本发明属于医用止血材料制备领域，具体是一种含银颗粒的多孔止血海绵的制备方法。
背景技术：
多年来，关于止血材料的研究越来越多，体内可吸收止血材料大都是用天然产物比如纤维蛋白胶、粉末状胶原蛋白、壳聚糖、透明质酸、明胶等制备而成，这类单一成分的止血材料虽然有一定的止血效果，但是，止血效果都不是特别理想。在实际发生创伤出血时，由于周围环境往往是比较复杂，容易发生伤口感染，因此，具有优秀止血效果且能防止伤口感染的止血材料对于伤口止血护理具有十分重要的意义。
壳聚糖是至今为止自然界中唯一带阳离子电荷的碱性多糖，其止血机理为带正电荷的壳聚糖与细胞表面带负电荷的氨基酸残基受体相互作用，促进血小板的聚集，激活凝血系统，交联红细胞形成血块，并且它有一定的抗菌作用；透明质酸钠具有良好的吸水性保水性，能显著提高材料的吸水能力，使得止血效果更好；抗坏血酸中含有大量的羟基，具有较好的还原性，可以将硝酸银中的银离子还原成银单质，以微小颗粒的方式存在。明胶是胶原蛋白的水解物，具有一定止血功能，同时明胶的憎水基可与还原出来的银单质进行物理吸附，亲水基在水中可以逐渐延展，增加了附着在明胶分子表面的银颗粒的位阻效应，减少银颗粒的团聚产生。而小直径的银颗粒具有很强的杀菌性能，不会对有害细菌产生耐药性，是持续有效的杀菌剂。
作为优秀的止血材料，仅仅选择合适的材料还不够，还需要将材料制备成具有特定孔结构，才能具有更好的吸水功能。常用的制孔方法有粒子溶出法、相分离法、冷冻干燥法、气体发泡法、烧结微球法等，但是如何选择合适的制孔方法，制备具有均匀孔径大小，高孔隙率，孔孔相通的孔结构，且具有很好的亲水性和一定强度的材料，仍然是一个技术难题。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一种制备简单，止血速度快，抗菌效果好，无毒，无刺激，孔径大小均匀，高孔隙率，高吸水率的含银颗粒的多孔止血海绵的制备方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种含银颗粒的多孔止血海绵的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，溶液的配制：
1)配制壳聚糖溶液，称取抗坏血酸加入到蒸馏水中，在40℃～50℃水浴条件下充分搅拌溶解，制得0.05mol/L～0.3mol/L的抗坏血酸溶液；称取壳聚糖加入到所述抗坏血酸溶液中，充分混合后，在40℃～50℃水浴条件下搅拌均匀，得到质量百分浓度为3％～6％的壳聚糖溶液，保存使用；
2)配制透明质酸钠溶液，称取透明质酸钠加入到蒸馏水中，在30℃～40℃水浴条件中充分溶解，制得质量百分浓度为0.2％～0.6％的透明质酸钠溶液，保存使用；
3)配制明胶溶液，称取明胶加入到蒸馏水中，在50℃～60℃水浴条件下充分搅拌溶解制得质量百分浓度为5％～15％的明胶溶液，保存使用；
4)配制硝酸银溶液，称取硝酸银加入到蒸馏水中，搅拌均匀，制得质量百分浓度为1‰～5‰的硝酸银溶液，保存使用；
步骤二，含银颗粒的多孔止血海绵的制备：
取所述壳聚糖溶液、透明质酸钠溶液和明胶溶液按照2∶2∶1的体积比在25℃～50℃水浴条件中充分搅拌混合，得到混合淡黄色凝胶液，而后取所述硝酸银溶液加入所述混合淡黄色凝胶液，在25℃～50℃水浴条件中充分搅拌30min～60min，得到混合浅褐色凝胶液，在所述混合浅褐色凝胶液中所述硝酸银溶液占质量百分比0.1‰～1‰；取所述混合浅褐色凝胶液，倒入模具中，预冻12h以上呈冰块状，再真空冷冻干燥48h～72h后得到含银颗粒的多孔止血海绵。
本发明的有益效果是：该方法以抗坏血酸、透明质酸、明胶，壳聚糖，硝酸银为主要原料。利用了抗坏血酸溶液溶解壳聚糖，并将硝酸银还原成银颗粒，采用冷冻及冷冻干燥技术进行材料成型。该材料具有多孔海绵状，不但具有很高的吸水倍率(高达100余倍)，而且吸水后会快速成凝胶状，达到快速止血效果；同时银颗粒能均匀分布在止血海绵中，止血海绵的多孔表面使其能够持续释放银颗粒，银颗粒具有强大的杀菌能力，并且无毒副作用，不会使有害细菌产生耐药性，从而使通过本方法获得的含银颗粒的多孔止血海绵材料具有快速止血和抑菌的作用；制备简单，止血速度快，抗菌效果好，无毒，无刺激，孔径大小均匀(孔径为100μm～200μm)，孔隙率高，吸水率高。
优选地，步骤一所述壳聚糖溶液、透明质酸钠溶液、明胶溶液和硝酸银溶液的保存温度环境均为30℃～40℃，确保所述壳聚糖溶液、透明质酸钠溶液、明胶溶液和硝酸银溶液的分子结构稳定性，利于含银颗粒的多孔止血海绵材料的制备。
优选地，步骤二中所述硝酸银溶液加入所述混合淡黄色凝胶液，在25℃～50℃水浴条件中搅拌时长30min～60min，确保所述硝酸银溶液加入所述混合淡黄色凝胶液搅拌充分。
优选地，步骤二所述混合浅褐色凝胶液的预冻温度环境为-20℃～-80℃，确保所述混合浅褐色凝胶液被冻结呈冰块状，利于得到含银颗粒的多孔止血海绵材料。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1，一种含银颗粒的多孔止血海绵的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，溶液的配制：
1)配制壳聚糖溶液，称取抗坏血酸加入到蒸馏水中，在40℃水浴条件下充分搅拌溶解，制得0.05mol/L的抗坏血酸溶液；称取壳聚糖加入到抗坏血酸溶液中，充分混合后，在40℃水浴条件下搅拌均匀，得到质量百分浓度为3％的壳聚糖溶液，30℃下保存使用；
2)配制透明质酸钠溶液，称取透明质酸钠加入到蒸馏水中，在30℃水浴条件中充分溶解，制得质量百分浓度为0.2％的透明质酸钠溶液，30℃下保存使用；
3)配制明胶溶液，称取明胶加入到蒸馏水中，在50℃水浴条件下充分搅拌溶解制得质量百分浓度为5％的明胶溶液，30℃下保存使用；
4)配制硝酸银溶液，称取硝酸银加入到蒸馏水中，搅拌均匀，制得质量百分浓度为1‰的硝酸银溶液，30℃下保存使用；
步骤二，含银颗粒的多孔止血海绵的制备：
取壳聚糖溶液、透明质酸钠溶液和明胶溶液按照2∶2∶1的体积比在25℃水浴条件中充分搅拌混合，得到混合淡黄色凝胶液，而后取硝酸银溶液加入混合淡黄色凝胶液，在25℃水浴条件中充分搅拌60min，得到混合浅褐色凝胶液，在混合浅褐色凝胶液中硝酸银溶液占质量百分比0.1‰；取混合浅褐色凝胶液，倒入模具中，-80℃下预冻12h以上呈冰块状，再真空冷冻干燥48h后得到含银颗粒的多孔止血海绵。
实施例2，一种含银颗粒的多孔止血海绵的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，溶液的配制：
1)配制壳聚糖溶液，称取抗坏血酸加入到蒸馏水中，在45℃水浴条件下充分搅拌溶解，制得0.15mol/L的抗坏血酸溶液；称取壳聚糖加入到抗坏血酸溶液中，充分混合后，在45℃水浴条件下搅拌均匀，得到质量百分浓度为4.5％的壳聚糖溶液，35℃下保存使用；
2)配制透明质酸钠溶液，称取透明质酸钠加入到蒸馏水中，在30℃～40℃水浴条件中充分溶解，制得质量百分浓度为0.4％的透明质酸钠溶液，35℃下保存使用；
3)配制明胶溶液，称取明胶加入到蒸馏水中，在55℃水浴条件下充分搅拌溶解，制得质量百分浓度为10％的明胶溶液，35℃下保存使用；
4)配制硝酸银溶液，称取硝酸银加入到蒸馏水中，搅拌均匀，制得质量百分浓度为3‰的硝酸银溶液，35℃下保存使用；
步骤二，含银颗粒的多孔止血海绵的制备：
取壳聚糖溶液、透明质酸钠溶液和明胶溶液按照2∶2∶1的体积比在30℃水浴条件中充分搅拌混合，得到混合淡黄色凝胶液，而后取硝酸银溶液加入混合淡黄色凝胶液，在40℃水浴条件中充分搅拌40min，得到混合浅褐色凝胶液，在混合浅褐色凝胶液中硝酸银溶液占质量百分比0.5‰；取混合浅褐色凝胶液，倒入模具中，-50℃下预冻12h以上呈冰块状，再真空冷冻干燥60h后得到含银颗粒的多孔止血海绵。
实施例3，一种含银颗粒的多孔止血海绵的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，溶液的配制：
1)配制壳聚糖溶液，称取抗坏血酸加入到蒸馏水中，在50℃水浴条件下充分搅拌溶解，制得0.3mol/L的抗坏血酸溶液；称取壳聚糖加入到抗坏血酸溶液中，充分混合后，在50℃水浴条件下搅拌均匀，得到质量百分浓度为6％的壳聚糖溶液，40℃下保存使用；
2)配制透明质酸钠溶液，称取透明质酸钠加入到蒸馏水中，在40℃水浴条件中充分溶解，制得质量百分浓度为0.6％的透明质酸钠溶液，40℃下保存使用；
3)配制明胶溶液，称取明胶加入到蒸馏水中，在60℃水浴条件下充分搅拌溶解，制得质量百分浓度为15％的明胶溶液，40℃下保存使用；
4)配制硝酸银溶液，称取硝酸银加入到蒸馏水中，搅拌均匀，制得质量百分浓度为5‰的硝酸银溶液，40℃下保存使用；
步骤二，含银颗粒的多孔止血海绵的制备：
取壳聚糖溶液、透明质酸钠溶液和明胶溶液按照2∶2∶1的体积比在50℃水浴条件中充分搅拌混合，得到混合淡黄色凝胶液，而后取硝酸银溶液加入混合淡黄色凝胶液，在50℃水浴条件中充分搅拌30min，得到混合浅褐色凝胶液，在混合浅褐色凝胶液中硝酸银溶液占质量百分比1‰；取混合浅褐色凝胶液，倒入模具中，-20℃下预冻12h以上呈冰块状，再真空冷冻干燥72h后得到含银颗粒的多孔止血海绵。
应用案例1：以实施例1制得的含银颗粒的多孔止血海绵进行兔子肝脏出血止血实验。
取健康成年新西兰白兔12只，雌雄不限，体重2.5kg左右，随机分为两组，每组6只，其中一组用于测试含银颗粒的多孔止血海绵的止血效果，另一组用做对照。动物术前2h禁饮食，速眠新(0.1ml/kg)肌注麻醉。背部固定，剃去腹部兔毛，腹部朝上，用75％的医用酒精对腹部消毒后，切开腹腔后小心的将肝脏的左内侧叶从腹腔内拉出，放在已经消毒纱布上。然后，在肝脏切开一个伤口，长约1厘米，深0.5厘米，让其自由出血10s后，轻轻擦去伤口上的血液，并将含银颗粒的多孔止血海绵按压在出血伤口上，50克的重量垂直加压在含银颗粒的多孔止血海绵上方，并开始计时，每隔30s轻轻揭开止血材料，观察是否继续流血，若伤口继续流血，则继续按压止血，则直到出血停止，记录止血时间。对照组用市售止血海绵(福康森牌)同样操作进行止血处理，止血完成后，每个材料都称重，计算失血量。每个样品重复实验6次，取其平均值。实验结果表明，含银颗粒的多孔止血海绵的平均止血时间是45s，市售止血海绵(福康森牌)的平均止血时间为105s，含银颗粒的多孔止血海绵的平均止血失血量为6.8g，市售止血海绵(福康森牌)的平均止血失血量为12.5g。故含银颗粒的多孔止血海绵的止血效果明显要好于市售止血海绵(福康森牌)
应用案例2：以实施例1制得的含银颗粒的多孔止血海绵进行兔耳动脉出血止血实验。
取健康成年新西兰白兔12只，雌雄不限，体重2.5kg左右，随机分为两组，每组6只，其中一组用于测试含银颗粒的多孔止血海绵的止血效果，另一组用做对照。实动物术前2h禁饮食，用速眠新(0.1ml/kg)肌注麻醉，然后固定四肢。剃掉兔子耳朵背面的兔毛，暴露耳动脉。用75％的医用酒精对耳朵背部消毒后，在距离耳尖顶端7cm将耳动脉切断，血液立刻不断地在伤口处涌出。在自由出血5s后，用灭菌纱布轻轻的擦去耳朵伤口上的浮血，并立刻将含银颗粒的多孔止血海绵按压在出血伤口上，并用200克的重物垂直加压，同时开始计时，每隔30s轻轻揭开止血材料，观察是否继续流血，若伤口继续流血，则继续按压止血，则直到出血停止，记录止血时间；对照组用市售止血海绵(福康森牌)同样操作进行止血处理。止血完成后，称重，计算失血量。每个样品重复实验6次，取其平均值。实验结果表明，含银颗粒的多孔止血海绵的平均止血时间是35s，市售止血海绵(福康森牌)的平均止血时间为98s；含银颗粒的多孔止血海绵的平均止血失血量为3.4g，市售止血海绵(福康森牌)的平均止血失血量为10.2g；含银颗粒的多孔止血海绵的止血效果明显要好于市售止血海绵(福康森牌)。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。