一种醋氯芬酸的药物组合物及其医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种醋氯芬酸的药物组合物及其医药用途，本发明提供的醋氯芬酸的药物组合物中含有醋氯芬酸和一种从大黄的干燥根中分离得到的结构新颖的天然产物化合物（Ⅰ），醋氯芬酸和该天然产物化合物（Ⅰ）单独作用时，对慢性肾炎的治疗效果较弱；二者联合作用时，对慢性肾炎的治疗效果显著提高，可以开发成治疗慢性肾炎的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种醋氯芬酸的药物组合物及其医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及醋氯芬酸的新用途，具体涉及一种醋氯芬酸的药 物组合物及其医药用途。
【背景技术】
[0002] 醋氯芬酸是一种新型、强效解热、镇痛、抗关节炎药物，临床上适用于治疗风湿性 关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、脊椎炎等，也适用于各种疾病引起的疼痛和发热。
[0003] 本品为一新合成的口服有效的非类固醇类，苯乙酸类抗炎、解热、镇痛药物。在结 构上，与双氯芬酸、阿氯芬酸和芬氯芬酸有关。在临床实践中，本品的药理作用与其他非类 固醇类药物(NSAIDs)相比，它在急、慢性炎症实验模型中以具有明显广泛的抗炎作用、强力 的镇痛和解热以及胃毒性作用为特征。
[0004] 抗炎作用。本品对大鼠由注射爱兰苔胶引起的水肿和脓肿的发展显示高效的抑制 作用。它也减轻小鼠由腹腔注射醋酸引起的血管通透性增加以及大鼠由爱兰苔胶引起的胸 膜炎的水肿和细胞成分的炎症反应。本品对急性炎症的抗炎作用的强度与高效NSAIDs吲哚 甲新和双氯芬酸相似。而比萘普生、保泰松作用强。口服本品预防和治疗也使犬关节内注射 尿酸钠引起的病理性步态产生剂量依赖性得到改善。本品的抗炎作用也在棉花小球肉芽肿 实验中得以证实。在这种实验中发现类固醇比NSAIDs更有效，对鼠慢性佐剂关节炎，本品有 与吲哚甲新、双氯芬酸相似的、显著的抗关节炎作用。在临床上已证实对慢性关节炎的有效 性。
[0005] 镇痛作用。对许多由化学性、机械性或关节炎的刺激引起的动物疼痛模型，本品的 效能类似于双氯芬酸或吲哚甲新，而强于萘普生和保泰松。尤其本品对注入硝酸银引起的 鼠爪关节炎和犬关节注射尿酸钠所致的骨膜炎疼痛显示强力的抗伤害作用。在临床上，本 品的镇痛作用已被不同起因的疼痛病人证实。本品与其它NSAIDs-样具有突出的周围性镇 痛机制。可能是由于抑制内源性疼痛介质的形成。
[0006] 解热作用。本品可明显地减轻大鼠由注射布鲁尔氏酵母引起的体温升高。即使口 服最低剂量〇.25mg/kg，它的解热作用也大于它的抗炎作用8倍。本品的高效解热作用，提示 它除了抑制体内前列腺素的合成或释放外，还可能由于对下丘脑的抑制。
[0007] 慢性肾炎是由多种原因引起的原发于肾小球的一组免疫炎症性疾病。近年来，由 于免疫荧光技术及电子显微镜的应用，现代医学对慢性肾炎的免疫发病机理、病理形态及 功能改变都进行了系统而深入的研究，但在治疗方面，尚缺乏特效药物。
[0008]迄今为止，尚未见醋氯芬酸的药物组合物与慢性肾炎的相关性报道。
【发明内容】
[0009]本发明的目的在于提供一种醋氯芬酸的药物组合物，该药物组合物中含有醋氯芬 酸和一种从草本中分离得到的结构新颖的天然产物，醋氯芬酸和该天然产物可以协同治疗 慢性肾炎。
[0010] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的： 一种具有下述结构式的化合物（I)，
一种醋氯芬酸的药物组合物，包括醋氯芬酸、如上所述的化合物（I)和药学上可以接受 的载体。
[0011] 如上所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将大黄的干燥根粉碎， 用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和 的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正 丁醇取物用大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集 70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶 分离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d) 步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积 百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化 合物(I)。
[0012] 进一步地，步骤(a)中，用75%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0013]进一步地，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0014] 如上所述的化合物(I)在制备治疗慢性肾炎的药物中的应用。
[0015] 如上所述的醋氯芬酸的药物组合物在制备治疗慢性肾炎的药物中的应用。
[0016] 本发明的优点： 本发明提供的醋氯芬酸的药物组合物中含有醋氯芬酸和一种从草本中分离得到的结 构新颖的天然产物，醋氯芬酸和该天然产物单独作用时，对慢性肾炎的治疗效果较弱;二者 联合作用时，对慢性肾炎的治疗效果显著提高，可以开发成治疗慢性肾炎的药物。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容。
[0018] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试 剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0019]分离方法：（a)将大黄的干燥根(2kg)粉碎，用75%乙醇热回流提取（20LX 3次），合 并提取液，浓缩至无醇味(4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯(4L X 3次)和水饱和的正 丁醇（4LX 3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a )中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗 脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱 浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1 (8个柱体积）、25:1 (8个柱体积）、15:1 (8个柱 体积)和5:1(10个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用 正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1 (8个柱体积）、5:1 (10个柱体积)和2:1 (5个柱体 积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分;（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗 脱液减压浓缩得到化合物（I) (525mg，HPLC归一化纯度大于98%)。
[0020] 结构确证:黄色固体;HR-ESI-MS显示[M+H]+为m/z 541.3119，结合核磁特征可得 分子式为C32H44O7,不饱和度为11。核磁共振氢谱数据SH(ppm，DMS0-^，600MHz) :H-l(5.97， d,/=12.7Hz),H-2(5.82,d,/=12.7Hz),H-4(4.59,dt,/=12.2,6.5Hz),H-5(2.18,m),H-6 (4·43，?，/=4·4Ηζ)，Η-7(1·43，πι)，Η-7(1·48，πι)，Η-8(2·27，(Μ，/=13·1，4·9Ηζ)，Η-11(1·38， m),H-ll(2.21,dd,/=11.0,6.8Hz),H-12(1.42,m),H-12(1.71,m),H-15(1.29,dd,/=14.2, 4.3Hz),H-15(2.33,dd,/=14.2,7.9Hz),H-16(5.33,td,/=7.2,4.3Hz),H-16b(2.06,s),H-17(2.44,m),H-18(1.16,s),H-19(0.98,d,/=4.0Hz),H-19(1.84,d,/=4.0Hz),H-20(2.51, m),H-21(0.86,d,/=6.9Hz),H-24aa(6.02,s),H-24ab(5.90,s),H-25(2.92,m),H-26(1.05, d J=6.8Hz)，H-27( 1.10，(1，/=6· 8Hz)，H-28( 1.59，(1，/=6· 6Hz)，H-30( 1.01，s);核磁共振碳 谱数据 Sc(ppm，DMS〇-c/i；，150MHz) :151.5(CH，卜 C)，118.9(CH，2-C)，168.2(C，3-C)，79.3(CH， 4-C)，47.7(CH，5-C)，66.2(CH，6-C)，32.8(CH2,7-C)，40.3(CH，8-C)，30.0(C，9-C)，35.2(C， 10-C)，28.5(CH2，11-C)，32.6(CH2，12-C)，45.8(C，13-C)，47.3(C，14-C)，47.5(CH2，15-C)， 77.1(CH，16-C)，170.2(C，16a-C)，22.7(CH 3，16b-C)，50.5(CH，17-C)，19.2(CH3，18-C)，36.3 (CH2，19-C)，32.5(CH，20-C)，12.6(CH 3,21-C)，203.7(C，22-C)，195.2(C，23-C)，154.3(C， 24-C)，120.3(CH2,24a-C)，30.7(CH，25-C)，22.1(CH3,26-C)，21.9(CH 3,27-C)，18.5(CH3， 28-〇,20.7(〇13,30-〇。11?谱图中的3455 〇11-1、1715〇11-1与1694 〇11-1吸收带表明该化合物 结构中存在-〇H、羰基与共辄羰基;UV谱图中的最大吸收207nm与245nm说明结构中存在共辄 双键。氢谱核磁数据表明该结构中不饱和度是由2个C-C双键结构，4个羰基结构以及5个环 状骨架组成。知1.84与δ Η 〇. 98的偶合常数为4.0Hz，是存在环丙烷结构的证据。碳谱核磁数 据与DEPT谱数据表明：该化合物结构中含有32个碳，其中有七个甲基(S C22.7、19.2、12.6、 22.1、21.9、18.5与2〇.7)，六个亚甲基0。32.8、28.5、32.6、47.5、36.3与12〇.3)，十个次甲 基（3。151.5、118.9、79.3、47.7、66.2、40.3、77.1、50.5、32.5与30.7)，九个叔碳（3。168.2、 3〇.〇、35.2、45.8、47.3、154.3、17〇.2、2〇3.7与195.2)，两个酮基0。2〇3.7与195.2)，两个 酯羰基（δ^168·2与170.2)，三个连氧叔碳（6。79.3、66.2与77.1)，四个烯碳（6。151.5与 118.9;154.3与12〇.3)。!!\?(：谱中!1-60[ 14.43)与(：-8(5。40.3)和(：-100。35.2)的相关性，以 及COSY谱中Η-6和Η-5(δ Η2.18)的相关性表明C-6(Sc66.2)位连有一个羟基。通过HMBC解析可 知δ[170.2的羰基碳与δ Η2.06的H-16b甲基组成乙酰基，同时δΗ5.33的H-16与δ[170.2羰基碳 也存在相关性，表明了乙酰基连接的位置;知203.7的碳信号与δ Η2.51的Η-20存在相关性，说 明C-22为羰基。通过N0ESY谱数据解析δΗ 4.59的Η-4、δΗ 1.59的Η-28与δΗ2.18的Η-5及δ η4.43的Η-6关系可以说明28-甲基相对立体构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和N0ESY谱，以及 文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下，立体构型进一步通过ECD试验确 定，理论值与实验值基本一致。
[0021]实施例2:对大鼠慢性肾炎模型的治疗作用 实验采用的是的方法改良的阳离子化牛血清白蛋白（诱发的慢性肾小球肾炎模型，该 模型是目前研究治疗药物时首选的动物模型之一。阳性对照药物选取的是雷公藤多苷片。 检测实验大鼠的尿蛋白、血清肌酐、尿素氮等生化指标的变化，肾脏组织制作染色病理切 片，在光镜下观察其病理变化。
[0022] -、实验材料 (一）、实验动物 SD大鼠90只（健康清洁级），雌雄各半，体重标准:200 ± 15g。购自黑龙江中医药大学实 验动物中心，实验动物合格证号：SCXK黑2014-004。实验室具备排气通风设施，自然光照明 暗周期，笼具天消毒一次，垫料与饲料均购自佳木斯大学动物实验中心。
[0023](二）、实验仪器与试剂 1、实验仪器 大鼠金属代谢笼（黑龙江中医药大学动物实验中心），TGL-16G-C型高速台式冷冻离心 机(上海安婷科学仪器厂），电子天平（长沙市八方科学仪器厂），ALC-201.4型分析天平(德 国赛多利斯集团），XH_C型旋祸混合器(金坛市医疗仪器厂），M0DULY0D型真空冷冻干燥仪， 电热恒温水浴箱(天津市泰斯特仪器有限公司），KQ5200型超声清洗器(昆山市超声仪器有 限公司），NS-500A型半自动生化分析仪（四川美生科技有限公司），透析袋(美国公司），大鼠 灌胃针(北京金泉水科技有限公司），TSJ-1A型自动组织脱水机(天津天利航空机电有限公 司），KD-2508型轮转切片机(浙江金华市科迪仪器设备有限公司），KPJ-1A型烤片机(天津天 利航空机电有限公司），BMJ-1型生物组织包埋机(天津航空机电公司），CX31RTSF型OLYMPUS 倒置显微镜（日本OLYMPUS株式会社）。
[0024] 2、实验试剂 无水乙二胺(上海阿拉丁试剂有限公司），牛血清白蛋白（上海阿拉丁试剂有限公司）， 醋酸钠(天津市凯通化学试剂有限公司），弗氏不完全佐剂(上海阿拉丁试剂有限公司），盐 酸(上海阿拉丁试剂有限公司），醋酸（天津市北联精细化学品开发有限公司），甘油三醋干 粉试剂盒(北京市北北康泰临床试剂有限公司），血清肌酐试剂盒(南京建成生物工程研究 所），血清尿素氮脲酶法试剂盒(南京建成生物工程研究所），总胆固醇试剂盒(北京市北北 康泰临床试剂有限公司），低密度脂蛋白胆固醇试剂盒(北京康泰临床试剂有限公司）。 [0025] 3、实验药物 雷公藤多苷片（l〇mg/片)购自黄石飞云制药有限公司。醋氯芬酸购自上海极威生物科 技有限公司。化合物(I)自制，制备方法见实施例1。
[0026] 二、实验方法 (一）、制备阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA) 按照Border的方法改良，将67ml无水乙二胺液溶解于500ml双蒸水，继续缓慢添加 350ml盐酸(6mol/l)，调整上述溶液pH至4.75。搅拌均匀，待其冷却至25°C后，加入25ml天然 牛血清白蛋白（N-BSA)0.2g/ml水溶液，搅拌后再加1.8g炭化二亚胺盐酸盐，维持25°C，持续 搅拌2h，保持pH值4.75，最后加入4mo 1/1的醋酸缓冲液30ml，终止反应，即得等电点提高的 C-BSA溶液。将C-BSA溶液置于透析袋中，用4°C双蒸水透析72h，4h换水1次。将所得溶液冷冻 干燥48h，即可获得BSA干粉，将其保存于-30°C冰箱中备用。
[0027](二）、制备不完全弗氏佐剂(FIA) 将羊毛脂l〇g和液体石蜡40ml置于研钵中，在108°C下消毒15分钟，然后在紫外灯下照 射2h。随后在超净工作台上把羊毛脂和液体石錯按质量体积比1:3的比例混合，均匀研磨， 即可完成不完全弗氏佐剂的制备。将成品储存于4°C冰箱中备用。
[0028](三）、实验动物分组及模型复制 1、动物的适应性飼养及初次分组 SD大鼠90只（健康清洁级），雌雄各半，体重200土 15g。适应性喂养1周后，将其置于代谢 笼中收集尿液，两次测定尿蛋白均为阴性。在其体表使用苦味酸法进行编号标记后进行随 机分组，随机选取16只大鼠作为正常组，剩余大鼠则用于下一步造模。
[0029] 2、模型复制 (1)预免疫 实验第1周，将C-BSA与FIA按1:1混合，混匀成乳白色悬液。使用2. Omg上述悬液对造模 大鼠颈部、背部、腹股沟及腋下进行皮下注射。正常组则注射等量生理盐水。
[0030] (2)免疫 在实验第2周至第4周，将C-BSA与FIA按1:1混合，混匀成乳白色悬液。使用2.Omg上述悬 液对造模大鼠颈部、背部、腹股沟及腋下进行皮下注射。然后将混匀乳白色的悬液对造模大 鼠进行尾静脉注射。首次对大鼠进行尾静脉注射量为〇.5mg/只，每隔1日进行尾静脉注射1 次。每隔次注射时给药剂量逐渐递增〇. 5mg，3周内将尾静脉注射量增加至2.5mg，正常组注 射等量生理盐水。
[0031] 3、动物二次分组 尾静脉注射C-BSA结束后（即实验第4周后），检测实验大鼠24小时尿蛋白，结果显示造 模大鼠的尿蛋白大量增加，与正常组相比较有显著性差异(P<〇.05)，确认造模成功。造模 结束后，正常组大鼠存活15只，造模大鼠存活60只。将60只复制C-BSA模型成功且存活的大 鼠随机分为5组，即醋氯芬酸治疗组，化合物（I)治疗组、醋氯芬酸与化合物（I)组合物治疗 组，慢性肾炎模型对照组(模型组），雷公藤多苷治疗组（阳性对照组），每组12只，经统计学 分析P>0.05,即说明这组在尿蛋白的轻重程度上，无显著性差异，有可比性，具备统计学意 义。醋氯芬酸、化合物(I)及其组合物先用少量DMS0超声溶解，再用蒸馏水溶解稀释灌胃。
[0032](四）给药方案设定 正常组:蒸馏水2ml，每日1次晚间8点灌胃。
[0033]模型组:蒸馏水2ml，每日1次晚间8点灌胃。
[0034]阳性对照组:药液2ml(相当于10g/kg/d)，每日1次晚间8点灌胃。
[0035]醋氯芬酸治疗组:药液2ml(相当于5g/kg/d)，每日1次晚间8点灌胃。
[0036] 化合物（I)治疗组:药液2ml(相当于5g/kg/d)，每日1次晚间8点灌胃。
[0037] 醋氯芬酸与化合物（I)组合物治疗组:药液2ml【相当于2.5g/kg/d醋氯芬酸+2.5g/ kg/d化合物(I)】，每日1次晚间8点灌胃。
[0038]以上各组均连续给药4周，每周测试1次24h尿蛋白，测量之前各组均禁食不禁水1 次，持续时间为12h，其余时间自由取食、饮水。
[0039](五）、生化指标检测及病理切片制作 1、尿标本检测 在造模前，实验第4、5、6、8周，将大鼠置于代谢笼中（釆样前禁食不禁水121!，收集大鼠 的24小时尿液。使用双缩脲测量大鼠的尿蛋白含量，然后使用半自动生化分析仪，在波长 540nm下，测定各管吸光度值，并换算成实际尿蛋白含量并记录。
[0040] 2、血清样本检测 采集血样前禁食12h。实验第4周，对实验大鼠麻醉后进行眼内龇取血0.5ml，在37 °C水 浴中静置2h后，以3000rpm离心10分钟，弃去上清液，收集血清，使用试剂盒法测定各指标数 值并记录;实验第8周末，将实验大鼠麻醉后，剖开腹腔，找到腹主动脉后取血8ml，釆取血样 在37°C水浴中静置2h后，以3000rpm离心10分钟，弃去上清液，收集血清。使用试剂盒测定各 指标数值并记录。
[0041 ] 3、肾组织病理切片制作 (1)大鼠肾脏的初步处理 实验大鼠麻醉后用断椎法处死，将其固定于鼠台上，于大鼠背部旁下1.5cm处作纵切 口，暴露出肾脏，将双肾取出，分离血管，脂肪及表面包膜，用醋酸缓冲液(PBS)液冲洗，然后 置于10%福尔马林固定24h。
[0042] (2)组织脱水及包埋 将肾脏标本从10%福尔马林液中取出，使用蒸懷水反复冲洗5min。然后使用自动脱水 机脱水:在浓度为70%乙醇液中放置6h，转入浓度为80%的乙醇液中放置6h，转入浓度为95% 的乙醇液中放置12h，转入浓度100%的乙醇液中放置4h，转入二甲苯溶液1中放置1 Omin，然 后转入二甲苯溶液2中放置lOmin，继续转入60°C石錯1号中放置15min，转入60°C石錯2号中 放置15min。上述步骤完成后，立即取出脱水标本，放入组织包埋机的浸蜡盒中，对标本进行 石蜡包埋，标号，然后按组别标记。
[0043] (3)制作病理切片及HE染色 使用切片机将已包錯标本制成厚度约为3μπι的薄片，在55°C展片机中展片，将薄片均匀 贴于载玻片上。然后将其放入烤箱中60°C下烤30min直至组织蜡完全融解，而后进行脱蜡处 理，使用蒸傭水反复清洗，随后在二甲苯1、2液中各浸泡lOmin，经不同浓度的乙醇液中（从 浓度为100%至70%)逐级脱水，而后在苏木素染液中放置lmin，自来水冲洗，1%HCL酒精分化， 于95%伊红酒精染液中放置lmin，然后进行脱水、透明，使用中性树胶封片。在光学显微镜下 观察肾组织病变程度、形态改变，并使用光学显微摄像系统照相。
[0044] (4)数据处理统计方法 全部实验数据采用SPSS 18.0统计软件进行处理，计量资料以（X 土 S)表示，组间比较采 用t检验及方差分析，计数资料使用卡方检验，P<0.05有统计学意义。
[0045]三、试验结果 1、 24h尿蛋白量的变化 与正常组比较，造模组尿蛋白明显升高，具有显著差异(P<〇.01)，提示造模成功。实验 第5周至第8周，除正常组外，各治疗组24小时尿蛋白含量随时间呈现降低趋势，模型组的下 降幅度很小，与模型组比较，各治疗组的尿蛋白呈现显著下降趋势(P<〇.01)。醋氯芬酸与 化合物（I)组合物治疗组与阳性对照组比较无显著差异(P>〇.05)，醋氯芬酸治疗组和化合 物（I)治疗组与阳性对照组比较有显著差异(P<〇.05)，说明：醋氯芬酸与化合物（I)组合物 能显著降低肾炎大鼠的尿蛋白含量，与阳性药效果接近;醋氯芬酸或化合物（I)单独作用 时，有一定治疗作用，但是效果明显不如醋氯芬酸与化合物(I)组合物及阳性药。
[0046] 结果见下表(实验大鼠24h尿蛋白结果，mg/24h)。
[0047]
2、 血清肌酐(Cr)的变化 实验第4周至第8周，正常组与模型组的Cr无明显变化，醋氯芬酸治疗组、化合物（I)治 疗组、醋氯芬酸与化合物（I)组合物治疗组及阳性对照组的Cr均下降，统计学上有显著差异 (P<0.01)，但是，醋氯芬酸治疗组、化合物（I)治疗组对Cr的下降作用不如醋氯芬酸与化合 物（I)组合物治疗组及阳性对照组。结果见下表(对大鼠 Cr水平的影响，μπι〇1/1)。
[0048] 3、血清尿素氮(BUN)的变化 实验第4周至第8周，正常组与模型组的BUN无明显变化，醋氯芬酸治疗组、化合物（I)治 疗组、醋氯芬酸与化合物（I)组合物治疗组及阳性对照组的BUN均下降，统计学上有显著差 异(P<0.01)，但醋氯芬酸治疗组、化合物(I)治疗组对BUN的下降作用不如醋氯芬酸与化合 物（I)组合物治疗组及阳性对照组。结果见下表(对大鼠 BUN水平影响，mmol/1)。
[0049] 4、肾组织病理形态学的观察 肉眼观察:正常组大鼠的肾脏外观呈深红色，表面光滑柔软，皮质、髓质界面清楚;模型 组大鼠的肾脏呈淡红色，皮质增厚，肿胀明显，部分大鼠的皮质髓质边界不清;治疗组大鼠 的肾脏大多数呈红色，有轻度肿胀，皮质略增厚，皮质、髓质界面清楚；阳性对照组大鼠的肾 脏大多数呈淡红色，少数呈红色;有轻度肿胀，皮质略增厚，皮质、髓质界面清楚。
[0050] 光镜下观察:正常组大鼠肾组织的肾小球细胞、肾小管结构及间质形态正常，结构 清晰，未见间质炎细胞浸润、水肿及纤维化，系膜细胞及基质无增殖;模型组大鼠肾组织见 肾小球肿胀，大多数肾小球毛细血管狭窄，体积增大明显，细胞数增多，系膜基质增生明显， 大量肾小管管腔扩张，肾间质出现纤维化，且有炎细胞浸润;各治疗组的肾小球内壁光滑， 间质增生明显减少，有少量炎细胞浸润。
[0051] 上述结果表明，醋氯芬酸和本发明提供的化合物（I)单独作用时，对慢性肾炎的治 疗效果较弱;醋氯芬酸和本发明提供的化合物(I)联合作用时，对慢性肾炎的治疗效果显著 提高，可以开发成治疗慢性肾炎的药物。
[0052] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种醋氯芬酸的药物组合物，其特征在于:包括醋氯芬酸、如权利要求1所述的化合 物(I)和药学上可以接受的载体。3. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将大 黄的干燥根粉碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙 酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (b)步骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱8 个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓 缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得 到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、5:1和2:1的 二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅 胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液 减压浓缩得到化合物(I)。4. 根据权利要求3所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中，用75%乙醇热 回流提取，合并提取液。5. 根据权利要求3所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为DlOl型 大孔吸附树脂。6. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗慢性肾炎的药物中的应用。7. 权利要求2所述的醋氯芬酸的药物组合物在制备治疗慢性肾炎的药物中的应用。
【文档编号】C07J73/00GK105884858SQ201610321332
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年5月16日
【发明人】徐珍
【申请人】苏州毕诺佳医药技术有限公司