本发明涉及一种具有抗癌效果的鸦胆子碘化油及其制备和应用，属于医药
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：肝细胞性肝癌是我国常见高发的恶性肿瘤，发病率高，转移早，预后差，缺乏有效的治疗方法。据国际癌症研究中心估计，2015年中国共计约有280万人死于癌症，平均每天7500人。肝癌的化疗及放疗不能获得满意疗效，化学抗癌药物在作用于靶细胞的同时往往会对其他正常细胞造成伤害，引起多种副作用，而植物药、中药在抗癌、抗肿瘤方面有独特的优势，因此目前从天然植物中提取抗癌物质具有重要的应用价值和广阔的研究前程。鸦胆子是苦木科植物鸦胆子的干燥成熟果实，主要成分有鸦胆因、鸦胆子苦素、鸦胆子苷等。鸦胆子仁含鸦胆子油56.23％，油主要是由油酸、亚油酸、软脂酸、棕榈酸、花生烯酸等组成。目前已经证实鸦胆子油除了具有抗炎、抗菌作用外，还具有对癌细胞的直接杀伤作用。研究证明鸦胆子油为细胞周期非特异性抗肿瘤药物，对多种癌细胞均有杀伤和抑制作用，能明显通过抑制阻碍癌细胞的增殖，通过调节机体免疫功能杀死癌细胞，除此以外还具有逆转药物的耐药性的特点，与其他抗癌药物共同作用时，具有协同作用。鸦胆子油具体的抗癌机制可大体归纳为以下几个方面：1鸦胆子油对细胞凋亡具有诱导作用；2鸦胆子油可有效抑制肿瘤细胞dna的转录与合成；3鸦胆子油对肿瘤细胞生物膜结构具有明显的破环作用；4鸦胆子油对dna拓扑异构酶ⅱ具有抑制和逆转耐药性作用。碘化油又名碘油，是碘结合天然植物油中不饱和脂肪酸双键形成的有机碘化物。目前临床，碘化油除了用作药物载体，还用作肝癌治疗栓塞剂。临川研究表明，对于不能手术的中晚期肝癌，经动脉灌注化疗栓塞术能明显的延长患者的生存期，成为目前公认的肝癌非手术手段中疗效最好的治疗方法。碘化油的栓塞作用是由于它经动脉输入后能选择性积聚于肿瘤血管内，这是因为肿瘤新生血管走向迂曲，管壁缺乏肌层和弹力层，无神经支配，而且由于肿瘤分泌的渗透增强因子的作用使其通透性增高，致黏性较大的碘化油不易被血流冲散而滞留在肿瘤血管、血窦内或漏到肿瘤组织间歇内；除此以外肿瘤血管缺乏神经、肌层，致使管壁不能收缩，流速缓慢，黏附的碘化油不易被冲掉。目前临床上大多用碘化油作为肝癌治疗栓塞剂。在对肝癌动脉栓塞治疗时，碘化油混合栓塞剂可通过门静脉胆支的胆管周围静脉丛进入门静脉中，造成一过性阻断肝脏和肿瘤组织中的毛细血管床血流。同时，碘化油对肝癌组织具有趋向性和亲和力，能较密集的沉积于肝癌组织中。技术实现要素：本发明首先提供了一种鸦胆子碘化油，是一种双功能的用于治疗肝癌的物质。所述鸦胆子碘化油是：主要由油酸、亚油酸、硬脂酸等饱和、不饱和脂肪酸组成的鸦胆子果实中通过浸取法得到的植物油。其中油酸含量为50-65％，亚油酸含量为10-20％，其中油酸：亚油酸约为3：1。所述鸦胆子碘化油的制备方法，包括以下步骤：在碘化氢发生器中加入赤磷、碘，连续缓慢滴加纯水，将所产生的碘化氢气体通入鸦胆子油中，得到碘化油。所述鸦胆子碘化油的制备方法中，鸦胆子油、赤磷、碘的质量比可以为10-20：5-10：40-80。所述鸦胆子碘化油的制备方法中，水的滴加速度可以控制在10-100μl/min。所述鸦胆子碘化油的制备方法中，碘化氢发生器可加热至40-45℃。所述鸦胆子碘化油的制备方法中，将所产生的碘化氢气体通入鸦胆子油中，反应12-24h。所述碘化油中，含碘量为25％-30％。所述鸦胆子油可以是市售的鸦胆子油，也可以是通过常规方法制备提取的鸦胆子油。为了解决鸦胆子油安全性差、不良反应多等一系列问题，本发明使用了吸附剂对鸦胆子油进行了精炼：将鸦胆子油原料加热到70-80℃，再加入重量为粗油体积3-5％的干燥活性炭，充分搅拌，30-60分钟后减压抽提得到黄色粗油；再向粗油中加入体积为5-10％的干燥高岭土，充分混匀搅拌，30分钟后减压抽提得到鸦胆子油；将鸦胆子油在110℃条件下700mmhg减压通氮1小时，最后得到精炼鸦胆子油。本发明提供的一种新型鸦胆子碘化油，在具有栓塞效果的基础上，同样具有抑制肝癌细胞hepg2生长的能力，能够在临床中拥有栓塞作用，停留在肿瘤部位抗癌。附图说明图1体外模拟栓塞模型。具体实施方式实施例1鸦胆子油的精炼将市售或提取墨绿色50g鸦胆子油加热至70℃，加入5g干燥后的活性炭，充分搅拌后减压抽提得到黄色粗油；再将黄色粗油加热至70℃，加入5g干燥后的高岭土，充分搅拌后减压抽提得到鸦胆子油；将得到的鸦胆子油在减压条件下通氮气1小时，得到48.97g纯鸦胆子油。实施例2鸦胆子油的质量检验(1)纯鸦胆子油的含量测定取2滴实施例1制备得到的精制鸦胆子油，溶于2mlnaoh甲醇溶液(0.5mol/l)，加热至65℃，30分钟后加入2ml三氟化硼甲醇溶液(1：3)并加热至70℃，加热10分钟，于室温条件下加入2ml色谱纯正己烷，剧烈摇晃后静止分层，取上相有机相1ml加入无水硫酸钠或饱和食盐水后用有机滤膜过滤。采用gc-2010plus(岛津)气相色谱柱，并且设定气相色谱条件：tr-fame260m154p(60m×0.25mm，0.25μm)；载气，高纯氮气；分流比，100：1；进样量1μl；进样口温度250℃；检测器温度250℃；程序升温，60℃保持3min，以5℃/min升至175℃，保持15min，以2℃/min升至220℃，保持10min对样品进行测定。测得鸦胆子油中油酸含量为62.2％，亚油酸含量为19％。(2)其他项目检测：水分与挥发物：不得过1.0％(中国药典2015版)杂质：不得过0.05％相对密度应为：0.910-0.920灼烧残渣：不得超过0.1％实施例3鸦胆子碘化油的制备在碘化氢气体发生器中加入赤磷7g，碘片70g，以10μl/min速度连续滴加水滴，加热至40℃，将产生的碘化氢气体通入20g纯鸦胆子油中，反应24小时，得粗制鸦胆子碘化油28.14g。用8ml无水乙醇洗涤粗制碘化油10次脱除游离碘；再用10ml偏重亚硫酸钠洗涤5次，脱色，最后用20ml蒸馏水洗涤5次，真空干燥后既得精炼碘化油27.78g。(1)碘含量测定：根据2015版中国药典，取0.6g碘化油，置蒸发皿中，加40mlkoh乙醇溶液，水浴蒸发至块状物，用少量水洗净，洗液并入蒸发皿中，继续蒸发至干，用热水150ml将残渣洗入具塞锥形瓶，放冷加入5ml冰醋酸与5滴曙红钠指示液5滴，用0.1mol/l硝酸银溶液滴定至红色，每1ml硝酸银滴定液等于12.69mg的碘。测定计算得到含碘量28.01％。(2)游离碘测定：根据2015版中国药典，取碘化油1g，加三氯甲烷5ml，摇匀，加10ml蒸馏水和0.5g碘化钾，溶解后，加淀粉指示液1ml，摇匀后静置，水层无色，说明游离碘含量达标。(3)转化率测定：将20g碘化油用饱和食盐水洗涤3次，静止分层。回收上层油相，减压条件下旋转蒸发除去过量的乙醇，然后加入无水硫酸钠，静止过夜去除多余的水分。减压过滤除去硫酸钠结晶，称量得19.28g。再与等体积正戊烷混合，放置于-20℃冰箱中12小时，减压抽滤去除甘油三脂，得到17.45g产品，则其转化率为87.25％。实施例4鸦胆子碘化油的制备在碘化氢气体发生器中加入赤磷7g，碘片60g，以10μl/min速度连续滴加水滴，加热至40℃，将产生的碘化氢气体通入20g纯鸦胆子油中，反应24小时，得粗制鸦胆子碘化油26.82g。用8ml无水乙醇洗涤粗制碘化油10次脱出游离碘；再用10ml偏重亚硫酸钠洗涤5次，脱色，最后用20ml蒸馏水洗涤5次，真空干燥后既得精炼碘化油26.61g。(1)碘含量测定：根据2015版中国药典，取0.6g碘化油，置蒸发皿中，加40mlkoh乙醇溶液，水浴蒸发至块状物，用少量水洗净，洗液并入蒸发皿中，继续蒸发至干，用热水150ml将残渣洗入具塞锥形瓶，放冷加入5ml冰醋酸与5滴曙红钠指示液5滴，用0.1mol/l硝酸银溶液滴定至红色，每1ml硝酸银滴定液等于12.69mg的碘。测定计算得到含碘量24.84％。(2)游离碘测定：根据2015版中国药典，取碘化油1g，加三氯甲烷5ml，摇匀，加10ml蒸馏水和0.5g碘化钾，溶解后，加淀粉指示液1ml，摇匀后静置，水层无色，说明游离碘含量达标。(3)转化率测定：将20g碘化油用饱和食盐水洗涤3次，静止分层。回收上层油相，减压条件下旋转蒸发除去过量的乙醇，然后加入无水硫酸钠，静止过夜去除多余的水分。减压过滤除去硫酸钠结晶，称量得18.92g。再与等体积正戊烷混合，放置于-20℃冰箱中12小时，减压抽滤去除甘油三脂，得到17.42g产品，则其转化率为87.1％。实施例5鸦胆子碘化油的制备在碘化氢气体发生器中加入赤磷7g，碘片80g，以10μl/min速度连续滴加水滴，加热至40℃，将产生的碘化氢气体通入20g纯鸦胆子油中，反应24小时，得粗制鸦胆子碘化油29.11g。用8ml无水乙醇洗涤粗制碘化油10次脱出游离碘；再用10ml偏重亚硫酸钠洗涤5次，脱色，最后用20ml蒸馏水洗涤5次，真空干燥后既得精炼碘化油28.62g。(1)碘含量测定：根据2015版中国药典，取0.6g碘化油，置蒸发皿中，加40mlkoh乙醇溶液，水浴蒸发至块状物，用少量水洗净，洗液并入蒸发皿中，继续蒸发至干，用热水150ml将残渣洗入具塞锥形瓶，放冷加入5ml冰醋酸与5滴曙红钠指示液5滴，用0.1mol/l硝酸银溶液滴定至红色，每1ml硝酸银滴定液等于12.69mg的碘。测定计算得到含碘量30.11％。(2)游离碘测定：根据2015版中国药典，取碘化油1g，加三氯甲烷5ml，摇匀，加10ml蒸馏水和0.5g碘化钾，溶解后，加淀粉指示液1ml，摇匀后静置，水层无色，说明游离碘含量达标。(3)转化率测定：将20g碘化油用饱和食盐水洗涤3次，静止分层。回收上层油相，减压条件下旋转蒸发除去过量的乙醇，然后加入无水硫酸钠，静止过夜去除多余的水分。减压过滤除去硫酸钠结晶，称量得19.28g。再与等体积正戊烷混合，放置于-20℃冰箱中12小时，减压抽滤去除甘油三脂，得到18.01g产品，则其转化率为90.05％。实施例6鸦胆子碘化油抑制肝癌细胞生长的作用本实施例通过mtt比色法测定鸦胆子碘化油样品对hepg2细胞生长的抑制能力。收集培养的hepg2细胞，调整细胞悬液浓度至10000个/ml，在96孔板中每孔加入100μl悬液，在5％co2，37℃环境下孵育12小时，至细胞单层铺满孔底，加入实施例3中碘化鸦胆子油培养24小时后，每孔加入20μlmtt工作液，继续培养4小时；每空加入150μl二甲基亚砜溶液，轻轻震动10分钟，在酶标仪490mm波长处检测样品吸光度，得到碘化鸦胆子油对hepg2的半数抑制浓度为：35.3mg/l。收集培养的hepg2细胞，调整细胞悬液浓度至10000个/ml，在96孔板中每孔加入100μl悬液，在5％co2，37℃环境下孵育12小时，至细胞单层铺满孔底，加入鸦胆子油培养24小时后，每孔加入20μlmtt工作液，继续培养4小时；每空加入150μl二甲基亚砜溶液，轻轻震动10分钟，在酶标仪490mm波长处检测样品吸光度。得到鸦胆子油对hepg2的半数抑制浓度为：33.1mg/l。实施例7鸦胆子碘化油抑制肝癌细胞生长的作用本实施例通过mtt比色法测定鸦胆子碘化油样品对hepg2细胞生长的抑制能力。收集培养的hepg2细胞，调整细胞悬液浓度至10000个/ml，在96孔板中每孔加入100μl悬液，在5％co2，37℃环境下孵育12小时，至细胞单层铺满孔底，加入实施例4中碘化鸦胆子油培养24小时后，每孔加入20μlmtt工作液，继续培养4小时；每空加入150μl二甲基亚砜溶液，轻轻震动10分钟，在酶标仪490mm波长处检测样品吸光度，得到碘化鸦胆子油对hepg2的半数抑制浓度为：35.9mg/l。收集培养的hepg2细胞，调整细胞悬液浓度至10000个/ml，在96孔板中每孔加入100μl悬液，在5％co2，37℃环境下孵育12小时，至细胞单层铺满孔底，加入鸦胆子油培养24小时后，每孔加入20μlmtt工作液，继续培养4小时；每空加入150μl二甲基亚砜溶液，轻轻震动10分钟，在酶标仪490mm波长处检测样品吸光度。得到鸦胆子油对hepg2的半数抑制浓度为：31.25mg/l。实施例8鸦胆子碘化油抑制肝癌细胞生长的作用本实施例通过mtt比色法测定鸦胆子碘化油样品对hepg2细胞生长的抑制能力。收集培养的hepg2细胞，调整细胞悬液浓度至10000个/ml，在96孔板中每孔加入100μl悬液，在5％co2，37℃环境下孵育12小时，至细胞单层铺满孔底，加入实施例5中碘化鸦胆子油培养24小时后，每孔加入20μlmtt工作液，继续培养4小时；每空加入150μl二甲基亚砜溶液，轻轻震动10分钟，在酶标仪490mm波长处检测样品吸光度，得到碘化鸦胆子油对hepg2的半数抑制浓度为：35.88mg/l。收集培养的hepg2细胞，调整细胞悬液浓度至10000个/ml，在96孔板中每孔加入100μl悬液，在5％co2，37℃环境下孵育12小时，至细胞单层铺满孔底，加入鸦胆子油培养24小时后，每孔加入20μlmtt工作液，继续培养4小时；每空加入150μl二甲基亚砜溶液，轻轻震动10分钟，在酶标仪490mm波长处检测样品吸光度。得到鸦胆子油对hepg2的半数抑制浓度为：30.28mg/l。实施例9体外栓塞模拟将直径2mm的玻璃珠约12g装入容积10ml的塑料容器中，取普通医用输液器插入倒挂的500ml生理盐水瓶口，微导管通过y型接头置于塑料容器上端口。将生理盐水的流速调节至0.3ml/s，用注射器把碘化鸦胆子油通过微导管注入，连续推注直到水流停止，观察到碘化鸦胆子油能将水流完全堵住，没有沉淀物经过玻璃珠口流出。表1鸦胆子油脂肪酸组成序号脂肪酸种类脂肪酸含量分子式1棕榈酸7.94％c16h32o22硬脂酸6.93％c18h36o23油酸62.2％c18h34o24亚油酸19％c18h32o25亚麻酸1.26％c18h30o2表2实施例6碘化鸦胆子油吸光度结果表3实施例6鸦胆子油吸光度结果浓度mg/l03.1256.2512.52550吸光度0.1730.1280.1370.0750.0650.0790.1650.1680.1290.0930.0690.0820.2220.1790.1280.0930.0780.0850.1560.1400.1300.0780.0790.0820.1980.2040.1520.1130.0870.086平均吸光度0.18280.163730.1348190.0908230.0751370.082564抑制率09.44123125.431749.7657758.4417354.3341表4实施例7碘化鸦胆子油吸光度结果浓度mg/l03.1256.2512.52550吸光度0.1760.1160.1080.1090.0870.0790.1780.1580.1030.1180.0820.0590.1610.1300.1030.1090.0920.0720.2150.1640.1090.1130.1010.1040.1910.1810.1300.1320.0980.083平均吸光度0.18420.1494990.1106760.116230.0920.07933抑制率018.8388339.9150536.8998650.0542956.9326表5实施例7鸦胆子油吸光度结果浓度mg/l03.1256.2512.52550吸光度0.1810.1190.1200.0850.0680.0620.1610.1490.1110.1030.0740.0720.2140.1690.1190.1030.0870.0730.1600.1290.1040.0880.0890.0790.1970.1880.1300.1230.0980.087平均吸光度0.18260.1512940.1172940.1008940.0836940.075094抑制率％017.1447135.7646544.7460354.1655258.87527表6实施例8碘化鸦胆子油吸光度结果表7实施例8鸦胆子油吸光度结果浓度mg/l03.1256.2512.52550吸光度0.2110.1220.1120.0730.0640.0690.1760.1500.1040.0810.0700.0740.2140.1570.1070.0980.0830.0940.1820.1410.0970.0760.0850.0860.1920.1470.1220.1110.0860.083平均吸光度0.1950.1430.1080.0880.0780.081抑制率％021.6010340.7026951.9217757.5508255.65796虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。当前第1页12