本发明属于医药制药技术领域，具体涉及一种骨化三醇注射液。
背景技术：
骨化三醇被世界卫生组织列为治疗骨质疏松症的首选药物之一，临床上主要用于治疗绝经后和老年性骨质疏松，慢性肾功能低下及假性甲状旁腺功能低下、自发性甲状旁腺功能低下，维生素依赖性佝偻病及低血磷性维生素抵抗型佝偻病。目前我国50岁以上人群中，骨质疏松症总患病率为15.7%，随着老龄化进程加快，骨质疏松症发病率呈快速增长态势，市场前景广阔。
骨化三醇存在于健康人体内，是维生素d3在体内代谢的最重要活性产物。维生素d3有40余种代谢物，发挥生物活性作用的主要是骨化三醇，通过与靶器官组织细胞核上的维生素d受体结合发挥作用。在不同的靶组织上，骨化三醇有不同的作用。
体外实验表明，骨化三醇有促骨形成作用，能增加转移生长因子β的量，转移生长因子β是刺激成骨细胞增殖和分化的重要因子。高剂量骨化三醇在体外实验时促进破骨细胞分化，在体内生理剂量时通过增加钙的吸收和抑制甲状旁腺素的分泌而抑制骨的吸收。在甲状旁腺，骨化三醇直接作用于甲状旁细胞，抑制甲状旁素的分泌。
由于骨化三醇具有以下性质：骨化三醇为白色或类白色晶体化合物，天然存在于人体中；几乎不溶于水，易溶于有机溶剂，且对空气、光和热敏感。由于骨化三醇几乎不溶于水，配制困难，所以目前骨化三醇的主要制剂形式是软胶囊剂和胶丸。
但是，在生产和储存过程中，骨化三醇容易氧化降解，产生各种降解产物，因此软胶囊剂和胶丸的稳定性不好，有效成分含量极低。由此可以看出，在增加骨化三醇溶解度的同时，尽量减少降解产物的数量和含量是目前骨化三醇注射液生产过程中的一个难点。
技术实现要素：
本发明的目的在于提出一种在骨化三醇注射液，所述骨化三醇注射液稳定性良好，可工业化生产。
每1000ml的注射液由以下重量份数的原料组成：0.001-0.002份骨化三醇、0.05-0.55份抗坏血酸、2-20份抗氧化剂、2-20份助溶剂、10-200份物理稳定剂、5-50份血管刺激调节剂、余量为注射用水。
进一步地，所述抗氧化剂为焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠和乙二胺四乙酸二钠中的一种或多种。
进一步地，所述物理稳定剂为甘露醇、山梨醇、右旋糖酐、葡萄糖、乳糖和木糖醇中的一种或多种。
进一步地，所述助溶剂为柠檬酸、酒石酸、乙酸、乳酸、盐酸和磷酸中的一种或多种。
进一步地，所述血管刺激调节剂为苯甲醇、丙二醇和桂油醇中的一种或多种。
所述的骨化三醇注射液的制备方法，包括以下步骤：
（1）称量部分注射用水，按照比例加入抗坏血酸、助溶剂和抗氧化剂，搅拌至完全溶解；
（2）向步骤（1）得到的溶液中加入骨化三醇，搅拌至完全溶解；
（3）向步骤（2）得到的溶液中加入物理稳定剂以及血管刺激调节剂，搅拌至溶解，加入余量的注射用水；
（4）加入的活性炭，搅拌后吸附，过滤并除去活性炭；
（5）充氮气灌封，经灭菌后得到。
本发明有益效果：
抗坏血酸的加入能够助于骨化三醇溶解，而且有很好的抗氧化性能，可有效抑制在生产和储存过程中骨化三醇的降解。在保证骨化三醇不被氧化的同时，降低了抗坏血酸的用量。生产工艺采用121℃，15分钟灭菌，经检测，注射液中的杂质含量没有明显增加，说明本发明制备的骨化三醇注射液稳定性良好，可工业化生产。
附图说明
图1为实施例1中所述骨化三醇注射液加速6月有关物质测定代表性高效液相色谱图。
具体实施方式
为了使本发明的技术目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面结合具体实施例对本发明的技术方案作出进一步的说明，但所述实施例旨在解释本发明，而不能理解为对本发明的限制，实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。
实施例1
本实施例中，每1000ml所述骨化三醇注射液由以下重量份数的原料组成：
骨化三醇0.001g，抗坏血酸0.1g，焦亚硫酸钠1g，酒石酸5g，山梨醇100g，苯甲醇20g，余量为注射用水。
使用上述原料制备骨化三醇注射液的制备方法：
（1）称量400ml的注射用水，顺次加入0.1g的抗坏血酸、5g的酒石酸和1g的焦亚硫酸钠，搅拌至完全溶解；
（2）向步骤（1）得到的溶液中加入0.001g的骨化三醇，搅拌至完全溶解；
（3）向步骤（2）得到的溶液中顺次加入100g的山梨醇以及20g的苯甲醇，搅拌至溶解，加入注射用水至1000ml；
（4）加入注射液总质量0.5％的活性炭，搅拌后吸附30分钟，过滤除去活性炭；
（5）充氮气灌封，在121℃的温度下，灭菌15分钟。
实施例2
本实施例中，每1000ml所述骨化三醇注射液由以下重量份数的原料组成：
骨化三醇0.002g，抗坏血酸0.1g，焦亚硫酸钠1g，酒石酸5g，山梨醇100g，苯甲醇20g，余量为注射用水。
使用上述原料制备骨化三醇注射液的制备方法：
（1）称量400ml的注射用水，顺次加入0.1g的抗坏血酸、5g的酒石酸和1g的焦亚硫酸钠，搅拌至完全溶解；
（2）向步骤（1）得到的溶液中加入0.002g的骨化三醇，搅拌至完全溶解；
（3）向步骤（2）得到的溶液中顺次加入100g的山梨醇以及20g的苯甲醇，搅拌至溶解，加入注射用水至1000ml；
（4）加入注射液总质量0.5％的活性炭，搅拌后吸附30分钟，过滤除去活性炭；
（5）充氮气灌封，在121℃的温度下，灭菌15分钟。
实施例3
本实施例中，每1000ml所述骨化三醇注射液由以下重量份数的原料组成：
骨化三醇0.001g，抗坏血酸0.3g，硫代硫酸钠3g，柠檬酸10g，甘露醇150g，丙二醇30g，余量为注射用水。
使用上述原料制备骨化三醇注射液的制备方法：
（1）称量400ml的注射用水，顺次加入0.3g的抗坏血酸、10g的柠檬酸和3g的硫代硫酸钠，搅拌至完全溶解；
（2）向步骤（1）得到的溶液中加入0.001g的骨化三醇，搅拌至完全溶解；
（3）向步骤（2）得到的溶液中顺次加入150g的甘露醇以及30g的丙二醇，搅拌至溶解，加入注射用水至1000ml；
（4）加入注射液总质量0.5％的活性炭，搅拌后吸附30分钟，过滤除去活性炭；
（5）充氮气灌封，在121℃的温度下，灭菌15分钟。
实施例4
本实施例中，每1000ml所述骨化三醇注射液由以下重量份数的原料组成：
骨化三醇0.002g，抗坏血酸0.3g，硫代硫酸钠3g，柠檬酸10g，甘露醇150g，丙二醇30g，余量为注射用水。
使用上述原料制备骨化三醇注射液的制备方法：
（1）称量400ml的注射用水，顺次加入0.3g的抗坏血酸、10g的柠檬酸和3g的硫代硫酸钠，搅拌至完全溶解；
（2）向步骤（1）得到的溶液中加入0.002g的骨化三醇，搅拌至完全溶解；
（3）向步骤（2）得到的溶液中顺次加入150g的甘露醇以及30g的丙二醇，搅拌至溶解，加入注射用水至1000ml；
（4）加入注射液总质量0.5％的活性炭，搅拌后吸附30分钟，过滤除去活性炭；
（5）充氮气灌封，在121℃的温度下，灭菌15分钟。
实施例5
本实施例中，每1000ml所述骨化三醇注射液由以下重量份数的原料组成：
骨化三醇0.001g，抗坏血酸0.5g，亚硫酸氢钠5g，酒石酸20g，山梨醇200g，苯甲醇50g，余量为注射用水。
使用上述原料制备骨化三醇注射液的制备方法：
（1）称量400ml的注射用水，顺次加入0.5g的抗坏血酸、20g的酒石酸和5g的亚硫酸氢钠，搅拌至完全溶解；
（2）向步骤（1）得到的溶液中加入0.001g的骨化三醇，搅拌至完全溶解；
（3）向步骤（2）得到的溶液中顺次加入200g的山梨醇以及50g的苯甲醇，搅拌至溶解，加入注射用水至1000ml；
（4）加入注射液总质量0.5％的活性炭，搅拌后吸附30分钟，过滤除去活性炭；
（5）充氮气灌封，在121℃的温度下，灭菌15分钟。
实施例6
本实施例中，每1000ml所述骨化三醇注射液由以下重量份数的原料组成：
骨化三醇0.002g，抗坏血酸0.5g，亚硫酸氢钠5g，酒石酸20g，山梨醇200g，苯甲醇50g，余量为注射用水。
使用上述原料制备骨化三醇注射液的制备方法：
（1）称量400ml的注射用水，顺次加入0.5g的抗坏血酸、20g的酒石酸和5g的亚硫酸氢钠，搅拌至完全溶解；
（2）向步骤（1）得到的溶液中加入0.002g的骨化三醇，搅拌至完全溶解；
（3）向步骤（2）得到的溶液中顺次加入200g的山梨醇以及50g的苯甲醇，搅拌至溶解，加入注射用水至1000ml；
（4）加入注射液总质量0.5％的活性炭，搅拌后吸附30分钟，过滤除去活性炭；
（5）充氮气灌封，在121℃的温度下，灭菌15分钟。
实施例7
每1000ml所述骨化三醇注射液由以下重量份数的原料组成：
骨化三醇0.001g，抗坏血酸0.05g，亚硫酸钠1g，乙酸1g、磷酸1g，右旋糖酐5g、葡萄糖5g，桂油醇5g，余量为注射用水。
使用上述原料制备骨化三醇注射液的制备方法：
（1）称量400ml的注射用水，顺次加入0.05g的抗坏血酸、1g的乙酸、1g的磷酸和1g的亚硫酸钠，搅拌至完全溶解；
（2）向步骤（1）得到的溶液中加入0.001g的骨化三醇，搅拌至完全溶解；
（3）向步骤（2）得到的溶液中顺次加入5g的右旋糖酐、5g的葡萄糖以及5g的桂油醇，搅拌至溶解，加入注射用水至1000ml；
（4）加入注射液总质量0.5％的活性炭，搅拌后吸附30分钟，过滤除去活性炭；
（5）充氮气灌封，在121℃的温度下，灭菌15分钟。
实施例8
每1000ml所述骨化三醇注射液由以下重量份数的原料组成：
骨化三醇0.002g，抗坏血酸0.55g，焦亚硫酸钠10g，乙二胺四乙酸二钠10g，乳酸10g、盐酸10g，乳糖100g、木糖醇100g，苯甲醇25g、丙二醇25g，余量为注射用水。
使用上述原料制备骨化三醇注射液的制备方法：
（1）称量400ml的注射用水，顺次加入0.55g的抗坏血酸、10g乳酸、10g的盐酸、和10g的焦亚硫酸钠，10g的乙二胺四乙酸二钠，搅拌至完全溶解；
（2）向步骤（1）得到的溶液中加入0.002g的骨化三醇，搅拌至完全溶解；
（3）向步骤（2）得到的溶液中顺次加入100g的乳糖、100g的木糖醇以及25g的苯甲醇、25g的丙二醇，搅拌至溶解，加入注射用水至1000ml；
（4）加入注射液总质量0.5％的活性炭，搅拌后吸附30分钟，过滤除去活性炭；
（5）充氮气灌封，在121℃的温度下，灭菌15分钟。
对比例
每1000ml所述骨化三醇注射液由以下重量份数的原料组成：0.001g骨化三醇、4g聚山梨酯20、10g抗坏血酸钠、1.5g氯化钠、7.5g无水磷酸二钠、1.8g一水磷酸二氢钠、1.1g依地酸二钠、余量为注射用水。
使用上述原料制备骨化三醇注射液的制备方法：
（1）称量50ml注射用水，加入4g的聚山梨酯20和0.001g的骨化三醇，搅拌至完全溶解，得到溶液i；
（2）称量600ml注射液用水，顺次加入10g的抗坏血酸钠、1.5g的氯化钠、7.5g的无水磷酸二钠、1.8g的一水磷酸二氢钠、1.1g的依地酸二钠，搅拌至完全溶解，得到溶液ii；
（3）将溶液i加入到溶液ii中并搅拌混合，加入注射用水至1000ml；
（4）加入注射液总质量0.5％的活性炭，搅拌后吸附30分钟，过滤除去活性炭；
（5）充氮气灌封，在121℃的温度下，灭菌15分钟。
取实施例1-6以及对比例制备的骨化三醇注射液，进行以下稳定性试验，并于0月、3月、6月这三个时间点上对含量项和有关物质项进行检测：
1、澄清度的测定方法：依照《中国药典》2015年版四部通则0902中规定方法测定。
2、ph的测定方法：依照《中国药典》2015年版四部通则0631中规定方法测定。
3、骨化三醇含量的测定方法：依照《中国药典》2015年版四部通则0512中规定方法测定。
色谱条件和系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水（78:22）为流动相洗脱，流速1.5ml/min，检测波长264nm，柱温30℃，供试品溶液理论板数按骨化三醇峰计算不低于10000；骨化三醇峰的拖尾因子应为0.8～2.0。
高效液相色谱的标准品制备：精密称定10mg的骨化三醇，用甲醇溶解，并定容于100ml容量瓶中并摇匀，量取1ml容量瓶中的骨化三醇溶液并用甲醇稀释至100ml，混匀，得到标准品。
检测时：精密量取标准品、实施例1-6以及对比例各50μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算。
4、有关物质，即骨化三醇前体的测定方法：量取含量项下供试品溶液，按照含量项下的色谱条件，注入液相色谱仪，按面积归一法计算，骨化三醇前体含量不得大于10%。
实施例1-6与对比例所述骨化三醇注射液检测结果及稳定性试验对比结果的平均值见表1和表2。
表1实施例1-6与对比例制备的骨化三醇注射液稳定性检测结果
表2实施例1-6与对比例所述骨化三醇注射液加速试验对比结果
结果表明，实施例1-6制备的骨化三醇注射液的含量和有关物质稳定；相对于对比例制备的骨化三醇注射液，有关物质含量较低。其中，实施例1在加速六个月检测的骨化三醇的含量，如图1所示，含量项检测结果稳定。
尽管以用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以做出许多其他的更改和修改，因此，这意味着在所述权利要求中包括本发明范围的所有变化和修改均属于本发明保护范围。