专利名称：：总天麻素及结合天麻素的检测方法
技术领域：
：本发明涉及一种对天麻素成分的检测方法，特别是对同时含有游离态和结合态天麻素的被检品中的总天麻素含量，和/或结合天麻素含量的检测方法。
背景技术：
：天麻为中国药典中收载的一种常用中药，为兰科植物G"Wro&"e/atoBl.的干燥块茎，具有平肝息风止痉之功效，可用于头痛眩晕，肢体麻木，小儿惊风，癫痫抽搐，破伤风等。以天麻为有效成分的药物，有单方的天麻制剂(如全天麻胶囊)和复方天麻制剂(如天麻醒脑胶囊、天麻首乌片、天麻丸、大川芎丸等)。迄今，国内外学者已对天麻的化学成分、药理作用等方面做了大量的研究工作，并逐步建立了天麻药材的质量控制标准。已有研究表明，天麻素为天麻的活性成分，因此该成分已作为天麻药材及其制剂的质量控制指标性成分。如，2005版《中国药典》收载的HPLC法测定天麻药材和全天麻胶囊中天麻素的含量作为质量控制的方法；张磊等对"复方天麻颗粒"(《安徽医药》2006;10(12):919-920)、李洪刚等对"通天口服液"(《中国药业》2005:14(19):55-56),潘震宇等对"天麻头风灵片"(《中医药导报》2005:ll(5):61-63)等制剂中天麻素含量也分别采用HPLC法进行测定的方法。现有的研究已发现，天麻药材中化学成分除天麻素(即游离天麻素)夕卜，还含有另一类天麻素与柠檬酸(citricacid)縮合而成的各种酯类成分(王莉"天麻化学物质基础及质量控制方法研究"，《中国科学院研究生院博士学位论文》p10)，如巴利森苷，巴利森苷B，巴利森苷C等。天麻素与柠檬酸縮合的各种酯类成分可称为结合天麻素，天麻素和结合天麻素之和即为其所含有的总天麻素。CH^COOR!_C0。R2CH2C0OR3(结合天麻素巴利森苷1^=}12=113=11巴利森苷B:R=R2=R，R3=H巴利森苷C:1^=113=11，R2=H)CHgOHR(天麻素)经本发明人的深入研究发现，在天麻药材中，结合天麻素的含量远高于按2005版《中国药典》的方法直接检测得到的天麻素(即游离天麻素)的含量。深入的研究还发现，结合天麻素与天麻素可具有相同或相似的药效活性。例如，天麻素(游离态)和巴利森苷(结合态)对体外模拟脑缺血损伤大鼠脑微血管内皮细胞(BMEC)的保护作用试验结果已显示，天麻素和巴利森苷各实验剂量(12.5，25，50，100，200mg/L)可明显增强BMEC活力，提高受损内皮细胞(EC)的生存率，促使ECNO分泌增加，表明天麻素和巴利森苷对体外培养的大鼠BMEC缺血损伤均具有一定的保护作用。由于目前的含量检测及质量控制方法仅能实现对天麻药材及其制剂中的游离天麻素进行检测，难以客观真实地反映天麻药材及其制剂的内在质量，以及作为在体内发挥药效作用的全部活性成分的总量，在药物生产和临床使用中对实际质量的控制、以及对治疗效果及不良反应的掌握和对药材的合理、节约的利用等方面，都存在明显的缺陷。
发明内容基于上述情况，本发明将提供一种能对天麻药材及其制剂中的总天麻素和/或结合天麻素含量进行检测的方法。本发明所说的总天麻素的检测方法，是将至少含有结合天麻素成分的被检品原料经碱性条件水解后，再检测其游离态天麻素成分的含量。其中所说的至少含有结合天麻素成分的被检品原料，是指被检品原料中可以为只含有结合天麻素成分，也可以是同时含有结合天麻素和天麻素(即游离天麻素)两类成分。对按本发明上述方式经碱性水解后含有游离态天麻素成分被检品的检测，可以采用目前已有使用和/或报道的各种检测方法进行，例如可采用如2005版中国药典附录VID的高效液相色谱法对该游离态天麻素成分的含量进行检测。由于结合天麻素是一类由天麻素结构中的-OH与柠檬酸所成的酯类化合物，因此按目前常规方式用温和的碱性条件很容易将其水解，得到游离的天麻素成分。例如，在常温至不超过8(TC的加热条件，都可以使所说的水解反应顺利进行和完成，其中优选的水解温度为25'C-6(TC。所说的碱性水解一般在pH大于12的水溶液、稀醇溶液等碱性溶液中进行，可更有利于水解反应的完全，而在碱性较弱的条件下进行，则可能导致水解反应的不完全，例如可优选为碱浓度》0.25mol/L的水解环境。所用的碱性成分一般可以选择如氢氧化钠、氢氧化钾等常用的碱金属氢氧化物。本发明的上述方法在具体实施时，根据被检品原料的不同情况，可以分别采用下述的不同方式或途径进行。一种方式是可以对该被检品原料先用水或能与水混溶的有机溶剂中的至少一种对该至少含有结合天麻素成分的被检品原料进行提取后，再对提取物进行碱性水解后，以所得到的水解产物作为被检品并检测其中的总天麻素成分含量。此种方式特别适用于被检品原料的取样量较大时，先得到其提取物后，可以大大减小被水解物料的体积，有利于后续操作。另一种方式是先对该被检品原料进行所说的碱性水解后，再用水或能与水混溶的有机溶剂中的至少一种对水解产物进行提取，以所得到的提取物作为被检品并检测其中的总天麻素成分含量。此种方式一般多适用于被检品原料的取样量较小时的情况。上述两种处理方式中所说的能与水混溶的有机溶剂均为包括乙醇、甲醇、乙腈、丙酮的极性有机溶剂，并且均以采用由水与所说的极性有机溶剂组成的混合溶剂为优选。对比试验的结果显示，上述两种不同的处理方式对检测结果的影响，不存在统计学意义的差异性。以天麻药材及其制剂中总天麻素的检测方法为例，本发明上述检测方法的一种典型过程可按下述方式进行(1)供试品溶液的制备取天麻药材及其制剂适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流提取3小时，放冷再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加5。/。NaOH溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并加5"y。NaOH溶液至刻度，摇匀，精密吸取该溶液lml，置5ml具塞试管中，40。C水浴水解2小时，取出，用体积比为3:97的乙腈-水混合溶液转移至10ml量瓶中，用盐酸调至中性或弱酸性(例如pH57)，加体积比为3:97的乙腈-水混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备按《中华人民共和国药典》2005年版一部天麻含量测定项下规定的方法制备，作为对照品溶液；(3)测定方法按《中华人民共和国药典》2005年版一部天麻含量测定项下规定的方法测定。在本发明上述的水解过程中，由于被检品原料中的结合天麻素均已被水解成为游离态的天麻素，因此检测结果即为被检品原料中以各种状态存在的总天麻素的含量。而按目前已有使用和/或报道(包括中国药典)的方法，只能直接检测到在被检品原料中以游离态存在的天麻素的含量。因此，由本发明上述方法得到总天麻素成分含量中扣除对未进行上述碱性水解的该被检品原料直接检测得到的天麻素含量，其差值即为该被检品中的结合天麻素的含量。由此可以理解，本发明的上述检测方法可以客观、真实、准确地得到天麻药材或其各种形式药物制剂中以不同状态存在的总天麻素成分的含量，从而为实现在制药和/或用药中对药材原料的内在质量或制剂中全部活性成分含量的控制、掌握，提供了客观、准确和科学可靠的检测方法，在保证产品质量，提高药物疗效，减少因活性成分含量不准确可能导致的不利影响，以及对药材的合理、节约利用并提高其利用率等方面，都具有积极和现实的意义。以下结合实施例的具体实施方式再对本发明的上述内容作进一歩的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明的范围内。具体实施例方式实施例1天麻药材中的总天麻素和结合天麻素含量检测供试品溶液的制备被检天麻药材于8(TC减压干燥，粉碎，取粉末(过四号筛)约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇(按《中国药典》2005版一部附录p98稀乙醇的配制方法配制)50ml，称定重量，加热回流提取3小时，放冷再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液10ml蒸干，残渣加体积比(以下均同此)3:97的乙腈-水混合溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并用乙腈-水(3:97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为(游离)天麻素的供试品溶液。再另取上述续滤液10ml，蒸干，残渣加5%(w)NaOH溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并用5。/。NaOH溶液稀释至刻度，摇匀，精密吸取该溶液lml，置5ml具塞试管中，40'C水解2小时，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液转移至10ml量瓶中，用盐酸调pH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为总天麻素的供试品溶液。对照品溶液的制备精密称取在80'C减压干燥1小时的天麻素对照品适量，加流动相制成每lml含50ug的溶液。测定方法按照2005版中国药典附录VID规定的高效液相色谱法进行测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05%磷酸溶液(3:97)为流动相；检测波长为220nm。理论板数按天麻素峰计算应不低于5000。分别精密吸取对照品溶液10W与供试品溶液510pl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得游离天麻素、总天麻素和结合天麻素的含量。检测结果本例被检药材样品(以干燥品计算)含总天麻素2.85%，天麻素(游离)0.64%，结合天麻素为2.21%(w%)。实施例2:天麻药材中的总天麻素含量检测供试品溶液的制备被检天麻药材于8(TC减压干燥，粉碎，取粉末(过四号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入5。/。KOH稀乙醇50ml，室温放置4小时进行水解后，盐酸调节pH至中性，加热回流提取3小时，放冷，转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。对照品溶液的制备、色谱条件与系统适用性试验均同实施例1。测定法按照2005版中国药典附录VID规定的高效液相色谱法测定。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5pl，注入液相色谱仪，测定，计算。检测结果本例被检药材按干燥品计算，含总天麻素2.87%。实施例3:天麻药材中游离天麻素、总天麻素和结合天麻素含量的检测供试品溶液的制备另取一批天麻药材于80。C减压干燥，粉碎，取粉末(过四号筛)约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50。/。甲醇50ml，称定重量，加热回流提取3小时，放冷再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液作为(游离)天麻素的供试品溶液。再另取续滤液10ml，蒸干，残渣加2%NaOH溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并用2%NaOH溶液稀释至刻度，摇匀，精密吸取该溶液2ml，置5ml具塞试管中，4(TC水解2小时，取出，用甲醇转移至10ml量瓶中，用盐酸调PH至中性或弱酸性，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为总天麻素的供试品溶液。对照品溶液的制备精密称取在8(TC减压干燥1小时的天麻素对照品适量，加甲醇制成每lml含50ug的溶液。测定法按照2005版中国药典附录VID规定的高效液相色谱法进行测定。色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-磷酸盐溶液(O.lmol/L磷酸二氢钾溶液和O.lmol/L磷酸二氢钠溶液等量混合)-水(10:3:87)为流动相；检测波长为270nm。理论板数按天麻素峰计算应不低于2000。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5^1，注入液相色谱仪，测定，计算，即得游离天麻素、总天麻素和结合天麻素的含量。检测结果本例被检品按干燥品计算，含天麻素0.29%，总天麻素1.64%，结合天麻素1.35%。实施例4:天麻丸中游离天麻素、总天麻素和结合天麻素的含量检测供试品溶液的制备将被检的天麻丸粉碎，取粉末(过四号筛)约10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，称定重量，加热回流提取4小时，放冷再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液20ml，蒸干，残渣加乙腈-水(3:97)混合溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并用乙腈-水(3:97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为(游离)天麻素的供试品溶液。再另取滤液20ml蒸干，残渣加l%NaOH溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并用ly。NaOH溶液稀释至刻度，摇匀，精密吸取该溶液lml，置5ml具塞试管中，60'C水解2小时，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液转移至10ml量瓶中，用盐酸调PH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液作为总天麻素的供试品溶液。测定法按照2005版中国药典附录VID规定的高效液相色谱法测定。对照品溶液的制备/色谱条件与系统适用性试验均同实施例1。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各51(V1，注入液相色谱仪，测定，计算，即得游离天麻素、总天麻素和结合天麻素的含量。检测结果本例被检品每lg含天麻素0.22mg，总天麻素0.91mg，结合天麻素0.69mg。实施例5:天麻醒脑胶囊中总天麻素的含量检测供试品溶液的制备取被检测的天麻醒脑胶囊内容物约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入10%NaOH的30%乙醇溶液50ml,室温放置2小时(水解)，用盐酸调pH至中性，加热回流提取3小时，放冷，转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。测定法按照2005版中国药典附录VID规定的高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验、对照品溶液的制备同实施例1。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5|nl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。检测结果本例被检品每粒胶囊含总天麻素3.10mg。实施例6:复方天麻颗粒中总天麻素的含量检测供试品溶液的制备取被检测的复方天麻颗粒约2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100ml，称定重量，加热回流提取2小时，放冷再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液20ml蒸干，残渣加5%NaOH溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并用5n/。NaOH溶液稀释至刻度，摇匀，精密吸取该溶液lml，置5ml具塞试管中，4(TC水解2小时，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液转移至10ml量瓶中，用盐酸调pH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为总天麻素的供试品溶液。测定法按照2005版中国药典附录VID规定的高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验、对照品溶液的制备同实施例1。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各510pl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。检测结果本例被检品每lg含总天麻素1.74mg。实施例7:通天口服液中总天麻素的含量检测供试品溶液的制备取被检测的通天口服液5ml，蒸干，残渣加8。/。NaOH溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并用8。/。NaOH溶液稀释至刻度，摇匀，精密吸取该溶液lml，置5ml具塞试管中，室温放置(水解)3小时，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液转移至10ml量瓶中，用盐酸调pH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为总天麻素的供试品溶液。测定法按照2005版中国药典附录VID规定的高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验、对照品溶液的制备同实施例1。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各510(！1，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。检测结果本例被检品每lml含总天麻素0.81mg。实施例8:提取溶剂的选择和影响取天麻药材粉末约0.8g，共9份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入水、30%乙醇、稀乙醇、70%乙醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、30%丙酮、30%乙腈各50ml,称定重量，加热回流提取3小时，放冷再称定重量，分别用相应的提取溶剂补足减失的重量，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加乙腈-水(3:97)混合溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并用乙腈-水(3:97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为游离天麻素的供试品溶液。再分别另取上述滤液10ml，蒸干，残渣加5。/。NaOH溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并加5。/。NaOH溶液至刻度，摇匀，精密吸取该溶液lml，置5ml具塞试管中，40'C水浴水解2小时，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液转移至10ml量瓶中，用盐酸调pH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为总天麻素的供试品溶液。分别按照《中国药典》2005年版一部天麻含量测定项下规定的方法测定，计算，即得游离天麻素和总天麻素的含量，结果如表1所示。表l提取溶剂的选择和影响<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>说明(1)结合天麻素=总天麻素-游离天麻素；(2)稀乙醇按《中国药典》2005版一部附录98页稀乙醇的配制方法配制。表1结果表明，用水或含水的乙醇、甲醇、丙酮、乙腈均能较好地提出游离天麻素和结合天麻素。实施例9:提取方法的选择和影响取天麻药材粉末约0.8g，共7份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml,称定重量，其中，3份样品分别超声处理20、40、60分钟，另4份样品分别加热回流提取l、2、3、4小时，上述样品放冷后再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加乙腈-水(3:97)混合溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并用乙腈-水(3:97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为游离天麻素的供试品溶液。再分别另取滤液10ml，蒸干，残渣加5。/。NaOH溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并加5。/。NaOH溶液至刻度，摇匀，精密吸取该溶液lml，置5ml具塞试管中，40'C水浴水解2小时，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液转移至10ml量瓶中，用盐酸调pH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为总天麻素的供试品溶液。按照《中国药典》2005年版一部天麻含量测定项下规定的方法测定，计算，即得游离天麻素和总天麻素的含量，结果如表2所示。表2提取方法的选择和影响<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>说明同表l由表2可见，超声或回流提取均能较好地提出游离天麻素和结合天麻素，以回流提取2-4小时为佳。实施例10:水解温度的选择和影响取天麻药材粉末约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流提取3小时，放冷再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加5%NaOH溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并加5%NaOH溶液至刻度，摇匀，精密吸取该溶液lml，共6份，分别置5ml具塞试管中，于冰箱冷藏(4'C)、25°C、40°C、60°C、80。C、IOO'C放置(水解)2小时，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液转移至10ml量瓶中，用盐酸调pH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为总天麻素的供试品溶液。按《中国药典》2005年版一部天麻含量测定项下规定的方法测定，计算，即得总天麻素的含量，结果如表3所示。表3水解温度的选择<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表3结果可见，碱水解的适宜温度为4。C-80°C，均能较好地将结合天麻素水解成游离天麻素，其中的最佳水解温度为25'C-6(TC。实施例11:水解条件的碱浓度选择和影响取天麻药材粉末约1.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇lOOml，称定重量，加热回流提取3小时，放冷再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，取滤液10ml，共8份，分别蒸干，残渣分别加0.5%、1%、2%、4%、6%、8%、10%、20%NaOH溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并加相应的NaOH溶液至刻度，摇匀，精密吸取该溶液lml，置5ml具塞试管中，4(TC水浴水解2小时，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液转移至10ml量瓶中，用盐酸调PH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为总天麻素的供试品溶液。按照《中国药典》2005年版一部天麻含量测定项下规定的方法测定，计算，即得总天麻素的含量，结果如表4所示。表4水解条件的碱浓度选择和影响<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表4结果可见，碱浓度为》1%(或》0.25mol/L)，溶液pH均大于12的条件下，都能很好地将结合天麻素水解成游离天麻素。实施例12:水解时间的选择和影响取天麻药材粉末约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流提取3小时，放冷再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加P/。NaOH溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并加l%NaOH溶液至刻度，摇匀，精密吸取该溶液lml，共5份，分别置5ml具塞试管中，于4(TC放置(水解)0.5、1、2、4、8小时，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液转移至10ml量瓶中，用盐酸调pH至中性或酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为总天麻素的供试品溶液。另取滤液10ml，2份，蒸干，残渣分别加5。/。NaOH和10。/。NaOH溶液溶解，同法制备供试品溶液。按照《中国药典》2005年版一部天麻含量测定项下规定的方法测定，计算，即得总天麻素的含量，结果如表5所示。表5水解时间的选择和影响<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>由表5结果可见，碱水解的适宜时间为0.5-8小时。进一步研究还发现，本发明方法中对被检品原料的水解温度、碱浓度和水解时间三者可相互关联和配合。例如，采用较低浓度的碱水解时，可通过延长水解时间和/或提高水解温度使结合天麻素水解完全。如，采用0.5%NaOH室温放置过夜(约20小时)的水解效果，可与在5%NaOH溶液中室温水解2小时的效果相当。本发明所述的检测方法，按照中药质量标准分析方法验证指导原则，对线性关系、稳定性、精密度、重现性、加样回收率等进行考察，结果均符合要求。此外，以结合天麻素的巴利森苷纯品作为对照，采用上述实施例1的方法进行水解后，检测其天麻素含量。检测结果显示，实际测得的天麻素量为理论计算量的98.6%，表明本发明采用上述的碱水解方式对结合天麻素的水解是彻底和完全的，建立在此基础上的总天麻素检测方法是可行的，检测结果的准确性具有足够的可信度。权利要求1.总天麻素的检测方法，其特征是将至少含有结合天麻素成分的被检品原料经碱性条件水解后，再检测其中的游离态天麻素成分的含量。2.如权利要求1所述的总天麻素的检测方法，其特征是所说的碱性水解的温度为常温至不超过8(TC的加热条件。3.如权利要求2所述的总天麻素的检测方法，其特征是所说的碱性水解的温度为25°C-60°C。4.如权利要求1所述的总天麻素的检测方法，其特征是所说的碱性水解为在pH值大于12的碱性溶液中进行。5.如权利要求1至4之一所述的总天麻素的检测方法，其特征是所说的至少含有结合天麻素成分的被检品原料包括天麻药材或其提取物，以及含有天麻药材或其提取物的制剂，该被检品原料先用水或能与水混溶的有机溶剂中的至少一种对该至少含有结合天麻素成分的被检品原料进行提取后，再对提取物进行碱性水解后，以所得到的水解产物作为被检品并检测其中的总天麻素成分含量，所说的能与水混溶的有机溶剂为包括乙醇、甲醇、乙腈、丙酮的极性有机溶剂。6.如权利要求5所述的总天麻素的检测方法，其特征是所说的对被检品原料的提取采用由水与所说的极性有机溶剂组成的混合溶剂。7.如权利要求1至4之一所述的总天麻素的检测方法，其特征是所说的至少含有结合天麻素成分的被检品原料包括天麻药材或其提取物，以及含有天麻药材或其提取物的制剂，先对该被检品原料进行所说的碱性水解后，再用水或能与水混溶的有机溶剂中的至少一种对水解产物进行提取，以所得到的提取物作为被检品并检测其中的总天麻素成分含量，所说的能与水混溶的有机溶剂为包括乙醇、甲醇、乙腈、丙酮的极性有机溶剂。8.如权利要求7所述的总天麻素的检测方法，其特征是所说的对被检品的提取采用由水与所说的极性有机溶剂组成的混合溶剂。9.一种天麻药材及其制剂中总天麻素的检测方法，其特征是按下述方式进行(1)供试品溶液的制备取天麻药材及其制剂适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流提取3小时，放冷再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加5。/。NaOH溶液溶解，转移至10ml量瓶中，并加5。/。NaOH溶液至刻度，摇匀，精密吸取该溶液lml，置5ml具塞试管中，40'C水浴水解2小时，取出，用体积比为3:97的乙腈-水混合溶液转移至10ml量瓶中，用盐酸调pH至中性或弱酸性，加体积比为3:97的乙腈-水混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备按《中华人民共和国药典》2005年版一部天麻含量测定项下规定的方法制备，作为对照品溶液；(3)测定方法按《中华人民共和国药典》2005年版一部天麻含量测定项下规定的方法测定。10.结合天麻素的检测方法，其特征是按权利要求1所述的方法由至少含有结合天麻素成分的被检品原料经碱性条件水解后得到的含有总天麻素成分的被检品进行检测后，从得到的总天麻素成分含量中扣除对未进行所说碱性水解的该被检品原料直接检测得到的天麻素含量，即为结合天麻素的含量。全文摘要总天麻素及结合天麻素的检测方法。将至少含有结合天麻素成分的被检品原料经碱性条件水解后，再检测其游离态天麻素成分的含量，即为被检品原料中包括游离天麻素和结合天麻素在内的总天麻素含量。由总天麻素中扣除该被检品按现行方法检测得到的游离天麻素后，即为该被检品中结合天麻素的含量。该检测方法可以真实、准确地得到被检品中所含的全部天麻素成分含量，为实现在制药和/或用药中对原料或制剂中天麻素成分含量客观、准确地进行检测和质量控制提供了可靠的方法，以利保证产品质量，提高药物疗效并减少因活性成分含量不准确所可能导致的不利影响。文档编号G01N1/28GK101169355SQ200710050639公开日2008年4月30日申请日期2007年11月28日优先权日2007年11月28日发明者刘云华,刘玉红,易进海,燕陈,黄志芳申请人:四川省中医药科学院