氢氯噻嗪的药物组合物及其在生物医药中的应用
【专利摘要】本发明公开了氢氯噻嗪的药物组合物及其在生物医药中的应用，本发明提供的氢氯噻嗪的药物组合物中含有氢氯噻嗪和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，氢氯噻嗪、化合物(Ⅰ)单独作用时，能提高肺巨噬细胞吞噬的功能和AMФ内酶活力，对肺免疫功能具有改善作用；氢氯噻嗪和化合物(Ⅰ)联合作用时，对肺免疫功能的改善效果进一步提高，可以开发成改善肺免疫功能的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
氢氯噻嗪的药物组合物及其在生物医药中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及氢氯噻嗪的新用途，具体涉及氢氯噻嗪的药物组 合物及其在生物医药中的应用。
【背景技术】
[0002] 氢氯噻嗪为利尿药、抗高血压药。主要适用于心原性水肿、肝原性水肿和肾性水 肿:如肾病综合征、急性肾小球肾炎、慢性肾功能衰竭以及肾上腺皮质激素与雌激素过多引 起的水肿;高血压;尿崩症。长期应用时宜适当补充钾盐。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种氢氯噻嗪的药物组合物，该药物组合物中含有氢氯噻 嗪和一种结构新颖的天然产物，氢氯噻嗪和该天然产物可协同改善肺免疫功能。
[0004] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0005] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0007] -种氢氯噻嗪的药物组合物，包括氢氯噻嗪、如权利要求1所述的化合物（I)和药 学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0008] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0009] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0010] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将桑白皮粉碎，用65~85%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇萃取物 用大孔树脂除杂，先用6%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗 脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分 离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步 骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百 分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化 合物(I)。
[0011] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用75%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0012] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0013]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制备改善肺免疫功能的药物中的应用。
[0015] 上述氢氯噻嗪的药物组合物在制备改善肺免疫功能的药物中的应用。
[0016] 本发明的优点：
[0017] 本发明提供的氢氯噻嗪的药物组合物中含有氢氯噻嗪和一种结构新颖的天然产 物，氢氯噻嗪和该天然产物单独作用时，对肺免疫功能具有改善作用；二者联合作用时，对 肺免疫功能的改善效果进一步提高，可以开发成改善肺免疫功能的药物。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。
[0019] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0020]分离方法：（a)将桑白皮(3kg)粉碎，用75%乙醇热回流提取(20LX 3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水饱和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用6%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个 柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓 缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1 (8个柱体积）、25:1 (8个柱体积）、15:1 (8个柱体 积)和5:1(10个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正 相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1(8个柱体积）、5:1(10个柱体积)和2:1(5个柱体 积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物(I)(纯度大于98% )。
[0021] 结构确证:册431-]\^显示[]\?^]+为111/2 439.1442，结合核磁特征可得分子式为 C22H24〇8,不饱和度为11。核磁共振氢谱数据 SH(ppm，DMS0-d6,400MHz):H-2(4.01，m)，H-2 (4.13，m)，H-6(5.29，d，J=9.1)，H-7(3.23，m)，H-8(5.31，m)，H-9(1.22，m)，H-9(2.30，dd，J = 13.0,4.5)，H-13(6.07，d，J = 2.9)，H-13(5.69，d，J = 2.9)，H-14(1.36，s)，H-15(1.92， s)，H-18(5.41，d，J = 6.2)，H-19(6.01，br，s)，H-19(6.42，br，s)，H-20(1.38，d，J = 6.7)，H- 22 (1 · 96，s);核磁共振碳谱数据δ。(ppm，DMS〇-d6，1 OOMHz): 7210 · 5 (C，1 -C)，51 · 3 (CH2，2-C)， 196.1(C，3-C)，130.2(C，4-C)，152.1(C，5-C)，68.8(CH，6-C)，47.7(CH，7-C)，70.4(CH，8-C)，43.5(CH2,9-C)，42.9(C，10-C)，135.8(C，11-C)，168.3(C，12-C)，121.2(CH2，13-C)，20.7 (CH 3，14-C)，10.6(CH3，15-C)，164.8(C，16-C)，139.2(C，17-C)，64.7(CH，18-C)，126.0(CH2， 19-〇，18.7(〇1 3,20-〇，169.6((：，21-〇,21.3(〇13,22-〇。11?光谱表明该化合物含有双键 (1643cm-〇 和酯基（1782 和 1734cm-4 功能团。1H-NMR 谱显示三个甲基[SH1.36(3H，s，Me-14)， 1.92(3!1，8，]\^-15)和1.38(3!1，(1，了 = 6.7取，]\^-20)]，一个乙酰甲基[3!11.96(3!1，8，]\^-22)]，两个烯属亚甲基质子信号[5册.07(1!1，(1，1 = 2.9他，!1-13)，5.69(1!1，(1，1 = 2.9他，!1-13)，6.01(1!1，1^，8，!1-19)和6.42(1!1，1^，8，!1-19)]，三个含氧次甲基质子信号[5!15.29(1!1， 111，!1-6)，5.31(1!1，111，!1-8)和5.41(1!1，(1，了 = 6.2!^，!1-18)]。13(：-匪1?谱显示22个碳信号，包括 四个甲基，四个亚甲基(两个烯烃碳），四个次甲基(三个含氧碳）以及十个季碳(两个酮羰基 碳，三个酯羰基碳和四个烯烃碳KHMBC谱中H 2-2和Me-15与C-3，Me-15、Me-14和H2-9与C-5的 相关性表明C-3为酮羰基，C-4和C-5形成双键。氢谱显示两个特征性的单质子双峰信号[δ 此.07(1!1，(1，了 = 2.9抱，!1-13)和5.69(1!1，(1，了 = 2.9抱，!1-13)]，且都与!1-7[3[13.23(1!1，111)]相 连，证实了 α-亚甲基-γ-内酯结构的存在。此外，Η-6和Η-7的耦合常数(J6,7 = 9.1Hz)以及Η-7和H-13的烯丙基耦合常数(J7,13 = 2.9Hz)表明内酯为反式连接。HMBC谱中，H-8与C-16的相 关性表明C-8位连有一个酯基。HMBC谱中H-18与C-21，Me-22与C-21的相关性表明C-18位连 有一个乙酰氧基。通过HMBC谱中H 2-19与C-17的相关性可知C-17和C-19之间存在双键。 N0ESY谱中H-8与H-6,以及H-6与Me-14的相关性表明H-6、H-8和Me-14为β构型。综合氢谱、碳 谱、HMBC谱和N0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立 体构型进一步通过E⑶试验确定，理论值与实验值基本一致。
[0022]该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0024] 实施例2:药理作用
[0025]本实施例对化合物（I )、氢氯噻嗪、氢氯噻嗪与化合物（I)组合物改善肺部免疫功 能进行研究。
[0026] 1、材料与方法
[0027] 1.1试剂
[0028] 氢氯噻嗪购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。戊 巴比妥钠；RPMI1640(With L_glutamine;Without sodium bicarbonate)，GIBC0BRL公司； 无支原体新生小牛血清(New Born Calf Serum)，Hyclone公司；Hepes，Sigma公司；LDH试剂 盒，ACP试剂盒，南京建成生物工程研究所;氢溴鸟氨酸;印度墨汁。
[0029] 1.2实验仪器
[0030] 752紫外分光光度计，上海第三分析仪器厂；隔水式电热恒温培养箱，重庆四达实 验仪器厂医疗仪器厂;恒温震荡水槽，上海实验仪器总厂;MA200电子秤;TDL-5离心机，上海 安亭科学仪器厂;生物显微镜，重庆光学仪器厂;JY92-II型超声波细胞粉碎机，宁波新芝科 器研究所。
[0031] 1.3实验动物及饲养
[0032]肺巨噬细胞实验采用Wistar 10月龄雌性二级大鼠，由中国医学科学院动物中心 繁育场提供。将大鼠随机分为对照组、化合物（I)组（200mg/kg. bw)、氢氯噻嗪组（200mg/ kg · bw)和氢氯噻嗪与化合物（I)组合物组（100mg/kg · bw+100mg/kg · bw)。
[0033]按照上述剂量连续灌喂给药28d后进行各项指标的测定。
[0034] 1.4大鼠肺巨噬细胞(ΑΜΦ )吞噬功能的测定
[0035]末次给药第2d，对所有大鼠进行支气管肺泡原位灌洗(BAL)，将灌洗液进行离心洗 涤。后用生理盐水将细胞沉淀定容于0.7ml，分别吸取0.3ml细胞悬液及0.3ml 1 %鸡红细胞 悬液在试管中混匀（做平行），然后吸取混合液滴于玻片上，铺片37°C培养48min，用生理盐 水冲洗，甲醇固定，Giemsa-Wright-PB染色，油镜下观察吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数及被吞 噬的鸡红细胞数，计算吞噬率及吞噬指数：
[0036] 吞噬率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的观察巨噬细胞总数X 100%
[0037] 吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的观察巨噬细胞总数X 100%
[0038] 1.5大鼠肺巨噬细胞酶活性的测定
[0039] 获得肺巨噬细胞灌洗液后，37°C培养2h，将肺巨噬细胞反复冻融，制成破碎的ΑΜΦ 悬液。测定酸性磷酸酶(ACPase)及精氨酸酶(Arginase)的酶活性。
[0040] 2、实验结果
[0041 ] 2.1对ΑΜΦ吞噬功能的影响
[0042]由表1可见，经口给予化合物（I )、氢氯噻嗪、氢氯噻嗪与化合物（I)组合物28d后， 与对照组比较，肺巨噬细胞吞噬率和吞噬指数均显著提高(P〈〇.01或P〈〇.05)。结果提示:化 合物(I)、氢氯噻嗪均具有提高肺巨噬细胞吞噬的功能，且两者合用效果更强。
[0043] 实验结果见表1。
[0044] 表1对大鼠肺巨噬细胞吞噬功能的影响
[0046] 2.2对崖〇内酶活力的影响
[0047] 由表2可见，经口给予化合物（I)、氢氯噻嗪、氢氯噻嗪与化合物（I)组合物28d后， 与对照组比较，肺巨噬细胞内酸性磷酸酶(ACPase)活性和精氨酸酶(Arginase)活性均显著 提高(P〈〇.01或P〈〇.05)。化合物（I)、氢氯噻嗪能够提高肺巨噬细胞内ACPase及Arginase活 性，且两者合用效果更显著。实验结果见表2。
[0048] 表2对大鼠ΑΜΦ内酶活力的影响
[0051] 上述结果表明，氢氯噻嗪、化合物（I)单独作用时，能提高肺巨噬细胞吞噬的功能 和AMΦ内酶活力，对肺免疫功能具有改善作用;氢氯噻嗪和化合物（I)联合作用时，对肺免 疫功能的改善效果进一步提高，可以开发成改善肺免疫功能的药物。
[0052] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物α)，2. -种氢氯噻嗪的药物组合物，其特征在于:包括氢氯噻嗪、如权利要求1所述的化合 物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的氢氯噻嗪的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的载体 包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体 或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的氢氯噻嗪的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片剂、胶 囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、 栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将桑 白皮粉碎，用65~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用6%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗脱 8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70 %乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、5:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用75%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为AB-8型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备改善肺免疫功能的药物中的应用。10.权利要求2~4任一所述的氢氯噻嗪的药物组合物在制备改善肺免疫功能的药物中 的应用。
【文档编号】A61K31/365GK105949155SQ201610403493
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年6月7日
【发明人】黄芳
【申请人】黄芳