本发明属于中药制剂领域，涉及一种治疗犬疮疡的中药凝胶剂的制备方法，还涉及由该方法制得的产品。
背景技术：
中兽药是在中兽医理论指导下，用于预防和治疗各种动物疾病的药物。国内现多用紫草、当归等中药制成“烧伤油”，用于烧伤、烫伤、创伤等感染性伤口及溃疡面的疗效显著，也有被制成膏剂等剂型应用于临床。油膏富有粘性，外敷患处若渗液较多时易形成薄膜紧贴创面，去之易出血，油溶液剂可使创面润滑无板硬、粘着不舒适的感觉，且附着性小，药物在患处停留时间短，油膏与油溶液均易污染衣物。
疮疡为中医外科的一大类疾病，分为急性和慢性两种，病因分为外感和内伤两种，外感所致的疮疡主要是以热毒、火毒夹杂风寒暑湿等邪气侵袭机表，阻滞气血，困于肌肉，留与筋骨而导致疮疡，《素问·生气通天论》说：“营气不从，逆于肉理，乃生痈肿”，这些都会导致疖、痈、疔、疮、疽、肿块等的发生。内伤所致的疮疡主要是五脏虚弱、六腑不和或因经络阻塞等引起，分为阴证、阳证。如五脏大多因虚致病，且多属于慢性，如肾虚络空，易为风寒痰浊侵袭而成流痰、肺肾阴亏，虚火上炎，灼津为痰而成瘰疬这类疮疡的初、中期、经络不通不荣等发生的疮疡多属阴证，以疮疡起病较缓、疮形平塌散漫、不疼或隐痛、抽疼、皮色不变、紫暗或沉黑、不热或微热为特点；难消，难溃，难敛，溃则脓水清稀病程长，恢复慢；而心火炽盛“诸痛痒疮,皆属于心”，多由心火旺盛，心阴不足，血燥生风、饮食不节，内伤脾胃，心胃化郁火而导致的疮疡多属阳证，以红、肿、热、痛为主要特点，常伴性寒肢冷等外感症状，起病急，恢复快，易溃，溃后脓稠色润，易消。此外，由于内生而引起疮疡，虽有时正气尚未虚衰，但较之单为外邪引起者多为严重，如消渴病合并疖、有头疽等。故疮疡的发生，普遍认为从外感受者轻，脏腑蕴毒从内而发者重。
凝胶是一类含有两组分或两组分以上的包含液体的半固体胶冻和其干燥体系(干胶)的大分子的网络体系的通称。将药物溶解或均匀分散于凝胶中既为凝胶剂，具有粘附性、渗透性好、使用舒适、易于清洗等优点，可弥补油剂的不足。在现代药学中以凝胶为基质的缓释、控释剂型，适用于凝胶给药系统的药物有亲水性药物、疏水性药物、酸性药物、大分子药物等，可以从口腔、鼻腔、皮肤等多种途径给药，但中药凝胶剂存在有效成分释放和吸收速度慢的问题，所以有必要选择合适的辅料及控制配比制得用于治疗疮疡的中药凝胶剂。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种治疗犬疮疡的中药凝胶剂的制备方法，本发明的目的之二在于由上述方法制得的治疗犬疮疡的中药凝胶剂。
为达到上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
1.一种治疗犬疮疡的中药凝胶剂的制备方法，包括如下步骤：
1)药材的提取：将重量比取紫草30～60份、红景天30～50份、白芷10～16份置于体积分数50％乙醇溶液中浸提，过滤，分别收集滤液和滤渣，记为滤液ⅰ和滤渣ⅰ；然后按重量份取当归15～30份、防风10～18份、生地10～18份和甘草4～12份加入到滤渣ⅰ中，再加入水提取，过滤，收集滤液，记为滤液ⅱ，分别将滤液ⅰ和滤液ⅱ浓缩至相对密度为1.32-1.50的清膏，备用；
2)凝胶基质的制备：按重量份取冰片2～5份，加相当于冰片重量2倍的甘油溶解，制成冰片溶液；然后按重量份取卡波姆2.5～6份，置蒸馏水中充分溶胀，用氢氧化钠溶液调节ph至6-7，制成卡波姆溶液，另将羧基甲基纤维素加入热水中充分溶解，加入甘油和10～20份丙二醇，制成羧基甲基纤维素溶液，甘油加入量按加入后甘油总重量份为15份，将制成的卡波姆溶液和羧基甲基纤维素溶液混匀，制得凝胶基质；
3)中药凝胶剂的制备：将制得的冰片溶液和滤液ⅱ浓缩的清膏加入凝胶基质中，然后加入滤液ⅰ浓缩的清膏，按重量份加入10～20份珍珠粉，混合搅匀，制成中药凝胶剂。
本发明中药组合物的主要原料具有如下性质和功效：
紫草为紫草科植物新疆紫草(arnebiaeuchroma(royle)johnst.)的干燥根；味甘、咸，性寒；归心、肝经；功能凉血，活血，解毒透疹，主治血热毒盛，疮疡，湿疹，水火烫伤，温热斑疹，烧伤，湿疹，丹毒。
红景天为景天科红景天属植物红景天(rhodiolaroseal.)的干燥根；味甘、涩，性寒；归肺经；功能主活血止血、散瘀消肿，主治大热大疮，诸蛊毒痂庀，寒热风痹，跌打损伤。
当归为伞形科植物当归(angelicasinensis(oliv.)diels)的干燥根；味甘、辛，性温；归肝、心、脾经；功能补血，活血，主治肌肤麻木，痈疽疮疡，跌扑损伤。
防风为伞形科防风属植物防风(saposhnikoviadivaricata(trucz.)schischk.)的干燥根；味辛、甘，性微温；归膀胱、肺、脾、肝经；功能祛风解表，胜湿止痛，止痉。
生地为玄参科地黄属植物地黄(rehmanniaglutinosa(gaetn.)libosch.exfisch.etmey.)的块根；味甘、苦，微寒；归心经，肝经，肾经；有滋阴清热，凉血补血的功效；用于发斑透疹、吐血、衄血。
白芷为伞形科当归属植物白芷(angelicadahurica.)的干燥根；性温，味辛，气芳香，微苦；归肺、胃经。功能活血排脓，生肌止痛。
冰片为樟科植物龙脑樟(cinnamomumcamphora(l)presl)的新鲜枝叶经水蒸汽蒸馏及重结晶加工制成；气清香，味辛、苦，性凉，具挥发性；归入心、肝经；主散郁火，能透骨热，目赤浮翳、痘毒内陷、走而不守，亦能生肌止痛。
珍珠粉主要成分有碳酸钙、牛磺酸、人体所需的微量元素，并含有人体所需的氨基酸(甘胺酸、甲硫胺酸、丙胺酸、亮胺酸、谷胺酸等)，解毒生肌；口舌生疮；咽喉溃腐；疮疡久不收口，清凉解毒，安神定惊，除翳生肌，还有美白，去皱抗衰，消除色斑，养颜美容之功效。
按照防治原则和中医学组方的原则，选择具有解毒透疹、凉血活血、散瘀消肿作用的紫草、红景天、当归、防风等共九味药的合理组方：紫草凉血活血，解毒消斑，为君药。红景天具有补气清肺、益智养心、收涩止血、散瘀消肿之功效，为臣药。当归辛甘温润，芳香散行，既能补血，又能活血，为补血和营的要药。防风辛散甘缓，祛风解表，可上达周身，为风之主药，气行则血行。生地具有清热凉血，养阴生津之功，入血分，对血热妄行的出血证有奇效。白芷具有祛风解表，消肿排脓，生长肌肉、祛腐生新之功效，故有谓“疮家圣药”之称。冰片有开窍醒神，清热止痛，防腐止痒之效。珍珠粉具有解毒生肌之功，对刀伤、擦伤、烫伤、烧伤等造成的皮肤破损有奇效，均为佐药。甘草具有补中益气，缓急止痛，调和药物之效，为使药。诸药合用，具有通经活络、清热解毒、活血止痛、敛疮生肌之功。
辅料甘油可作为保湿剂，还可作为溶剂，可增加凝胶的透明度，又是凝胶剂的保湿剂和防腐剂，但由于本凝胶剂含水量较高，故加入一定量丙二醇作为防腐剂；同时丙二醇可以作为保湿剂、溶剂，还可以作为防腐剂和凝胶基质；但是丙二醇在处方中的用量可影响到凝胶剂的外观性状，所以需要控制合适的添加量。
本发明中保湿剂还可以选在山梨醇、聚乙二醇和透明质酸替换，防腐剂可以用苯扎溴铵、对羟基苯甲酸甲酯、苯氧乙醇替换。
凝胶基质可以用羟丙甲纤维素、甲基纤维素、壳聚糖和明胶替换。使用卡波姆利用卡波姆由丙稀酸与丙烯基鹿糖交联而成的高分子聚合物，具有较强吸湿性，对皮肤无刺激性，涂后形成透明薄膜，耐热、耐寒均好，且黏附性强、易于清洗、无油腻感、能吸收组织渗出液、对皮肤无刺激性等特点；同时利用羧甲基纤维素钠具有的粘合、乳化、缓释等多方面的作用也作为外用凝胶剂基质使用，但其在一定程度上较易失水，因此使得形成的凝胶制剂干燥缺水，因此本发明通过与甘油等保湿剂使用解决此问题。
本发明中，步骤1)药材的提取为：将重量比取紫草50份、红景天50份、白芷15份置于体积分数50％乙醇溶液中浸提，过滤，分别收集滤液和滤渣，记为滤液ⅰ和滤渣ⅰ；然后按重量份取当归25份、防风15份、生地15份和甘草10份加入到滤渣ⅰ中，再加入水提取，过滤，收集滤液，记为滤液ⅱ，分别将滤液ⅰ和滤液ⅱ浓缩至相对密度为1.32-1.50的清膏，备用；
优选的，步骤1)中，所述乙醇溶液加入量相当于紫草、红景天和白芷重量的8倍。
优选的，步骤1)中，所述浸提为在60℃下浸提12小时。
优选的，步骤1)中，所述加水提取为加入相当于当归、防风、生地、甘草和滤渣ⅰ重量10倍的水溶液于100℃提取3次，每次3小时。
2.所述的制备方法制得的治疗犬疮疡的中药凝胶剂。
本发明的有益效果：本发明公开了治疗犬疮疡的中药凝胶剂的制备方法，通过对主要配方和辅料的优化，并结合制备工艺获得紫红色的半固体中药制剂，质地均匀细腻，有水溶性机制，避免了脂质体的油腻感及气闷感，具有很好的生物粘附性，涂布后能够较长时间内与作用部分精密粘附，药物能缓慢均匀释放，其生物利用度高的，并且降低药物的不良反应，减少用药次数。同时制成的凝胶剂各组分的用量和质量符合农业部442号公告中《中兽药、天然药物分类及注册资料要求》、《兽药研究技术指导原则汇编》及《中华人民共和国兽药典》2015版(二部)的一般标准。其性状、ph值、粘度、定性鉴别均符合规定，各检测项无显著变化，并且通过合理配方克服了软膏剂中油脂基质的吸水性差、易酸败、不易于存贮等缺点，为凝胶剂的质量控制打下良好基础，为保证凝胶剂产品的安全、有效提供了技术优化和技术理论支持，使传统中成药真正实现安全、有效、稳定、可控。
具体实施方式
下面将对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1、紫玉生肌凝胶剂的制备方法
按如下处方分别称取药材，具体如下：
其制备方法包括如下步骤：
1)药材的提取：将处方量的紫草、红景天、白芷置于相当于药材重量8倍的50(v/v)％乙醇溶液中在60℃下温浸12小时，过滤，分别收集滤液ⅰ和滤渣；然后将处方量的当归、防风、生地、甘草加入到收集的滤渣中，再加入相当于药材重量10倍的水溶液于100℃提取3次，每次3小时，过滤，收集滤液ⅱ，分别将滤液ⅰ和滤液ⅱ浓缩至清膏(相对密度为1.32-1.50)，备用；
2)凝胶基质的制备：将处方量的冰片加相当于冰片重量2倍的甘油溶解，制成冰片溶液；取卡波姆，置蒸馏水中充分溶胀，用氢氧化钠溶液调节ph至6-7，另将羧基甲基纤维素加入热水中充分溶解，加入剩余的甘油和丙二醇，将溶解的卡波姆和羧基甲基纤维素溶液混匀，即为凝胶基质；
3)紫玉生肌凝胶剂的制备：将制得的冰片溶液和滤液ⅱ浓缩的清膏加入凝胶基质中，混合搅匀，然后加入滤液ⅰ浓缩清膏，加入珍珠粉，混合搅匀，制成紫玉生肌凝胶剂，分装。
实施例2、紫玉生肌凝胶剂的制备方法
按如下处方分别称取药材，具体如下：
其制备方法包括如下步骤：
1)药材的提取：将处方量的紫草、红景天、白芷置于相当于药材重量8倍的50(v/v)％乙醇溶液中在60℃下温浸12小时，过滤，分别收集滤液ⅰ和滤渣；然后将处方量的当归、防风、生地、甘草加入到收集的滤渣中，再加入相当于药材重量10倍的水溶液于100℃提取3次，每次3小时，过滤，收集滤液ⅱ，分别将滤液ⅰ和滤液ⅱ浓缩至清膏(相对密度为1.32-1.50)，备用；
2)凝胶基质的制备：将处方量的冰片加相当于冰片重量2倍的甘油溶解，制成冰片溶液；取卡波姆，置蒸馏水中充分溶胀，用氢氧化钠溶液调节ph至6-7，另将羧基甲基纤维素加入热水中充分溶解，加入剩余的甘油和丙二醇，将卡波姆和羧基甲基纤维素溶液混匀，即为凝胶基质；
3)紫玉生肌凝胶剂的制备：将制得的冰片溶液和滤液ⅱ浓缩的清膏加入凝胶基质中，混合搅匀，然后加入滤液ⅰ浓缩清膏，加入珍珠粉，混合搅匀，制成紫玉生肌凝胶剂，分装。
实施例3、紫玉生肌凝胶剂的制备方法
按如下处方分别称取药材，具体如下：
其制备方法包括如下步骤：
1)药材的提取：将处方量的紫草、红景天、白芷置于相当于药材重量8倍的50(v/v)％乙醇溶液中在60℃下温浸12小时，过滤，分别收集滤液ⅰ和滤渣；然后将处方量的当归、防风、生地、甘草加入到收集的滤渣中，再加入相当于药材重量10倍的水溶液于100℃提取3次，每次3小时，过滤，收集滤液ⅱ，分别将滤液ⅰ和滤液ⅱ浓缩至清膏(相对密度为1.32-1.50)，备用；
2)凝胶基质的制备：将处方量的冰片加相当于冰片重量2倍的甘油溶解，制成冰片溶液；取卡波姆，置蒸馏水中充分溶胀，用氢氧化钠溶液调节ph至6-7，另将羧基甲基纤维素加入热水中充分溶解，加入剩余的甘油和丙二醇，将卡波姆和羧基甲基纤维素溶液混匀，即为凝胶基质；
3)紫玉生肌凝胶剂的制备：将制得的冰片溶液和滤液ⅱ浓缩的清膏加入凝胶基质中，混合搅匀，然后加入滤液ⅰ浓缩清膏，加入珍珠粉，混合搅匀，制成紫玉生肌凝胶剂，分装。
实施例4、紫玉生肌凝胶剂对大鼠疮疡模型的影响
试验动物：9-10周清洁级sd大鼠，250-300g，12只，雄性，购自西南大学荣昌校区实验动物中心，购回隔离饲养一周后备用。
试验药品：蜂蜡、珍珠粉，均购于桐君阁药房。甘油、卡波姆、羧基甲基纤维素、丙二醇均使用分析纯类。
试验菌种：金黄色葡萄球菌ccvc2261，中国兽医药品检测所。
菌悬液的制备：平板中挑取一个菌落接种到2ml肉汤中，在37℃温箱中培养6h，涂板，菌落计数，稀释至109cfu/ml。
大鼠皮肤准备：试验前期，取雄性大鼠12只，在大鼠背部脊柱的两侧剪毛约20cm2，剃除该部位被毛并暴露出皮肤，擦净，备用。
大鼠疮疡模型的建立：大鼠禁食12h，用适量的速眠新注射液按对大鼠进行腹腔注射麻醉，在脱毛区局部消毒，在脊柱两侧旁开2cm左右做一个长轴直径1.5cm，短轴直径1cm的椭圆形，切除全层皮肤，深至筋膜层，覆盖4层灭菌纱布和2层医用胶布缝合固定。每个伤口接种0.5ml的109cfu/ml金黄色葡萄球菌，每天1次，连续接种3天，第4天揭开创面，用生理盐水清理创面，开始用药，并使创面暴露。
治疗方法：试验分为用药5天和用药10天，用药时间自揭开创面时始，每组3只大鼠，随机分为模型组(该组不给药，仅用生理盐水清洗)；实施例1～3紫玉生肌凝胶剂，每组每天用药1次，用药前用生理盐水清洗创面，取适量凝胶剂涂布于创面周围，连续5天或10天。
创面愈合面积的测量：分别在用药5天或10天后，测定各组大鼠创面的长轴和短轴，按椭圆的面积计算创面面积。
数据分析：试验用统计软件spss20.0对数据进行处理，平均值±标准差
表1外用紫玉生肌凝胶剂对大鼠创面面积的影响
注：同列有相同字母表示差异不显著。同列有不同字母表示差异显著，其中小字母用来表示0.05的水平，大写字母表示0.01的水平。
结果显示，外用紫玉生肌凝胶剂第5天时，涂布紫玉生肌凝胶的创面面积较模型组差异显著，实施例ⅰ-ⅲ的紫玉生肌凝胶剂的创面面积无明显差异。在第10天时创面有明显的收缩，涂布实施例ⅰ-ⅲ的紫玉生肌凝胶剂的创面面积分别收缩至0.20±0.03、0.21±0.02和0.21±0.07，而实施例ⅰ-ⅲ的紫玉生肌凝胶剂和模型组比较差异极显著，实施例ⅰ-ⅲ的紫玉生肌凝胶剂比较，得出实施例ⅰ的紫玉生肌凝胶剂较其他两组差异显著，说明实施例ⅰ的紫玉生肌凝胶剂能明显缩小创面面积，促进创面的愈合效果。表明，本发明制得的紫玉生肌凝胶剂可促进疮口愈合效果，对大鼠的疮疡肿毒有明显收敛作用。且实施例ⅰ的紫玉生肌凝胶剂效果最佳。
实施例5、紫玉生肌凝胶剂对犬疮疡的影响
试验动物：10周龄犬，12只，雄性，购自西南大学荣昌校区实验动物中心，购回隔离饲养一周后备用。
试验药品：蜂蜡、珍珠粉，均购于桐君阁药房。甘油、卡波姆、羧基甲基纤维素、丙二醇均使用分析纯类。
试验菌种：金黄色葡萄球菌ccvc2261，中国兽医药品检测所。
菌悬液的制备：平板中挑取一个菌落接种到2ml肉汤中，在37℃温箱中培养6h，涂板，菌落计数，稀释至109cfu/ml。
犬皮肤准备：试验前期，取幼犬12只，在犬背部脊柱的两侧剪毛约20cm2，剃除该部位被毛并暴露出皮肤，擦净，备用。
犬疮疡模型的建立：犬禁食12h，用适量的速眠新注射液对犬进行腹腔注射麻醉，在脱毛区局部消毒，在脊柱两侧旁开2cm左右做一个长轴直径1.5cm，短轴直径1cm的椭圆形，切除全层皮肤，深至筋膜层，覆盖4层灭菌纱布和2层医用胶布缝合固定。每个伤口接种0.5ml的109cfu/ml金黄色葡萄球菌，每天1次，连续接种3天，第4天揭开创面，用生理盐水清理创面并用药，并使创面暴露。
治疗方法：试验分为用药5天和用药10天，用药时间自揭开创面时始，每组3只犬，随机分为模型组(该组不给药，仅用生理盐水清洗)；实施例1～3紫玉生肌凝胶剂，每组每天用药1次，用药前用生理盐水清洗创面，取适量凝胶剂涂布于创面周围，连续5天或10天。创面愈合面积的测量：分别在用药5天或10天后，测定各组犬创面的长轴和短轴，按椭圆的面积计算创面面积。
数据分析：试验用统计软件spss20.0对数据进行处理，平均值±标准差
表2外用紫玉生肌凝胶剂对犬创面面积的影响
注：同列有相同字母表示差异不显著。同列有不同字母表示差异显著，其中小字母用来表示0.05的水平，大写字母表示0.01的水平。
结果显示，外用紫玉生肌凝胶剂第5天时，涂布紫玉生肌凝胶的创面面积较模型组差异显著，创面面积有明显的减少，实施例ⅰ-ⅲ的紫玉生肌凝胶剂对创面面积无明显差异。在第10天时创面面积有明显缩小，实施例ⅰ-ⅲ的的紫玉生肌凝胶剂的创面分别收缩至0.21±0.04、0.23±0.02和0.25±0.05，实施例ⅰ-ⅲ的的紫玉生肌凝胶剂和模型组比较差异极显著，对实施例ⅰ-ⅲ的紫玉生肌凝胶剂的治疗效果进行比较，得出实施例ⅰ的紫玉生肌凝胶剂较其他两组差异显著，说明实施例ⅰ的紫玉生肌凝胶剂能明显缩小创面面积，促进创面愈合效果。试验结果表明，本发明制得的紫玉生肌凝胶剂可促进疮口愈合效果，对犬疮疡肿毒有明显收敛作用，且实施例ⅰ的紫玉生肌凝胶剂效果最佳。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。