肽的组合物及其制备方法与流程
本申请是申请号为200980121295.5、进入中国国家阶段日期为2010年12月07日、国际申请号为pct/us2009/002842、国际申请日为2009年5月7日的专利申请的分案申请。
相关申请
本申请要求2008年5月7日提交的美围临时专利申请序列号61/051,038的35u.s.c.§119(e)下的权益，所述公开全文援引加入本文。
本发明一般地涉及肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的组合物，及其制备方法。
背景技术：
各种生物活性的肽、多肽和蛋白已经被广泛地用于医学治疗。对于大多数的医学治疗，需要向动物或人类运送持续水平的生物活性肽或蛋白以提供稳定的治疗作用。此外，还需要将生物活性肽或蛋白储存长的一段时间并仍旧保持它们的活性。然而，许多天然存在的和合成的肽和蛋白和它们的类似物显示了形成凝胶、聚集体、原纤维(fibril)、二聚体、其他聚合物、凝结物等的趋势。在一些情况中，所形成的物质能够恢复回到活性单体形式。在其他情况中，所述改变的状态可能是永久的并表现为降解的状态。一些示例性生物活性肽包括胰岛素、胰高血糖素样肽(glp-1)和促性腺激素释放激素(gnrh)类似物。肽的不稳定性已经成为制备、加工、储存和运输这些肽的重大障碍。
迄今为止，已经发现一些方法可以用于稳定肽或蛋白的溶液。例如，美国专利第6,124,261号描述了可以用于稳定肽的非水性极性质子惰性肽制剂。在另一个实例中，柠檬酸盐缓冲剂可以用于降低脂肪酸酰化的蛋白的胶凝。参见美国专利第5,631,347号。
然而，由于生物活性肽和蛋白的多样性，持续地需要发现具有改善的稳定性的新的肽或蛋白的组合物和制备肽或蛋白的组合物的方法。
技术实现要素：
本发明提供包含治疗有效量的至少一种肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物和足量的用于改善所述肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物在溶液中的稳定性的至少一种稳定剂的组合物，其中至少一种稳定剂为中链脂肪酸盐、或酯、醚、或中链脂肪酸的衍生物，并具有约4至约20个碳原子的碳链长度，或者为表面活性剂。在一些实施方案中，至少一种肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物为胰岛素或其类似物或衍生物。在一个实施方案中，至少一种肽、多肽、蛋白、及其类似物或衍生物为胰高血糖素样肽(glp)或其类似物或衍生物。在另一个实施方案中，稳定剂选自由辛酸钠、癸酸钠和月桂酸钠组成的组中。
根据本发明的另一方面，提供了用于制备至少一种肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的组合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括将肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物与足量的用于改善所述肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的稳定性的至少一种稳定剂混合，且所述稳定剂为中链脂肪酸盐、或酯、醚、或中链脂肪酸的衍生物且具有约4至约20个碳原子的碳链长度。在一个实施方案中，所述稳定剂为具有约8至约14个碳原子的碳链长度的中链脂肪酸盐。
附图说明
以下附图构成本发明说明书的一部分并被包括以进一步说明本发明的某些方面。通过参考这些附图中一个或多个并结合本文给出的具体实施方案的详细描述可以更好地理解本发明。
图1为描述制备不同acyline批次的表。
图2显示不同acyline批次在丙二醇中的9％和16.7％的acyline样品的外观。
图3显示不同acyline批次在水中的0.5％和1％的acyline样品的外观。
图4(a)显示不同acyline批次的5mg和10mg剂量的acyline微乳剂的外观
图4(b)显示微乳剂的制剂。
图5图示说明含有1％和0％吐温80的0.1mg/ml的acyline样品的胶凝的对比结果。
图6图示说明含有5mg/ml、1mg/ml、0.1mg/ml和1％吐温80的0.1mg/ml的acyline样品的胶凝的对比结果。
图7图示说明含有1％和1mg/ml吐温80的0.1mg/ml和0.01mg/ml的acyline样品的胶凝的对比结果。
图8图示说明含有0.1％，0.5％和1％吐温80的0.01mg/ml的acyline样品的胶凝的对比结果。
图9图示说明癸酸钠的浓度和acyline的胶凝之间的相互关系。
图10(a)说明微乳剂1-55％capmulmcm的制剂。图10(b)说明微乳剂2-45％capmulpg-8的制剂。图10(c)说明微乳剂3-55％capmulmcmc10的制剂。
图11图示说明acyline的不同配方的相对生物利用度的对比结果。
图12图表说明了(1)肠溶片剂10mgacyline对比不含表面活性剂的acyline样品和(2)肠溶片剂10mgacyline对比含有癸酸钠样品的5mgacyline的相对生物利用度的对比结果。
图13(a)说明了含有或不含癸酸钠的胰岛素制剂的胰岛素回收百分数的相互关系。图13(b)说明了自含有癸酸的胰岛素制剂的胰岛素回收百分数。
具体实施方式
现在将根据本文所提供的说明和方法学更为详细地描述本发明的上述方面和其他方面。应当理解，所述发明可以以不同形式的方式实施，且不应该理解为限于本文陈述的实施方案。相反，提供这些实施例以使此公开相对于本领域技术人员而言将是全面和完整的，并完全地表达所述发明的范围。
本文所提到的所有专利、专利申请和公开都全文援引加入本文。在术语冲突的情况下，以本说明书为准。
本发明说明书中所用的术语仅是为了描述具体的实施方案，而不是为了限制本发明。除非上下文清楚地另外指出，否则本发明实施方案的说明书和所附权利要求中所用的单数形式意在还包括复数形式。同样，如本文所用的，“和/或”指并包括相关的所列出项目的一种或多种的任意和所有可能的组合。此外，本文所用的术语“约”当指可测量的值如化合物的量、剂量、时间、温度等时，意指包括所述量的20％、10％、5％、1％、0.5％或甚至0.1％的变化。除非有不同的定义，否则本说明书中所用的所有术语，包括技术和科学术语，都具有本发明所属领域的技术人员通常理解普通含义。
本文所使用的“醇”指其中一个或多个羟基(oh)基团代替氢(h)原子连接到碳(c)原子上的有机化合物。在一些实施方案中，醇包含1-6个碳原子。而在其他实施方案中，醇包含1-4个碳原子。示范性的醇包括但不限于甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、戊醇、己醇。
本文所使用的“胶凝”指所关注的化合物经历聚集以形成原纤维、二聚体、较长的聚合物、凝结物或可导致形成胶体结构或凝胶的结构。本申请中所用的混合物的粘度可以施用至水溶液或实体中的所关注的化合物。
“胶凝”可能以不同程度发生，且可能以常规工具不能检测的方式发生。例如，其可能不增加溶液的粘性或改变溶液的流动特性。然而，由胶凝形成的物质(以后称为“凝胶”)可以通过物理方法如过滤而除去，并因此可以通过本领域技术人员已知的分析技术进行检测。在不同给药形式的开发中，凝胶的存在可能导致重大问题。例如，当作为药物物质制备技术一部分处理胶凝的系统以获得药物粉末时，在所述处理过程中可能形成干凝胶。本文所用的“干凝胶”为自胶凝的系统除去液体后由凝胶形成的固体。由含有干凝胶的胶凝的系统获得的粉末可能具有与由不含胶凝的物质的溶液获得的粉末完全不同的特性。在一些情况下，所获得的粉末失去了生物活性。因此，在药物物质的处理阶段或在制备剂型的阶段或储存阶段，凝胶的形成可能潜在地导致有害的作用。
导致凝胶形成的团聚(agglomeration)或聚并(coalescence)的程度可以通过本领域技术人员熟知的各种方法进行测量，例如微过滤或粗过滤(macrofiltration)随后进行滤液分析，离心随后进行上清液分析，或不同的光吸收或衍射方法，包括那些采用可见光或uv光的方法，或基于激光的方法。也可以使用测量液体的物理特性如表面张力、冰点下降、粘性或其他依数性的方法。干凝胶形成的程度可以通过将物质分散在水中并使用本文所描述的技术而进行测量，或通过本领域技术人员已知的方法直接测量粉末，所述方法包括x-射线粉末衍射、ir光谱，或可以在粉末物质上进行的本领域已知的其他方法。
本文所用的术语“降低胶凝”指扰乱、阻止或消除化合物的凝胶形成。在胶凝可逆的情况下，术语“降低胶凝”还指使凝胶回复至保持其生物学活性的化合物的单体形式。本文所用的术语“抗胶凝剂”指当使用足量的抗胶凝剂时，可以抑制至少50％的所关注的化合物的胶凝的试剂、化合物、组合物或它们的组合。在一些实施方案中，当使用足量的抗胶凝剂时，抗胶凝剂可以抑制至少80％的所关注的化合物的胶凝。在一些实施方案中，当使用足量的抗胶凝剂时，抗胶凝剂可以抑制至少90％的所关注的化合物的胶凝。
本文所用的“治疗有效量”或“治疗可接受的量”指将在对象中引起治疗上有利的反应。所述治疗上有利的反应可以提供提供对象中的至少一种临床症状的一些减轻、缓解或降低。本领域技术人员将理解，治疗上有利的反应不需要是完全的或治愈的，只需为对象提供一些益处即可。在一些实施方案中，对象是动物。在一些实施方案中，对象是人类。
本文所用的术语“与水混溶的溶剂”指能够与水混合形成溶液的溶剂。与水混溶的溶剂可以被用于形成亲水相。
本发明提供的组合物包含治疗有效量的至少一种肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物和足量的能够改善所述肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的稳定性的至少一种稳定剂，基本上由以上成分组成，或由上述成分组成。本文所用的“稳定剂”为能够改善本文所描述的肽、多肽、蛋白、及其类似物或衍生物的稳定性的试剂。
在一些实施方案中，至少一种稳定剂为中链脂肪酸盐、或中链脂肪酸的酯、醚或衍生物，并具有约4至约20个碳原子的碳链长度。在一些实施方案中，至少一种稳定剂为表面活性剂。
本发明提供了保持本文所描述的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的稳定性的组合物、以有足够时间用于储存、处理和/或用于治疗给药。测量稳定性的一种方法为测量肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的在具体条件下被保留的百分数。本文所用的术语“肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物被保留”指在一段时间之后，所述肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物不形成凝胶、聚集体、原纤维、二聚体、其他聚合物、凝结物，而是保持其单体形式或保持其生物活性。在一个实施方案中，将所述组合物在约37℃下保持至少约24小时之后，本发明组合物中保留至少约50％的所述肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物。在一些实施方案中，将所述组合物在约37℃下保持至少约24小时之后，本发明组合物中保留至少约80％的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物。在一些实施方案中，将所述组合物在约37℃下保持至少约24小时之后，本发明组合物中保留至少约90％的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物。在一些实施方案中，将所述组合物在约37℃下保持至少约24小时之后，本发明组合物中保留至少约95％的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物。在一些实施方案中，当肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的胶凝降低时，稳定性改善。
本文描述的组合物可以直接用于储存、处理或给药。或者，所述组合物还可以用于与适合的介质(如，溶剂、微乳剂或固体块）混合用于储存、处理或给药。如本文所述，在其中使用介质的情况下，改善了肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物在介质中的稳定性。
在一些实施方案中，稳定剂为抗胶凝剂。在一个实施方案中，本发明提供包含治疗有效量的一种或多种肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物和足量的用于降低所述肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的胶凝的至少一种抗胶凝剂的组合物。
在一个实施方案中，组合物中的稳定剂和肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的溶出率基本相同。
i.肽、多肽、蛋白、其类似物和衍生物。
本发明可以应用于具有聚集、二聚、聚合、凝结、胶凝或形成原纤维的趋势的任何肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物。这些术语中包括任意肽、多肽或蛋白的类似物、衍生物和药学上可接受的盐。本文所用的所述“聚集、二聚、聚合、凝结、胶凝或形成原纤维的趋势”指所关注的化合物的至少50％经历聚集以形成原纤维、二聚体、聚合物、凝结物、或在将系统静置一段时间后(例如约至少24小时)，在某温度下(例如37℃)可能导致在所述系统中形成胶体结构或凝胶的结构。
在一些实施方案中，至少一种肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物为胰岛素或其类似物或衍生物。
在一个实施方案中，至少一种肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物为胰高血糖素样肽(glp)、或其类似物或衍生物。在另一个实施方案中，至少一个glp选自由glp-1、glp-1类似物、其衍生物、glp-2、glp-2类似物、其衍生物、和毒蜥外泌肽-4、其类似物和衍生物组成的组中。
更多示例性的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物包括但不限于gnrh激动剂和拮抗剂、生长抑素、acth、促肾上腺皮质激素释放因子、血管紧张素、降钙素、抑胃肽、生长激素、生长激素释放因子、垂体腺苷酸、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽-3、环化酶激活肽、促胰液素、胃肠素(enterogastrin)、生长抑素、生长激素、生长调节素、甲状旁腺激素、血小板生成素、促红细胞生成素、下丘脑释放因子、催乳素、促甲状腺素、内啡肽、脑啡肽、加压素、催产素、阿片样物质及其类似物、超氧化物歧化酶、干扰素、天门冬酰胺酶、精氨酸酶、精氨酸脱氨酶、腺苷脱氨酶、核糖核酸酶、fvii、fxiii、fvii和fxiii的混合物、il-20、il-21、il-28a、il-29、il-31、其类似物和衍生物。
在一些实施方案中，至少一种肽、多肽、蛋白、类似物或衍生物包括各种具有胶凝趋势的gnrh相关化合物。本文所用的“胶凝趋势”指化合物的至少50％经历聚集以形成原纤维、二聚体、聚合物、凝结物、或在将系统静置一段时间后(例如至少约2小时)，在某温度(例如37℃)下，可能导致在所述系统中形成胶体结构或凝胶的结构。本文所用的gnrh相关化合物包括gnrh拮抗剂和gnrh激动剂两者。在一些实施方案中，本发明可以用于gnrh拮抗剂。在一些实施方案，本发明包括但不限于以下gnrh拮抗剂：acyline(ac-d2nal-d4cpa-d3pal-ser4aph(ac)-d4aph(ac)-leu-ilys-pro-dala-nh2)、乙酰基-β-[2-萘基]-d-ala-d-p-氯-phe-β-[3-吡啶基]-d-ala-ser-nε-[烟酰基]-lys-nε-[烟酰基]-d-lys-leu-nε-[异丙基]-lys-pro-d-α-nh2(本文也称为安替肽(antide))、乙酰基-d2nall、d4c1phe2，d3pal3，arg5，dglu6(aa)(本文也称为nalglu)、乙酰基-d2nal-d4ciphe-d3pal-ser-aph(ac)-d-aph(ac)-leu-lys(lpr)-pro-d-ala-nh2、阿巴瑞克(abarelix，specialtyeuropeanpharma，dusseldorf，德国)、nal-lys、萘瑞林(synarel，searlepeapack，n.j.)、加尼瑞克(ganirelix，orgalutron/antagon)(organan，westorange，n.j.)、西曲瑞克i(cetrorelixi，aeternazentarisinc，frankfurt，德国)、西曲肽(cetrotide)、阿察林b(azalineb)、在5位和6位引入p-脲基-苯基丙氨酸的新一代长效ganrh类似物(如地加瑞克(degarelix))、fe200486、ac-d2nal-d4cpa-d3pal-ser-4aph(l-氢化乳清酸)-d4aph(氨基甲酰(carbarnoyl))leu-ilys-pro-dala-nh2(其乙酸盐为fe200486)、ac-d2nal-d4cpa-d3pal-ser-4aph(atz)-d4aph(atz)-leu-ilys-pro-dala-nh2，其中atz为3’-氨基-1h-1’，2’，4’，-三唑-5’-基、以及美国专利第5,506,207、5,821,230、5,998,432、6,156,772、6,156,767、6,150,522、6,150,352、6,147,088、6,077,858、6,077,847、6,025,366、6,017,944、6,004,984、6,214,798和6,875,843号中描述的拮抗剂。在一些实施方案中，本发明的gnrh拮抗剂在离子的存在下具有胶凝趋势。在一些实施方案中，至少一种gnrh拮抗剂选自由acyline、阿巴瑞克、阿察林b、西曲瑞克、加尼瑞克、替维瑞克(teverelix)、地加瑞克、安替肽、orntide和美国专利第7,098,305号中描述的gnrh拈抗剂。
在一个实施方案中，至少一种gnrh拮抗剂选自由阿巴瑞克、西曲瑞克、地加瑞克、加尼瑞克、及其药学上可接受的盐组成的组中。
整个说明书和权利要求书中所用的术语“阿巴瑞克”指具有式i结构的化合物：
式i
式i的iupac名称为乙酰基-d-β-萘基丙氨酰-d-4-氯苯基丙氨酰-d-3-吡啶基丙氨酰-l-丝氨酰-l-n-甲基-酪氨酰-d-天冬酰胺酰-l-亮氨酰-l-n(e)-异丙基-赖氨酰-l-脯氨酰-d-丙氨酰-酰胺。术语“阿巴瑞克”包括式i的化合物、其药学上可接受的盐、和这些的平衡混合物。术语“阿巴瑞克”还包括式i化合物及其药学上可接受的盐的晶体、水合的或溶剂化的晶体、和无定形形式。
整个说明书和权利要求书中所用的术语“西曲瑞克”指具有式ii结构的化合物：
式ii
式ii的iupac名称为乙酰基-d-3-(2’-萘基)-丙氨酸-d-4-氯苯基丙氨酸-d-3-(3’-吡啶基)-丙氨酸-l-丝氨酸-l-酪氨酸-d-瓜氨酸-l-亮氨酸-l-精氨酸-l-脯氨酸-d-丙氨酸-酰胺。术语“西曲瑞克”包括式ii化合物、其药学上可接受的盐、和这些的平衡混合物。术语“西曲瑞克”还包括式ii化合物及其药学上可接受的盐的晶体、水合的或溶剂化的晶体、和无定形形式。
整个说明书和权利要求书所用的术语“地加瑞克”指具有式iii结构的化合物：
式iii
式iii的iupac名称为n-乙酰基-3-(萘-2-基)-d-丙氨酰-4-氯-d-苯基丙氨酰-3-(吡啶-3基)-d-丙氨酰-l-丝氨酰-4-((((4s)-2，6-二氧代六氢嘧啶-4-基)羰基)氨基)-l-苯基丙氨酰-4-(氨基甲酰氨基)-d-苯基丙氨酰-l-亮氨酰-n6-(1-甲基乙基)-l-赖氨酰-l-脯氨酰-d-丙氨酰胺。还被称为fe-200486。术语“地加瑞克”包括式iii化合物、其药学上可接受的盐、和这些的平衡混合物。术语“地加瑞克”还包括式iii化合物及其药学上可接受的盐的晶体、水合的或溶剂化的晶体、和无定形形式。
整个说明书和权利要求书所使用的术语“加尼瑞克”指具有式iv结构的化合物。
式iv的iupac名称为(2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-乙酰氨基-3-萘-2-基丙酰]氨基]-3-(4-氯苯基)丙酰]氨基]-3-吡啶-3-基丙酰]氨基]-3-羟基丙酰]氨基]-3-(4-羟基苯基)丙酰]氨基]-6-[双(乙基氨基)亚甲基氨基]己酰]氨基]-4-甲基戊酰]氨基]-6-[双(乙基氨基)亚甲基氨基]己酰]-n-[(2r)-1-氨基-1-氧代丙-2-基]吡咯烷-2-甲酰胺。术语“加尼瑞克”包括式iv化合物、其药学上可接受的盐、和这些的平衡混合物。术语“加尼瑞克”还包括iv化合物及其药学上可接受的盐的晶体、水合的或溶剂化的晶体、和无定形形式。
在一些实施方案中，本发明可以用于具有胶凝趋势的gnrh激动剂。示例性的gnrh激动剂包括但不限于组氨瑞林(histerelin)、亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)。
所述术语“gnrh相关化合物”、“gnrh拮抗剂”和“gnrh激动剂”包括其所有形式，包括立体异构体、对映异构体、非对映异构体、外消旋混合物、及其衍生物例如盐、酸、酯等等。所述化合物可以以任何适当的相态提供，包括固体、液体、溶液、悬浮液等等。当以固体颗粒形式提供时，所述颗粒可以为任意适当的尺寸或形态，且可以呈现为一种或多种晶体、半晶体和/或无定形形式。
本发明中所用的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物可以以足够引起治疗作用的量存在，且当应用时，可以基本地以一种光学纯对映异异构体的形式或以混合物形式、外消旋形式或其他形式存在。本领域技术人员将理解，组合物中所用的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的实际量将取决于所讨论的选定的化合物的效力。
本文所描述的肽、多肽、蛋白、类似物或衍生物可以通过商业来源获得或可以根据本领域技术人员已知的方法制备。本发明所应用的gnrh拮抗剂可以通过使用本领域技术人员已知的方法或本发明中描述的方法制备。例如，acyline可以根据美国专利第5,506,207号中描述的方法制备。
ii稳定剂
本发明中所用的稳定剂的量可以显著地变化。例如，所述量可以取决于单独的稳定剂、溶剂系统和组合物中的其他组分。通常，稳定剂的量应足以改善系统中的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的稳定性，以使得所述组合物在37℃下静置至少约24小时后，至少50％的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物被保留。在一些实施方案中，稳定剂的量应足以改善系统中的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的稳定性，以使得所述组合物在37℃下静置至少约24小时后，至少80％的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物被保留。在其他实施方案中，抗胶凝剂的量应足以改善系统中的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的稳定性，以使得所述组合物在37℃下保持至少约24小时后，至少90％的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物被保留。在一些实施方案中，组合物中稳定剂的浓度至少等于或大于组合物中稳定剂的cmc(临界胶束浓度)。
a.中链脂肪酸及其衍生物
在一些实施方案中，至少一种稳定剂为中链脂肪酸盐、或中链脂肪酸的酯、醚或衍生物，且具有4至20个碳原子的碳链长度。在一些实施方案中，至少一种稳定剂为中链脂肪酸盐、或中链脂肪酸的酯、醚或衍生物，且具有6至20个碳原子的碳链长度。在一些实施方案中，所述碳链长度为8至14。在一些实施方案中，至少一种稳定剂为中链脂肪酸盐，且具有8至14个碳原子的碳链长度。在一些实施方案中，至少一种稳定剂为中链脂肪酸盐、或中链脂肪酸的酯、醚或衍生物，且具有6至20个碳原子的碳链长度；条件是(i)其中稳定剂为中链脂肪酸的酯，所述6至20个碳原子的链长度是指羧酸根部分的链长，且(ii)其中稳定剂为中链脂肪酸的醚，至少一个烷氧基基团具有6-20个碳原子的碳链长度。在另一个实施方案中，至少一种稳定剂为中链脂肪酸盐、或中链脂肪酸的酯、醚，或衍生物，其在室温下为固体，且具有8至14个碳原子的碳链长度；条件是(i)其中稳定剂为中链脂肪酸的酯，所述8至14个碳原子的链长是指羧酸根部分的链长，且(ii)其中稳定剂为中链脂肪酸的醚，至少一个烷氧基团具有8至14个碳原子的碳链长度。在一些实施方案中，至少一种稳定剂为中链脂肪酸的钠盐，所述中链脂肪酸具有8至14个碳原子的碳链长度。在一些实施方案中，所述稳定剂在室温下为固体。在另一个实施方案中，至少一种稳定剂选自由辛酸钠、癸酸钠和月桂酸钠组成的组中。在一个实施方案中，至少一种稳定剂为癸酸钠。
b.表面活性剂
在一些实施方案中，至少一种稳定剂为表面活性剂。本文所用的术语“表面活性剂”指能够降低其所溶于的介质的表面张力和/或与其他相的界面张力，并因此在液/气和/或其他界面处被正吸附的试剂。本发明所用的表面活性剂包括双离子试剂，即阳离子、阴离子或两性离子和非离子试剂、或它们的混合物。
阳离子表面活性剂的实例包括但不限于，苯扎氯氨、联十六烷基氯化铵、十六烷基二甲基乙基溴化铵、氯化十六烷基吡啶和上述表面活性剂的盐。
阴离子表面活性剂的实例包括但不限于硬脂酰乳酸钠、氢化卵磷脂、月桂基硫酸钠、c8-32脂肪酸和其盐；胆酸和其衍生物如去氧胆酸根和其盐，熊去氧胆酸、和牛磺胆酸；酒石酸的c8-56二酯；磷脂如磷脂酸和磷脂酰丝氨酸；乳酸的c5-29单酯；c8-20磺酸盐、包括烷基-、烯烃-、和烷基芳基-衍生物；三癸基和十二烷基苯磺酸；和c5-33肌氨酸和甜菜碱衍生物。
两性离子表面活性剂的实例包括但不限于磷脂如卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、十二烷基甜菜碱、十二烷基二甲基胺氧化物，椰油酰胺丙基甜菜碱和可可两性甘氨酸(cocoamphoglycinate)。
非离子表面活性剂的实例包括但不限于硬脂醇聚醚；聚乙二醇(peg)；聚山梨酸酯(如吐温-80)；鲸蜡硬脂基葡萄糖苷；各种可商购的山梨聚糖和它们的衍生物例如山梨聚糖六硬脂酸酯乙氧基化物eo6摩尔、山梨聚糖异硬脂酸酯、山梨聚糖月桂酸酯、山梨聚糖单异硬脂酸酯乙氧基化物20摩尔、山梨聚糖单月桂酸酯乙氧基化物20摩尔、山梨聚糖单油酸酯乙氧基化物eo20摩尔、山梨聚糖单棕榈酸乙氧基化物eo20摩尔、山梨聚糖单硬脂酸酯乙氧基化物eo20摩尔，山梨聚糖单硬脂酸酯乙氧基化物eo6摩尔、山梨聚糖油酸酯、山梨聚糖棕榈酸酯、山梨聚糖倍半油酸酯、山梨聚糖硬脂酸酯、山梨聚糖四油酸酯乙氧基化物eo30摩尔、山梨聚糖四油酸酯乙氧基化物eo40摩尔、山梨聚糖四油酸酯乙氧化物eo6摩尔、山梨聚糖四硬脂酸酯乙氧基化物eo60摩尔、山梨聚糖三油酸酯乙氧基化物eo20摩尔、山梨聚糖三油酸酯、山梨聚糖三硬脂酸酯乙氧基化物eo20摩尔、和山梨聚糖三硬脂酸酯；乙氧基化蓖麻油、c5-29单甘油酯和其乙氧基化的衍生物；c15-60二甘油酯及其具有1至90个poe基团的聚氧乙烯衍生物；长链脂肪酸(具有16个及以上的碳原子的脂肪酸)的c10-40酯(醇中具有10至40个碳原子)；c10-40醇；固醇类如胆固醇、麦角固醇和其c2-24酯；c8-96乙氧基化脂肪酯；c14-130蔗糖脂肪酯；和其具有0至90个poe基团的聚氧乙烯(poe)衍生物，如聚氧乙烯聚糖单油酸酯、山梨糖醇六油酸酯poe(50)。
在一些实施方案中，至少一种表面活性剂选自由以下组中：月桂基硫酸钠、聚山梨酯表面活性剂(如聚山梨酯20(吐温20)，聚山梨酯80(吐温80)、山梨聚糖表面活性剂、山梨聚糖单月桂酸酯、和聚乙氧基化蓖麻油和它们的组合。在一些实施方案中，至少一种表面活性剂包括聚山梨酯。
iii其他赋形剂
根据本发明的一些方面，本发明的组合物进一步包括一种或多种赋形剂。本领域技术人员可以理解，赋形剂的正确选择和它们相对应的量将在某种程度上取决于最终的剂型。在一些实施方案中，赋形剂选自由速率控制聚合物物质、稀释剂、润滑剂、崩解剂、增塑剂、抗粘剂、乳浊剂、颜料、调味剂组成的组中。
本发明所用的术语“速率控制聚合物物质”包括亲水性聚合物、疏水性聚合物、和亲水性和/或疏水性聚合物的混合物，其能够控制或延缓药物化合物如gnrg相关化合物自本发明的固体口服剂型的释放。适宜的速率控制聚合物物质包括选自以下组中的那些：羟基烷基纤维素如羟基丙基纤维素和羟基丙基甲基纤维素；聚氧乙烯；烷基纤维素如乙基纤维素和甲基纤维素；羧甲基纤维素；亲水纤维素衍生物；聚乙二醇；聚乙烯基吡咯烷酮、乙酸纤维素、乙酸纤维素丁酸酯；乙酸纤维素邻苯二甲酸酯；乙酸纤维素偏苯三酸酯；聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯；羟基丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯；羟基丙基甲基纤维素乙酸酯琥珀酸酯、聚乙烯基乙缩醛二乙基氨基醋酸酯；聚(烷基甲基丙烯酸酯)和聚(乙酸乙烯)。其他适当的疏水性聚合物包括由丙烯酸或甲基丙烯酸和其各自的酯衍生的聚合物和/或共聚物、玉米醇溶蛋白、蜡、虫胶和氢化植物油。在一个实施方案中，速率控制聚合物包括由丙烯酸或甲基丙烯酸和它们的各自的酯衍生的聚合物或由丙烯酸或甲基丙烯酸和它们各自的酯衍生的共聚物。在另一个实施方案中，速率控制聚合物包括羟基丙基甲基纤维素(hpmc)。
在一些实施方案中，至少一种速率控制物质选自以下组中聚丙烯酸、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸和聚甲基丙烯酸酯聚合物如以商品名
在一些实施方案中，本发明可以进一步包含稀释剂。本发明可以使用任何适宜的稀释剂。示例性的稀释剂包括但不限于，药学上可接受的惰性填充剂如微晶纤维素、乳糖、磷酸氢钙、糖类和/或它们的混合物。稀释剂的实例包括微晶纤维素如以商标avicel(fmccorp.，philadelphia，pa.)出售的那些，例如，aviceltmph101，aviceltmph102和aviceltmph112；乳糖如乳糖一水合物、无水乳糖和pharmatosedcl21；磷酸氢钙如
在一些实施方案中，本发明的组合物可以进一步包含润滑剂。本发明可以使用任意适当的润滑剂。在一些实施方案中，润滑剂包括对将被压缩的粉末的流动性起作用的试剂。示例性的润滑剂包括但不限于胶体二氧化硅如aerosiltm200，滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、和硬脂酸钙。在一些实施方案中，润滑剂为硬脂酸。
在一些实施方案中，本发明组合物可以进一步包含崩解剂。本发明可以使用任何适当的崩解剂。实例性的崩解剂包括但不限于轻度交联的聚乙烯基吡咯烷酮、玉米淀粉、土豆淀粉、玉米淀粉和改性淀粉，交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羟基乙酸淀粉钠和它们的组合和混合物。在一些实施方案中，所述崩解剂选自交联聚维酮和聚乙烯基吡咯烷酮。
在一些实施方案中，以上所描述的组合物可以进一步包含增强剂。所述增强剂可以是本领域普通技术人员所熟知的任意适当的增强剂。示例性的增强剂包括但不限于中链脂肪酸盐、中链脂肪酸的酯、醚或衍生物，其具有4至20个碳原子的碳链长度。在一些实施方案中，增强剂在室温下为固体。在一些实施方案中，增强剂为中链脂肪酸盐、中链脂肪酸的酯、醚或衍生物，其具有6至20个碳原子的碳链长度。在一些实施方案中，碳链长度为8至14。在一些实施方案中，增强剂为s-环糊精、维生素etpgs、没食子酸酯、交联聚维酮、山梨聚糖酯、泊洛沙姆、或聚氧乙烯乙醇酸化的天然或氢化蓖麻油(
iv.共溶剂系统在制备gnrh相关化合物的过程中的应用
本文所述的gnrh相关化合物可以在共溶剂系统的存在下以降低gnrh化合物的胶凝的方式来制备。在一些实施方案中，制备gnrh相关化合物的最终步骤在共溶剂系统的存在下进行。在一些实施方案中，最终步骤为干燥，所述干燥使用已知的技术如冷冻干燥、盘式干燥、喷雾干燥、流化床干燥或其他本领域技术人员已知的类似技术。
在一些实施方案中，共溶剂系统包含水和至少一种与水混溶的溶剂。与水混溶的溶剂可以选自但不限于：直链或支链的c1-6醇、四氢呋喃、丙酮、乙基甲基酮、甲基异丁基酮、甲基异丙基酮、环己酮、二乙基酮、戊-3酮、环己烷、乙腈、n，n-二甲基甲酰胺、n，n-二甲基乙酰胺、二氧六环、醇、乙二醇、二甘醇二甲醚、单乙二醇二甲醚、乙二醇单甲基醚、二乙二醇、三乙二醇、聚乙二醇和它们的混合物。在某些实施方案中，至少一种与水混溶的溶剂为直链或支链的c1-6醇。示例性的适当的醇包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、仲丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、和己醇。在一些实施方案中，至少一种与水混溶的溶剂选自由甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇和叔丁醇组成的组中。在一些实施方案中，至少一种与水混溶的溶剂选自由甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、乙腈和二氯甲烷组成的组中。在一些实施方案中，本发明可以使用两种或多种与水混溶的溶剂进行。在一些实施方案中，与水混溶的溶剂相对于水的重量比在约1/1000至约99/1的范围内。在一些实施方案中，所述重量比为约3/97至约59/41。
在一些实施方案中，所述方法包括在制备gnrh相关化合物的过程中进一步加入酸。本发明所用的酸包括但不限于乙酸、硫酸、盐酸(hydrochlorideacid)、三氟乙酸、柠檬酸、酒石酸、抗坏血酸、和硼酸等。通常，酸的浓度足够制备gnrh相关化合物的盐。在一些实施方案中，酸的浓度取决于gnrh相关化合物的分子量和其中所用的酸。在一些实施方案中，所述浓度在溶液的约0.5％至约20％的范围内。
v.制备组合物的方法
根据本发明的一些方面，提供了用于制备肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的组合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括将所述肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物和足量的用于改善肽、多肽、蛋白、其类似物和/或衍生物的稳定性的至少一种稳定剂混合。在一些实施方案中，至少一种稳定剂为中链脂肪酸盐、中链脂肪酸的酯、醚或衍生物，并具有约4至约20个碳原子的碳链长度或为表面活性剂。本文所用的术语“混合”指将肽、多肽、蛋白、其类似物和/或衍生物与一种或多种稳定剂接触、组合、反应，和/或用一种或多种稳定剂将肽、多肽、蛋白、其类似物和/或衍生物包衣。在一个实施方案中，“混合”指在组合物中将肽、多肽、蛋白、其类似物和/或衍生物与稳定剂组合。在一个实施方案中，gnrh相关化合物在本文所描述的共溶剂系统的存在下制备。在一些实施方案中，组合物中稳定剂的浓度等于或大于稳定剂的临界胶束浓度。
vi.药物组合物和给药
在一个实施方案中，本发明提供了包含治疗有效量的一种或多种肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物，和足量的用于改善所述肽、多肽、蛋白、、其类似物或衍生物的稳定性的至少一种稳定剂，其中至少一种稳定剂为中链脂肪酸盐、中链脂肪酸的酯、醚或衍生物，并具有约4至约20个碳原子的碳链长度，或为表面活性剂。在另一个实施方式中，药物组合物进一步包含药学上可接受的载体。本文使用的术语“药学上可接受的载体”指任意物质，其本身不是治疗剂，用作用于将活性物质递送至对象的运载体。
本发明的组合物可以适用于口服、非消化道、吸入喷雾剂、局部、直肠、鼻、舌下、口腔、阴道或植入储库给药等的制剂。在一个实施方案中，所述组合物口服、局部、腹腔或静脉给药。本发明组合物的灭菌可注射形式可以为水性的或油性混悬剂。可以使用适当的分散剂或增湿剂和助悬剂根据本领域已知的技术配制这些混悬剂。灭菌可注射制剂还可以是在无毒的非消化道可接受的稀释剂或溶剂中的灭菌可注射溶液剂或混悬剂。在可接受的运载体和溶剂中，可以使用的有水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的不挥发油通常用来作为溶剂或混悬介质。
在一些实施方案中，本发明所用的药物组合物为口服剂型。在一些实施方案中，口服剂型选自片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、颗粒或粉末填充的胶囊剂、液体或半固体填充的胶囊剂、颗粒或粉末填充的扁囊剂、液体、乳剂、微乳剂和能够形成乳剂的任意组合物。在一个实施方案中，口服剂型可以是片剂、多颗粒剂或胶囊剂。在一个实施方案中，本文所描述的中链脂肪酸和其衍生物还可以作为增强剂。
在一些实施方案中，口服制剂为延迟释放剂型，其能够使肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物和稳定剂和/或增强剂在胃中的释放最小化，并因此使其中局部稳定剂的稀释或增强剂的浓度最小化，并在肠中释放肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物和稳定剂或增强剂。在一些实施方案中，口服制剂为延迟释放快速起效剂型。这样的剂型使肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物和稳定剂或增强剂在胃中的释放最小化，并因此使其中局部稳定剂的稀释或增强剂的浓度最小化，但一旦到达肠中适当的部位即快速释放肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物和稳定剂或增强剂，并通过使吸收部位的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物和稳定剂的局部浓度最大化而使低渗透性或难溶的肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物的递送最大化。
在本文所描述的任意实施方案的实例中，控释包衣可以用于施用至最终的剂型(胶囊剂、片剂、多层片剂等)。在一个实施方案中，控释包衣可以包括本文所描述的速率控制聚合物物质。这种包衣物质的溶液特性可以依赖或独立于ph值。
在一些实施方案中，本发明组合物上可以具有肠溶包衣。在一个实施方案中，肠溶包衣包含选自由聚(丙烯酸)、聚丙烯酸酯、聚(甲基丙烯酸)、聚甲基丙烯酸酯、和它们的混合物组成的组中的聚合物。在一些实施方案中，肠溶包衣的组合物可以是片剂或胶囊剂的形式。
本文所用的术语“片剂”包括但不限于立即释放(ir)片剂、缓释(sustainedrelease)(sr)片剂、基质片剂、多层片剂、多层基质片剂、延长释放(extendedrelease)片剂、延迟释放(delayedrelease)片剂和脉冲释放片，其中任意或所有片剂可以任选地用一种或多种包衣物质包衣，所述包衣物质包括聚合物包衣物质如肠溶包衣、速率控制包衣、半渗透包衣等等。术语“片剂”还包括渗透递送系统，其中药物化合物与渗透剂(osmagent)(和任选存在的其他赋形剂)组合，并用半渗透膜包衣，所述半渗透膜限定孔口，药物化合物可以通过其被释放。可以用于本发明实践中的片剂固体口服剂型包括选自由ir片剂、sr片剂、包衣ir片剂、基质片剂、包衣基质片剂、多层片剂、包衣多层片剂、多层基质片剂和包衣多层基质片剂组成的组中的那些。在一些实施方案中，片剂剂型为肠溶包衣片剂剂型。在一些实施方案中，片剂剂型为肠溶包衣的速效片剂剂型。
胶囊剂固体口服剂型可以用于本发明实践中，包括选自由速释胶囊剂、缓释胶囊剂、包衣速释胶囊剂、和包括延迟释放胶囊剂的包衣缓释胶囊剂组成的组中的那些。胶囊剂可以填充有粉末、颗粒、多颗粒、片、半固体、或液体。在一些实施方案中，胶囊剂剂型为肠溶包衣胶囊剂剂型。在一些实施方案中，胶囊剂剂型为肠溶包衣速效胶囊剂剂型。胶囊剂可以由硬明胶、软明胶、淀粉、纤维素聚合物、或现有技术已知的其他物质制成。
本文所用的术语“多颗粒”指多个离散的颗粒、小球、微片、和其混合物或组合。如果口服形式为多颗粒胶囊剂，则这样硬明胶胶囊剂或软明胶胶囊剂可以适当地使用以包含多颗粒。在一些实施方案中，扁囊剂可以适当地使用以包含多颗粒。在一些实施方案中，多颗粒可以用包含速率控制聚合物物质的层进行包衣。在一些实施方案中，本发明的多颗粒口服剂型可以包含具有不同体外和/或体内释放特性的颗粒、小球或微片中的两种或多种群体的混合。例如，多颗粒口服剂型在适宜的胶囊剂中可以包含速释组分和延迟释放组分的混合。
在一些实施方案中，多颗粒和一种或多种辅助赋形剂物质可以被压成片剂形式如多层片剂。在一些实施方案中，多层片剂可以包括两个层，所述两个层含有相同或不同水平的具有相同或不同释放特性的相同活性成分。在一些实施方案中，多层片剂在每层中可以含有不同的活性成分。这样的(单层或多层的)片剂，可任选用控释聚合物包衣以提供额外的控释释放特性。在一些实施方案中，多颗粒制剂包括含有延迟释放快速起效的微片的胶囊剂。在一些实施方案中，多颗粒剂型包括含有速释微片的延迟释放胶囊剂。在一些实施方案中，多颗粒剂型包括含有延迟释放颗粒的胶囊剂。在一些实施方案中，多颗粒剂型包括含有速释颗粒的延迟释放胶囊剂。
本文所用的术语“乳剂”指一种液体在另一种不混溶的液体中的混悬剂或分散体。在一些实施方案中，所述乳剂为水包油或水包油包水乳剂。
本文所用的术语“微乳剂”指疏水相(油状)和亲水相(水状)和表面活性剂形成胶束结构的溶液。这样的分散体随时间过去为澄清的和稳定的。
另外，本文所使用的“乳剂”或“微乳剂”包括亲水性或疏水性液体，其在分别用疏水性或亲水性液体稀释时形成乳剂或微乳剂。在一些实施方案中，本文所使用的“乳剂”或“微乳剂”包括在较高的温度下是液体的固体或半固体物质。例如所述物质在室温下可以是固体。在约体温(约37℃)下，所述物质可以为液体。
或者，本发明的药学上可接受的组合物可以是用于直肠给药的栓剂的形式。栓剂可以通过将活性物质和适宜的在室温下为固体但在直肠温度下为液体并因此将在直肠中融化而释放药物的无刺激性的赋形剂混合而制备。这样的物质包括可可脂、蜂蜡、和聚乙二醇。
本发明的药学上可接受的组合物可以为局部溶液剂、软膏剂或乳膏剂的形式，其中活性成分混悬或溶解于一种或多种载体中。用于本发明化合物的局部给药的载体包括但不限于矿物油、液体石蜡、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡、和水。其中局部用制剂为软膏剂或乳膏剂的形式，适当的载体包括但不限于矿物油、山梨聚糖单硬脂酸酯、聚山梨酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苯甲醇和水。
当所述药学上可接受的组合物为眼用制剂时，其可以是在等渗的、ph调节的灭菌水溶液中的微粒化的混悬剂、或以在等渗的ph调节的灭菌盐水中的溶液剂的形式，其包含或不含防腐剂如苯扎氯胺。或者，对于眼科应用，所述药学上可接受的组合物可以被配制为软膏剂的形式。
本发明的药学上可接受的组合物还可以通过鼻腔、气雾剂或通过吸入给药途径给药。根据药物制剂领域已知的技术制备这样的组合物，并可以制备成盐水中的溶液剂的形式，使用苯甲醇或其他适当的防腐剂、用于改善生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物、和/或其他常规的溶解剂或分散剂。
还应理解的是，用于任何特定患者的具体的剂量和治疗方案将取决于各种因素，包括所用的具体化合物的活性、年龄、体重、整体健康、性别、饮食、给药时间、排泄率、药物组合、和治疗医师的判断、和受治疗的特定疾病的严重性。组合物中本发明化合物的量还将取决于组合物中的特定化合物。
vii.治疗和使用方法
本发明的另一方面提供了治疗可通过肽、多肽、蛋白、其类似物或衍生物治疗的医学病症的方法，包括向患有所述病症的患者给药本申请描述的药物组合物。本文使用的医学病症包括但不限于糖尿病、阿尔茨海默病、自身免疫疾病、结肠癌、性激素依赖性疾病如良性前列腺增生、前列腺癌、雌激素依赖性乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、子宫内膜异位和性早熟、以及人或动物对象中的避孕。
另一个实施方案提供了本申请所描述的药物组合物在制备用于治疗可通过所述肽、多肽、蛋白、其类似物和/或衍生物治疗的医学病症的药物中的应用。
应理解的是，本文描述的所有实施方案的组合也是本发明中所设想的。
现将参考以下实施例对本发明进行更为详细的描述。然而，给出这些实施例的目的是用于说明，而不应解释为限制所述发明的范围。
实施例
1.共溶剂在制备acyline的过程中的应用
(1)制备acyline批次
图1所描述了六个不同的acyline批次，其汇总了不同的冻干步骤(其是制备acyline中的最后一步。对于批次xf173/315-125，xf185/165-133和xf173/315-151a，在冻干步骤中使用共溶剂系统。水用作为用于其他批次的溶剂。图1还所说明了批次和相关的冻干溶剂。acyline可以根据本领域技术人员已知的方法例如美国专利第6,747，125号中的方法，或本申请描述的方法制备。
实施例1
对不同acyline批次在丙二醇中的胶凝进行研究，结果汇总于图2中。通过使用图1中列出的acyline批次制备9％和16.7％的acyline样品。通过使用在冻干步骤中采用共溶剂而制备的acyline来制备xf173/315-125、xf185/165-133和xf173/315-151a的9％的acyline样品。2小时之后，xf173/315-125、xf185/165-133和xf173/315-151a的acyline批次的外观是澄清和非粘性的。使用水作为溶剂冻干的其他批次由于存在胶凝的acyline因此显出澄清和非粘性的溶液的外观。
实施例2
研究了不同acyline药品批次在水中的胶凝，结果汇总于图3中。通过使用图1中列出的acyline批次制备0.5％和1％的acyline样品。在冻干步骤中采用共溶剂而制备的xf173/315-125、xf185/165-133和xf173/315-151a的0.5％和1％的acyline样品在溶于水中时外观是澄清和非粘性的。
实施例3
研究了不同acyline批次在标准的微乳剂(sm)中的胶凝的趋势。结果汇总于图4(a)中。标准微乳剂的制剂示于图4(b)中。通过使用图1中合成的acyline批次制备5mg和10mg的acyline在微乳剂中的制剂。2小时后，在冻干步骤中采用共溶剂而制备的xf173/315-151a的5mg和10mg剂量acyline批次的外观澄清且透明。
2.抗胶凝剂在acyline组合物的制剂中的应用
对比实验的常规方法
在室温或37℃下，通过将acyline加入到ph＝6.8的缓冲溶液中制备不同浓度的acyline组合物。所有acyline溶液都包含0.6mg/ml癸酸钠(癸酸钠在图中被称为c10)。所有样品在分析之前离心并过滤。通过配有uv检测的反相hplc分析样品。
实施例4
将10mg的acyline转移到200ml体积的烧瓶中。将ph6.8的缓冲溶液预加热至37℃。然后，将100ml预加热的缓冲溶液和0.6mg/ml癸酸钠加入到烧瓶中以制备0.1mg/ml的acyline样品。以相似的方式，加入吐温80以制备包含1％吐温80的0.1mg/ml的acyline溶液。在37℃下的受控的水浴温度下振摇样品。在acyline与缓冲溶液混合后1、5、10、15、20、30和120分钟取5ml样品。立即通过0.45μm过滤器过滤样品。弃去最先的3ml。过滤的样品未经稀释即通过配有uv检测的反相hplc分析。所有样品制备双份，并获得用于分析的双份平均值的浓度。图5中图示记录了0.1mg/ml的acyline样品的1％和0％吐温-80的对比结果。结果显示，在低于cmc浓度下，单独的癸酸钠不足以降低acyline的胶凝。加入1％吐温80成功地降低了胶凝。
实施例5
使用类似于实施例4的实验方法以制备用于实施例5的acyline样品。图6中图示记录了含有0.6mg/ml癸酸钠和0.1mg/mlacyline的5mg/ml、1.0mg/ml、0.1mg/ml和0.1％吐温的磷酸缓冲溶液的对比结果。所述结果显示仅1％吐温80溶液可以完全抑制acyline的胶凝。
实施例6
使用类似实施例4的方法制备用于实施例6的acyline样品。图7中图示记录了0.1和0.01mg/ml的acyline样品中1％和1mg/ml吐温80的对比结果。结果显示，1％的吐温80降低了0.1mg/ml和0.01mg/ml的acyline样品的胶凝。
实施例7
使用类似实施例4的方法制备用于实施例7的acyline样品。图8中图示记录了含有0.1％、0.5％和1％吐温80的0.01mg/ml的acyline样品的对比结果。结果显示，含有1％的吐温80的acyline样品显著地降低了胶凝。
3.癸酸钠(c10)对acyline在水中胶凝的趋势的作用
实施例8
图9图示说明了不同浓度的癸酸钠(c10)对acyline在水中胶凝的影响。当癸酸钠的浓度低于10mg/ml时，acyline的回收显著降低，这暗示了acyline胶凝的升高。本发明的研究认为，胶凝的增加是由于加入癸酸钠导致的离子浓度的增加。然而，当癸酸钠的浓度达到和高于癸酸钠的cmc(～20mg/ml)时观察到acyline的回收的突然和显著的增加，这表明胶凝的有效降低。已知癸酸钠的cmc浓度为100mm(～20mg/ml)。(参见“kineticstudiesoftheinteractionoffattyacidswithphosphatidylcholinevesicles(liposomes)，rogerson等，colloidsandsurfacesb：biointerfaces，48，24-34(2006))当癸酸钠的浓度达到约50mg/ml时，acyline的回收为几乎100％，这表明胶凝完全被抑制。
4.抗胶凝剂在acyline样品的不同微乳剂制剂中的应用
实施例9
图11图示显示了不同acyline制剂在狗中的相对生物利用度。通过对比不同acyline制剂的绝对生物利用度和acyline标准制剂的绝对生物利用度来测量相对生物利用度，所述标准制剂为不含任何抗胶凝剂的制剂。微乳剂1(m1/55％capmulmcm)、微乳剂2(m2/45％capmulpg-8)和微乳剂3(m3/55％capmulmcmc10)的制剂描述于图10(a)-(c)中。标准溶液的制剂为5mgacyline、550mg癸酸钠和5ml纯水。图10和11中的c10表示癸酸钠。图10和11中的“sls”表示月桂基硫酸钠。图11中的对比结果显示，包含抗胶凝剂如癸酸钠和月桂基硫酸钠的所有制剂都使acyline的生物利用度提高7.8倍至32.5倍。
实施例10
图12图示显示了(1)10mg的acyline肠溶片的相对生物利用度对比未增强的5mg的acyline溶液样品的生物利用度和(2)10mg的acyline肠溶片剂的生物利用度对比未增强的5mg的acyline标准样品的相对生物利用度。acyline标准样品的制剂为5mgacyline、550mg癸酸钠和5ml纯水。以水作为溶剂使用冻干步骤制备片剂中的acyline和5mgacyline样品。所述片剂含有与5mg的acyline样品相同量的癸酸钠。观察到，癸酸钠的浓度110mg/ml足以降低或甚至抑制溶液中的胶凝并提高acyline溶液的生物利用度。图12显示了与未增强的片剂相比较，增强片剂的生物利用度显著地改善。
5.癸酸钠和癸酸在胰岛素样品中的应用
实施例11
进行了评价癸酸钠(c10)和癸酸对牛胰岛素的稳定性影响的研究。在该研究中，将效价为29u/mg的牛胰岛素用于制备10u/ml的在ph8的磷酸盐缓冲溶液中的溶液(344.83mg/l溶液)。使用200ml容器，将适量的c10加入胰岛素溶液的100ml等分试样中。使用仅含有胰岛素溶液的两个瓶作为对照。将另外3g的c10加入到瓶3和4中，向瓶5和6中加入6g的c10，向瓶7和8中加入3g的癸酸，向瓶9和10中加入6g的癸酸。轻微旋转瓶子并从每个瓶中除去6ml的等分试样用于t＝0样品。过滤样品(millex-hv0.45μm)，除去最初的5ml滤液。将适当的实验溶液搅拌，在6、24小时等时，从所有实验溶液中收集另外的样品。相对于标准(70mg，在200ml的0.01n的hcl中)测定过滤后溶液中牛胰岛素的量。
将胰岛素溶液静置一段时间后的完整胰岛素的回收百分数记录在表2和表3中，并图示显示在图13(a)和(b)中。观察到包含癸酸钠的胰岛素溶液比不含癸酸钠的胰岛素样品或包含癸酸的溶液显著地更加稳定。对于包含癸酸钠的胰岛素样品，所述溶液在37℃下静置至少约24小时后，至少90％的胰岛素被回收。
表1实施例11的胰岛素溶液的制剂
表2包含或不包含c10的牛胰岛素纤维化结果
表3包含或不包含癸酸的牛胰岛素纤维化结果
以上是为了阐述本发明，而不应被理解为限制本发明。尽管已经描述了本发明的一些示例性实施方案，但本领域技术人员应容易地理解，在没有实质性超出本发明新的教导和优势下，可能对示例性实施方案进行许多修改。因此，所有这些修改都意图包括在权利要求所限定的本发明范围内。因此，可以理解，以上是为了阐述本发明而不应被理解为限于所公开的具体实施方案，且对于所公开实施方案和其他实施方案的修改意图包括在所附的权利要求的范围内。本发明通过以下权利要求限定，且所述等同权利要求将包括在本文中。
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