一种乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物的应用的制作方法

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物的应用。

背景技术：

非酒精性脂肪性肝病( NAFLD) 已成为许多地区慢性肝病的重要病因，其中以非酒精性脂肪性肝炎( NASH) 发病率最高。非酒精性脂肪性肝炎的特点是病人无嗜酒史，但组织学特征改变类似酒精性肝炎且肝大、血清转氨酶升高。严重者更可发展为肝纤维化和肝硬化，甚至肝癌。

研究表明，肠道菌群结构的失调可以导致宿主循环系统血浆中内毒素 (endotoxin) 增加，诱发持续低度炎症，阻断胰岛素的细胞内的信号传递系统，导致胰岛素抵抗。而胰岛素抵抗是产生脂肪肝，肥胖，代谢综合症的重要原因。例如，肝脏螺旋杆菌（Helicobacter Hepaticus，H. hepaticus）作为一种已知的肝脏致病菌，位于消化道下段，它在易感动物中可以引起慢性炎症和肿瘤的形成。例如，在小鼠模型中已经发现，H. hepaticus 可以引起慢性肝炎，炎症性肠病（inflammatory bowl diseases, IBD），结肠炎，结直肠癌。H. hepaticus 现在也在胆囊疾病的病人胆汁中检测到，而且也与肝癌有一定相关性。在一些免疫缺陷的小鼠，如 IL-10 基因敲除小鼠，重症联合免疫缺陷（Scid）小鼠，Rag 基因缺陷小鼠中可以检测到 H.hepaticus 的大量增生。表明宿主的免疫系统的缺乏对于感染 H. hepaticus 是一个先决条件。虽然 H. hepaticus 在代谢综合症中的作用还不知道，而同一属中的 H. pylori 与代谢综合症的关系已有报道。

此外，高脂高糖饮食诱导代谢综合征的产生很可能就是通过改变肠道内的菌群（dysbiosis），打破其平衡结构来实现的。通过动物模型也研究表明，高脂饮食可以改变肠道菌群生态结构。瘦型的模型动物比较肥胖模型动物而言，有更高丰度的拟杆菌 （Bacteroidetes）含量，而肥胖型小鼠肠道所含的厚壁菌门 (Firmicutes) 的丰度增加。宏基因组分析发现肥胖小鼠肠道菌中编码分解多糖的基因包括糖原水解酶的基因增加，导致肠道能量吸收的增加。另外，大量的临床研究也表明，肥胖病人肠道发生类似的变化，即拟杆菌门（Bacteroidetes）的丰度降低，而厚壁菌门 (Firmicutes) 的丰度增加。同时肥胖也 会引起肠道菌群多样性的降低。

肠道菌群的异常是通过什么机理导致代谢综合症发生的，一般认为肠道菌群的异常将对肠道的免疫系统造成过度的激活，产生持续而低度的炎症，而后者将抑制胰岛素的信号传导，产生胰岛素抵抗，进而产生高血糖。为了降低高血糖，肝脏将血糖转化为甘油三脂，而过度的甘油三脂，及其积累会产生脂变（fat degeneration）, 形成脂肪肝，即普通脂肪肝（simple steatosis）。如前所述，在第二次打击（second hit）例如肝脏病毒感染的条件下，普通脂肪肝将有可能进一步转化为非酒精性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis, NASH）。而后者的特点是持续的肝脏炎症，肝脏实质细胞（hepatocytes）的损伤，气球样脂肪变 (ballooning fat degeneration)。肝脏实质细胞的损伤将会产生多重代谢紊乱，例如肝脏分解胆固醇的能力降低，导致 LDL-C升高，HDL-C降低，从而造成心血管疾病 , 动脉粥样硬化 (Atherosclerosis), 溶血系统的紊乱，如脑血栓、中风。

大量研究表明，脂肪肝的发生，发展与胰岛素抵抗 (insulin resistance，IR) 和遗传易感性密切相关。而脂肪肝包括多种肝病，例如非酒精性单纯性脂肪肝 (non-alcoholic simple fatty liver，NASFL)、非酒精性脂肪性肝炎 (non-alcoholic steatohepatitis，NASH) 及其相关肝硬化（cirrhosis）和肝癌 （hepatocellular carcinoma)。据报道，在西方发达国家，NAFLD 已成为慢性肝病的最常见病因，普通成人患病率达 20 ～ 40%，其中 NASH 和肝硬化分别为10%以及3%。肥胖患者的单纯性脂肪肝患病率高达80%、NASH 患病率为 25%、肝硬化患病率为 4%。近年我国 NAFLD 的患病率增长迅速且有低龄化的发病趋势，上海、广州、香港等地区的 NAFLD 患病率约15%。

此外，肠道菌群紊乱 (dysbiosis)、以及小肠细菌的过度生长、肠道粘膜损伤，引发慢性炎症，导致肠道通透性改变从而破坏肠道生物完整性，大量肠源性内毒素进入门脉系统，促发炎症介质进一步释放， 在 NAFLD 转化为 NASH 的发生中起到重要的作用。

随着社会不断的发展，脂肪肝病的患病率较高，脂肪肝人群不断增加，目前市场上治疗脂肪肝的药物远远不能满足市场需求，因此，开发一种满足市场需求的脂肪肝药物是非常必要的。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物的应用。

本发明的目的是这样实现的，所述的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物在制备治疗脂肪肝药物中的应用，所述的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物具有以下结构：

其中，R为H或具有生物活性的化合物残基。

乙酰天麻素是本发明申请人在治疗眩晕领域的主打品种，在该领域拥有很高的市场份额，近几年，随着老品种二次开发的不断推进，本发明申请人发现了该化合物及其衍生物在其他疾病领域也有着不错的治疗效果，例如，乙酰天麻素及其衍生物对抗阿尔茨海默病。至今，尚无关于以乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物为活性成分，或含有乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物的药物用于通过恢复肠道微生态平衡来治疗非酒精性脂肪肝的研究。本发明提供了一种乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物的用途，为临床治疗非酒精性脂肪肝提供了新的选择。

本发明所述的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物类似于益生元，使肠道的微生物菌群生态达成平衡，从而限制了条件致病菌的生长，肠道细菌毒素的释放，从而缓减肝脏的压力。本发明通过实验验证了乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物可以用于调节肠道菌群（肠道菌群为拟杆菌属细菌，进一步为α－变形菌纲细菌），增加拟杆菌属细菌数量、抑制α －变形菌纲的丰度。肠道菌群的失调与非酒精性脂肪肝有密切相关性，因此，乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物的制备可以用于预防及治疗非酒精性脂肪肝。在非酒精性脂肪肝过程中，拟杆菌属细菌数量会降低，乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物可以上调拟杆菌属细菌数量。在非酒精性脂肪肝过程中，α－变形杆菌纲的丰度上升，乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物可以抑制α－变形杆菌纲的数量。

附图说明

图1为拟杆菌属相对定量结果示意图；

图2为α－变形菌纲相对定量结果示意图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

本发明所述的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物的应用为所述的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物在制备治疗脂肪肝药物中的应用，所述的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物具有以下结构：

其中，R为H或具有生物活性的化合物残基。

所述的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物的应用为所述的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用所述的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物具有以下结构：

其中，R为H或具有生物活性的化合物残基。

所述的R为、、、、、、NO₂或H。

本发明所述的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物的应用中的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物的药物制剂为所述的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物中加入药学上可接受的辅料制备成片剂、口服液、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、膏剂、滴丸剂、糖浆剂、散剂、冲剂和酊剂。

本发明提供了乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物的用途。该用途是本发明所示的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物用于制备治疗非酒精性脂肪肝药物的应用。本发明通过试验研究了乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物对非酒精性脂肪肝大鼠模型血脂CHO、TG值的影响，其中，接受KPC-3000157、KPC-3000159、KPC-3000161、KPC-3000162、KPC-3000165、KPC-3000170、KPC-3000172和KPC-3000100治疗的实验动物血脂CHO、TG值水平与模型组相比都有了明显的下降，与阳性药水飞蓟宾对照组相当，实验结果表明本发明所示乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物具有改善非酒精性脂肪肝症状的作用；本发明通过大鼠实验研究了如式I所示的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物对大鼠肠道拟杆菌属细菌和α－变形菌纲细菌的影响，其中，接受KPC-3000157、KPC-3000159、KPC-3000161、KPC-3000162、KPC-3000165、KPC-3000170、KPC-3000172和KPC-3000100治疗的大鼠，拟杆菌属细菌的丰度上升，α－变形菌纲细菌丰度下降，实验结果表明如本发明所示的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物可以恢复肠道微生态平衡。由此可见，本发明所示的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物通过恢复肠道微生态平衡对非酒精性脂肪肝具备较好的治疗效果，为临床治疗非酒精性脂肪肝提供了新的选择。

本发明所示的乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物的用途中所用试剂、原料药或辅料均可由市场购得。

下面以具体实施案例对本发明做进一步说明：

实施例1

乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物对非酒精性脂肪肝大鼠模型血脂CHO、TG值的影响

表1 实施例中涉及化合物

实验材料及方法：

1、动物与材料

SD大鼠165只，由昆明医科大学动物中心提供，体重为180±20g，自由饮食，饲养条件为 22±2℃。乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物由昆药集团自制。

水飞蓟宾胶囊由购自天津天士力制药有限公司；CHO、TG、均在昆药集团生物学部检测。

2、非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立与分组

2.1 分组：

将165只大鼠随机分为11组，分别为空白组、阳性组、模型组、KPC-3000157组、KPC-3000159组、KPC-3000161组、KPC-3000162组、KPC-3000165组、KPC-3000170组、KPC-3000172组和KPC-3000100组。所有大鼠喂养一周后开始实验。

2.2 模型建立：

除空白对照给与生理盐水外，其余各组采用高脂乳剂（50g花生油加热，加入15g胆固醇融化，搅匀后加入3.5ml的吐温80，制成油相，使用50ml水、10g全脂奶粉、1g食盐、20g蔗糖和3.5ml丙二醇加热后介入1g脱氧胆酸钠，制成水相，随后将油相和水相进行充分混合成高脂乳剂），根据大鼠体重每周两次喂食，平时以高脂饲料维持，连续喂食12周。12周后每组随机处死3只，测定血脂CHO、TG值，观察模型是否成功。

2.3 给药：

模型成功后，除了空白对照组与模型组外，其余各组加灌胃各组相应的药物 （阳性组按 4.5mg／kg灌胃水飞蓟宾胶囊，KPC-3000157组、KPC-3000159组、KPC-3000161组、KPC-3000162组、KPC-3000165组、KPC-3000170组、KPC-3000172组和KPC-3000100组均按３mｇ／ｋｇ灌胃），空白组与模型组依旧按1ml／100g灌胃生理盐水。再连续灌胃8周。

2.4 指标检测及结果：

腹主动脉取血，分离血清，测定胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)，结果见表2。另外，取大鼠新鲜粪便提取细菌 DNA 进行 定量 PCR 分析。

表 2 乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物对大鼠血脂指标的影响（±ｓ）

注：模型组与空白对照组比较，^＃＃Ｐ＜０．０１；给药组与模型组比较，＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１

由表2可见，乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物具有改善非酒精性脂肪肝症状的作用。

实施例 2

乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物上调非酒精性脂肪肝大鼠肠道内的拟杆菌属细菌

作为革兰氏阴性细胞，拟杆菌属是肠道最主要的共生菌。一般认为拟杆菌属为肠道中化能有机营养的专性厌氧杆菌，我们发现非酒精性脂肪肝的进程与肠道拟杆菌属细菌的下降有关。大量的文章证明在肥胖病人肠道中厚壁菌门细菌明显增加，而拟杆菌下降。图1所示为大鼠粪便细菌（拟杆菌属）相对定量结果。与正常健康大鼠对比，非酒精性脂肪肝大鼠其粪便中拟杆菌属(Firmicutes) 细菌相对含量显著下降，而经乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物治疗大鼠拟杆菌属细菌恢复至正常水平。

实施例 3

乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物抑制非酒精性脂肪肝大鼠肠道内的 α －变形菌纲细菌

变形杆菌（proteus species）是人和动物的寄生菌和病原菌。变形杆菌广泛分布在自然界中及人或动物的肠道内。变形杆菌的大多数成是革兰氏阴性菌。变形杆菌食物中毒是我国常见的食物中毒之一。 引起食物中毒的变形杆菌主要是普通变形杆菌 (P． vulgaris) 和奇异变形杆菌 (P．mirabikis)。变形杆菌食物中毒还包括普罗威登斯菌属 (Providencid)中的雷氏普罗威登斯菌(P．rettgeri)及摩根菌属(Morganella)中的摩氏摩根菌 (M．morganii)。

在该发明中，我们发现非酒精性脂肪肝的进程与肠道 α－变形菌纲的上升有关。重要的是，我们发现口服乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物可以抑制肠道α－变形菌纲在非酒精性脂肪肝进程中的上升。因此，该发明的“新颖性”与“可实施性”可以通过应用口服乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物来抑制肠道的条件性致病菌，例如，α－变形菌纲。如图2所示，说明口服乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物在小鼠体内发挥了平衡肠道菌群的作用。

实施例４

乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物片剂的制备

取乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物与常规辅料混合，按照常规方法制备获得乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物片剂。

实施例５

乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物口服液的制备

取乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物与常规辅料混合，按照常规方法制备获得乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物口服液。

实施例６

乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物丸剂的制备

取乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物与常规辅料混合，按照常规方法制备获得乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物丸剂。

实施例７

乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物胶囊剂的制备

取乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物与常规辅料混合，按照常规方法制备获得乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物胶囊剂。

实施例８

乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物颗粒剂的制备

取乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物与常规辅料混合，按照常规方法制备获得乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物颗粒剂。

实施例９

乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物膏剂的制备

取乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物与常规辅料混合，按照常规方法制备获得乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物膏剂。

实施例10

乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物滴丸剂的制备

取乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物与常规辅料混合，按照常规方法制备获得乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物滴丸剂。

实施例11

乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物糖浆剂的制备

取乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物与常规辅料混合，按照常规方法制备获得乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物糖浆剂。

实施例12

乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物散剂的制备

取乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物与常规辅料混合，按照常规方法制备获得乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物散剂。

实施例13

乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物冲剂的制备

取乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物与常规辅料混合，按照常规方法制备获得乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物冲剂。

实施例14

乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物酊剂的制备

取乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物与常规辅料混合，按照常规方法制备获得乙酰天麻素和乙酰天麻素衍生物酊剂。