专利名称：：雌酚酮类衍生物ea303的医药新用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药
技术领域：
，涉及雌酚酮类衍生物EA303的医药新用途，具体涉及其在制备治疗肠管平滑肌痉挛性疾病及腹泻药物中的用途。
背景技术：
：雌酚酮类衍生物EA303的化学名称是3-(3画dimethylaminol-yl)propoxy-estral-l，3,5(10)-trien-17-onehydrochloride,我们在美国专利中查至'jEA303于2005年由CooperwoodJohnS对其抗癌活性进行了初步考察，结果表明，该化合物有较弱的抗癌活性，但至今未见有关EA303舒张肠管平滑肌作用的报道，申请者经多方面实验筛选，首次发现该化合物具有肠管平滑肌解痉及止泻作用。雌酚酮类衍生物EA303名称是3-[3-(二甲氨基)丙氧基]雌甾-1,3，5(10)-三烯-17-酮，其合成方法如下将14g雌酚酮溶于100ml甲苯中，加入8gKOH，100ml水，全部溶解后搅拌下加入1,3-二溴丙烷27ml，搅拌均匀后加入四丁基溴化铵1.7g,放入微波反应器中，9(TC下功率500W,反应2h。反应液降至室温后，分出水层，甲苯萃取，合并甲苯层，水洗三次，无水MgS04千燥，过滤蒸干得产物。将原料溶于80mlTHF中，加入二甲胺20ml，少量Kl,恥。C反应28小时。将溶剂蒸干后，加入乙酸乙酯80ml溶解后，用水洗三次，无水MgS04干燥后，过滤，用HC1的乙酸乙酯饱和溶液调PH值4，有白色固体析出，过滤后，干燥得EA-303。核磁共振氢谱1H-NMR(300MHz,CDC13),0.91(s，3H),L47-2.90(m,17H),2.52(s，3H),2.55(s,3H),3.22(m,2H)4.06(t,2H,J=6Hz),6.61(s,1H),6.67(dd，1H，J=2.7,J=8.7),7.21(d，2H，J=8.7)，12.8(brs,12.8)
发明内容本发明的目的是提供雌酚酮类衍生物EA303在制备肠管平滑肌解痉剂及止泻剂中的用途。研究表明肠管平滑肌强烈收缩致痉挛可引起多种疾病，如腹痛、腹鸣、腹胀、腹泻，所以研究肠平滑肌解痉药有很大的现实意义，对治疗胃肠痉挛性绞痛，肠易激综合症，溃疡性结肠炎等引起的胃肠功能紊乱等疾病均有指导意义和参考价值。EA303能够降低家兔离体小肠和结肠自发活动的张力和振幅，舒张乙酰胆碱、氯化钡、氯化钾收缩的家兔离体小肠和结肠。EA303灌胃给药可明显抑制蓖麻油、硫酸镁、液体石蜡所致的小鼠腹泻，还可明显抑制正常小鼠的小肠推进和大肠推进。因此，EA303可以用于制备治疗肠管平滑肌痉挛的解痉剂及止泻剂。对小鼠而言常规的有效剂量是29.74mg/kg,换算成成人有效剂量是100mg/50kg左右，EA303还可以与药学上可接受的载体结合制成临床可接受的剂型，用于治疗肠管平滑肌痉挛和止泻。图1为EA303对家兔离体小肠平滑肌自主收缩活动的影响(r^4)图2为EA303对家兔离体降结肠平滑肌自主收缩活动的影响(11=4)图3为EA303对致痉剂收縮的家兔离体小肠舒张作用的量效曲线一BaC12+ACh+KC1图4为EA303对致痉剂收缩的家兔离体结肠舒张作用的量效曲线+BaC12"~ACh^^KC具体实施例方式实施例1:急性毒性实验灌胃给药实验小鼠100只，体重1822g，雌雄各半，随机分为5组。给药前禁食12小时，用5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)将EA303配成溶液，以等比剂量(剂量分别为480.0mg/kg、600.0mg/kg、750.0mg/kg、938.0mg/kg)分别给4组小鼠灌胃给药，第5组为溶剂对照组，用等容积的5%CMC-Na灌胃。给药后观察动物的中毒症状，连续观察4小时，常规词养一周，记录体重及一般状况，观察7天累计死亡率，用Bliss法计算半数致死量(LD5。)及95%可信限。结果给药后2小时高剂量组有小鼠死亡，主要集中在3小时到12小时。中毒反应主要表现为受试小鼠呼吸困难，眼球突出，步态忙碌，四肢及耳充血，抽搐，痉挛。尸检除胃肠胀气外未发现其它主要脏器的明显病变。未死亡小鼠继续饲养一周，无一死亡，一般状态、摄食饮水、自发活动、背毛光泽等均无异常，而且体重增加。LDso值为594.8mg/kg,95%置信限为515.5~686.3mg/kg。Bliss法计算用表见表1。4表l.通过灌胃给药EA303的LDso值Doss(mg/kg)LgDNDeathnumberDeathrate(%)Chanceunite(Y)480.02.6812206304.4756600.02.77822010505扁0750.02.87512014705.5244938.02.97222018卯6.2816实施例2:离体实验1EA303对家兔离体小肠和结肠自发活动的作用待标本张力稳定后，向浴管中分别加入不同终浓度的EA303(10—5mol/L、3xl(T5mol/L、l(T4mol/L)0.1ml和溶剂水，观察并记录每种浓度下小肠和结肠收缩曲线的变化，记录给药前、给药后O、5、IO分钟时的张力、振幅的变化。实验数据以均值士标准差表示，并作配对t检验，判定差异的显著性。2对致痉剂引起的家兔离体小肠和结肠收缩的作用待标本张力稳定后，向洛管中加入致痉剂(氯化乙酰胆碱10—4mOl/L,氯化钡20%,氯化钾60mmol/L),获得最大收缩后，充分冲洗组织，加入同浓度的致痉剂再次诱导对照收缩，当与前一次收缩基本一致后，分别累计加入EA303(l(r6mol/L~l(T4mol/L),记录量效曲线。以致痉剂的最大收缩幅度为100%,绘制量效曲线，数据以平均值±标准误表示，并求出EC,由表2表7，图1~图4可知EA303能够降低家兔离体小肠和结肠的张力和振幅，舒张乙酰胆碱、氯化钡、氯化钾收缩的家兔离体小肠和结肠。表2.EA303对家兔离体小肠自发活动振幅(g)的影响(7士S)组别剂量给药前-给药后Cmol/L)Omin5min10minEA303(n=4)10-41.04±0.340.60±0.27*0.37±0.16**0.18土0.16"EA303(n=4)0.91±0.290.74±0.160.63士0.23"0.55士0.31"EA303(n=4)l(T50.90±0.430,77士0.150.67±0.210.62±0.31*p<0.05**p<0.01同给药前相比，Student'sMest表3.EA303对家兔离体小肠自发活动张力(g)的影响(7士S)组别(mol/L)给药前给药后0min5min10minEA303(")EA303(n=4)EA303(n=4)10-40.70±0.140.65±0.130.46±0.10"0.41±0.08**3xl(T50.77±0.170.66士0.260.65±0.190.64±0.1710—0.70±0.080.65±0.190.62±0.180.59±0.16p<0.05**p<0.01同给药前相比，Student'sf-test表4.EA303对家兔离体结肠自发活动振幅(g)的影响(；iS)组别给药前(mol/L)给药后Omin5minlOminEA303(n=4)EA303(n=4)EA303(n=4)-4103x10lO-50.59±0.110.35±0,10**0.24±0.06**0.14±0.03"0.92±0.410.67±0.250.65±0.36*0.40±0.17*0.57±0.130.43±0.180.66±0.310.59±0.26p<0.05**p<0.01同给药前相比，Student's,-test表5.EA303对家兔离体结肠自发活动张力(g)的影响(7土S)组别给药前(mol/L)给药后Omin5minlOminEA303(n=4)EA303(n=4)EA303(n=4)l(T1.06±0.260.85±0.100.64士0.17**0.48±0.20**3xl0-51.50±0.331.36±0.221.22±0.32*1.06土0.30"1.23±0.471.25±0.361.12±0.360.99±0.31p<0.05**p<0.01同给药前相比，Student'sMest表6.EA303对致痉剂引起小肠平滑肌痉挛的舒张作用的EC^值(；iS.E.M)致痉剂-logEC50(mol/L)ACh(n=6).10逸286KCl(n=6;>5.16±0.15BaCl2(n=6)5.20±0.15表7.EA303对致痉剂引起结肠平滑肌痉挛的舒张作用的EC^。值(7iS.E.M)致痉剂-logEC50(mol/L)ACh(n=6)5.26±0.24KCl(n=6)5.08±0.04BaCl2(n=6)4.98±0.07实施例3:整体实验1对蓖麻油、硫酸镁、液体石蜡所致腹泻的作用取体重1822g健康的雄性小鼠50只，随机分为5组，每组IO只，标记后称重，各组均为单次灌胃给药，第一组生理盐水0.2ml/10g灌胃作为阴性对照；第二组盐酸洛哌丁胺2.2mg/kg灌胃作为阳性对照；第三、四、五组分别灌胃给予EA30359.48mg/kg、29.74mg/Kg、14.87mg/kg，给药容量均为0.2ml/10g,l小时后，各组分别灌胃蓖麻油(硫酸镁、液体石蜡)0.2ml/10g。给药后将每只小鼠放在垫有直径约15cm滤纸的鼠笼,每隔lh换一次垫纸，实验前不禁食水,实验过程中禁食水。以正常鼠便为O分，软便为0.5分，稀便或水样便为1.0分，计算小鼠腹泻指数，连续观察4h，统计数据。2EA303对正常小鼠小肠推进的影响取体重1822g健康雄性小鼠50只，随机分为5组，每组10只，实验前禁食不禁水24h,标记后称重。第一组生理盐水0.2ml/10g灌胃作为阴性对照；第二组盐酸洛哌丁胺2.2mg/kg灌胃作为阳性对照；第三、四、五组分别灌胃给予EA30359.48mg/kg、29.74mg/Kg、14.87mg/kg,给药容量均为0.2ml/10g，30分钟后，各组分别灌胃5%活性炭和10%阿拉伯胶的混合水溶液0.2ml/只，再过30分钟后，小鼠脱颈椎处死,打开腹腔，分离肠系膜，剪取幽门至回盲部肠管，将小肠平铺于坡璃板上，测量肠管长度为小肠总长度，从幽门至活性炭前沿的长度为炭粉峰的移动距离，按照下式计算炭粉推进百分数，统计数据。炭粉移动百分率=(炭粉移动距离/小肠总长度)xlOO%。3EA303对正常小鼠大肠推进的影响取体重18~22g健康雄性小鼠50只，随机分为5组，每组10只，实验前禁食不禁水24h,标记后称重，第一组生理盐水0.2ml/10g灌胃作为阴性对照；第二组盐酸洛哌丁胺2.2mg/kg灌胃作为阳性对照；第三、四、五组分别灌胃给予EA30359.48mg/kg、29.74mg/Kg、14.87mg/kg,给药容量均为0.2ml/10g,30分钟后，各组分别灌胃5%活性炭和10%阿拉伯胶的混合水溶液0.2ml/只，并将小鼠分别单个置于铺有12.5x23.0cm的白色滤纸的塑料鼠笼内，观察并记录小鼠第一次排出黑便的时间，统计数据。由表(表8表12)，可知EA303灌胃给药可明显抑制蓖麻油、硫酸镁、液体石蜡所致的小鼠腹泻，还可明显抑制正常小鼠的小肠推进和大肠推进。表8.EA303对蓖麻油致腹泻小鼠腹泻指数的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>***PO.OOl,**P<0.01,*PO.05与模型组比较表11.EA303对正常小鼠小肠推进的抑制作用组别剂量(mg/kg)推进率(°/。)NS盐酸洛哌丁胺组EA303组EA303组EA303组***P<0.001，**PO.01,*P<0.05与NS比较表12.EA303对正常小鼠大肠肠推进的抑制作用组别剂量(mg/kg)第一次排黑便时间(min)NS盐酸洛哌丁胺组EA303组EA303组EA303组***PO.001,**P<0.01，*PO.05与NS比较以上实验结果说明EA303能够降低家兔离体小肠和结肠自发活动的张力和振幅，舒张乙酰胆碱、氯化钡、氯化钾收缩的家兔离体小肠和结肠。EA303灌胃给药可明显抑制蓖麻油、硫酸镁、液体石蜡所致的小鼠腹泻，还可明显抑制正常小鼠的小肠推进和大肠推进。因此，EA303可以用于制备治疗肠管平滑肌痉挛的解痉剂及止泻剂。—78.41士15.912.2026.06±4.27***59.4858.53±14.12*29.7473.58±7.6614.8775.15±13.11一78.10±15.982.20167.50±8.85***59.48116.40±17.69**29.74114.40±45.76"14.87101.50±50.02*权利要求1、雌酚酮类衍生物EA303在制备治疗肠管平滑肌痉挛性疾病及腹泻药物中的用途。2、根据权利要求l所述的用途，其特征在于所述的肠管平滑肌痉挛性疾病包括各种原因引起的胃肠痉挛性绞痛，肠易激综合症，溃疡性结肠炎；所述的腹泻包括高渗性腹泻、吸收不良性腹泻、分泌性腹泻、渗出性腹泻、运动性腹泻。3、根据权利要求l所述的用途，其特征在于所述的雌酚酮类衍生物EA303可以与药学上可接受的载体结合制成临床可接受的剂型，全文摘要本发明涉及医药
技术领域：
，是雌酚酮类衍生物EA303在制备肠管平滑肌解痉剂及止泻剂中的用途。在动物离体实验中，EA303能够降低家兔离体小肠和结肠自发活动的张力和振幅，舒张乙酰胆碱、氯化钡、氯化钾收缩的家兔离体小肠、结肠。在整体实验中，EA303灌胃给药可明显抑制蓖麻油、硫酸镁、液体石蜡所致的小鼠腹泻，还可明显抑制正常小鼠的小肠推进和大肠推进。因此，可以用于制备治疗肠管平滑肌痉挛的解痉剂及止泻剂。雌酚酮类衍生物EA303还可以与药学上可接受的载体结合制成临床可接受的剂型，用于治疗肠管平滑肌痉挛和止泻。文档编号A61K31/568GK101480400SQ20091001021公开日2009年7月15日申请日期2009年1月21日优先权日2009年1月21日发明者付守廷,周谦谦,岚朱,陈国良申请人:沈阳药科大学