技术领域本发明属于化学医药领域，涉及阿扎那韦的医药新用途；具体涉及阿扎那韦通过抑制高迁移率族蛋白B1(highmobilitygroupprotein，HMGB1)的表达，以致于预防或治疗肥胖、II型糖尿病、糖尿病肾病和非酒精性脂肪肝等相关的代谢紊乱疾病。
背景技术：
2型糖尿病即成人发病型糖尿病，占糖尿病患者90％以上。2型糖尿病人多肥胖，产生胰岛素抵抗，导致对胰岛素敏感性下降。糖尿病肾病为糖尿病的重要并发症，糖尿病后期近40％病人会发展为糖尿病肾病。肥胖症是由于热量摄入超过消耗所致的体内脂肪堆积，体重增加的一种非健康状态。肥胖症的发病率无论在发达国家还是发展中国家都迅速增长，并呈低龄化趋势，已成为全球性严重影响健康的流行病，目前我国拥有超重者至少2-3亿人，肥胖症患者突破7000万人。肥胖症不仅影响人的日常生活，而且是导致2型糖尿病，冠心病，高血压，血脂异常，胆囊炎等疾病的主要因素。因此，肥胖症的防治具有重要的临床意义。高迁移率族蛋白B1(highmobilitygroupprotein，HMGB1)是一种高度保守的核蛋白，广泛分布于哺乳动物细胞。随着其晚期促炎作用的发现，HMGB1成为近年来危重医学研究的热点靶点。高血糖可促进HMGB1的表达[VolzHC1,SeidelC,LaohachewinD,KayaZ,MüllerOJ,PlegerST,LasitschkaF,BianchiME,RemppisA,BierhausA,KatusHA,AndrassyM.HMGB1:themissinglinkbetweendiabetesmellitusandheartfailure.BasicResCardiol.2010；105(6):805-820.]。HMGB1与肥胖关系密切，尤其脂肪组织中的巨噬细胞的HMGB1高表达[WeisbergSP,McCannD,DesaiM,RosenbaumM,LeibelRL,FerranteAW,Jr.Obesityisassociatedwithmacrophageaccumulationinadiposetissue.JClinInvest.2003；112(12):1796-1808.；WagnerM.Adangerousduoinadiposetissue:high-mobilitygroupbox1proteinandmacrophages.YaleJBiolMed.2014；87(2):127-133.]。临床上硫酸阿扎那韦胶囊用于与其他抗逆转录病毒药物联合使用治疗HIV-1感染，，但阿扎那韦在预防或治疗肥胖、II型糖尿病、糖尿病肾病和非酒精性脂肪肝的药理作用未见报道。本发明人通过大量的研究发现阿扎那韦可以通过抑制HMGB1表达从而预防或治疗肥胖、II型糖尿病、糖尿病肾病和非酒精性脂肪肝。基于此，本发明人发明了阿扎那韦通过抑制IHMGB1表达，从而抑制肥胖、II型糖尿病、糖尿病肾病和非酒精性脂肪肝的发生发展，以致于预防或治疗肥胖、II型糖尿病、糖尿病肾病和非酒精性脂肪肝。
技术实现要素：
本发明提供了阿扎那韦在制备预防或治疗肥胖、II型糖尿病、糖尿病肾病和非酒精性脂肪肝的药物中的应用。本发明提供了阿扎那韦在制备预防或治疗肥胖的药物中的应用。本发明提供了阿扎那韦在制备预防或治疗II型糖尿病的药物中的应用。本发明提供了阿扎那韦在制备预防或治疗糖尿病肾病的药物中的应用。本发明提供了阿扎那韦在制备预防或治疗非酒精性脂肪肝的药物中的应用。本发明提供了阿扎那韦通过抑制HMGB1的表达在肥胖、II型糖尿病、糖尿病肾病和非酒精性脂肪肝中的药物中的应用。本发明提供的阿扎那韦可以以硫酸盐、盐酸盐等存在。优选硫酸盐。阿扎那韦和药学上可接受的载体或辅料组成的药物，该药物可以以药学常规方法制备成片剂、胶囊剂、滴丸剂，优选以胶囊形式存在。本发明提供的阿扎那韦在用于肥胖、II型糖尿病、糖尿病肾病和非酒精性脂肪肝时，其口服使用剂量范围是50mg～2000mg；优选50～1000mg。具体实施方式实施例1硫酸阿扎那韦胶囊制备称取50.0g硫酸阿扎那韦、和150.0g羧甲基淀粉钠充分混合均匀后过100目筛，加入适量的3％PVPK30水溶液适量制软材，20目筛制粒，60℃干燥3小时，18目筛整粒，加入2.0g硬脂酸镁，混合均匀后装胶囊，调节胶囊重约200mg，即得。具体实施例试验例1硫酸阿扎那韦对ob/ob肥胖小鼠的影响1.1实验材料糖化血红蛋白测定试剂盒，批号：0590072；HMGB1一抗购买于sigma公司；硫酸阿扎那韦(纯度99.5％，购买于大连美仑生物科技有限公司)；高密度脂蛋白(HDL)试剂盒(北京中生科技公司，批号：130706)、低密度脂蛋白(LDL)试剂盒(北京中生科技公司，批号：130806)和甘油三酯(TG)试剂盒(北京中生科技公司，批号：130406)。ob/ob小鼠，雄性50只，10周龄，体重50～55g；购买于南京模式动物研究所。1.2实验方法与结果ob/ob小鼠50只，随机分为5组，即模型组、硫酸阿扎那韦灌胃给药10mg/kg、20mg/kg、200mg/kg、400mg/kg组。另外取10只正常ob/ob小鼠作为对照组。各组给予相应药物，连续给药4周。称重和计算摄食量，测定糖化血红蛋白(HbA1c)、血糖，高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和甘油三酯(TG)。取脂肪组织，均浆，BCA蛋白测定试剂盒(Pierce公司)测定蛋白浓度后，取50μg样品蛋白进行10％的十二烷基磺酸钠2聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶变性电泳、然后转至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜，加入HMGB1一抗，β-actin作内参，Westernblot检测脂肪组织HMGB1蛋白的表达。比较各给药组与模型组的差异。组间进行T检验。表1硫酸阿扎那韦给药4周对ob/ob小鼠的影响(n＝10)*，p<0.05，**，p<0.01，与模型组比较表2硫酸阿扎那韦给药4周对ob/ob小鼠的血生化指标影响(n＝10)*，p<0.05，**，p<0.01，与模型组比较表1、表2结果显示硫酸阿扎那韦灌胃给药10mg/kg、20mg/kg、200mg/kg和400mg/kg组明显降低体重和摄食量，降低血浆HbA1c、LDL和TG水平，抑制血糖升高，抑制脂肪组织HMGB1表达下降，升高HDL水平(p<0.05或p<0.01)。硫酸阿扎那韦200mg/kg组降低体重和摄食量，降低血浆HbA1c、LDL和TG水平，抑制血糖升高，抑制脂肪组织HMGB1表达下降，升高HDL水平与硫酸阿扎那韦400mg/kg组比较无显著性差异。试验例2硫酸阿扎那韦对db/dbII型糖尿病小鼠的影响2.1实验材料糖化血红蛋白测定试剂盒，批号：0590072；HMGB1一抗购买于sigma公司；硫酸阿扎那韦(纯度99.5％，购买于大连美仑生物科技有限公司)；db/db小鼠，雄性60只，10周龄，体重50～55g；购买于南京模式动物研究所。2.2实验方法与结果db/db小鼠50只，随机分为5组，即模型组、硫酸阿扎那韦灌胃给药10mg/kg、20mg/kg，200mg/kg、400mg/kg组。另外取10只正常db/db小鼠作为对照组。各组给予相应药物，连续给药4周。称重，测定糖化血红蛋白(HbA1c)、血糖。取脂肪组织，均浆，BCA蛋白测定试剂盒(Pierce公司)测定蛋白浓度后，取50μg样品蛋白进行10％的十二烷基磺酸钠2聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶变性电泳、然后转至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜，加入HMGB1一抗，β-actin作内参，Westernblot检测脂肪组织HMGB1蛋白的表达。比较各给药组与模型组的差异。组间进行T检验。表3硫酸阿扎那韦给药4周对db/db糖尿病小鼠的影响(n＝10)*，p<0.05，**，p<0.01，与模型组比较表3结果显示硫酸阿扎那韦灌胃给药10mg/kg、20mg/kg、200mg/kg和400mg/kg组明显降低体重，降低血浆HbA1c水平，抑制血糖升高，抑制脂肪组织HMGB1表达下降(p<0.05或p<0.01)。硫酸阿扎那韦200mg/kg组降低体重，降低血浆HbA1c水平，抑制血糖升高，抑制脂肪组织HMGB1表达下降与硫酸阿扎那韦400mg/kg组比较无显著性差异。试验例3硫酸阿扎那韦对糖尿病肾病大鼠的影响3.1实验材料硫酸阿扎那韦(纯度99.5％，购买于大连美仑生物科技有限公司)苯那普利，北京诺华制药有限公司生产，批号：130106；链脲佐菌素(Sigma公司)，血糖测定试剂盒(北京中生试剂有限公司批号：130503)；肌酐和尿素氮试剂盒(北京中生科技公司，批号：130606)。实验动物：SPF级SpragueDawley大鼠，雄性，体重150g-200g，山东绿叶制药股份有限公司实验动物中心提供，动物合格证号为：SYXK(鲁)20030020。3.2试验方法与结果雄性SD大鼠100只，适应性喂养1周后，所有的大鼠在10％水合氯醛(0.35mL/100g，ip)麻醉，行左肾摘除术，一周后单次静脉注射1％的链脲佐菌素溶液60mg/kg，链脲佐菌素以0.1mol/L、pH为4.5枸椽酸缓冲溶液溶解，72h后眼眶采血，血糖测定试剂盒测定，血糖≥16.7mmol/L确定为造模成功，4周后随机分为6组，即模型组、苯那普利2mg/kg组，硫酸阿扎那韦灌胃5mg/kg组，硫酸阿扎那韦灌胃10mg/kg组，硫酸阿扎那韦灌胃100mg/kg组，硫酸阿扎那韦灌胃200mg/kg组，另外取10只作为正常对照组。各组连续给药8周，采血测定血清肌酐和尿素氮及各组大鼠24h尿蛋白排泄量。取肾组织，均浆，BCA蛋白测定试剂盒(Pierce公司)测定蛋白浓度后，取50μg样品蛋白进行10％的十二烷基磺酸钠2聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶变性电泳、然后转至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜，加入HMGB1一抗，β-actin作内参，Westernblot检测肾组织HMGB1蛋白的表达。比较各给药组与模型组的差异，同时对肾脏作病理切片进行显微检查。表4硫酸阿扎那韦给药8周对糖尿病肾病大鼠的影响(n＝10)*，p<0.05，**，p<0.01，与模型组比较表5硫酸阿扎那韦给药8周对糖尿病肾病大鼠肾系数和HMGB1的影响(n＝10)*，p<0.05，**，p<0.01，与模型组比较表4、表5结果表明苯那普利2mg/kg组，硫酸阿扎那韦灌胃5mg/kg组，硫酸阿扎那韦灌胃10mg/kg组，硫酸阿扎那韦灌胃100mg/kg组，硫酸阿扎那韦灌胃200mg/kg组给药8周明显降低血清肌酐和尿素氮24h尿蛋白排泄量，减少肾组织HMGB1的表达(与模型对照组比较，p<0.05或0.01)；硫酸阿扎那韦灌胃100mg/kg组降低血清肌酐和尿素氮及24h尿蛋白排泄量，减少肾组织HMGB1的表达与硫酸阿扎那韦灌胃200mg/kg组比较，无显著性差异。病理检查：正常对照组大鼠肾小球基底膜正常，未见增宽，足突排列整齐。模型对照组大鼠肾小球基底膜显著增宽，足突排列紊乱、融合，系膜细胞和基质轻度节段性增生。硫酸阿扎那韦各给药组较模型组病变轻，且随剂量的增加病理损伤逐步减轻。试验例4硫酸阿扎那韦对非酒精性脂肪肝大鼠的影响4.1实验材料硫酸阿扎那韦(纯度99.5％，购买大连美仑生物科技有限公司)二甲双胍片(上海信谊药厂有限公司，批号:1307231)；游离脂肪酸(FFA)检测试剂盒，购自南京建成生物工程有限公司，批号20130715；甘油三酯TG(酶学终点法)检测试剂盒，威特曼生物科技(南京)有限公司，批号ZGY13307；总胆固醇(TC试剂盒(北京中生科技公司，批号：130506)实验动物：SPF级SpragueDawley大鼠，雄性，体重150g-200g，山东绿叶制药股份有限公司实验动物中心提供，动物合格证号为：SYXK(鲁)20030020。3.2试验方法与结果大鼠适应性饲养1周后，大鼠按体重编号，完全随机分为正常组10只和高脂造模组60只。正常组予普通饲料喂养，基础饲料配方：面粉20％、米粉10％、玉米20％、鼓皮25％、豆料20％、鱼粉2％、骨粉2％。高脂造模组予高脂饲料喂养，高脂饲料配方：基础饲料77.6％、猪油10％、胆固醇2.0％、胆盐0.2％、丙硫氧嚓咙0.2％、蛋黄粉5％、蔗糖5％。均自由饮水。连续造模8周，根据体重大鼠分为模型组、二甲双胍10mg/kg、硫酸阿扎那韦灌胃给药5mg/kg、10mg/kg、100mg/kg、200mg/kg组，各组继续给予高脂饲料地同时给予上述相应药物，至16周时处死大鼠，测定体重，计算肝系数，收集血样，测定血清ALT、AST、TG、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)。取肝组织，均浆，BCA蛋白测定试剂盒(Pierce公司)测定蛋白浓度后，取50μg样品蛋白进行10％的十二烷基磺酸钠2聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶变性电泳、然后转至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜，加入HMGB1一抗，β-actin作内参，Westernblot检测肝组织HMGB1蛋白的表达。比较各给药组与模型组的差异。表6硫酸阿扎那韦给药8周对非酒精性脂肪肝大鼠的影响(n＝10)*，p<0.05，**，p<0.01，与模型组比较表7硫酸阿扎那韦给药8周对非酒精性脂肪肝大鼠的影响(n＝10)*，p<0.05，**，p<0.01，与模型组比较表6、表7结果表明二甲双胍10mg/kg组，硫酸阿扎那韦灌胃5mg/kg组，硫酸阿扎那韦灌胃10mg/kg组，硫酸阿扎那韦灌胃100mg/kg组，硫酸阿扎那韦灌胃200mg/kg组给药8周明显降低体重、肝系数和肝组织HMGB1表达，降低血清ALT、AST、TG、TC和FFA(与模型对照组比较，p<0.05或0.01)；硫酸阿扎那韦灌胃100mg/kg组降低体重、肝系数和肝组织HMGB1表达，降低血清ALT、AST、TG、TC和FFA与硫酸阿扎那韦灌胃200mg/kg组比较，无显著性差异。