一种青蒿氯仿提取物及其制备方法和用途与流程

本发明提供了一种青蒿氯仿提取物，以及该提取物的制备方法和在制备治疗支气管哮喘方面的药物的用途，属于中医药技术领域。

背景技术：

支气管哮喘(以下简称“哮喘”)是一种由过敏原引起的多发性慢性呼吸道疾病，其发病机制目前尚不完全清楚。目前，全球的哮喘患者达到3亿以上，我国的哮喘患者有将近3000万。2013年中国成人哮喘患病情况为：自我报告的哮喘患病率为2％，基于症状的哮喘患病率为3.9％；而中国城区0～14岁儿童哮喘总患病率为3.02％，较10年前显著升高。目前哮喘疾病的有效控制率低下，其主要原因是随着社会经济的发展生活水平的提高，环境变化加快，汽车尾气、工业废气、家庭装修、食品添加剂等过敏原越来越多，这都必然导致哮喘的发病率越来越高，目前，哮喘已经成为仅次于癌症的世界第二大致死和致残疾病。因此急需寻找能有效的治疗哮喘的药物。

哮喘的主要症状表现为气道阻塞，而气道平滑肌的异常收缩是导致这一症状的主要原因。目前支气管扩张剂如β2-受体激动剂已被广泛应用于临床，但治疗效果有限，30～45％哮喘病人的肺功能无法得到改善，即使症状有所缓解，停止治疗后病情亦容易反复发作，严重者更需要住院治疗。这给患者本人和家庭造成了极大的痛苦，同时也加重了社会经济的负担和损失。

青蒿，为菊科植物黄花蒿Artemisia annua L.的地上部分。主要分布于重庆酉阳、吉林、辽宁、河北、陕西等地。朝鲜、日本、越南(北部)、缅甸、印度(北部)及尼泊尔等也有分布。重庆酉阳享有“世界青蒿之乡”的美誉，是世界上最主要的青蒿生产基地，也是全球青蒿素高含量的富集区，平均青蒿素含量高达8‰。青蒿的主要成份包含青蒿素系列化合物如青蒿素，青蒿甲、乙，青蒿内酯等和黄酮类化合物如山柰黄素(山柰酚)、槲皮黄素等，以及挥发油和香豆精类化合物。《中国药典》显示青蒿具有清热、解暑、除蒸、截疟等功效。现代药理研究表明青蒿提取物具有抗疟、抑菌、消炎、抗肿瘤作用。

目前虽然有相关文献报道青蒿素及其衍生物青蒿琥酯具有制备治疗哮喘药物的功效，但是发挥功效的组分为青蒿素，在青蒿中尚无除青蒿素外的其他组分具有治疗哮喘功效的相关报道。

技术实现要素：

本发明提供了一种青蒿氯仿提取物，该提取物经过试验发现能够舒张气道平滑肌，能够用于缓解哮喘患者的气道阻塞，因此上述青蒿氯仿提取物能够应用于制备治疗支气管哮喘的药物。

实现本发明上述目的所采用的技术方案为：

一种青蒿氯仿提取物，该提取物采用以下方法制备：(1)选取干燥的青蒿作为原料，磨成粉末；

(2)将粉末混入去离子水中，加热至50～60℃并维持2～4h，过滤收集提取物，重复提取1～4次；

(3)将提取物用旋转蒸发器蒸干，收集残余物；

(4)残余物溶于去离子水，用石油醚萃取2～4次，除去油脂及其他石油醚可溶性物质，收集滤出液；

(5)滤出液用氯仿萃取，收集萃取液并蒸干制得浸膏，即青蒿氯仿提取物。

步骤(2)中采用pH值为9～10的去离子水提取2次，提取时加热时间为3h。

步骤(4)中残余物溶解于pH值为9～10的去离子水中，用等体积石油醚萃取3次。

步骤(5)中滤出液用氯仿萃取2次。

本发明中所提供的青蒿氯仿提取物，在提取过程中采用氯仿萃取之前，先用去离子水进行初提，而青蒿素几乎不溶于水，所以水初提物中几乎不含青蒿素；另外，通过之后的石油醚萃取，进一步去除了可能残留的青蒿素。因此本发明所制备的氯仿提取物中是不含有青蒿素的。

通过对实验小鼠离体气管环张力的检测发现，本发明所提供的青蒿氯仿提取物具有舒张气管平滑肌的作用，有望应用于缓解哮喘患者气道阻塞。因此能够用于制备治疗支气管哮喘药物中。

附图说明

图1为本发明实施例中青蒿氯仿提取物对高钾引起气道平滑肌收缩的作用图；

图2为本发明实施例中青蒿氯仿提取物对乙酰胆碱引起气道平滑肌收缩的作用图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做详细具体的说明，但是本发明的保护范围并不局限于以下实施例。

实施例1

本实施例中青蒿氯仿提取物的制备方法如下：

选取干燥的青蒿作为原料，磨成粉末；采用去离子水(pH:9)浸泡，并于52℃加热3h，重复3次，收集提取物；将提取物用旋转蒸发器蒸干，收集残余物；残余物溶于200毫升去离子水(pH:9)，用等体积石油醚萃取3次，除去油脂及其他石油醚可溶性物质，收集滤出液；滤出液用等体积氯仿萃取，收集氯仿萃取液并蒸干制得浸膏，即青蒿氯仿提取物，所得青蒿氯仿提取物约为原材料干重的0.5％。

下面将氯仿提取物溶解于DMSO用于生物活性实验检测，检测步骤如下：

1、小鼠气管的体外分离：

雄性成年的BALB/c小鼠颈椎脱臼法处死，将口腔和四肢钉在解剖板上，喷洒75％的酒精后剪开胸腔，暴露出心肺组织，移除心脏之后取下从喉结至肺部的一整段组织，将取下的组织马上浸泡于PSS溶液(NaCl 135mM，KCl 5mM，MgCl2 1mM，CaCl2 2mM，HEPES10mM，glucose 10mM，pH 7.4)中，然后在转移至胶板上进行进一步修剪。在SZM体视显微镜下小心去除气管外周的结缔组织及内腔中的残留血液。

2、小鼠气道平滑肌的张力检测方法：

将小鼠气管剪成长约5mm的气管环后与挂钩连接，小心衔接张力换能器后置于内有6mL PSS并持续通高纯氧的37℃的恒温水浴槽中.前负荷调至300mg，开始平衡，平衡期间，每15min换液1次，共换液4次。平衡完毕后使用80mM高钾溶液或100μM乙酰胆碱(ACh)溶液进行预刺激，充分刺激组织活性后换液洗脱，至恢复至基线，30min后即可开始试验。

3、青蒿氯仿提取物效果测试：

离体小鼠气管环在80mM高钾溶液中发生稳定持续的预收缩，当加入青蒿氯仿提取物(CEAA)后收缩的气管环张力逐渐下降，随着青蒿氯仿提取物浓度的增加气管环张力逐渐恢复为收缩前水平。表明青蒿氯仿提取物可完全舒张高钾引起气道平滑肌收缩，且该药物作用呈现剂量依赖性，检测结果如图1所示。

实施例2

本实施例中青蒿氯仿提取物的制备方法如下：

选取干燥的青蒿作为原料，磨成粉末；采用去离子水(pH:10)浸泡，并于60℃加热3h，重复2次，收集提取物；将提取物用旋转蒸发器蒸干，收集残余物；残余物溶于200毫升去离子水(pH:10)，用等体积石油醚萃取3次，除去油脂及其他石油醚可溶性物质，收集滤出液；滤出液用等体积氯仿萃取，收集氯仿萃取液并蒸干制得浸膏，即青蒿氯仿提取物，所得青蒿氯仿提取物约为原材料干重的0.5％。

下面将氯仿提取物溶解于DMSO用于生物活性实验检测，检测步骤如下：

1、小鼠气管的体外分离：

雄性成年的BALB/c小鼠颈椎脱臼法处死，将口腔和四肢钉在解剖板上，喷洒75％的酒精后剪开胸腔，暴露出心肺组织，移除心脏之后取下从喉结至肺部的一整段组织，将取下的组织马上浸泡于PSS溶液(NaCl 135mM，KCl 5mM，MgCl2 1mM，CaCl2 2mM，HEPES10mM，glucose 10mM，pH 7.4)中，然后在转移至胶板上进行进一步修剪。在SZM体视显微镜下小心去除气管外周的结缔组织及内腔中的残留血液。

2、小鼠气道平滑肌的张力检测方法：

将小鼠气管剪成长约5mm的气管环后与挂钩连接，小心衔接张力换能器后置于内有6mL PSS并持续通高纯氧的37℃的恒温水浴槽中.前负荷调至300mg，开始平衡，平衡期间，每15min换液1次，共换液4次。平衡完毕后使用80mM高钾溶液或100μM乙酰胆碱(ACh)溶液进行预刺激，充分刺激组织活性后换液洗脱，至恢复至基线，30min后即可开始试验。

3、青蒿氯仿提取物效果测试：

离体小鼠气管环在100μM ACh溶液中发生稳定持续的预收缩，当加入青蒿氯仿提取物后收缩的气管环张力逐渐下降，随着青蒿氯仿提取物浓度的增加气管环张力逐渐恢复为收缩前水平。表明青蒿氯仿部提取物可完全舒张ACh引起气道平滑肌收缩，且该药物作用呈现剂量依赖性，检测结果如图2所示。