本发明涉及中药剂型设计领域，具体地说是一种供雾化用复方桔梗牡丹皮吸入制剂的制备方法。
背景技术：
近年来，随着城市化节奏的加快，环境污染问题，尤其是空气污染问题越来越严峻。有报道表明，空气污染物主要有：氮氧化物、碳氢化合物、硫氧化物、颗粒物(PM)、致病菌等。如何预防空气污染对机体最大的气体交换器官肺脏及相关生理结构的损害，已经成为一个亟待解决的问题。桔梗Platycodon grandifloram(Jacq.)A.DC.作为常用治疗肺病用中药，为多年生草本植物，南北皆适于种植，主产于安徽、河南、山东、辽宁、吉林等省份，人工种植量大，野生资源也很丰富。桔梗性味苦、辛、平，归肺经，具有宣肺，利咽，祛痰，排脓之功效，用于咳嗽痰多、胸闷不畅、咽痛、音哑、肺痈吐脓等症。现代药理学研究表明桔梗有广泛的药理作用，包括镇咳祛痰、解热镇痛、免疫调节、抗炎等。桔梗中含有大量的三萜皂苷类成分，如桔梗皂苷A、C、D、远志皂苷Dl、D2等，其中桔梗皂苷D是主要皂苷，是桔梗主要的有效成分，具有显著的镇咳祛痰、抗肿瘤、抗氧化及免疫增强作用，对呼吸系统疾病有显著的疗效与预防作用。
丹皮酚为毛茛科芍药属植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)的特征性成分。其具有清热凉血、活血化瘀的功效。牡丹皮是在中医临床应用中比较广泛的一种中药，常用于温毒发斑，吐血衄血，夜热早凉，无汗骨蒸，痈肿疮毒，跌扑损伤等症。现代研究表明牡丹皮提取物丹皮酚具有抗病原微生物、抗心肌缺血、抗炎、保肝、降血糖、对心肌动作电位调节、调节免疫细胞等作用。其抗病原微生物的作用对金黄色葡萄球菌菌、肺炎克雷伯杆菌、绿脓杆菌、甲型链球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等均有抑制作用，同时也能非特异性免疫中中性白细胞对细菌的清除作用。丹皮酚与桔梗的联合使用，可起到对呼吸道与肺脏一定的保护作用。但口服桔梗提取物或丹皮酚，易造成恶心、呕吐等胃肠道不良反应，因此如何在保留桔梗与丹皮酚原有功效的基础上，克服这一缺陷，值得深入研究。
吸入疗法已经成为治疗呼吸系统疾病的常用治疗方法，主要包括压力定量吸入、干粉吸入和雾化吸入给药等。与其他给药方法相比，具有剂量可灵活调节、应用方便等特点。由于雾化吸入给药的明显优势，近几年来其临床应用药物种类、治疗疾病类型等有了进一步的发展。肺部具有巨大的肺泡表面积、肺泡细胞膜较薄、丰富的毛细血管网、狭小的气血通路、低酶活性、肺深处较慢的清除速率等生理解剖特点。与传统的给药方式相比，它提高了局部药物浓度，免去全身用药时先使血药浓度达到一定值后，才能对局部感染或其他疾病发挥作用的缺点。因而可以减少毒副作用，特别是免去药物的胃肠道不良反应。综合上述，发明一种桔梗牡丹皮供雾化液体制剂对桔梗和丹皮酚的应用具有实际意义。
技术实现要素：
本发明旨在提供一种供雾化用复方桔梗牡丹皮吸入制剂的制备方法，所要解决的技术问题是在保证丹皮酚与桔梗协同作用的基础上克服其带来的胃肠道不良反应。
本发明得到的供雾化用复方桔梗牡丹皮吸入制剂，每毫升中总皂苷含量不少于2mg，桔梗皂苷D含量不少于0.1mg，丹皮酚含量不少于0.2mg。
本发明供雾化用复方桔梗牡丹皮吸入制剂的制备方法，包括如下步骤：
1、取注射用水，加入助溶剂，搅拌混合均匀，即得溶剂；溶剂中助溶剂与注射用水的体积比为1：99至15：85；
2、向步骤1获得的溶剂中加入桔梗提取物3-100g、丹皮酚提取物0.1-10g、矫味剂0.01-0.5g和抗氧化剂0.01-0.5g，定容至1000-10000mL，搅拌均匀，调pH至4.0，即为初溶液；
3、将所得初溶液依次经粗滤、精滤，获得终溶液；
4、将所得终溶液灌注至安瓿瓶中，封装，灭菌，检漏，包装，得到成品。
步骤1中，所述助溶剂为乙醇、丙二醇、PEG300、甘油中的一种或几种的混合物。
步骤2中，桔梗提取物为药用植物桔梗经加工后质量稳定可靠的提取物成品，其桔梗总皂苷含量不低于60％，桔梗皂苷D含量不低于1％；
步骤2中，丹皮酚提取物为药用植物牡丹经加工后质量稳定可靠的丹皮酚成品，其丹皮酚含量不低于90％；
步骤2中，所述矫味剂为薄荷油、桂皮油、柠檬油、陈皮油及其芳香水剂中的一种或几种的混合物。
步骤2中，所述抗氧化剂为维生素C、亚硫酸钠、乙二胺四乙酸中的一种或几种的混合物。
步骤3中，粗滤采用滤布高置静压过滤，滤布目数为50-200目；精滤采用滤膜减压或加压过滤，滤孔直径为0.01-0.45微米。
步骤4中，灭菌采用高压灭菌锅，121℃、104KPa下灭菌15分钟。
步骤4中，安瓿瓶容量可为1ml-25ml。
本发明的有益效果体现在：
本发明制备供雾化用复方桔梗牡丹皮吸入制剂充分考虑到口服桔梗提取物与丹皮酚易产生胃肠道不良反应等不足之处，采用了先进的制剂工艺，由口服给药变为吸入给药，使药物能直接到达作用部位气管、支气管、肺部组织等，减轻了副作用；同时桔梗提取物镇咳祛痰与丹皮酚的抗菌消炎协同作用，能有效减轻空气污染物对呼吸道与呼吸器官的损伤；除此之外，雾化吸入方法方便快捷，省去了传统中药先煎煮再使用的缺陷；从工艺生产角度来看，本方法技术路线成熟，步骤简单重复性好，可控性高，产品稳定性好。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动成果前提下所获得的所有其他实施例，均属于本发明的保护范围。
实施例1：
本实施例中供雾化用复方桔梗牡丹皮吸入制剂的制备方法如下：
1、取1,2-丙二醇100g，加入900g注射用水搅拌混合均匀，即为溶剂，备用；
2、称取桔梗提取物5g(总皂苷含量为66.12％，桔梗皂苷D含量为2.45％)、丹皮酚提取物0.3g(丹皮酚含量为95.12％)、陈皮油0.05g和亚硫酸氢钠0.1g，加入所述溶剂定容至1000ml，搅拌均匀，加稀盐酸调pH至4.0，得到初溶液。
3、取初溶液，80目滤布高置静压过滤，滤液过0.22微米滤膜，减压抽滤，得到终溶液。
4、将所得终溶液灌注至已洗净的20毫升安瓿瓶中，封装；封装后安瓿瓶置于高压灭菌锅中，121℃、104KPa下灭菌15分钟，得到供雾化用复方桔梗牡丹皮吸入制剂。
实施例2：
1、取1,2-丙二醇100g，加入900g注射用水搅拌混合均匀，即为溶剂，备用；
2、称取桔梗提取物7.5g(总皂苷含量为68.93％，桔梗皂苷D含量为2.77％)、丹皮酚提取物0.5g(丹皮酚含量为92.28％)、薄荷油0.05g和亚硫酸氢钠0.1g，加入所述溶剂定容至1000ml，搅拌均匀，加稀盐酸调pH至4.0，得到初溶液；
3、取初溶液，80目滤布高置静压过滤，滤液过0.22微米滤膜，减压抽滤，得到终溶液；
4、将所得终溶液灌注至已洗净的25毫升安瓿瓶中，封装；封装后安瓿瓶置于高压灭菌锅中，121℃、104KPa下灭菌15分钟，得到供雾化用复方桔梗牡丹皮吸入制剂。
实施例3：
1、取1,2-丙二醇50g，食用95％乙醇50g，加入900g注射用水搅拌混合均匀，即为溶剂，备用；
2、称取桔梗提取物10g(总皂苷含量为66.12％，桔梗皂苷D含量为2.45％)、丹皮酚提取物3g(丹皮酚含量为92.28％)、陈皮油0.5g和亚硫酸氢钠1g，加入所述溶剂定容至1000ml，搅拌均匀，加稀盐酸调pH至4.0，得到初溶液。
3、取初溶液，80目滤布高置静压过滤，滤液过0.22微米滤膜，减压抽滤，得到终溶液。
4、将所得终溶液灌注至已洗净的15毫升安瓿瓶中，封装；封装后安瓿瓶置于高压灭菌锅中，121℃、104KPa下灭菌15分钟，得到供雾化用复方桔梗牡丹皮吸入制剂。
实施例4：
1、取1,2-丙二醇50g，食用95％乙醇50g，加入900g注射用水搅拌混合均匀，即为溶剂，备用；
2、称取桔梗提取物7.5g(总皂苷含量为66.12％，桔梗皂苷D含量为2.45％)、丹皮酚提取物0.5g(丹皮酚含量为92.28％)、薄荷油0.05g和维生素C 0.1g，加入所述溶剂定容至1000ml，搅拌均匀，加稀盐酸调pH至4.0，得到初溶液；
3、取初溶液，80目滤布高置静压过滤，滤液过0.22微米滤膜，减压抽滤，得到终溶液；
4、将所得终溶液灌注至已洗净的10毫升安瓿瓶中，封装；封装后安瓿瓶置于高压灭菌锅中，121℃、104KPa下灭菌15分钟，得到供雾化用复方桔梗牡丹皮吸入制剂。
实施例5：
1、取1,2-丙二醇1000g，加入9000g注射用水搅拌混合均匀，即为溶剂，备用；
2、称取桔梗提取物50g(总皂苷含量为68.93％，桔梗皂苷D含量为2.77％)、丹皮酚提取物3g(丹皮酚含量为95.12％)、陈皮油0.5g和维生素C 1g，加入所述溶剂定容至10000ml，搅拌均匀，加稀盐酸调pH至4.0，得到初溶液。
3、取初溶液，80目滤布高置静压过滤，滤液过0.22微米滤膜，减压抽滤，得到终溶液。
4、将所得终溶液灌注至已洗净的20毫升安瓿瓶中，封装；封装后安瓿瓶置于高压灭菌锅中，121℃、104KPa下灭菌15分钟，得到供雾化用复方桔梗牡丹皮吸入制剂。
实施例6：
1、取1,2-丙二醇1000g，加入9000g注射用水搅拌混合均匀，即为溶剂，备用；
2、称取桔梗提取物50g(总皂苷含量为66.12％，桔梗皂苷D含量为2.45％)、丹皮酚提取物3g(丹皮酚含量为92.28％)、陈皮油0.5g和亚硫酸氢钠C 1g，加入所述溶剂定容至10000ml，搅拌均匀，加稀盐酸调pH至4.0，得到初溶液。
3、取初溶液，80目滤布高置静压过滤，滤液过0.22微米滤膜，减压抽滤，得到终溶液。
4、将所得终溶液灌注至已洗净的10毫升安瓿瓶中，封装；封装后安瓿瓶置于高压灭菌锅中，121℃、104KPa下灭菌15分钟，得到供雾化用复方桔梗牡丹皮吸入制剂。
供雾化用复方桔梗牡丹皮吸入制剂的含量测定：为了规范本品保存，流通，销售和使用过程中质量的控制方式，采用高效液相色谱法测定供雾化用复方桔梗吸入制剂成品中桔梗皂苷D与丹皮酚的含量，同时采用紫外分光光度法测定总皂苷含量。
(一)桔梗皂苷的含量测定
色谱条件：色谱柱为C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈-0.1％磷酸(25∶75)，流速1.0mL·min-1，ELSD检测器，柱温25℃。
对照品溶液的制备：精密称取桔梗皂苷D对照品适量，置10ml量瓶中，加甲醇定容，制得0.3mg/ml桔梗皂苷D对照品溶液，备用。
样品溶液的制备：取本品25ml，加25ml水饱和正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，减压干燥，回收溶剂，残渣加流动相溶解，并转移至25ml容量瓶中，加流动相定容，摇匀，过滤，收取滤液，密封，即得样品溶液，备用，重复三次实验。
测定法：分别精密吸取对照品溶液10μ1、20μ1，样品20μ1，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
经高效液相色谱法检测，本发明制备的供雾化用复方桔梗吸入制剂中理论板数按桔梗皂苷D计算，应不低于3000。桔梗皂苷D最低含量为每毫升0.1mg。
(二)丹皮酚的含量测定
色谱条件：色谱柱为C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇-水(45∶55)，流速1.0mL·min-1，检测波长274nm，柱温25℃。
对照品溶液的制备：精密称取丹皮酚对照品适量，置10ml量瓶中，加甲醇定容，制得20μg/ml丹皮酚对照品溶液，备用。
样品溶液的制备：精密移取取本品1.00ml，转移至10ml容量瓶中，加流动相定容，摇匀，过滤，收取滤液，密封，即得样品溶液，备用，重复三次实验。
测定法：分别精密吸取对照品溶液20μ1，样品溶液20μ1，注入液相色谱仪，测定，用外标法计算，即得。
经高效液相色谱法检测，本发明制备的供雾化用复方桔梗吸入制剂中理论板数按丹皮酚计算，应不低于5000。丹皮酚最低含量为每毫升0.2mg。
(三)总皂苷的含量测定
对照品溶液的制备：对照品溶液的制备：精密称取桔梗皂苷D对照品适量，置10ml量瓶中，加甲醇定容，制得0.3mg/ml桔梗皂苷D对照品溶液，备用。
样品溶液的制备：精密移取取本品1.00ml，转移至10ml容量瓶中，加流动相定容，摇匀，过滤，收取滤液，密封，即得样品溶液，备用，重复三次实验。
测定法：分别精密吸取对照品溶液0.1ml，样品溶液0.1ml，置于不同具塞试管中水浴蒸干，加入5％香草醛-冰醋酸0.20ml，高氯酸0.8ml，摇匀，于60℃水浴加热15min，冰水浴中冷却3min，随行试剂做空白测定，置于紫外分光光度计中，与475nm处，测定吸光度，用外标法计算总皂苷含量，即得。
经紫外分光光度法检测，本发明制备的供雾化用复方桔梗吸入制剂中，总皂苷最低含量为每毫升2mg。