一种具有补气养血功能的组合物及提取物的制备方法与应用与流程

文档序号:12804601阅读:232来源:国知局

本发明涉及药品或保健品技术领域,尤其涉及组合物、提取物及提取物的制备方法与在制备改善气血两虚的产品中的用途。



背景技术:

在劳动过程中人体各系统、器官或全身生理功能和作业能力出现明显下降的状态称为疲劳。它是人体的正常生理反应。疲劳的长期积蓄会造成过度疲劳,发展为病理状态。疲劳是人们熟悉但又十分复杂的一种现象,不论从事何种作业,随着劳动时间延长,均会出现疲劳,表现为作业能力下降,感觉疲倦,对任何用力都感到厌烦等。《素问·宣明五气篇》曰:“因劳致虚,日久成虚劳”,疲劳过度,耗伤脾气,脾虚化生气血不足,则出现身倦乏力,脘闷纳呆。

中医学认为气的根本在肾而统于肺脾。在表则护卫皮毛,充实腠理,使人有抗邪能力;在内则导行血脉,升降阴阳,周流一身。气虚是指由于元气不足引起的一系列病理变化及证候,症见言语音低、呼吸短促微弱,神疲肢倦,懒于行动,自汗,胸闷,脱肛,滑泄不止,平时易于感冒及血失统摄。血,即血液,是循行于脉中的富有营养的红色的液态物质,是构成人体和维持人体生命活动的基本物质之一。血主于心,藏于肝,统于脾,布于肺,根于肾,有规律地循行脉管之中,在脉内营运不息,充分发挥灌溉一身的生理效应。血虚多为失血过多,血液生化之源不足、或因淤血阻滞或因新血不生等,临床表现为面色淡白或萎黄,口唇、眼睑、指甲色淡,心悸多梦,手足发麻,头晕眼花,妇女经血量少色淡、延期甚或闭经,舌淡脉细。因此,气血两虚则表现为“精神差、气色差”,治法应益气补血。

随着现代生活节奏的加快,社会竞争的加剧,大部分人群面临着工作、学习、生活带来的巨大压力,疲劳、气血不足成为困扰很多人的健康问题。近年来随着人民生活水平的提高,人们的消费观念、健康观念发生了较大变化,越来越多的人群开始重视营养保健品的使用。目前市场上的抗疲劳产品种类繁多,组成也多种多样。但是,疲劳发生往往是综合因素导致的,而目前的抗疲劳保健品往往不能具有确切的效果,功能也大多十分不稳定。因此,进一步的开发功能显著且稳定的抗疲劳产品十分必要。



技术实现要素:

有鉴于此,本发明要解决的技术问题在于提供组合物、提取物及提取物的制备方法与在制备改善气血两虚的产品中的用途,本发明提供的组合物能够具有补血、抗疲劳和/或增强免疫力功能。

本发明提供的组合物由人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉组成。

本发明提供的组合物由以下质量份的组分组成:人参10~30份,蛹虫草10~30份,银耳5~30份,铁皮石斛1~10份,龙眼肉5~30份。

一些实施例中,本发明提供的组合物由以下质量份的组分组成:人参10~30份,蛹虫草10~30份,银耳5~10份,铁皮石斛1~10份,龙眼肉5~10份

一些实施例中,本发明提供的组合物由以下质量份的组分组成:人参10~30份,蛹虫草10~30份,银耳10~30份,铁皮石斛10份,龙眼肉10~30份。

一些具体实施例中,本发明提供的组合物由以下质量份的组分组成:人参30份,蛹虫草30份,银耳10份,铁皮石斛10份,龙眼肉10份。

一些具体实施例中,本发明提供的组合物由以下质量份的组分组成:人参30份,蛹虫草30份,银耳5份,铁皮石斛1份,龙眼肉5份。

一些具体实施例中,本发明提供的组合物由以下质量份的组分组成:人参10份,蛹虫草10份,银耳10份,铁皮石斛10份,龙眼肉10份。

一些具体实施例中,本发明提供的组合物由以下质量份的组分组成:人参10份,蛹虫草10份,银耳30份,铁皮石斛10份,龙眼肉30份。

人参为五加科植物人参panaxginsengc.a.mey.的干燥根。栽培者为园参,野生者为山参。是我国名贵的中草药材,《神农本草经》记载,人参有“补五脏、安精神、定魂魄、止惊悸、除邪气、明日开心益智”的功效,现代医学研究证明,人参具有调节中枢神经系统、调节物质代谢、补血益气等功效。

龙眼肉为无患子科龙眼属植物龙眼dimocarpuslonganlour.的假种皮,又名,龙眼、桂圆或圆眼。《药品化义》中记载“桂圆,大补阴血,凡上部失血之后,入归脾汤同莲肉、芡实以补脾阴,使脾旺统血归经”,龙眼肉是滋补佳品。

蛹虫草为子囊菌门,肉座目,虫草菌科、虫草属的模式种。学名为cordycepsmilitaris,其中的虫草酸、虫草素和虫草多糖是主要的药效成分,具有提高免疫力,抗衰老,抑制肿瘤生长等作用,是珍贵的药食同源药材。

铁皮石斛为兰科植物铁皮石斛dendrobiumofficinalekimuraetmigo的茎。《中国药典》中记录铁皮石斛“益胃生津,滋阴清热,用于阴伤津亏”,现代医学研究证明其具有增强免疫力、抗疲劳、助消化和降血糖降血脂等功效。

银耳为真菌类银耳科银耳属植物银耳tremellafuciformisberk.的子实体,有“菌中之冠”的美称,是日常食用或中药组方的佳品。具有补肺益气,养阴润燥。用于病后体虚,肺虚久咳,痰中带血,崩漏,大便秘结,高血压病,血管硬化的功效。

本发明以人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉进行复配,所述人参为人参原药或饮片,所述蛹虫草为蛹虫草原药或饮片,所述银耳为银耳原药或饮片,所述铁皮石斛为铁皮石斛原药或饮片,所述龙眼肉为龙眼肉原药或饮片。所获得的组合物中各组分产生增效协同作用,对气血两虚导致的贫血、易疲劳、免疫力低下有着显著的改善作用,其效果显著优于单独使用各组分,也显著优于缺少一种或多种组分的处方。实验表明,在本发明提供的比例范围内,组方有着更好的效果,说明适宜的配比是影响本发明组合物效果的重要因素之一。

本发明还提供了一种提取物,由本发明所述的组合物制得。

本发明所述提取物的制备方法为,将人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉以水提取,将提取液经浓缩、干燥,获得所述提取物。

所述以水提取中,水的质量为组合物质量的20倍,水的温度为100℃,提取的压强为常压。所述常压是指一个大气压。

所述以水提取的次数为2次,第一次提取2h,滤渣与20倍质量水混合后,进行第二次提取,提取时间为1h。

所述浓缩至每100ml上清液含有100g生药量(即本发明组合物)。

所述干燥为冷冻干燥或者70℃烘干。

本发明所述提取物的制备方法中所述浓缩与干燥之间还包括醇沉的步骤;所述醇沉包括:提取液经浓缩后,与乙醇水溶液混合,静置后分离上清液与沉淀;所述上清液经浓缩、干燥制得提取物;所述沉淀经干燥制得提取物。

所述乙醇水溶液中,乙醇的体积分数为40%~95%。

本发明所述组合物或提取物在制备增加红细胞数量、提高血红蛋白和/或血清铁蛋白水平的产品中的应用。

给予大鼠本发明提供提取物30天,再以放血和环磷酰胺造模10天后,检测对大鼠取血进行检测,结果表明,给予本发明提供提取物的大鼠体内红细胞数量、血红蛋白含量和血清铁蛋白水平皆显著高于模型组或对照组。说明本发明提供的组合物或提取物能够具有补血、改善贫血的作用。本发明提供的提取物用于补血的剂量为1ml/100g。

本发明所述组合物或提取物在制备补血产品中的应用。

本发明所述组合物或提取物在制备降低血液乳酸水平、降低血清尿素氮水平和/或降低血清磷酸肌酸激酶活力的产品中的应用。

所述血液乳酸水平、降低血清尿素氮水平和/或降低血清磷酸肌酸激酶活力为力竭游泳实验后进行检测。

给予大鼠本发明提供提取物30天,再以放血和环磷酰胺造模10天后,检测对大鼠取血进行检测,结果表明,给予本发明提供提取物的大鼠血液内乳酸含量、血清尿素氮含量、血清磷酸肌酸激酶活力(ck)皆显著下降,另有试验表明,本发明提供的组合物或提取物能够显著延长气血两虚模型大鼠的力竭游泳时间。说明本发明提供的组合物或提取物能够具有良好的抗疲劳的作用。本发明提供的提取物用于抗疲劳的剂量为1ml/100g。

本发明所述组合物或提取物在制备提高白细胞数量、提高动物脾指数、提高胸腺指数和/或提高肝糖原水平的产品中的应用。

给予大鼠本发明提供提取物30天,再以放血和环磷酰胺造模10天后,检测对大鼠取血进行检测,结果表明,造模后大鼠脾指数升高、胸腺指数升高、肝脏中肝糖原储备含量升高,且血液中白细胞数量也得到显著提高。说明本发明提供的组合物具有提高免疫力的作用。本发明提供的提取物用于提高免疫力的剂量为1ml/100g。

本发明所述组合物或提取物在制备抗疲劳和/或提高免疫力的产品中的应用。

本发明所述组合物或提取物在制备改善气血两虚的产品中的应用。

实验表明,本发明提供的组合物或提取物,有助于气血虚模型大鼠体重的增长,改善其外观状况及精神面貌;显著增加大鼠的力竭游泳时间,提高其耐受力;增加大鼠的脾指数、胸腺指数和肝糖原,提高其免疫能力;降低大鼠的血乳酸、血清尿素氮和血清磷酸肌酸激酶活力,提高其抗疲劳能力。

一种改善气血两虚的产品,其特征在于,包括本发明所述组合物或提取物。

所述改善气血两虚的产品的剂型是胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液。

本发明提供了一种由人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛、龙眼肉组成的组合物,并提供了其提取物及提取物的制备方法。实验表明,本发明提供的组合物或提取能够具有改善贫血、抗疲劳、提高免疫力的作用,能够用于制备改善气血两虚的产品。本发明提供的组合物中各组分产生增效协同作用其效果显著优于单独使用各组分,也显著优于缺少一种或多种组分的处方。

具体实施方式

本发明提供了组合物、提取物及提取物的制备方法与在制备改善气血两虚的产品中的用途,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。

本发明采用的试材皆为普通市售品,皆可于市场购得。

下面结合实施例,进一步阐述本发明:

实施例1:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为30份、30份、10份、10份、10份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至每100ml含有100g生药量,冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得中药组合物提取物。

实施例2:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为30份、30份、5份、1份、5份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至每100ml含有100g生药量,冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得中药组合物提取物。

实施例3:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为10份、10份、10份、10份、10份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至每100ml含有100g生药量,冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得中药组合物提取物。

实施例4:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为10份、10份、30份、10份、30份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至每100ml含有100g生药量,冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得中药组合物提取物。

实施例5:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为10份、10份、30份、10份、30份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至适量,加入95%乙醇至40%乙醇体积,静置过夜,离心获得上清液和沉淀,上清液浓缩至每100ml含有100g生药量,冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得40%中药组合物提取物。

实施例6:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为10份、10份、30份、10份、30份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至适量,加入95%乙醇至40%乙醇体积,静置过夜,离心获得上清液和沉淀,沉淀冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得40%中药组合物提取物。

实施例7:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为10份、10份、30份、10份、30份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至适量,加入95%乙醇至60%乙醇体积,静置过夜,离心获得上清液和沉淀,上清液浓缩至每100ml含有100g生药量,冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得60%中药组合物提取物。

实施例8:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为10份、10份、30份、10份、30份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至适量,加入95%乙醇至60%乙醇体积,静置过夜,离心获得上清液和沉淀,沉淀冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得60%中药组合物提取物。

实施例9:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为10份、10份、30份、10份、30份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至适量,加入95%乙醇至80%乙醇体积,静置过夜,离心获得上清液和沉淀,上清液浓缩至每100ml含有100g生药量,冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得80%中药组合物提取物。

实施例10:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为10份、10份、30份、10份、30份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至适量,加入95%乙醇至80%乙醇体积,静置过夜,离心获得上清液和沉淀,沉淀冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得80%中药组合物提取物。

实施例11:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为30份、30份、5份、1份、5份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至适量,加入95%乙醇至40%乙醇体积,静置过夜,离心获得上清液和沉淀,上清液浓缩至每100ml含有100g生药量,冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得40%中药组合物提取物。

实施例12:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为30份、30份、5份、1份、5份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至适量,加入95%乙醇至40%乙醇体积,静置过夜,离心获得上清液和沉淀,沉淀冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得40%中药组合物提取物。

实施例13:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为30份、30份、5份、1份、5份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至适量,加入95%乙醇至60%乙醇体积,静置过夜,离心获得上清液和沉淀,上清液浓缩至每100ml含有100g生药量,冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得60%中药组合物提取物。

实施例14:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为30份、30份、5份、1份、5份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至适量,加入95%乙醇至60%乙醇体积,静置过夜,离心获得上清液和沉淀,沉淀冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得60%中药组合物提取物。

实施例15:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为30份、30份、5份、1份、5份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至适量,加入95%乙醇至80%乙醇体积,静置过夜,离心获得上清液和沉淀,上清液浓缩至每100ml含有100g生药量,冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得80%中药组合物提取物。

实施例16:中药提取物的制备方法

按照重量份分别为30份、30份、5份、1份、5份称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至适量,加入95%乙醇至80%乙醇体积,静置过夜,离心获得上清液和沉淀,沉淀冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得80%中药组合物提取物。

对比例1~10

处方如表1:

按照重量份分别称取人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛和龙眼肉,加入20倍水,煎煮2h,过滤,收集滤液,滤渣加入20倍水,煎煮1h,过滤,合并2次滤液;浓缩滤液至每100ml含有100g生药量,冷冻干燥或者70℃烘干,粉碎即得中药组合物提取物。

实施例17:中药组合物对气血两虚大鼠模型的干预研究

1材料和方法

1.1材料

1.1.1实验动物

spf大鼠,雄性,动物适应性喂养5天后,将所有大鼠称体重,按照体重由轻到重排列。剔除重量在150~160g以及240g以上的大鼠。将体重在180-230g的大鼠分为12个区间,每个区间4.2g,随机分为每组12只。

本次实验所需大鼠均从华中农业大学实验动物中心订购且均由本校实验动物中心进行饲养及管理。

1.1.2供试品

本次研究所需的配方药物由公司提供,需在4摄氏度避光保存。

1.1.3主要试剂及仪器

铁蛋白检测试剂盒(南京建成;货号:h129;48t)

电子天平bsa124s,赛多利斯科学仪器(北京)有限公司;

台式高速离心机tg16-ⅱ,长沙平凡仪器仪表有限公司;

血细胞分析仪xfa6100,美国贝克曼库尔特;

灌胃针,1ml注射器,1.5mlep管,移液枪,离心机,小剪刀镊子等。

1.2方法

1.2.1动物分组

将spf级大鼠进行随机分组,分为正常对照组、模型组、阳性药对照组、实施例1~16组,对比例1~15组;每组12只。其中阳性药组(当归补血口服液)给药量为1ml/100g。

1.2.2动物造模

大鼠分组后预给药30d(给药剂量为1ml/100g)后,除空白对照组外,其他各组开始造模10d。造模第一日每鼠尾部(眼眶)放血5ml/kg,隔日再放血1次,共放血5次,大鼠于造模的第2日,每鼠腹腔注射环磷酰胺40mg/kg,隔日注射,(以后的剂量为20mg/kg),共注射5次,造气血两虚模型共10d。

1.2.3动物外观及行为学观察

主要观察造模后各组中大鼠的精神状态、体重、眼、耳、皮毛色泽等外观行为变化。

精神状态:正常;自发活动减少;逃避、攻击行为明显减少。

外观状况:观察大鼠毛发(光泽、稀疏脱落程度)、耳边缘、眼部变化(眼球及眼周围颜色)。

体重:称量体重变化。

结果表明,造模后大鼠的耳边缘明显要比正常组大鼠颜色苍白,鼻周围明显要比正常组血色暗淡,眼球颜色比正常组暗淡,无神。造模10天后,与空白组大鼠比较,模型组活动明显减弱,逃避、攻击行为明显减少,通过对模型大鼠外观及行为学的观察,以上表明,造模后大鼠有明显的气虚血虚状态,表明气血两虚模型大鼠造模成功。

表2造模后大鼠体重占初始体重百分比(%)(n=12)

注:*示与空白对照组相比存在显著性差异,p<0.05;

#示与模型组相比存在显著性差异,p<0.05;

a示对比例与实施例1相比存在显著性差异,p<0.05;

b示对比例与实施例2相比存在显著性差异,p<0.05;

c示对比例与实施例3相比存在显著性差异,p<0.05;

d示对比例与实施例4相比存在显著性差异,p<0.05。

如表2所示,空白对照组大鼠体重未出现明显波动;模型组大鼠体重呈下降趋势,在第3天至第7天下降幅度明显,第10天下降至初始体重的86%;阳性药对照组大鼠体重呈先上升再下降趋势,第5天达到最高值为初始体重的107%;各个实施例组大鼠体重均呈逐渐上升趋势,其中实施例2和实施例4组大鼠体重上升较为显著,且与模型组与空白组对比均有显著性差异(p<0.05),体重上升至最大时达到初始体重的113%左右,证明实施例2或实施例4的中药组合物对造模后大鼠体重有明显的恢复效果。醇提取中药组合物实施例中,60%醇提取中草药组合物优于40%醇提和80%醇提,且与模型组相比具有差异性(p<0.05)。

1.2.4外周血相的测定

大鼠气血两虚模型成功后,末次放血造模中,收集大鼠眼眶取血1.5ml,其中0.5ml全血(肝素抗凝450u·ml-1),用动物血细胞分析仪测定血常规包括红细胞计数(rbc)、白细胞计数(wbc)、血红蛋白(hb)。

另取1ml于干燥ep管收集全血,充分静置使得红细胞充分自然凝固后,3000r/min离心10min,取上层血清(约200μl)。按铁蛋白试剂盒(南京建成,货号:h129;48t)操作说明测定。

大鼠立即腹主动脉取血3ml,充分静置使得红细胞充分自然凝固后,3000r/min离心10min,取上层血清备用,按试剂盒说明书操作检测。

结果如表3:

表3造模后大鼠红细胞和白细胞含量变化(n=12)

注:*示与空白对照组相比存在显著性差异,p<0.05;

#示与模型组相比存在显著性差异,p<0.05;

a示对比例与实施例1相比存在显著性差异,p<0.05;

b示对比例与实施例2相比存在显著性差异,p<0.05;

c示对比例与实施例3相比存在显著性差异,p<0.05;

d示对比例与实施例4相比存在显著性差异,p<0.05。

如表3,大鼠经预给药30天,再放血和环磷酰胺造模10天后,测得红细胞含量和白细胞含量。

其中,红细胞含量,与空白对照组比较,模型组中红细胞数量显著降低(p<0.05)。与模型组比较,阳性药对照组显著提高造模后大鼠的红细胞数量。实施例1~4组大鼠的红细胞数量均高于模型组也高于各对比例组,且实施例1~4组与模型组或对比例组相比均具有显著性差异(p<0.05),经水提的实施例效果优于经醇沉的实施例。所有实施例中,实施例4组的中药提取物对造模后大鼠的红细胞数量恢复具有更好效果,与其他实施例相比存在显著差异(p<0.05)。

白细胞含量,与空白对照组比较,模型组中白细胞数量显著降低(p<0.05)。与模型组比较,阳性药对照组没有显著提高造模后大鼠的白细胞数量。且实施例1~4组与模型组或对比例组相比均具有显著性差异(p<0.05),经水提的实施例效果优于经醇沉的实施例。所有实施例中,实施例4组的中药提取物对造模后大鼠的白细胞数量恢复具有更好效果,与其他实施例相比存在显著差异(p<0.05)。

表4造模后大鼠血红蛋白和血清铁蛋白含量变化

注:*示与空白对照组相比存在显著性差异,p<0.05;

#示与模型组相比存在显著性差异,p<0.05;

a示对比例与实施例1相比存在显著性差异,p<0.05;

b示对比例与实施例2相比存在显著性差异,p<0.05;

c示对比例与实施例3相比存在显著性差异,p<0.05;

d示对比例与实施例4相比存在显著性差异,p<0.05。

如表4,大鼠经预给药30天,再放血和环磷酰胺造模10天后,测得血红蛋白含量和血清铁蛋白含量。

其中,血红蛋白含量,与空白对照组比较,模型组中血红蛋白含量显著降低(p<0.05)。与模型组比较,阳性药对照组显著提高造模后大鼠的血红蛋白的含量(p<0.05)。且实施例1~4组与模型组或对比例组相比均具有显著性差异(p<0.05),经水提的实施例效果优于经醇沉的实施例。所有实施例中,实施例4组的中药提取物对造模后大鼠的血红蛋白含量恢复具有更好效果,与其他实施例相比存在显著差异(p<0.05)。

血清铁蛋白含量,与空白对照组比较,模型组大鼠的血清中铁蛋白含量显著降低(p<0.05)。与模型组比较,阳性药对照组显著提高造模后大鼠的血清中铁蛋白含量(p<0.05)。且实施例1~4组与模型组或对比例组相比均具有显著性差异(p<0.05),经水提的实施例效果优于经醇沉的实施例。所有实施例中,实施例4组的中药提取物对造模后大鼠的血清铁蛋白含量恢复具有更好效果,与其他实施例相比存在显著差异(p<0.05)。

1.2.5力竭游泳试验

大鼠气血两虚模型成功后,末次给药24小时后,各组大鼠尾部负重3%体重铅皮置于游泳箱中游泳。水深不少于50cm,水温31℃±1.0℃,当大鼠游至没入水底,超过10秒,视为力竭。记录大鼠自游泳开始至力竭时间,力竭游泳后,大鼠立即腹主动脉取血3ml,充分静置使得红细胞充分自然凝固后,3000r/min离心10min,取上层血清备用,按试剂盒说明书操作检测血乳酸(bla)(南京建成;货号:a019-2;48t)、血清尿素氮(bun)(货号:c013-2脲酶法;96t)和血清磷酸肌酸激酶活性(ck)(南京建成;货号:a032;24t)。

表5造模后大鼠力竭游泳时间及血液生化指标含量(n=12)

注:*示与空白对照组相比存在显著性差异,p<0.05;

#示与模型组相比存在显著性差异,p<0.05;

a示对比例与实施例1相比存在显著性差异,p<0.05;

b示对比例与实施例2相比存在显著性差异,p<0.05;

c示对比例与实施例3相比存在显著性差异,p<0.05;

d示对比例与实施例4相比存在显著性差异,p<0.05。

如表5,大鼠经预给药30天,再放血和环磷酰胺造模10天后负重游泳时间结果表明,与空白对照组相比,模型组中大鼠的负重游泳时间大幅度降低(p<0.05)。与模型组相比,阳性药对照组中大鼠的负重游泳时间显著增加(p<0.05)。且实施例1~4组与模型组或对比例组相比,负重游泳时间均显著性提高(p<0.05),经水提的实施例效果优于经醇沉的实施例。所有实施例中,实施例2组的中药提取物对造模后大鼠的血清铁蛋白含量恢复具有更好效果,与其他实施例相比存在显著差异(p<0.05)。

血液生化指标检测结果表明,与模型组比较,阳性药对照组显著降低造模后大鼠血乳酸含量、血清尿素氮含量及血清磷酸肌酸激酶活力(p<0.05)。与模型组相比,阳性药对照组中大鼠的的血液生化指标显著降低(p<0.05)。且实施例1~4组与模型组或对比例组相比,血液生化指标也显著降低(p<0.05),经水提的实施例效果优于经醇沉的实施例。所有实施例中,实施例2组的中药提取物对造模后大鼠的血乳酸含量、血清尿素氮含量及血清磷酸肌酸激酶活力有着更显著的减低作用,该效果与其他实施例相比存在显著差异(p<0.05)。

1.2.6脾指数和胸腺指数的测定

将试验大鼠腹主动脉取血后,解剖取脾脏、胸腺,于生理盐水中漂洗掉表面的血液,在用滤纸吸去水分,用电子天平称重,计算胸腺和脾指数,胸腺指数=胸腺重(mg)/鼠重(g);脾指数=脾重(mg)/鼠重(g)。

1.2.7肝糖原测定

腹主动脉取血后的大鼠,取肝脏,肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干,称重(样本重量≤100mg为宜,不要>100mg)。然后加入碱液破坏组织保留糖原,按样本重量(9mg):碱液体积(μl)=1:3,一起加入试管中,用冰箱保鲜膜将管口扎起,以防水分蒸发,在膜上用针头扎一小孔,以便气体热胀冷缩,沸水浴煮20min,流水冷却。将糖原水解液进一步制备成糖元检测液,待测。按测试盒操作说明进行检测。

表6造模后大鼠脾指数、胸腺指数和肝糖原指标含量(n=12)

注:*示与空白对照组相比存在显著性差异,p<0.05;

#示与模型组相比存在显著性差异,p<0.05;

a示对比例与实施例1相比存在显著性差异,p<0.05;

b示对比例与实施例2相比存在显著性差异,p<0.05;

c示对比例与实施例3相比存在显著性差异,p<0.05;

d示对比例与实施例4相比存在显著性差异,p<0.05。

如表6所示,大鼠经预给药30天,再放血和环磷酰胺造模10天后,测得其脾指数、胸腺指数和肝糖原数值。

与空白组比较,模型组大鼠脾指数或胸腺指数显著降低(p<0.05)。与模型组比较,阳性药对照组显著提高造模后大鼠脾指数或胸腺指数(p<0.05)。实施例1~4组大鼠脾指数、胸腺指数均高于模型组或各对比例组;经水提的实施例效果优于经醇沉的实施例。所有实施例中,实施例2组的中药提取物对造模后大鼠的脾指数、胸腺指数的提高具有更好效果,与其他实施例相比存在显著差异(p<0.05)。

与空白组比较,模型组大鼠肝脏中肝糖原储备显著降低(p<0.05)。与模型组比较,阳性药对照组显著降低造模后大鼠肝脏中肝糖原储备,实施例1~4组均可以升高大鼠肝脏中肝糖原储备。实施例1~4组大鼠肝糖原储备均高于模型组或各对比例组;经水提的实施例效果优于经醇沉的实施例。所有实施例中,实施例2组的中药提取物对造模后大鼠的肝糖原储备的提高具有更好效果,与其他实施例相比存在显著差异(p<0.05)。

由以上结果可以看出,这种含有人参、蛹虫草、银耳、铁皮石斛、龙眼肉提取物的中药组合物有助于气血虚模型大鼠体重的增长,改善其外观状况及精神面貌;显著增加大鼠的力竭游泳时间,提高其耐受力;增加大鼠的脾指数、胸腺指数和肝糖原,提高其免疫能力;降低大鼠的血乳酸、血清尿素氮和血清磷酸肌酸激酶活力,提高其抗疲劳能力。有助于气血两虚模型大鼠体重的增长,改善其外观状况及精神面貌;显著提高模型大鼠的红细胞数量、白细胞数量、血红蛋白含量及血清铁蛋白含量,具有补血或改善贫血的作用。综合以上结果,说明本发明组合物能够改善大鼠气血两虚的状态,具有补血、提高机体免疫力及抗疲劳的作用。

以上仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

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