一种地红霉素的药物组合物及其医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种地红霉素的药物组合物及其医药用途，本发明提供的地红霉素的药物组合物中含有地红霉素和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，地红霉素、化合物(Ⅰ)单独作用时，对大鼠便秘具有治疗作用；地红霉素和化合物(Ⅰ)联合作用时，对大鼠便秘的治疗效果进一步提高，可开发成治疗便秘的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
-种地红霉素的药物组合物及其医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，设及地红霉素的新用途，具体设及一种地红霉素的药 物组合物及其医药用途。
【背景技术】
[0002] 地红霉素为大环内醋类抗生素，为红霉胺的前体药物，其作用机理是通过与敏感 微生物的50S核糖体亚基结合，从而抑制细菌蛋白质合成。地红霉素部分在肝脏中代谢。大 环内醋类抗生素都通过细胞色素 P450微粒体酶系统产生去甲基化作用。
[0003] 迄今为止，尚未见地红霉素及其药物组合物与治疗便秘的相关性报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种地红霉素的药物组合物，该药物组合物中含有地红霉 素和一种天然产物，地红霉素和该天然产物可W协同治疗便秘。
[0005] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0006] -种具有下述结构式的化合物(I)，
[0007]
[000引一种地红霉素的药物组合物，包括地红霉素、如权利要求1所述的化合物（I)和药 学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。
[0009] 进一步地，药学上可W接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0010] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0011] 上述化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：（a)将川射干粉碎，用75~85%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃 取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤(a)中正下醇萃取物 用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗脱10个柱体积，收集70% 洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶 分离，依次用体积比为60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d) 步骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、4:1和2:1的二氯甲烧-甲醇 梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积 百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~15个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得 到化合物(I)。
[0012] 进一步地，化合物(I)的制备方法中，所述大孔树脂为DlOl型大孔吸附树脂。
[0013] 上述化合物(I)在制备治疗便秘的药物中的应用。
[0014] 上述地红霉素的药物组合物在制备治疗便秘的药物中的应用。
[001引本发明的优点：
[0016] 本发明提供的地红霉素的药物组合物中含有地红霉素和一种结构新颖的天然产 物，地红霉素、化合物（I)单独作用时，对大鼠便秘具有治疗作用;地红霉素和化合物（I)联 合作用时，对大鼠便秘的治疗效果进一步提高，可开发成治疗便秘的药物。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0018] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0019] 试剂来源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0020] 分离方法：（a)将川射干(化g)粉碎，用80%乙醇热回流提取（1化X3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水饱和的正下醇 (化X3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤(a)中 正下醇萃取物用DlOl型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗脱10 个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中70%乙醇洗脱 浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为60:1(10个柱体积）、30:1(8个柱体积）、15:1(10个 柱体积)和5:1(8个柱体积)的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤k)中组分4用 正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1 (10个柱体积）、4:1 (8个柱体积)和2:1 (6个柱体 积)的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~15个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物(IKHPLC归一化纯度大于98% )。
[0021] 结构确证:HR-ESI-MS显示[M+H]+为m/z 309.1289,结合核磁特征可得分子式为 Ci6出0〇6，不饱和度为8。核磁共振氨谱数据Sh(卵m，CDCl3，500MHz): H-I (4.03，S)，H-3(3.31， s)，H-5(2.58，s)，H-7(2.73，dd，J=12.9,3.6Hz)，H-8a(1.72，m)，H-8e(1.81，m)，H-9a (1.56，m)，H-9e(1.63，m)，H-13C.76，d，J = 3.3Hz)，H-13(6.29，d，J = 3.3Hz)，H-14(1.02， 8)，护15(1.47,3)，12-016(3.77,3);核磁共振碳谱数据扣(口口111，〔0013，1251化）：78.4(邸，1- C)，203.4(C，2-C)，62.3(CH，3-C)，59.1(C，4-C)，58.7(CH，5-C)，208.6(C，6-C)，51.7(CH，7- C)，20.3(CH2,8-C)，33.5(CH2,9-C)，34.3(C，10-C)，144.6(C，11-C)，167.3(C，12-C)，124.9 (C出，13-C)，19.2 (C出，14-C)，21.6 (C出，15-C)，52.7 (C出，12-OMe)。"C-NMR、DEPT和HSQC谱 中显示有16个碳信号，包括=个甲基(一个连氧碳），=个亚甲基(一个締控碳），四个次甲基 (两个连氧碳），W及六个季碳(一个締控碳，=个幾基碳和一个连氧季碳）。W上功能结构再 结合不饱和数表明该化合物为S环结构。Ih-醒R谱结合HSQC谱显示S个甲基质子信号Sh 1.02(3山3)、1.47(3山3)与3.77(3山3)，一对端締控质子信号如6.29(1山(1^ = 3.3化）与 5.76(1山(1，1 = 3.3化），两个连氧次甲基质子信号如4.03(1山3)、3.31(1山3)。醒財普数据如 3.77(3H，s)与Sc 52.7可知该化合物中存在甲氧基，歷BC谱中甲氧基质子信号与C-12的相 关信号表明了甲氧基连接在C-12位。根据NMR谱数据Sh 3.31 (1H，S)与Sc 62.3、59.1可知该 化合物中存在个环氧结构。通过Ih-Ih COSY谱中H-7/H-8/H-9相关信号，W及HMB幻普中显示 的H-I与C-2、C-3和C-ll，H-3与C-1、C-2、C-巧PC-5，H-5与C-6和C-10，H-7与C-6、C-8和C-11， H-13与C-7、C-11和C-12，H-14与C-IO相关信号，可W构建该化合物的连接方式，并且上述波 谱数据表明该化合物为按叶烧型倍半祗。该化合物中的C-I、C-3、C-4、C-5、C-7和C-IO为手 性碳，通过N犯SY试验与H-H偶合常数确认了相对构型。N犯SY谱中H-1 /H-90、H-1 /H-14、H-3/ H-14、H-3/H-15、H-5/H-7、H-7/H-13、H-80/H-13、H-80/H-14 W 及H-14/H-15相关信号表该化 合物〇1、(：-3、(：-4、(：-5、(：-7和(：-10构型为11?、31?、45、55、75和101?。综合氨谱、碳谱、歷8村普和 NOESY谱，W及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一 步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。
[0022] 该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0023]
[0024] 实施例2:药理作用
[0025] 本实施例使用盐酸吗啡制备大鼠便秘模型，探讨药物对便秘大鼠模型血清及结肠 组织中丙二醒(MDA)、谷脫甘肤(G甜)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)水平的影响。
[0026] 1、材料与方法
[0027] 1.1 动物
[002引7周龄SD大鼠60只，SPF级，雌雄各半，购自北京实验动物中屯、。饲养条件:雌雄分开 饲养，每笼6只，室溫(20 ± 2 rC，相对湿度(60 ± 10) %。所有大鼠自由进食进水。
[00巧]1.2试剂与样品
[0030] 地红霉素购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。 ^)、500、104、6細试剂盒均购自上海荣盛生物制品研究所，盐酸吗啡购自东北制药有限公 司，粉末活性炭购自天津药业有限公司。
[0031] 1.3大鼠分组及模型制备
[0032] 大鼠随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、地红霉素组 (80mg ? kg-i)、化合物（I)组(80mg ? kg-i)、地红霉素与化合物（I)组合物组【40mg ? kg-i地红 霉素+40mg ? kg-i化合物（I)】。适应性喂养7d后，除正常组每天皮下注射3.0mg/kg蒸馈水外， 其余组每天皮下注射盐酸吗啡3. Omg/kg，连续注射40d，1次/d，制作大鼠便秘模型。造模成 功后，正常组、模型组蒸馈水lOmL/kg灌胃，地红霉素组、化合物（I)组、地红霉素与化合物 (I)组合物组按上述剂量灌胃给药。
[0033] 1.4血清 ^、]\?^、500、65巧]^平检测
[0034] 大鼠灌胃4周，禁食不禁水12h，乙酸麻醉，毛细玻璃管从眼底静脉丛采血，分离血 清，4 °C保存。根据试剂盒说明书方法，对大鼠血清中NO、MDA、SOD、G甜水平进行测定。
[0035] 1.5结肠组织備、]\?^、500、68时^平检测
[0036] 处死大鼠后，解剖分离出大肠，生理盐水冲洗干净，称取结肠组织0.3g，W生理盐 水研磨成10%的匀浆液。离屯、后提取上清液，-20°C保存。根据试剂盒说明书中的方法对大 鼠结肠组织匀浆液中N0、MDA、S0D、G甜水平进行测定。
[0037] 1.6统计学方法
[0038] 实验数据用均数±标准差(x±s)表示，应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差 分析和t检验，WP<0.05为差异有统计学意义。
[0039] 2、实验结果
[0040] 2.1对便秘模型大鼠血清^、]\?^、500、68巧]^平的影响
[0041 ]与正常组相比，模型组大鼠血清中MKMDA水平均上升，S0D、G細水平均下降（P< 0.05)，表明大鼠便秘模型造模成功。与模型组相比，地红霉素组和化合物（I)组N0、MDA水平 降低，SOD、G甜水平升高(P<0.05)，地红霉素与化合物（I)组合物组NO、MDA水平显著降低(P <0.01)，500、6甜水平显著升高化<0.01)。结果见表1。
[0042] 表1各组大鼠血清NO、MDA、SOD、GSH7JC平比较(皿01 /L)
[0043]
[0044] ~~2.2对便秘模型大鼠结肠组织^、104、500、65巧长平的影响 ' '
[0045] 与正常组相比，模型组血清中N0、MDA水平上升，S0D、G甜水平下降（P<0.05)。与模 型组相比，地红霉素组和化合物（I)组MKMDA水平降低，S0D、G細水平升高(P<0.05)，地红 霉素与化合物（I)组合物组N0、MDA水平显著降低，S0D、G甜水平显著升高(P<0.01)。结果见 表2。
[0046] 表2对便秘模型大鼠结肠组织^、104、500、68巧长平的影响(皿〇1/1) 「nrvi7l
[004引便秘是临床上W排便次数减少、排便困难、粪便过硬等为主要表现的一种常见慢 性消化道症状。由于硬粪的长期滞留和刺激，结肠黏膜常有不同程度的炎性改变，从而引发 一系列的氧自由基反应和脂质过氧化反应;便秘引起的炎症反应会产生大量的氧自由基， 从而导致细胞膜不饱和脂肪酸脂质过氧化程度的加重。
[0049] NO是一种由血管内皮细胞释放的新型信号分子，有强烈扩张血管的作用，从而广 泛参与机体生理病理机能的调节。过高的NO水平会使肠管平滑肌松弛，大肠传导减慢，从而 引起肠道运动的异常，引起便秘。NO在生成时产生了大量的氧自由基，运些自由基使脂质氧 化，并影响线粒体电子传递功能，造成组织细胞损伤。调节NO在体内的浓度从而恢复大肠生 理机能和传导功能，对肛肠疾病的治疗具有重要的临床意义。NO在体内可分解为径自由基 和NO2^自由基。运两种自由基具有很强的氧化性，可加剧S0D、G甜的分子结构损伤，促使其合 成和再生减少，显著减弱了S0D、G甜等抗氧化酶清除自由基的能力，从而对机体产生更大的 细胞毒性。
[0050] S0D、G細能有效地清除细胞代谢过程中产生的氧自由基，终止自由基连锁反应。 SOD活性随着机体的老化而降低，故测定该酶活性可作为检测机体抗氧化能力和衰老的一 个定量指标。机体内另一类具有清除氧自由基抗衰老作用的酶系是GSH，它对防止机体内氧 自由基引起脂质过氧化反应特别重要。S0D、GSH等酶系在机体内发挥协同作用，具有减轻和 阻断脂质过氧化反应、保护机体免受各类氧自由基的侵害、延缓衰老等作用，是评价细胞受 损与否的重要指标。所W，测定S0D、G甜等酶系是衡量药物抗氧化作用的重要方法之一。本 实验便秘模型组大鼠血清与结肠组织中N0、MDA水平高于正常组，S0D、G甜水平低于正常组， 表明过氧化反应是便秘产生的重要机制之一。
[0051] 结果表明，地红霉素、化合物（I)单独作用时，对大鼠便秘具有治疗作用;地红霉素 和化合物(I)联合作用时，对大鼠便秘的治疗效果进一步提高，可开发成治疗便秘的药物。
[0052] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可W对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物α)，2. -种地红霉素的药物组合物，其特征在于:包括地红霉素、如权利要求1所述的化合 物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的地红霉素的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的载体 包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体 或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的地红霉素的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片剂、胶 囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、 栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将川 射干粉碎，用75~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗 脱10个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇 洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、4:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~15个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。7. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗便秘的药物中的应用。8. 权利要求2~4任一所述的地红霉素的药物组合物在制备治疗便秘的药物中的应用。
【文档编号】A61K31/7048GK105924412SQ201610492873
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年6月24日
【发明人】丁俣汀
【申请人】丁俣汀