3显示,在通过含浸视黄醇(乳液)的微针而浸透视黄醇的猪皮肤的情况下，随时间，视黄醇含量在猪皮肤内迅速减少,受体溶液(acceptor solution)的视黄醇含量迅速增加,相反，在通过含浸视黄醇微粒的微针浸透视黄醇的猪皮肤的情况下，猪皮肤内视黄醇含量徐徐减少,在受体溶液中也徐徐增加。这是因为在浸透猪皮肤内的视黄醇-微粒中徐徐释放视黄醇。

<皮肤刺激试验>

将含有视黄醇的微针、含浸视黄醇微粒的微针(Microneeldle)以及含有视黄醇微粒的乳膏分别每天适用胳膊内侧2周时间，试验皮肤刺激。微针每1小时黏附一次,涂抹乳膏并确认了皮肤刺激程度(N＝20,视黄醇含量:2500IU)。其结果显示在图4和图5。

在含浸视黄醇的微针的情况下，显示伴随红斑以及浮肿的严重的刺激，相反，在含浸视黄醇微粒的微针的情况下，皮肤刺激是一般功能性化妆品水准(皮肤刺激指数:约0.1,在皮肤刺激指数为0.2以上时，判断为有皮肤刺激,普通功能性化妆品的皮肤刺激是0.05-0.1水准。)，这是微小的,显示出比含有视黄醇微粒的乳膏更小的皮肤刺激。

与含浸视黄醇的微针相比，含浸视黄醇微粒的微针显示更小的皮肤刺激是因为皮肤内浸透视黄醇后微粒中徐徐释放视黄醇,这可以从弗兰兹扩散池(Franz diffusion cell)实验结果推出。但是,本发明并非限定于这种理论记传。

另外,与含浸视黄醇微粒的乳膏相比，含浸视黄醇微粒的微针中显示更小的皮肤刺激是因为实际使用中微针短时间(1小时)使用后去除，而乳膏长时间涂抹，因此，皮肤接触视黄醇的时间短。但是,本发明并非限定于这种理论记传。

<皱纹改善效果>

将包含视黄醇微粒的乳膏和包含视黄醇微粒的微针(Microneeldle)每天在眼角皱纹上处理12周后评价了皱纹改善程度。通过硅胶复制品(silicone replica)以及皱纹影像分析方法确认了皱纹改善程度(N＝20)。其结果在图6显示。

本发明的含有视黄醇微粒的微针与乳膏剂型相比，皱纹改善效果显示优秀2倍以上的改善效果,这是因为通过微针使药物皮肤透过良好,且透过的视黄醇在微粒中徐徐释放，因此，确认到皮肤刺激小且效果明显。

在含有视黄醇的微针的情况下，由于皮肤刺激大，因此难以以人为对象来看皱纹改善效果,在一般乳膏内包含视黄醇乳液(emulsion)的情况下，乳膏内视黄醇不稳定,因此，适用一般视黄醇时在效能及效果方面没有意义。因此,作为对照组使用了包含视黄醇微粒的乳膏。