本发明涉及医疗技术领域，具体涉及以一种抗菌人工真皮支架及其制备方法。
背景技术：
皮肤是人体最大的器官，保护身体免受外界有害物质的侵入，防止体内水份、电解质等丢失，维持人体内环境的稳定，并参与人体的免疫和代谢过程。在我国，每年因烧烫伤与皮肤溃疡需要移植皮肤的患者将近1000万人。多种原因导致的皮肤缺损、坏死将直接影响人们的生活质量，甚至威胁生命。虽然皮肤可以自行再生修复，但只限于浅层受损，当皮肤受到严重的烧伤和损害时（深II度和III度），皮肤不能自行修复，需进行皮片移植手术才能完成创面修复。
人工皮肤主要分为组织工程皮肤和人工真皮代替物两大类。国外已有多种人工皮肤产品在临床上使用，如Integra、Biobrane、ALLoDerm、ApLigraf等。在我国，也有安体肤、桀亚等组织工程人造皮肤产品。含有真皮层和表皮层组织工程人造皮肤产品在外观形态、代谢及生化性能上接近于自然皮肤，但其制备成本高，存在细胞来源的问题。采用不同材料制备的人工真皮产品则相对成本较低，易于保存运输，可进行成批生产。目前，在我国上市的人工真皮替代物只有皮耐克。现有的专利公开了各种人工真皮的制备方法，例如专利公开号CN101703799B的专利公开了一种用于皮肤损伤修复、具有良好三维多孔结构和抗凝血真皮支架的制备，该支架由再生丝素蛋白、壳聚糖和肝素组成，具有优良的抗凝血性。专利公开号CN105561400A的专利公开了一种以包括氧化纤维素、交联剂为原料制成的人工真皮支架，该支架具有合适的孔径大小和孔隙率，不但能够有效促进伤口的愈合，更能促进肉芽组织和新生血管的再生。
植入后人工皮肤与伤口接触的界面容易引起感染，能否克服该缺点严重影响产品植入的成功率。现有的人工真皮支架均存在着创面修复过程中创面感染的风险，部分人工真皮支架存在着抗感染效果不佳、抗瘢痕效果较差等不足。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一种抗菌人工真皮支架及其制备方法。
本发明所采取的技术方案是：
一种抗菌人工真皮支架，由胶原、生物酶和第三种材料制成，所述第三种材料为硫酸软骨素、透明质酸、壳聚糖或丝素蛋白中的至少一种。
在一些优选的实施方式中，所述胶原、生物酶和第三种材料的质量比为（5-15）：（1.4-1.9）：（1.2-1.8）。
在一些优选的实施方式中，所述生物酶包括溶葡萄球菌酶和溶菌酶。
在上述方案优选的实施方式中，所述溶葡萄球菌酶和溶菌酶的质量比为（1-20）：（80-100）。
在一些优选的实施方式中，所述第三种材料中包括丝素蛋白，所述丝素蛋白是由蚕丝经脱胶、透析、冷冻干燥得到的。
在一些优选的实施方式中，所述抗菌人工真皮支架具有三维多孔结构。
本发明还提供了如上所述的抗菌人工真皮支架的制备方法，包括以下步骤：
S1：称取胶原、生物酶和第三种材料，分别溶于醋酸溶液中，得到胶原溶液、生物酶溶液和第三种材料溶液；
S2：将生物酶溶液和第三种材料溶液分别滴加到胶原溶液中，不断地搅拌，得到胶原复合物溶液；
S3：将所述胶原复合物溶液倒入模具中，冷冻，再冷冻干燥，得到胶原复合海绵支架；
S4：将所述胶原复合海绵支架浸泡在戊二醛-醋酸溶液中，使各组分分子内及分子间发生交联反应，清洗，即得抗菌人工真皮支架。
在一些优选的实施方式中，所述S3中冷冻是在-60~-80℃下冷冻1.5-3h。
在一些优选的实施方式中，所述戊二醛-醋酸溶液中所述戊二醛的体积分数为0.1-0.3%，所述醋酸的浓度为0.03-0.3moL/L。
在一些优选的实施方式中，所述S4中的清洗包括超纯水清洗、磷酸盐缓冲液浸泡清洗两步清洗。
本发明的有益效果是：
针对现有的人工真皮支架存在的抗感染效果不佳、抗瘢痕效果较差等不足的缺陷，本发明提供了一种抗菌人工真皮支架及其制备方法，由胶原、生物酶和第三种材料制成，所述第三种材料为硫酸软骨素、透明质酸、壳聚糖或丝素蛋白中的至少一种。通过在人工真皮支架的胶原蛋白支架中引入了生物酶，所得人工真皮支架具有抗菌、抗感染、促进创面愈合的功能；通过引入第三种材料，可改善材料的力学性能，第三种材料孔结构及降解速率，使材料降解周期及力学性能与所修复组织匹配。而且本发明制备的抗菌人工真皮支架具有很好的生物相容性和降解性，柔软度适宜，可与创面很好的贴合；而且抗菌人工真皮支架的制备方法简单，操作过程可实时监测。
具体实施方式
实施例1：
称取0.941 g胶原溶于100 mL 0.15 mol/L醋酸溶液中。称取0.014 g溶葡萄球菌酶、0.126 g溶菌酶溶于100 mL 0.15 mol/L醋酸溶液中。称取0.120 g硫酸软骨素溶于100 mL 0.15 mol/L醋酸溶液中。
将生物酶溶液及硫酸软骨素溶液以998 μL/min的速率滴加到胶原溶液中，并不断地搅拌，得浓度为0.4%的胶原复合物。
将所得胶原复合物倒入聚四氟乙烯模具中，在-80℃冷冻1.5 h后，置于冷冻干燥机中冷冻干燥24 h，得到具有三维多孔结构的胶原复合海绵支架。
将所得胶原复合海绵支架浸泡在戊二醛-醋酸溶液中，所述戊二醛-醋酸溶液中戊二醛的体积分数为0.2%，醋酸的浓度为0.03moL/L。24 h后取出，用超纯水清洗7次，再用磷酸盐缓冲液清洗2次，保存在磷酸盐缓冲液中。即得抗菌人工真皮支架。
引起皮肤创面感染的细菌有金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、表皮葡萄球菌、绿脓杆菌等。溶葡萄球菌酶是一种含锌的蛋白酶，能够特异性作用于革兰阳性菌细胞壁肽聚糖成分中甘氨酸肽键，溶解其细胞壁，对耐药性的金黄色葡萄球菌具有很强的杀菌作用。溶酶菌是一种天然的抗菌剂，在自然或变性条件下都具有杀菌活性，可破坏细菌细胞壁的β-1，4糖苷键，对革兰氏阴性和革兰氏阳性菌都有杀菌作用。两种酶都属于天然蛋白质，一起使用时具有协同作用，用量很小时也有强杀菌作用。
实施例2：
称取1.482 g胶原溶于100 mL 0.15 mol/L醋酸溶液中。称取0.019 g溶葡萄球菌酶、0.170 g溶菌酶溶于100 mL 0.15 mol/L醋酸溶液中。称取0.176 g透明质酸溶于100 mL 0.15 mol/L醋酸溶液中。
将生物酶溶液及透明质酸溶液以998 μL/min的速率滴加到胶原溶液中，并不断地搅拌，得浓度为0.6%的胶原复合物。
将所得胶原复合物倒入聚四氟乙烯模具中，在-80℃冷冻1.5 h后，置于冷冻干燥机中冷冻干燥24 h，得到具有三维多孔结构的胶原复合海绵支架。
将所得胶原复合海绵支架浸泡在戊二醛-醋酸溶液中，所述戊二醛-醋酸溶液中戊二醛的体积分数为0.1%，醋酸的浓度为0.3moL/L。24 h后取出，用超纯水清洗7次，再用磷酸盐缓冲液清洗2次，保存在磷酸盐缓冲液中。即得抗菌人工真皮支架。
实施例3：
称取0.980 g胶原溶于100 mL 0.15 mol/L醋酸溶液中。称取0.028 g溶葡萄球菌酶、0.250 g溶菌酶溶于100 mL 0.15 mol/L醋酸溶液中。称取0.235 g壳聚糖溶于100 mL 0.15 mol/L醋酸溶液中。
将生物酶及硫酸软骨素溶液以998 μL/min的速率滴加到胶原溶液中，并不断地搅拌，得浓度为0.8%的胶原复合物。
将所得胶原复合物倒入聚四氟乙烯模具中，在-60℃冷冻3h后，置于冷冻干燥机中冷冻干燥24 h，得到具有三维多孔结构的胶原复合海绵支架。
将所得胶原复合海绵支架浸泡在戊二醛-醋酸溶液中，所述戊二醛-醋酸溶液中戊二醛的体积分数为0.25%，醋酸的浓度为0.05moL/L。24 h后取出，用超纯水清洗7次，再用磷酸盐缓冲液清洗2次，保存在磷酸盐缓冲液中。即得抗菌人工真皮支架。
实施例4：
称取3.675 g胶原溶于100 mL 0.15mol/L醋酸溶液中。称取0.035 g溶葡萄球菌酶、0.320 g溶菌酶溶于100 mL 0.15 mol/L醋酸溶液中。称取0.294 g丝素蛋白溶于100 mL 0.15 mol/L醋酸溶液中，所述丝素蛋白是由蚕丝经脱胶、透析、冷冻干燥得到的。
将生物酶及硫酸软骨素溶液以998 μL/min的速率滴加到胶原溶液中，并不断地搅拌，得浓度为1%的胶原复合物。
将所得胶原复合物倒入聚四氟乙烯模具中，在-80℃冷冻2 h后，置于冷冻干燥机中冷冻干燥24 h，得到具有三维多孔结构的胶原复合海绵支架。
将所得胶原复合海绵支架浸泡在戊二醛-醋酸溶液中，所述戊二醛-醋酸溶液中戊二醛的体积分数为0.3%，醋酸的浓度为0.1 moL/L。24 h后取出，用超纯水清洗7次，再用磷酸盐缓冲液清洗2次，保存在磷酸盐缓冲液中。即得抗菌人工真皮支架。