一种用于治疗结肠癌的组合物及其制备方法与应用与流程

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，尤其是一种用于治疗结肠癌的组合物及其制备方法与应用。

背景技术：

结肠癌是常见的发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤，好发于直肠与乙状结肠交界处，以40～50岁年龄组发病率最高，男女之比为2～3：1。发病率占胃肠道肿瘤的第3位。结肠癌主要为腺癌、黏液腺癌、未分化癌。大体形态呈息肉状、溃疡型等。结肠癌可沿肠壁环行发展，沿肠管纵径上下蔓延或向肠壁深层浸润，除经淋巴管、血流转移和局部侵犯外，还可向腹腔内种植或沿缝线、切口面扩散转移。慢性结肠炎患者、结肠息肉患者、男性肥胖者等为易感人群。

早期癌内镜下可以根治的病变可以采取内镜微创治疗，中晚期癌治疗方法是以手术为主、辅以化疗、免疫治疗、中药以及其他支持治疗的综合方案，以提高手术切除率，降低复发率，提高生存率。首选的抗癌药物为氟脲嘧啶，其次为丝裂霉素和阿霉素，现有的这些化学药物虽然对结肠癌具有一定的治疗效果，但仍然不够理想。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于治疗结肠癌的组合物。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述用于治疗结肠癌的组合物的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种用于治疗结肠癌的组合物，由山药、槐耳、沉香、姜黄、茯苓、薏苡仁、陈皮、灵芝、姜半夏、重楼、红藤、夏枯草和生牡蛎组成，按其重量份数计山药20-40份、槐耳15-25份、沉香3-6份、姜黄7-10份、茯苓10-20份、薏苡仁25-40份、陈皮7-15份、灵芝10-15份、姜半夏6-13份、重楼7-12份、红藤12-18份、夏枯草10-18份、生牡蛎15-30份。

优选的，上述用于治疗结肠癌的组合物，按其重量份数计山药25-30份、槐耳15-20份、沉香3-4.5份、姜黄7-9份、茯苓10-15份、薏苡仁25-30份、陈皮7-9份、灵芝10-12份、姜半夏7-9份、重楼7-9份、红藤12-15份、夏枯草12-15份、生牡蛎15-20份。

优选的，上述用于治疗结肠癌的组合物，按其重量份数计山药25份、槐耳16.7份、沉香3.75份、姜黄7.5份、茯苓12.5份、薏苡仁25份、陈皮7.5份、灵芝10份、姜半夏7.5份、重楼7.5份、红藤12.5份、夏枯草12.5份、生牡蛎16.7份。

上述用于治疗结肠癌的组合物的制备方法，具体制备步骤如下：

(1)分别对山药、槐耳、沉香、姜黄、茯苓、薏苡仁、陈皮、灵芝、姜半夏、重楼、红藤、夏枯草和生牡蛎进行粉碎，过40-120目筛；

(2)按组方量称取各组分并混合均匀即得。

优选的，上述用于治疗结肠癌的组合物的制备方法，将所述步骤(2)所得混合细粉与炼蜜按重量比1：1合药后制条、成丸。

上述用于治疗结肠癌的组合物作为抗癌药物增效剂方面的应用。

优选的，上述用于治疗结肠癌的组合物的应用，所述抗癌药物为替加氟。

本发明的有益效果是：

上述用于治疗结肠癌的组合物，将传统中药合理组方，各组分协同作用，治疗结肠癌效果显著，同时可以作为抗癌药物替加氟的增效剂，大大提高化药的抗癌效果；其制备方法简单，适合规模化工业生产的需要。

附图说明

图1为裸鼠形成移植瘤情况。

图2为裸鼠移植瘤组织切片裸鼠移植瘤he染色(倍数100x)。

图3各组肿瘤细胞病理学he染色显微镜下观察图(倍数200x)，其中,

a为空白对照组,b为5-fu组,c为替加氟组,d为山药组,e为中药组合配方组,f为协同5-fu治疗组,g为协同替加氟治疗组。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。

下述实施例中各组分均为市售购买得到，其中，替加氟，购自齐鲁制药有限公司。

实施例1

一种用于治疗结肠癌的组合物，由山药、槐耳、沉香、姜黄、茯苓、薏苡仁、陈皮、灵芝、姜半夏、重楼、红藤、夏枯草和生牡蛎组成，其中，山药25kg、槐耳16.7kg、沉香3.75kg、姜黄7.5kg、茯苓12.5kg、薏苡仁25kg、陈皮7.5kg、灵芝10kg、姜半夏7.5kg、重楼7.5kg、红藤12.5kg、夏枯草12.5kg、生牡蛎16.7kg。

上述用于治疗结肠癌的组合物的制备方法，具体制备步骤如下：

(1)分别对山药、槐耳、沉香、姜黄、茯苓、薏苡仁、陈皮、灵芝、姜半夏、重楼、红藤、夏枯草和生牡蛎进行粉碎，过80目筛；

(2)按组方量称取各组分并混合均匀即得。

实施例2

一种用于治疗结肠癌的组合物，由山药、槐耳、沉香、姜黄、茯苓、薏苡仁、陈皮、灵芝、姜半夏、重楼、红藤、夏枯草和生牡蛎组成，其中，山药40kg、槐耳15kg、沉香6kg、姜黄7kg、茯苓20kg、薏苡仁40kg、陈皮15kg、灵芝15kg、姜半夏6kg、重楼12kg、红藤18kg、夏枯草18kg、生牡蛎30kg。

上述用于治疗结肠癌的组合物的制备方法，具体制备步骤如下：

(1)分别对山药、槐耳、沉香、姜黄、茯苓、薏苡仁、陈皮、灵芝、姜半夏、重楼、红藤、夏枯草和生牡蛎进行粉碎，过120目筛；

(2)按组方量称取各组分并混合均匀；

(3)将所得混合细粉与炼蜜按重量比1：1合药后制条、成丸。

实施例3

一种用于治疗结肠癌的组合物，由山药、槐耳、沉香、姜黄、茯苓、薏苡仁、陈皮、灵芝、姜半夏、重楼、红藤、夏枯草和生牡蛎组成，其中，山药20kg、槐耳25kg、沉香3kg、姜黄10kg、茯苓10kg、薏苡仁25kg、陈皮7kg、灵芝10kg、姜半夏13kg、重楼7kg、红藤12kg、夏枯草10kg、生牡蛎15kg。

上述用于治疗结肠癌的组合物的制备方法，具体制备步骤如下：

(1)分别对山药、槐耳、沉香、姜黄、茯苓、薏苡仁、陈皮、灵芝、姜半夏、重楼、红藤、夏枯草和生牡蛎进行粉碎，过40目筛；

(2)按组方量称取各组分并混合均匀即得。

优选的，上述用于治疗结肠癌的组合物的制备方法，将所述步骤(2)所得混合细粉与炼蜜按重量比1：1合药后制条、成丸。

实施例4

一种用于治疗结肠癌的组合物，由山药、槐耳、沉香、姜黄、茯苓、薏苡仁、陈皮、灵芝、姜半夏、重楼、红藤、夏枯草和生牡蛎组成，其中，山药25kg、槐耳20kg、沉香4.5kg、姜黄7kg、茯苓15kg、薏苡仁30kg、陈皮7kg、灵芝10kg、姜半夏9kg、重楼9kg、红藤12kg、夏枯草15kg、生牡蛎15kg。

上述用于治疗结肠癌的组合物的制备方法，具体制备步骤如下：

(1)分别对山药、槐耳、沉香、姜黄、茯苓、薏苡仁、陈皮、灵芝、姜半夏、重楼、红藤、夏枯草和生牡蛎进行粉碎，过40-120目筛；

(2)按组方量称取各组分并混合均匀即得。

实施例5

一种用于治疗结肠癌的组合物，由山药、槐耳、沉香、姜黄、茯苓、薏苡仁、陈皮、灵芝、姜半夏、重楼、红藤、夏枯草和生牡蛎组成，其中，山药30kg、槐耳15kg、沉香3kg、姜黄9kg、茯苓10kg、薏苡仁25kg、陈皮9kg、灵芝12kg、姜半夏7kg、重楼7kg、红藤15kg、夏枯草12kg、生牡蛎20kg。

上述用于治疗结肠癌的组合物的制备方法，具体制备步骤如下：

(1)分别对山药、槐耳、沉香、姜黄、茯苓、薏苡仁、陈皮、灵芝、姜半夏、重楼、红藤、夏枯草和生牡蛎进行粉碎，过100目筛；

(2)按组方量称取各组分并混合均匀即得。

实施例1-5之一所述中药材均为市售产品，将各组分用量按照相同比例增加或减少，所得各组分的重量份数关系均属于本发明的保护范围。

本发明所述中药组合物的组方原理是：方中山药块茎富含的果胶是一种诱生干扰素样物质，能增加t淋巴细胞的活性，提高网状内皮系统的吞噬能力，增强肌体免疫功能，抑制肿瘤细胞增殖。槐耳作为一种药用真菌，包含了18种以上的氨基酸，有多种矿物质，可以扶正固本，活血消症，增强患者的免疫力，抑制癌细胞的生长。沉香辛苦微温，归脾胃肾经，具有行气止痛，温中止呕，纳气平喘的功效。姜黄素是一种很强的抗氧化剂，可以阻挡癌细胞的逃生。茯苓甘淡而平，渗湿健脾。姜半夏辛温，燥湿化痰、消痞散结、降逆止呕。薏苡仁甘淡而凉，归脾胃肺经，具有健脾渗湿，除痹止泻，清热排浓的功效。陈皮辛苦温，健脾理气、燥湿化痰，疏肝理气。灵芝甘平，归心肺肝肾经，补气安神，止咳平喘。姜半夏辛温，归脾胃肺经，温中化痰，降逆止呕。重楼苦微寒，归肝经，清热解毒，消肿止痛，凉肝定惊。红藤有清热解毒、散郁结之功效。夏枯草辛苦寒，归肝胆经，清火，明目，散结，消肿。生牡蛎化痰软坚解毒。诸药共奏益气健脾、清热解毒、扶正祛邪之功。诸药合用，相互协同增效，治疗结肠癌效果显著，同时可以作为抗癌药物替加氟的增效剂，大大提高化药的抗癌效果。

试验例：

1、技术方法

1.1动物来源及分组

选用spf级3-4周龄雌性balb/c20只，体重16-18g，购自维通利华公司，饲养于ivc系统内(动物合格证号：11400700106716)。

实验动物按照随机数字表法分为空白对照组和实验组(wca组)5组，每组10只。

1.2荷结肠癌ht29细胞裸鼠模型的建立

1.2.1结肠癌ht29细胞培养

从液氮罐取出结肠癌ht29细胞系的冻存细胞，立即放入37℃水浴锅中解冻，解冻后用75％酒精消毒冻存管，将其放入生物安全柜内。用吸管吸出细胞悬液加入到含有5mldmem培养基的15ml离心管中，200g/3min离心，弃上清，将沉淀细胞重悬于5mldmem培养基，转入25cm²培养瓶，置于37℃、5％co2、95％饱和湿度的培养箱中培养。荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态，每2天半量换液，当细胞达到80％融合时进行传代。用dmem培养基调整细胞浓度至1×10⁵/ml，接种到两个25cm²培养瓶中，置于37℃、5％co2、95％饱和湿度的培养箱中继续培养，用做后续实验。

1.2.2荷结肠癌ht29细胞裸鼠模型的建立

balb/c裸鼠20只适应性饲养一周，收集上述ht29细胞，调整细胞浓度1×10⁵/ml无血清培养基与matrigel1:1混匀后与细胞均匀混合，冰上保存，并尽快接种动物。用微量注射器将0.2ml细胞接种于balb/c裸鼠右侧腋下，每两天观察一次记录裸鼠成瘤情况。待接种部位出现肿瘤结节、质地较硬等指征认定为成瘤。

1.3荷瘤裸鼠的治疗

将上述荷瘤裸鼠分为7组，每组10只。(1)空白对照组，每周尾静脉注射2次生理盐水，每次0.2ml；(2)山药组：按125mg/kg给药，每天一次灌胃0.2ml；(3)中药组合配方组(各组分用量比例同实施例1)，将山药2.5g、槐耳颗粒1.67g、沉香0.375g、姜黄0.75g、茯苓1.25g、薏苡仁2.5g、陈皮0.75g、灵芝1g、姜半夏0.75g、重楼0.75g、红藤1.25g、夏枯草1.25g、生牡蛎1.67g溶于50ml水中，每天以0.2ml灌胃。(4)5-fu组，尾静脉注射5-fu化疗药物，剂量为36mg/kg，连续5天给药；(5)替加氟组，尾静脉注射替加氟化疗药物，剂量为36mg/kg，连续5天给药；(6)中药组合配方协同5-fu组(协同5-fu治疗组)：尾静脉注射5-fu化疗药物，剂量为18mg/kg，连续5天给药；同时，将山药1.25g、槐耳颗粒0.83g、沉香0.188g、姜黄0.375g、茯苓0.625g、薏苡仁1.25g、陈皮0.375g、灵芝0.5g、姜半夏0.375g、重楼0.375g、红藤0.623g、夏枯草0.623g、生牡蛎0.83g溶于50ml水中，每天以0.2ml灌胃。(7)中药组合配方协同替加氟组(协同替加氟治疗组)：尾静脉注射替加氟化疗药物，剂量为18mg/kg，连续5天给药；同时，将山药1.25g、槐耳颗粒0.83g、沉香0.188g、姜黄0.375g、茯苓0.625g、薏苡仁1.25g、陈皮0.375g、灵芝0.5g、姜半夏0.375g、重楼0.375g、红藤0.623g、夏枯草0.623g、生牡蛎0.83g溶于50ml水中，每天以0.2ml灌胃。自给药日起，每天观察各组小鼠的生存状况及死亡情况，每2天测量瘤体大小，各组存活的裸鼠在治疗60天后处死，取瘤组织备用。

1.4瘤组织标本的he染色病理学检测

瘤组织经常规取材、脱水、包埋、制成组织蜡块。石蜡切片后，经烤片机烤片、环保透明剂脱蜡、无水乙醇脱除环保透明剂、梯度酒精(分别为无水乙醇、95％酒精、80％酒精)、入水、流动水冲洗切片、苏木素染色、盐酸酒精分化、氨水反蓝、伊红染色、环保封片胶封片。he制片完成。

1.5统计学处理

采用spss10.0软件，计量资料数据采用均数±标准差各组内及组间相同指标进行配对t检验或方差分析，方差分析后组间进一步比较用bonferroni法，p<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1结肠癌裸鼠动物模型

接种1×10⁵个ht29细胞的裸鼠于第4-5天全部形成了明显结节，此后移植瘤生长迅速，边缘清晰，质地逐渐坚硬。解剖后可见移植瘤具有包膜，呈黄色，见图1。移植瘤组织切片为典型结肠中分化腺癌，见图2。

2.2荷瘤裸鼠生存状况比较

在裸鼠生存状态方面，山药组、中药组合配方组、替加氟组、协同治疗组治疗期间无明显变化，始终活动自如，情绪平稳，进食进水正常。空白对照组，在治疗第三周开始出现活动受阻，出现濒死状态。

2.3对荷结肠癌细胞裸鼠的影响

治疗后，山药组、中药组合配方组、5-fu组、替加氟组、协同5-fu治疗组和协同替加氟治疗组对荷结肠癌ht29细胞裸鼠的抑瘤率明显高于空白对照组,差异具有统计学意义(p<0.05)；其中，如表1所示，协同替加氟治疗组抑瘤率可达52.36％，协同5-fu治疗组和协同替加氟治疗组抑瘤率显著高于山药组、中药组合配方组、5-fu组和替加氟组差异具有统计学意义(p<0.05)。同时，中药组合配方组抑瘤率也显著高于山药组，协同替加氟治疗组高于协同5-fu治疗组。

表1各治疗组对荷结肠癌ht29干细胞裸鼠的影响(n＝10,)

注：(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)组vs(1)组相比，^*p<0.05；(3)、(4)、(5)、(6)、(7)组vs(2)组相比，^△p<0.05，(6)、(7)组vs(3)、(4)、(5)组相比，^ap<0.05，(6)组vs(7)组相比，^bp<0.05

2.4病理学检测结果

病理学he染色检测结果如图3所示：

空白对照组：肉眼观察肿瘤生长未见明显变性坏死，其表面及切面呈粉白色，较粗糙；显微镜下观察瘤细胞呈筛状及巢状排列，细胞呈多角形，彼此镶嵌，呈铺砖状，肿瘤细胞巢周围可见毛细血管围绕。

5-fu组：肿瘤边缘为坏死灶，肿瘤细胞呈岛状结构。

替加氟组：显微镜下见肿瘤间多灶状坏死灶。

山药组：有区域坏死灶，坏死周围为筛状结构的肿瘤细胞。

中药组合配方组：肿瘤生长肉眼下观察除可见细胞变性与少量坏死外，显微镜下可见中心区为小灶状的肿瘤坏死灶，可见坏死的核碎屑组织。

协同5-fu治疗组：肿瘤细胞及不同阶段的坏死凋亡的肿瘤细胞。

协同替加氟治疗组：瘤细胞广泛坏死。

综上，替加氟作为一种广泛用于治疗消化道肿瘤的化疗药物，其作用原理是抑制胸苷酸合成酶的活性，从而抑制细胞的生长包括结肠癌细胞和免疫细胞，最终降低抗肿瘤免疫效应；本发明所述组合物可以协同替加氟对荷ht29结肠癌细胞裸鼠增效减毒，不仅组合物本身具有出色的抗肿瘤功效，同时还是替加氟的特效增效剂。

上述参照实施例对该一种用于治疗结肠癌的组合物及其制备方法与应用进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。