本发明属于中草药加工领域，具体涉及一种提高功效的灵芝孢子粉的去壳方法，该方法包括将灵芝孢子粉原料经过研磨及分离步骤、喷雾干燥步骤，得到去壳后灵芝孢子粉。
背景技术：
灵芝(Ganoderma lucidum)为担子菌纲多孔菌科属真菌，是一种作用广泛的药用真菌。其中，灵芝孢子为褐色，卵形，具双层壁结构。从细胞结构上看，该双层壁结构，由几丁质和葡萄糖构成，质地较为坚韧，阻碍有效成分的溶出，影响体内吸收。因此目前绝大部分产品都采用不同的破壁工艺粉碎孢子壁，以期提高活性成分体内生物利用度，增强治疗效果。但破壁后几丁质仍与壁内有效成分混合在一起，影响最终产品的多糖和三萜含量。在现有的灵芝孢子粉破壁方法中，制得的灵芝孢子粉的多糖和三萜的含量仅为1.5-1.8％。此外，特别是一些消化道疾病的患者，他们较大量地服用破壁灵芝孢子粉后，往往难以消化灵芝孢子粉的壳体，造成消化不良甚至影响进食的负面影响。
所以，目前需要一种将灵芝孢子粉的双层壁结构去除(即去壳)的方法，提高去壳灵芝孢子粉的得率，同时提高其中的多糖和三萜含量。
技术实现要素：
本发明提供一种提高功效的灵芝孢子粉的去壳方法，该方法包括将破壁灵芝孢子粉原料经过研磨步骤、经水稀释并离心分离壳肉、去壳、浓缩并喷雾干燥等步骤，得到去壳后的灵芝孢子粉。本发明产品肉质含量高，多糖和三萜含量高。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种提高功效的灵芝孢子粉的去壳方法，所述去壳方法包括：将灵芝孢子粉原料经过研磨及分离步骤、喷雾干燥步骤，得到去壳后灵芝孢子粉。
进一步地，所述研磨及分离步骤包括以下分步骤：
第一级研磨分离分步骤：
将灵芝孢子粉原料与水混匀，进行研磨处理，得到第一级研磨后的产物；再将所述第一级研磨后的产物进行离心处理，得到上清液和沉淀物；再将所述上清液进行过滤处理，保留滤液；
第二级研磨分离分步骤：
将所述沉淀物与水混匀，进行研磨处理、过滤处理，保留滤液。
进一步地，所述第一级研磨分离分步骤中，所述灵芝孢子粉原料与水的重量比为1：(3-6)；所述研磨处理采用纳米级胶体磨，研磨至850目以上，研磨1-4遍；所述离心处理的转速为4000-10000rpm，时间为10-40min；所述过滤处理采用800-1000目的滤网。
进一步地，所述第二级研磨分离分步骤中，所述沉淀物与水的重量比为1：(3-6)；所述研磨处理采用纳米级胶体磨，研磨至850目以上，研磨1-4遍；所述过滤处理采用800-1000目的滤网。
进一步地，所述喷雾干燥步骤包括：合并所述第一级研磨分离分步骤和第二级研磨分离分步骤得到的滤液，再进行浓缩处理、喷雾干燥处理，得到去壳灵芝孢子粉。
进一步地，所述浓缩处理在真空下进行，温度为70-85℃，浓缩至原体积的(1/2)-(2/3)；所述喷雾干燥处理的喷口温度为120-130℃。
进一步地，所述灵芝孢子粉原料的制备方法包括以下步骤：将灵芝孢子粉与比重水混匀后，得到混合物；再将所述混合物进行沉淀处理，得到分层次的混合物；再取所述分层次的混合物的中间层；再将所述中间层进行浓缩处理，得到浓缩产物；所述浓缩产物作为灵芝孢子粉原料。
进一步地，所述灵芝孢子粉和比重水的重量比为1：(6-11)；所述比重水为质量百分比10-30％的氯化钠溶液；所述沉淀处理的时间为2-10分钟；所述浓缩处理在真空下进行，温度为70-85℃，所述浓缩产物的体积为原体积的(1/2)-(2/3)。
进一步地，所述灵芝孢子粉原料的制备方法还包括以下步骤：
将所述浓缩产物进行烘干处理，得到灵芝孢子粉原料。
进一步地，所述烘干处理的温度为60-90℃。
相比现有技术，本发明具有如下有益效果：
1、本发明将灵芝孢子粉的双层壁结构(即壳)部分或彻底去除，有利于活性成分充分释放并被人体吸收，避免了难以消化的壳体对消化道疾病患者的副作用。
2、本发明将灵芝孢子粉进行多重研磨，不仅有利于灵芝孢子粉内部有效成分的释放，也有利于灵芝孢子粉外壁中有效成分的提取，有利于提高多糖和三萜含量。
3、本发明的破壁、去壳步骤中除去离子水之外基本不引入其他新的试剂，可以确保破壁灵芝孢子粉的高纯度。
4、本发明各个步骤及参数协同作用，共同提高了灵芝孢子粉原料加工的得率、多糖和三萜的含量。
5、本发明操作简便，生产成本低廉，有利于广泛使用。
具体实施方式
本发明提供一种提高功效的灵芝孢子粉的去壳方法，该去壳方法包括以下步骤：
步骤一、沉淀和浓缩：
收集灵芝孢子粉，将该灵芝孢子粉中加入比重水(该比重水为氯化钠溶液，质量百分浓度为10-30％(优选为20％))，其中，灵芝孢子粉和比重水的重量比为1：(6-11)(优选为1:7)，混匀后得到混合物；将该混合物于室温进行沉淀处理2-10分钟(优选为5分钟)，得到分层次的混合物；该分层次的混合物中，上层为灵芝孢子粉的瘪粒，中间层为灵芝孢子粉颗粒，下层为泥沙等杂质；去除上层和下层，取该混合物的中间层；
再将该中间层的灵芝孢子粉原料进行浓缩处理，处理后得到浓缩产物，作为灵芝孢子粉原料进行下一步骤的研磨；该浓缩处理在真空下进行，温度为70-85℃，浓缩至原体积的(1/2)-(2/3)；
所述浓缩产物也可以再于60-90℃进行烘干处理，至含水量5％以上(优选为6-9％)，作为灵芝粉孢子粉原料进行下一步的研磨。
示例性地，上述灵芝孢子粉与比重水的重量比可以为1：6、1：7、1：7.5、1：8、1:10、1:11等中任意值或任意两者之间的范围，上述沉淀时间可以为2min、5min、8min、10min等中任意值或任意两者之间的范围，上述浓缩的温度可以为70℃、75℃、80℃、85℃等中任意值或任意两者之间的范围，上述浓缩后的体积可以为原体积的1/2、3/5、2/3等中任意值或任意两者之间的范围。
步骤二、研磨及分离：
分步骤一、第一级研磨分离：
将上述灵芝孢子粉原料与去离子水按重量比1：(3-6)(优选为1:4)混匀，采用纳米级胶体磨进行研磨处理，研磨1-4遍(优选为2遍)，至850目以上，得到第一级研磨后的产物；再将该第一级研磨后的产物于室温、转速4000-10000rpm(优选为5800rpm)进行离心处理10-40min，分别保留得到的上清液和沉淀物；再将所述上清液采用800-1000目(优选为800目)的滤网进行过滤处理后，保留滤液。
示例性地，上述灵芝孢子粉原料与去离子水按重量比可以为1：3、1：4、1：5、1：6等中任意值或任意两者之间的范围，上述研磨的遍数可以为2、3、4等中任意值或任意两者之间的范围，上述离心转速可以为4000rpm、5000rpm、6000rpm、8000rpm、10000rpm等中任意值或任意两者之间的范围，上述离心时间可以为10min、20min、30min、40min等中任意值或任意两者之间的范围，上述滤网的目数可以为800、850、900、950、1000等中任意值或任意两者之间的范围。
分步骤二、第二级研磨分离：
将上述沉淀物与去离子水按重量比1：(3-6)(优选为1:6)混匀，再次采用纳米级胶体磨进行研磨处理，研磨1-4遍(优选为2遍)，至850目以上，得到第二级研磨后的产物；再将该第二级研磨后的产物用800-1000目(优选为800目)的滤网进行过滤处理，保留滤液。
示例性地，上述沉淀物与去离子水按重量比可以为1：3、1：4、1：5、1：6等中任意值或任意两者之间的范围，上述研磨的遍数可以为2、3、4等中任意值或任意两者之间的范围，上述滤网的目数可以为800、850、900、950、1000等中任意值或任意两者之间的范围。
上述纳米级胶体磨优选采用该纳米胶体磨优选为IKN牌CMS2000型纳米胶体磨，优选购自上海依肯机械设备有限公司。
步骤三、喷雾干燥：
将上述两级研磨后得到的滤液(即为灵芝孢子粉内容物的水溶液)合并在一起，在真空环境下于70-85℃(优选为80℃)进行浓缩处理，得到浓缩液，至原体积的(1/2)-(2/3)(优选为1/2)，再于喷口温度120-130℃(优选为125℃)进行喷雾干燥处理，得到去壳灵芝孢子粉。
该浓缩处理优选采用真空浓缩罐。
示例性地，上述浓缩的温度可以为70℃、75℃、80℃、85℃等中任意值或任意两者之间的范围，上述浓缩液可以为至原体积的1/2、3/5、2/3等中任意值或任意两者之间的范围，上述喷雾干燥的喷口温度可以为120℃、123℃、125℃、128℃、130℃等中任意值或任意两者之间的范围。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于本发明而不用于限制本发明的范围。对外应理解，在阅读了本发明的内容之后，本领域技术人员对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
本实施例的灵芝孢子粉的去壳方法，依次包括以下步骤：
(1)收集灵芝孢子粉。
(2)将该灵芝孢子粉中加入比重水，其中，灵芝孢子粉和比重水(25％的氯化钠溶液)的重量比为1：8，混匀后得到混合物；再将该混合物于室温进行沉淀处理5分钟，得到分层次的混合物，取其中间层；再将该中间层在真空环境下于80℃进行浓缩处理至原体积的3/5，作为灵芝孢子粉原料。
(3)将该灵芝孢子粉原料与去离子水按重量比1：6混匀，采用纳米级胶体磨进行研磨处理，研磨2遍，至850目以上，得到第一级研磨后的产物。
(4)将该第一级研磨后的产物于室温、转速5800rpm进行离心处理30min，分别保留得到的上清液和沉淀物。
(5)取该上清液，采用800目的滤网进行过滤处理后，保留滤液。
(6)取该沉淀物，与去离子水按重量比1：6混匀，采用纳米级胶体磨进行研磨处理，研磨2遍，至850目以上，得到第二级研磨后的产物。
(7)将该第二级研磨后的产物用800目的滤网进行过滤处理，保留滤液。
(8)合并步骤(5)和步骤(7)得到的滤液，该滤液即为灵芝孢子粉内容物的水溶液。
(9)在真空环境下于80℃进行浓缩处理得到浓缩液，至原体积的3/5。
(10)将该浓缩液于喷嘴温度125℃进行喷雾干燥处理，得到去壳灵芝孢子粉。
(11)将该去壳灵芝孢子粉用铝箔袋包装，入库储存。
上述去壳灵芝孢子粉在多糖含量4.2-4.5％，三萜含量5-5.8％的前提下，得率为15-20％。
实施例2
本实施例的灵芝孢子粉的去壳方法，依次包括以下步骤：
(1)收集灵芝孢子粉。
(2)将该灵芝孢子粉中加入比重水，其中，灵芝孢子粉和比重水(10％的氯化钠溶液)的重量比为1：10，混匀后得到混合物；再将该混合物于室温进行沉淀处理5分钟，得到分层次的混合物，取其中间层；再将该中间层在真空环境下于70℃进行浓缩处理至原体积的1/2，作为灵芝孢子粉原料。
(3)将该灵芝孢子粉原料与去离子水按重量比1：3混匀，采用纳米级胶体磨进行研磨处理，研磨4遍，至850目以上，得到第一级研磨后的产物。
(4)将该第一级研磨后的产物于室温、转速4000rpm进行离心处理40min，分别保留得到的上清液和沉淀物。
(5)取该上清液，采用1000目的滤网进行过滤处理后，保留滤液。
(6)取该沉淀物，与去离子水按重量比1：3混匀，采用纳米级胶体磨进行研磨处理，研磨2遍，至850目以上，得到第二级研磨后的产物。
(7)将该第二级研磨后的产物用1000目的滤网进行过滤处理，保留滤液。
(8)合并步骤(5)和步骤(7)得到的滤液，该滤液即为灵芝孢子粉内容物的水溶液。
(9)在真空环境下于70℃进行浓缩处理得到浓缩液，至原体积的1/2。
(10)将该浓缩液于喷嘴温度120℃进行喷雾干燥处理，得到去壳灵芝孢子粉。
(11)将该去壳灵芝孢子粉用铝箔袋包装，入库储存。
上述去壳灵芝孢子粉在多糖含量4.2-4.5％，三萜含量5-5.8％的前提下，得率为15-20％。
实施例3
本实施例的灵芝孢子粉的去壳方法，依次包括以下步骤：
(1)收集灵芝孢子粉。
(2)将该灵芝孢子粉中加入比重水，其中，灵芝孢子粉和比重水(25％的氯化钠溶液)的重量比为1：11，混匀后得到混合物；再将该混合物于室温进行沉淀处理10分钟，得到分层次的混合物，取其中间层；再将该中间层在真空环境下于85℃进行浓缩处理至原体积的2/3，作为灵芝孢子粉原料。
(3)将该灵芝孢子粉原料与去离子水按重量比1：4混匀，采用纳米级胶体磨进行研磨处理，研磨3遍，至850目以上，得到第一级研磨后的产物。
(4)将该第一级研磨后的产物于室温、转速10000rpm进行离心处理10min，分别保留得到的上清液和沉淀物。
(5)取该上清液，采用900目的滤网进行过滤处理后，保留滤液。
(6)取该沉淀物，与去离子水按重量比1：4混匀，采用纳米级胶体磨进行研磨处理，研磨2遍，至850目以上，得到第二级研磨后的产物。
(7)将该第二级研磨后的产物用1000目的滤网进行过滤处理，保留滤液。
(8)合并步骤(5)和步骤(7)得到的滤液，该滤液即为灵芝孢子粉内容物的水溶液。
(9)在真空环境下于85℃进行浓缩处理得到浓缩液，至原体积的2/3。
(10)将该浓缩液于喷嘴温度130℃进行喷雾干燥处理，得到去壳灵芝孢子粉。
(11)将该去壳灵芝孢子粉用铝箔袋包装，入库储存。
上述去壳灵芝孢子粉在多糖含量4.2-4.5％，三萜含量5-5.8％的前提下，得率为15-20％。
测试例：
本测试例是检测本发明实施例1-3中去壳灵芝孢子粉的得率、多糖含量、三萜含量。
实施例1-3中，去壳灵芝孢子粉在多糖含量4.2-4.5％，三萜含量5-5.8％的前提下，得率为15-20％。
(一)上述得率的计算方式为：(步骤(10)中喷雾干燥后得到的去壳灵芝孢子粉的重量/步骤(1)中收集到灵芝孢子粉的重量)×100％
(二)上述多糖含量的测定方法如下：
A.1、方法提要：
苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，糠醛与苯酚缩合成有色化合物。用分光光度法在合适的波长处测定多糖含量。
A.2、仪器：
(1)离心机：3000r/min，(2)50ml、100ml容量瓶、10ml离心管、10ml具塞玻璃管，(3)分光光度计，(4)水浴锅，(5)电加热板，(6)十万分之一电子天平。
A.3、试剂：(1)无水葡萄糖，(2)苯酚，(3)硫酸，(4)无水乙醇。
A.4、测定步骤：
(1)对照品溶液：取105℃干燥至恒重的葡萄糖约80mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中约含无水葡萄糖0.7mg)。
(2)标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.0ml.1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml、4.0ml，分别置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取上述各溶液2ml，置具塞试管中，分别加临用新制的4％苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入硫酸7.0ml，摇匀。于40℃水浴中保温30分钟，取出，置冰水浴中放置5分钟，取出，以第一份为空白，依照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录IVA)，在485nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(3)测定法：取本品约0.3g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加水50ml，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用水补足减失重量，摇匀，离心15分钟(每分钟3000转)，精密量取上清液2ml，加无水乙醇8ml，搅拌，离心15分钟(每分钟3000转)，取沉淀加水溶解，置100ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“加临用新制的4％苯酚溶液1ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中多糖重量(μg)，计算，即得。
A.5、计算：
式中：A——每100克样品中含水溶性多糖的含量；Cx——为供试品中多糖的浓度(ug/ml)；W——为供试品的称量(g)。
(三)上述三萜含量的测定方法如下：
(1)对照品溶液的配制：取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；
(2)标准曲线的绘制：精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，分别置于15ml具塞试管中，挥干，放冷，精密加入新配制的香草醛冰醋酸溶液(精密称取香草醛0.5g，加冰醋酸使溶解成100ml，即得)0.2ml、高氯酸0.8ml，摇匀，在70℃水浴中加热15分钟，立即置冰浴中冷却5分钟，取出，精密加入乙酸乙酯4ml，摇匀，以相应试剂为空白，依照紫外-可见分光光度法(2010年版药典一部附录VA)，在546nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线；
(3)待测液的配制：将去壳灵芝孢子粉水溶液(精确称取上述去壳灵芝孢子粉，用蒸馏水配制成为5％的水溶液)过滤，滤液置100ml的容量瓶中，用适量蒸馏水，分别洗涤滤器和滤渣，洗液并入上述容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，再精密量取0.2ml，置于15ml具塞试管中，蒸干，放冷，精密加入新配制的香草醛冰乙酸(精密称取香草醛0.5g，加冰乙酸使溶解成10ml即得)0.2ml及高氯酸0.8ml，摇匀，在70℃水浴中加热15分钟，取出，立即置于冰浴中冷却5分钟，取出，精密加入乙酸乙酯4ml，摇匀，得到待测液；
(4)三萜含量的测定：精密量取0.2ml水，置于15ml具塞试管中，蒸干，放冷，精密加入新配制的香草醛冰乙酸(精密称取香草醛0.5g，加冰乙酸使溶解成10ml即得)0.2ml及高氯酸0.8ml，摇匀，在70℃水浴中加热15分钟，取出，立即置于冰浴中冷却5分钟，取出，精密加入乙酸乙酯4ml，即得空白对照液；以上述空白对照液为空白，依照紫外-可见分光光度法测定上述待测液在546nm波长处的吸光度。根据标准曲线读出待测液中齐墩果酸的含量，三萜的含量按齐墩果酸计。