本发明涉及眼科疾病的药物，尤其是涉及一种丹皮酚磺酸钠眼用制剂。
背景技术：
：丹皮酚磺酸盐广泛应用于治疗手术后疼痛、风湿、类风湿以及果实保鲜等方面，在临床上有着广泛的应用。目前市售剂型为丹皮酚磺酸钠注射剂，未见用丹皮酚磺酸钠制备眼部制剂的应用及报道。中国专利CN102166205B公开了丹皮酚及其衍生物的医药用途，显示丹皮酚磺酸钠具有治疗或预防免疫性结膜炎、干眼、葡萄膜炎和巩膜炎的作用。美国专利US2008/0194700A1公开了丹皮酚或一个药学可接受盐可用于预防、改善或治疗与血管生成相关性疾病，如新生血管性青光眼、糖尿病视网膜病、因血管生成导致的角膜疾病、黄斑变性、翼状胬肉、视网膜变性等眼病，其描述的治疗机理是抑制血管生成。另外，丹皮酚磺酸钠具有较强的清除氧自由基的活性和抗UV诱导的红细胞溶血的作用，还对一些植物病原细菌和真菌等有较强的抑制作用。其对果实保鲜的作用就来自丹皮酚磺酸钠保护超氧化物歧化酶、清除自由基的作用密切相关。研究发现，白内障是世界首位致盲因素，同时也是我国第一位的致盲眼病。在白内障发生发展过程度中，自由基以及与其相关的氧化应激是导致晶状体生理功能改变、最终导致白内障的枢纽。因此，丹皮酚磺酸钠有望对白内障的发生发展产生一定药理作用。鉴于以上丹皮酚磺酸钠的显著眼部药理作用，目前仅有注射剂剂型存在，开发丹皮酚磺酸钠的眼部制剂需要解决以下问题：提高丹皮酚磺酸钠的稳定性、增强丹皮酚磺酸钠的角膜及结膜透过性、延长丹皮酚磺酸钠的眼部滞留时间、提高丹皮酚磺酸钠的眼部生物利用度。技术实现要素：本发明的目的是提供一种丹皮酚磺酸钠新的制剂品种，即丹皮酚磺酸钠眼用制剂，该丹皮酚磺酸钠眼用制剂增加了药物的有效吸收、提高了药物的稳定性、延长了眼部滞留时间、降低了药物的毒副作用、提高了药物的眼部生物利用度。本发明的目的是这样实现的：一种丹皮酚磺酸钠眼用制剂，特征是：在丹皮酚磺酸钠中加入眼用制剂药用辅料制成，所含丹皮酚磺酸钠的重量百分比为0.01-30％，余量为眼用制剂药用辅料。本发明的丹皮酚磺酸钠眼用制剂包括丹皮酚磺酸钠滴眼液、丹皮酚磺酸钠脂质体滴眼剂、丹皮酚磺酸钠包合物滴眼液、丹皮酚磺酸钠眼膏、丹皮酚磺酸钠眼用凝胶、丹皮酚磺酸钠原位凝胶剂、丹皮酚磺酸钠眼用脂质体凝胶剂、丹皮酚磺酸钠眼用注射剂、丹皮酚磺酸钠眼用脂质体注射剂，上述各种制剂的组成如下：1、一种丹皮酚磺酸钠滴眼剂，由以下百分比计的原料组成：2、一种丹皮酚磺酸钠脂质体滴眼剂，由以下百分比计的原料组成：3、一种丹皮酚磺酸钠包合物滴眼液，由以下百分比计的原料组成：4、一种丹皮酚磺酸钠眼膏，由以下百分比计的原料组成：5、一种丹皮酚磺酸钠眼用凝胶，由以下百分比计的原料组成：6、一种丹皮酚磺酸钠原位凝胶剂，由以下百分比计的原料组成：、7、一种丹皮酚磺酸钠脂质体凝胶剂，由以下百分比计的原料组成：8、一种丹皮酚磺酸钠眼用注射剂，由以下百分比计的原料组成：9、一种丹皮酚磺酸钠眼用脂质体注射剂，由以下百分比计的原料组成：所述pH调节剂为NaOH、HCl、枸橼酸、三乙醇胺、三羟甲基氨基甲烷、硼酸、硼酸钠、醋酸和醋酸钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠中的一种或多种。所述pH值为3.0-10.0。所述保湿剂为甘油、透明质酸钠中的一种或两种。所述等渗调节剂为氯化钠、甘油、葡萄糖、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硼酸、硼砂、甘露醇和丙二醇中的一种或多种。所述防腐剂为硫柳汞、山梨酸、醋酸苯汞、苯扎氯胺、苯扎溴胺、苯甲酸钠、苯氧乙醇、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和三氯叔丁醇中的一种或多种。所述抗氧剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、硫脲、维生素E、维生素A、维生素C和胡萝卜素中的一种或多种。所述金属螯合剂为乙二胺四乙酸(EthyleneDiamineTetraaceticAcid，EDTA)、EDTA-2Na、EDTA-Ca和EDTA-2K中的一种或多种。所述眼膏基质为脂肪醇、黄凡士林、白凡士林、羊毛脂和液体石蜡的一种或多种。所述脂质体材料为磷脂酰胆碱类、磷脂酰甘油类、磷脂酰肌醇类、磷脂酰乙醇胺类、神经鞘磷脂类、单链或双链磷脂(二肉蔻酸磷脂酰甘油、二月桂酸磷脂酰甘油、二软脂酸磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二肉蔻酸磷脂酸、二月桂酸磷脂酸、二软脂酸磷脂酸、二硬脂酸磷脂酸、二油酸磷脂酰丝氨酸、二亚油酸磷脂酰肌醇、二棕榈酸磷脂酰胆碱(DPPC)、二月桂酸磷脂酰胆碱(DLPC)、二肉豆蔻酸磷脂酰胆碱(DMPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、单肉蔻酸磷脂酰甘油、单月桂酸磷脂酰甘油、单软脂酸磷脂酰甘油、单硬脂酸磷脂酰甘油、单肉蔻酸磷脂酸、单月桂酸磷脂酸、单软脂酸磷脂酸、单硬脂酸磷脂酸、单油酸磷脂酰丝氨酸、单亚油酸磷脂酰肌醇、单棕榈酸磷脂酰胆碱(MPPC)、单月桂酸磷脂酰胆碱(MLPC)、单肉豆蔻酸磷脂酰胆碱(MMPC)、单硬脂酰磷脂酰胆碱(MSPC)中的一种或多种。所述包覆材料为聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙烯醇、环糊精、壳聚糖、壳寡糖、羧甲基壳聚糖、三甲基壳聚糖中的一种或多种。所述凝胶基质为具有pH值、温度或离子敏感特性的高分子材料，选自卡波姆、结冷胶、海藻酸钠、瓜儿胶、果胶质、聚乙二醇、泊洛沙姆、玻璃酸钠、羟丙甲纤维素(HPMC)、甲基纤维素(MC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和聚乙烯醇(PVA)中的一种或多种。所述丹皮酚磺酸钠包合物滴眼液中的包合物材料为环糊精、β-环糊精、羟丙基-β-环糊精中的一种或多种。本发明是以丹皮酚磺酸钠为活性有效成分、加眼用制剂药用辅料按常规制备方法制成。丹皮酚磺酸钠制成眼科用药，增加了药物的有效吸收、提高了药物的稳定性、延长了眼部滞留时间、降低了药物的毒副作用、提高了药物的眼部生物利用度。本发明的制备方法工艺可行、质量可控，有非常广阔的产业化前景。具体实施方式为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。实施例1：丹皮酚磺酸钠滴眼液取注射用水50mL，加入NaCl0.7g，硼酸1.9g，亚硫酸氢钠0.2g，EDTA-2Na0.03g，苯扎氯铵0.03g，透明质酸钠0.1g，搅拌使溶解，再加入丹皮酚磺酸钠3.5g，待溶解完全后，加入注射用水至100mL，用枸橼酸调节pH至6.0。0.22μm微孔滤膜过滤，无菌分装于棕色塑料滴眼瓶中，包装即得。实施例2：丹皮酚磺酸钠脂质体滴眼液采用薄膜分散法，取大豆卵磷脂1g、胆固醇0.75g溶于氯仿中作为油相，使用旋转蒸发仪55℃蒸干成膜，除去氯仿，停止旋转保持真空继续抽吸2h后停止，加入含有亚硫酸钠0.15g、EDTA-2Na0.03g、苯扎溴铵0.02g及丹皮酚磺酸钠0.2g的磷酸盐缓冲液50mL中(pH6.0)，剧烈振摇40min，洗膜后在4℃条件下高压均质机匀化(均质压力80Mpa，循环次数5次)，即得丹皮酚磺酸钠脂质体滴眼液。将制得的丹皮酚磺酸钠脂质体滴眼液缓慢滴入壳寡糖(50kDa)的磷酸盐缓冲液(1％，w/v)50ml中，10℃搅拌混匀60min，即得壳寡糖包覆丹皮酚磺酸钠脂质体混悬液，采用NaCl调节至等渗，用枸橼酸调节pH至7.4，测定包封率>49.8％。0.22μm微孔滤膜过滤，充氮，无菌分装于棕色塑料滴眼瓶中，包装即得。实施例3：丹皮酚磺酸钠包合物滴眼液取HP-β-环糊精1g，加入注射用水75mL，加热使溶解，加入丹皮酚磺酸钠0.1g，搅拌使溶解，置超声振荡器超声10min，再依次加入氯化钠0.6g，硼酸0.4g，硼砂1.3g，尼泊金甲酯0.1g，尼泊金丙酯0.02g，EDTA-2K0.04g，亚硫酸氢钠0.1g搅拌使溶解，用HCl调节pH至6.5。0.22μm微孔滤膜过滤，无菌分装于棕色塑料滴眼瓶中，包装即得。实施例4：丹皮酚磺酸钠眼膏眼膏基质：取白凡士林50g，液体石蜡10g，无水羊毛脂10g，加热至150℃熔化，搅拌均匀，加入维生素E0.5g，胡萝卜素1.5g，冷却备用。取注射用水20mL，加入亚硫酸钠0.2g，EDTA0.05g，维生素C0.2g，三氯叔丁醇0.02g，搅拌使溶解，再加入丹皮酚磺酸钠6.0g，得到丹皮酚磺酸钠水溶液，备用。取上述眼膏基质与丹皮酚磺酸钠水溶液研成细腻糊状，再分次递增眼膏基质至总量100g，分装，包装即得。实施例5：丹皮酚磺酸钠眼用凝胶取氯化钠0.9g，硼酸1.9g，亚硫酸钠0.2g，EDTA-2Na0.03g，搅拌使溶解于注射用水100mL，再加入丹皮酚磺酸钠3g，待溶解完全后，加入HPMCK4M1.2及尼泊金乙酯0.03g，加热，搅拌溶解至室温，放置过夜，用HCl调节pH至7.0。0.22μm微孔滤膜过滤，检查澄明度合格后，充氮，无菌分装于棕色塑料滴眼瓶中，包装即得。实施例6：丹皮酚磺酸钠眼用凝胶取注射用水约60mL，加入苯氧乙醇0.3g，加热搅拌使溶解，加热至80℃，加入羟丙甲基纤维素HPMCK4M1.5g，搅拌均匀，再加入2g丹皮酚磺酸钠，EDTA0.04g，维生素C0.1g，搅拌使形成透明溶液，过滤，分次将0.2g卡波姆940加入，边加边搅拌至完全分散溶胀，加入注射用水40mL，加入0.1M氢氧化钠调节pH至7.5，0.22μm微孔滤膜过滤，检查澄明度合格后，充氮，无菌分装于棕色塑料滴眼瓶中，包装即得。实施例7：丹皮酚磺酸钠原位凝胶剂取注射用水约70mL，加入苯扎氯铵0.005g，加热搅拌使溶解，再加入2g丹皮酚磺酸钠，亚硫酸氢钠0.1g，EDTA-2K0.03g，维生素C0.1g，搅拌使形成透明溶液，加入泊洛沙姆P1887g，于室温下搅拌溶解，再加入泊洛沙姆P40721g，搅拌分散均匀后，至4℃冰箱中冷藏48h以上，得到澄明溶液，补水致使成100mL。实施例8：丹皮酚磺酸钠脂质体凝胶剂采用薄膜分散法，取蛋黄卵磷脂3g、胆固醇0.8g、维生素E0.6g、维生素A1.5g，溶于氯仿中作为油相，使用旋转蒸发仪60℃蒸干成膜，除去氯仿，停止旋转保持真空继续抽吸2h后停止，加入含有EDTA-2Na0.03g及丹皮酚磺酸钠0.6g的磷酸盐缓冲液50mL中(pH6.8)，剧烈振摇40min，洗膜后在4℃条件下高压均质机匀化(均质压力80Mpa，循环次数5次)，即得丹皮酚磺酸钠脂质体混悬液。将制得丹皮酚磺酸钠脂质体混悬液缓慢滴入三甲基壳聚糖的磷酸盐缓冲液(1％，w/v)50ml中，10℃搅拌混匀60min，采用NaCl调节至等渗，即得三甲基壳聚糖包覆丹皮酚磺酸钠脂质体混悬液。HPMCK4M1.5g及尼泊金乙酯0.03g分散于50mL的注射用水中，加热，搅拌溶解至室温，放置过夜，得到HPMC溶液。将三甲基壳聚糖包覆丹皮酚磺酸钠脂质体混悬液与HPMC溶液混合，用已过滤除菌的注射用水定量，灌装即得。实施例9：丹皮酚磺酸钠眼用注射剂取注射用水50mL，加入氯化钠0.9g，亚硫酸钠0.2g，EDTA-2K0.03g，苯扎氯铵0.03g，搅拌使溶解，再加入丹皮酚磺酸钠2g，待溶解完全后，加入注射用水至100mL，用枸橼酸调节pH至6.5。0.22μm微孔滤膜过滤，检查澄明度合格后，充氮，无菌分装于棕色安瓿中，包装即得。实施例10：丹皮酚磺酸钠脂质体注射剂采用薄膜分散法，取大豆卵磷脂1g、胆固醇0.75g溶于氯仿中作为油相，使用旋转蒸发仪55℃蒸干成膜，除去氯仿，停止旋转保持真空继续抽吸2h后停止，加入含有焦亚硫酸钠0.25g，EDTA-2Na0.03g，尼泊金甲酯0.03g及丹皮酚磺酸钠4g的磷酸盐缓冲液50mL中(pH6.0)，剧烈振摇40min，洗膜后在4℃条件下高压均质机匀化(均质压力80Mpa，循环次数5次)，采用NaCl调节至等渗，调节pH至7.5。0.22μm微孔滤膜过滤，检查澄明度合格后，充氮，无菌分装于棕色安瓿中，包装即得。以下通过实验例证明本发明的有益效果。含量测定：仪器：高效液相色谱仪Waterse2695；色谱柱：InertsilODS-3柱(150×4.6mm，5μm)；柱温：35℃；流动相：0.12％磷酸二氢铵溶液-乙腈-甲醇(82∶10∶8，用磷酸调至pH3.5)；流速：1.0ml/min；检测波长：274nm；进样量：20μl样品配制：取丹皮酚磺酸钠样品以甲醇稀释适当倍数，注入高效液相色谱仪中测量粒径及分布；粒径及分布测定；仪器：马尔文ZS90；样品配制：取丹皮酚磺酸钠制剂以超纯水稀释适当倍数，注入粒度仪中测量粒径及分布。实验例1丹皮酚磺酸钠眼用凝胶的质量评价0.5g卡波姆934经甘油润湿，加入HPMCK4M0.5g以及取注射用水约60mL，常温放置24h，使其充分溶胀，再加入2g丹皮酚磺酸钠，焦亚硫酸钠0.1g，EDTA-2Na0.04g，搅拌使形成透明溶液，至完全分散溶胀，加入注射用水40mL，加入0.1M氢氧化钠调节pH至7.0，0.22μm微孔滤膜过滤，检查澄明度合格后，充氮，无菌分装于棕色塑料滴眼瓶中，包装即得。1.外观性状本法制得丹皮酚磺酸钠眼用凝胶透明、均匀细腻。2.黏度测定采用旋转黏度计(AntonPaar公司)测定三批凝胶剂黏度，结果见表1，符合眼用凝胶剂的要求。表1常温下凝胶剂在泪液稀释前后(40：7，v/v)的黏度3.离心稳定性分别取不同批次样品各3g，置于10ml离心试管中，经4000rpm离心30min，凝胶剂气泡被去除，无分层、沉淀、析出现象，性状透明、均匀，说明该凝胶稳定性良好。4.HPLC法含量测定取凝胶剂0.1g，加入饱和NaCl溶液50μl，搅拌，流动相稀释定容，0.22μm滤膜过滤，取续滤液，按上述色谱条件，计算样品含量，结果见表2。表2样品含量测定结果实验例2抗白内障药效实验1实验材料、试剂、仪器受试药物丹皮酚磺酸钠凝胶剂、丹皮酚磺酸钠滴眼液、生理盐水；实验动物11日龄大鼠；实验仪器：UV-2550紫外/可见分光光度计(日本岛津公司)，3-18K冷冻高速离心机(德国Sigma公司)。2统计方法用SPSS17.0软件进行统计分析。数据以均数±标准差表示，组间采用单因素方差分析，方差齐者组间进行LSD检验，方差不齐者进行Tamhane’sT2检验。3实验动物分组及模型制备取11日龄大鼠随机分组如下4组，每组6只：空白组，模型组，丹皮酚磺酸钠滴眼剂组，丹皮酚磺酸钠眼用凝胶剂组，其中空白组和模型组给予生理盐水。给药方案为每天给药4次，持续给药8d。除空白组外，各组动物均于首次给药后30min于大鼠后颈背部皮下注射亚硒酸钠生理盐水溶液(19μmol·kg-1)以诱发大鼠白内障形成。给药结束后，取大鼠晶状体，以10倍量生理盐水组织匀浆，测定晶状体总超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽(GSH)含量。4实验结果表3各实验组生化指标实验组SOD活力(U/mgprotein)MDA(nmol/ml)GSH(mg/gprotein)空白组63.5±12.32.1±0.938.7±12.6模型组20.1±9.8015.7±3.313.6±1.5滴眼液组45.7±11.8*7.8±1.1*22.9±13.4*凝胶剂组51.9±15.4*#4.4±1.2*#29.8±15.3**：P<0.05vs.模型组；#：P<0.05vs.滴眼液组。实验例3抗免疫性结膜炎药效实验1实验材料、试剂、仪器受试药物丹皮酚磺酸钠脂质体滴眼液、丹皮酚磺酸钠滴眼液、丹皮酚磺酸钠眼用凝胶剂组、生理盐水；实验动物Balb/C小鼠；实验仪器：酶标仪(美国Bio-Rad公司)，3-18K冷冻高速离心机(德国Sigma公司)。2统计方法用SPSS17.0软件进行统计分析。数据以均数±标准差表示，组间采用单因素方差分析，方差齐者组间进行LSD检验，方差不齐者进行Tamhane’sT2检验。3实验动物分组及模型制备取小鼠随机分组如下4组，每组6只：空白组，模型组，丹皮酚磺酸钠滴眼剂组，丹皮酚磺酸钠脂质体滴眼液组、丹皮酚磺酸钠眼用凝胶剂组，其中空白组和模型组给予生理盐水。致敏阶段采用致敏原鸡卵白蛋白OVA的ALUM溶液0.25ml，给药方案为每周1次，持续给药2周。经免疫激发后(OVA5mg/ml)，再持续给药5d，给药结束后，眼眶取血，采用ELISA方法测定血清中IL-4、OVA-sIgE、IFN-γ的含量。4实验结果表4各实验组血清测定结果实验组IL-4(pg/ml)OVA-sIgE(μg/ml)IFN-γ(ng/ml)空白组68.7±11.0*0.99±0.12*1578.6±15.6*模型组198.3±12.31.45±0.101130.3±36.5滴眼液组106.4±23.5*1.14±0.13*1346.5±26.8*脂质体滴眼液组75.8±16.1*#1.17±0.14*1499.5±25.1*#凝胶组80.7±11.2*1.00±0.11*#1398.1±23.4**：P<0.05vs.模型组；#：P<0.05vs.滴眼液组。实验例4抗结膜炎药效实验1实验材料、试剂、仪器受试药物丹皮酚磺酸钠眼膏、丹皮酚磺酸钠原位凝胶、生理盐水；实验动物健康成年大耳白兔；实验仪器：手持裂隙灯(苏州康捷公司)；2实验动物分组及模型制备建立慢性结膜炎模型：受试动物全麻后于上方球结膜距角膜缘2mm处行球结膜下埋线术(范围:上方180°)，线头不外露。取家兔随机分组如下4组，每组6只：空白组，模型组，丹皮酚磺酸钠眼膏，丹皮酚磺酸钠原位凝胶，其中空白组和模型组给予生理盐水。给药方案为每天给药3次，持续给药5周。双盲法观察，每日手电肉眼及荧光染色裂隙灯观察、记录，统一记录表格，量化计分。结果显示治疗1.5周后，除模型组外各组体征有所缓解，综合分值下降。用药2-4周，除模型组外各组明显好转，模型组仍有明显睑结膜充血。用药5周各组基本恢复正常，模型组刺激后仍有轻度充血。观察期内丹皮酚各制剂组无显著刺激性及不良反应。当前第1页1 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