塞来昔布的药物组合物及其治疗胆石症的医药用图
【专利摘要】本发明公开了塞来昔布的药物组合物及其治疗胆石症的医药用途，本发明提供的塞来昔布的药物组合物中含有塞来昔布和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，塞来昔布、化合物(Ⅰ)单独作用时，对胆石症具有治疗作用；塞来昔布和化合物(Ⅰ)联合作用时，对胆石症的治疗效果显著提高，可开发成治疗胆石症的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
塞来昔布的药物组合物及其治疗胆石症的医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，具体设及塞来昔布的药物组合物及其在生物医药中的 应用。
【背景技术】
[0002] 塞来昔布临床用于缓解骨关节炎的症状和体征、缓解成人类风湿关节炎的症状和 体征、治疗成人急性疼痛。
[0003] 塞来昔布是非酱体类抗炎药，动物模型中观察到其有抗炎、镇痛和退热的作用。塞 来昔布的作用机理是通过抑制环氧化酶-2(C0X-2)来抑制前列腺素生成。且在人体治疗浓 度下，本品对同工酶-环氧化酶-I(COX-I)没有抑制作用。
[0004] 在动物结肠肿瘤模型中塞来昔布减缓了肿瘤的发生和进展。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种塞来昔布的药物组合物，该药物组合物中含有塞来昔 布和一种结构新颖的天然产物，塞来昔布和该天然产物可W协同治疗胆石症。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0007] -种具有下述结构式的化合物(I)，
[OOOJ
[0009] -种塞来昔布的药物组合物，包括塞来昔布、如权利要求1所述的化合物（I)和药 学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。
[0010] 进一步地，药学上可W接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[001。进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0012]上述化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：（a)将慕枝核粉碎，用85~95%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃 取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤(a)中正下醇取物用 大孔树脂除杂，先用35%乙醇洗脱8个柱体积，再用90%乙醇洗脱12个柱体积，收集90%洗 脱液，减压浓缩得90%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中90%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分 离，依次用体积比为120:1、60:1、30:1和15:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d) 步骤(C)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为40:1、30:1和10:1的二氯甲烧-甲 醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体 积百分浓度为85%的甲醇水溶液等度洗脱，收集14~18个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩 得到化合物(I)。
[0013] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用90%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0014] 进一步地，化合物(I)的制备方法中，所述大孔树脂为DlOl型大孔吸附树脂。
[0015] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烧代替乙酸乙醋进行萃 取，得到二氯甲烧萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制备治疗胆石症的药物中的应用。
[0017] 上述塞来昔布的药物组合物在制备治疗胆石症的药物中的应用。
[001引本发明的优点：
[0019] 本发明提供的塞来昔布的药物组合物中含有塞来昔布和一种结构新颖的天然产 物，塞来昔布、化合物（I)单独作用时，对胆石症具有治疗作用；塞来昔布和化合物（I)联合 作用时，对胆石症的治疗效果显著提高，可开发成治疗胆石症的药物。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。
[0021] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0022] 分离方法：（a)将慕枝核(2kg)粉碎，用90%乙醇热回流提取（1化X3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水饱和的正下醇 (化X3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙醋萃取物用DlOl型大孔树脂除杂，先用35%乙醇洗脱8个柱体积，再用90%乙醇洗脱 12个柱体积，收集90%洗脱液，减压浓缩得90%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中90%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为120:1(11个柱体积）、60:1(9个柱体积）、30:1(9 个柱体积)和15:1 (8个柱体积)的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(C)中组分 3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为40:1(6个柱体积）、30:1(8个柱体积)和10:1(6个 柱体积)的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合 的反相硅胶分离，用体积百分浓度为85 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集14~18个柱体积洗 脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(IKHPLC归一化纯度大于98% )。
[0023] 结构确证:HR-ESI-MS显示[M+H]+为m/z 219.1772,结合核磁特征可得分子式为 〇15出2〇,不饱和度为 5。核磁共振氨谱数据 SH(ppm，CDCl3,500MHz):H-ie(1.74，m)，H-2a (2.15，m)，H-20(1.85，m)，H-3a(2.37，m)，H-30(1.98，m)，H-5(2.77，dd，J=11.4,7.8Hz)，H- 6a(2.33，m)，H-6e(1.88，m)，H-8a(1.56，m)，H-8e(1.51，m)，H-9a(1.72，m)，H-9e(1.76，m)， H-12(1.76，s)，H-13a(4.82，s)，H-l：3b(4.93，s)，H-14(1.46，s)，H-15a(4.71，s)，H-l加 (4.85,s);核磁共振碳谱数据Sc(ppm，CDCl3,125MHz) :51.7(CH，1-C)，26.9(C此，2-C) ,29.8 (CH2,3-C)，153.5(C，4-C)，37.2(CH，5-C)，31.8(Ol2,6-C)，89.6(C，7-C)，35.8(ai2,8-C)， 39.2(CH2,9-C)，86.7(C，10-C)，146.2(C，ll-C)，25.6(Ol3，12-C)，112.2(ai2，13-C)，26.3 (邸3，14-〇，114.1(邸2，15-〇。化合物的氨谱中显示该化合物有两个单峰甲基信号（如1.46 和1.76)，两组末端双键质子信号（Sh4.82和4.93; 4.71和4.85)。该化合物的碳谱显示15个 碳信号，其中有两组双键碳信号，W及两个连氧碳信号。综合高分辨质谱W及核磁数据，该 化合物可能为一个倍半祗类化合物。查阅文献可W看出该化合物和已知化合物7a ,IOa- epoxyguaiane-4a,ll-diol具有相似的结构。比较两者的核磁W及高分辨数据发现，新化合 物中相较于7日，10日-邱〇xyguaiane-4a, 11-diol最大的区别是多出了两个不饱和度即两个 双键。在新化合物的HMBC谱中，H-15/C-3，H-15/C-4，H-3/C-4的相关性说明C-15和C-4位之 间为双键。此外，H-12/C-7，H-12/C-13，H-13/C-7，H-13/C-11之间的相关性说明该化合物中 存在的另一个末端双键位于C-Il和C-13位。因此，该化合物仍然是一个C-10X-7位形成氧 桥的愈创木烧型倍半祗。ROESY谱中出-14/H-l，H-5/H-lW及H-5/出-12之间的相关性可W推 断该化合物的H-I，H-5，出-14 W及C-7位上的基团均为0构型。综合氨谱、碳谱、丽BC谱和 ROESY谱，W及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一 步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。
[0024] 该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0025]
[00%]实施例2:药理作用
[0027]本实施例使用盐酸林可霉素皮下注射制备胆石症豚鼠模型，观察药物降低胆石症 豚鼠胆囊黏膜TGR5阳性表达率，减少胆石形成等方面的抗胆石症作用。
[002引1、材料与方法
[0029] 1.1 动物
[0030] 豚鼠，雌性，350~450g，由卫生部兰州生物制品研究所实验动物中屯、提供。
[0031] 1.2试剂与样品
[0032] 塞来昔布购自中国药品生物制品检定所。化合物(I)自制，制备方法见实施例1。
[0033] 1.3 仪器
[0034] 一抗RalDbit Polyelonal to GPCR TGR5(ab72608)(美国Abeam)和二抗，购自 Abcam和北京中杉金桥生物技术有限公司；Olympus化72图像采集分析仪（日本Olympus公司 生产）。
[0035] 1.4豚鼠分组及模型制备
[0036] 豚鼠随机分为5组，每组12只，分别为正常对照组、模型对照组、塞来昔布组 (80mg ? kg-i)、化合物（I)组(80mg ? kg-i)、塞来昔布与化合物（I)组合物组【40mg ? kg-i塞来 昔布+40mg ? kg-i化合物（I)】。除正常对照组外，其他组均给予盐酸林可霉素60mg/kg，l次/ d，皮下注射，连续注射4d，停药2d，再注射3d进行造模。正常对照组给W同等剂量生理盐水 皮下注射。造模成功后按照上述剂量灌胃给药，1次/d,共8天;模型对照组和正常对照组给 W同样剂量的生理盐水灌胃。
[0037] 1.5胆囊容积测定实验
[0038] 实验第12天，末次给药前，禁食2地。末次给药化后，将豚鼠 W戊己比妥钢40mg/kg 腹腔注射麻醉，打开腹腔，结扎胆囊管切除胆囊，用空针抽出胆汁，测量胆囊容积[胆囊容积 (yl/g)=胆汁量(yl)/豚鼠体质量(g)]。
[0039] 1.6免疫组化观察阳性细胞实验
[0040] 采用Envision法染色。TGR5经巧樣酸高溫修复，具体操作步骤按说明书。取染色良 好的豚鼠各组切片在光学显微镜下观察并照相，显微镜下每一张切片随机选取10个视野， W胆囊黏膜上皮细胞顶膜侧出现栋色或栋褐色的均质或颗粒样物质为阳性细胞判断标准。 [OOW 1.7统计学方法
[0042] 实验数据用均数±标准差(x±s)表示，应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差 分析和t检验，WP<0.05为差异有统计学意义。
[0043] 2、实验结果
[0044] 2.1对胆石症模型豚鼠胆囊容积的影响
[0045] 与正常对照组比，模型对照组豚鼠胆囊容积明显增加(P<0.01)，表明造模效果较 好;与模型对照组比，塞来昔布与化合物（I)组合物组豚鼠胆囊容积显著减小(P<〇.01);与 模型对照组比，塞来昔布组、化合物（I)组豚鼠胆囊容积减小(P<〇.05)。结果见表1。
[0046] 2.2对胆石症模型豚鼠胆囊黏膜TGR5阳性表达的影响
[0047] 与正常对照组比较，模型对照组豚鼠的胆囊黏膜TGR5阳性表达明显增强（P< 0.01)。与模型对照组比较，塞来昔布与化合物（I)组合物组豚鼠的胆囊黏膜TGR5阳性表达 明显减弱(P<〇.01);与模型对照组比较，塞来昔布组、化合物（I)组豚鼠的胆囊黏膜TGR5阳 性表达减弱(P<〇.〇5)。结果见表1。
[004引表1对胆石症模型豚鼠胆囊容积和胆囊黏膜TGR5阳性表达的影响 「nrviol
[0050] TGRS(Gpbarl)是一种类似于视紫质的跨膜G蛋白偶联胆汁酸受体，为7次跨膜脂蛋 白，受体胞外结构域(N-末端)识别胞外信号分子并与之结合，胞内结构域(C-末端)与G蛋白 偶联。通过与G蛋白偶联，调节相关酶活性，在细胞内产生第二信使，从而将胞外信号跨膜传 递到胞内。TGRSmRNA的蛋白表达在许多不同的人类组织和晒齿类动物组织中发现，包括鼠 胆管上皮细胞和胆囊上皮细胞。研究发现TGR5定位于人体胆囊黏膜上皮细胞顶膜侧和胆管 上皮细胞原纤毛上，而且GS患者胆囊TGR5的表达明显高于对照组。
[0051] TGR5介导尖端钢依赖性胆盐运输体(ASBT)促进胞外胆汁酸逆转运，使胞内的胆汁 酸浓度升高，反馈地抑制了肝细胞中胆汁酸合成关键酶-胆固醇7a-径化酶（cytochrome P450，famil}f7，subfamilyA，polypeptidel;切p7al)，使胆汁酸合成减少而胆固醇增多，排 入胆道形成胆固醇过饱和致石胆汁。
[0052] 塞来昔布、化合物（I)单独作用时，对胆石症具有治疗作用;塞来昔布和化合物（I) 联合作用时，对胆石症的治疗效果显著提高，可开发成治疗胆石症的药物。
[0053] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可W对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物α)，2. -种塞来昔布的药物组合物，其特征在于:包括塞来昔布、如权利要求1所述的化合 物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的塞来昔布的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的载体 包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体 或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的塞来昔布的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片剂、胶 囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、 栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将荔 枝核粉碎，用85~95%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用35%乙醇洗脱8个柱体积，再用90%乙醇洗脱 12个柱体积，收集90%洗脱液，减压浓缩得90%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中90%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为120:1、60:1、30:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为40:1、30:1 和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合 的反相硅胶分离，用体积百分浓度为85 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集14~18个柱体积洗 脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用90%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗胆石症的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的塞来昔布的药物组合物在制备治疗胆石症的药物中的应 用。
【文档编号】A61P1/16GK105924413SQ201610338448
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年5月20日
【发明人】秦勇, 王 琦, 刘琪, 焦婷婷, 周自桂, 徐成, 陈建芳
【申请人】江苏神龙药业有限公司