本申请要求2016年3月29日提交的美国临时专利申请号62/314,700和2016年7月29日提交的申请号62/368,343的优先权，它们的内容通过引用整体并入本文。
本发明涉及用于治疗急性髓性白血病的方法、用途和组合物，包括6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐、以及4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐的治疗有效的组合。
背景技术
超过90％的白血病病例是在20岁及以上的成人中诊断出来的，其中最常见的类型是慢性淋巴细胞白血病(35％)和急性髓性(髓细胞)白血病(aml)(32％)(cancerfacts&figures，atlanta,americancancersociety；2014)。诊断患病的中位年龄为67岁，54％的诊断患病的患者为65岁或以上(o'donnell等，acutemyeloidleukemia，jnatlcomprcancernetwork，2012；10:984-1021)。据估计，2014年度，美国有18,860人(11,530名男性和7,330名女性)被诊断患有aml，并且有10,460人死于该疾病(id.，americancancersociety，2014)。虽然60％至80％的年轻患者通过标准治疗达到完全缓解(cr)，但只有约30％至40％的总患者群体能够长期无病存活(tallman，newstrategiesforthetreatmentofacutemyeloidleukemiaincludingantibodiesandothernovelagents,hematologyamsochematoleducprogram.2005:143-50)。60岁或以上的患者的预后较差，cr率在40％至55％之间，长期存活率较低。
flt3(fms样酪氨酸激酶3)是aml中最常见的突变基因之一。flt3中的活化突变(例如在近膜结构域中的内部串联重复(itd))存在于大约25％至30％的新诊断的aml病例中。在当前的阿糖胞苷(arac)和蒽环霉素(柔红霉素[dnr]或伊达比星[idr])的诱导化疗治疗后，携带flt3-itd突变的aml患者预后不良。阿扎胞苷是不适合强化化疗的aml患者的治疗选择。
随着年龄的增长，缓解率和总体存活率(os)取决于许多其他因素，包括细胞遗传学、以前的骨髓疾病(如骨髓增生异常综合征[mds])和合并症。目前，对于该疾病，尚无有效的治愈方法。因此，目前迫切需要针对急性髓性白血病的治疗和预防的新疗法。这样的疗法理想地具有以下中的一者：更好的功效，更少的副作用，严重程度更低的副作用，耐药性的进展减少，与单独施用药物相比将施用的药物的量降低至亚适量或亚临床剂量，和/或减轻症状。
gilteritinib的化学命名为6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺(下文中，可称为“化合物a”)，其具有以下结构：
[化学式1]
化合物a或其盐在专利文献1(ptl1)和专利文献2(ptl2)中进行了描述，并且可以用与ptl1相同的方法制备。化合物a的优选盐是半富马酸盐。化合物a或其盐是正在开发用于治疗aml的flt3抑制剂(futureoncol.,11(18),2499-2501(2015),50thannu.meet.am.chem.soc.clin.oncol.(asco)2014,摘要7070,50thannu.meet.am.chem.soc.clin.oncol.(asco)2014,摘要7071,51thannu.meet.am.chem.soc.clin.oncol.(asco)2015,摘要7003)。化合物a或其盐对axl、白细胞受体酪氨酸激酶(ltk)和间变性淋巴瘤激酶(alk)也具有抑制活性。化合物a或其盐优选口服施用。
阿扎胞苷的命名为4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮，并且5-阿扎胞苷具有以下结构：
[化学式2]
阿扎胞苷是以名称vidaza(注册符号)出售的批准药物。vidaza是核苷代谢抑制剂(去甲基化剂)，其用于治疗具有以下fab骨髓增生异常综合征(mds)亚型的患者：难治性贫血(ra)或伴有环状铁粒幼红细胞的难治性贫血(rars)(若伴有中性粒细胞减少或血小板减少症或需要输血)、伴有过量母细胞的难治性贫血(raeb)、伴有母细胞转化过量的难治性贫血(raeb-t)和慢性粒单核细胞白血病(cmmol)。对于所有患者，无论血液学基线值如何，第一治疗周期的推荐起始剂量是每天75mg/m2的vidaza，持续7天，通过皮下(sc)注射或静脉内(iv)输注施用。患者可以预先用药治疗恶心和呕吐。治疗周期可每4周重复一次。在2个周期后，如果没有看到有益效果并且没有发生除恶心和呕吐之外的毒性，则剂量可以增加至100mg/m2。患者应治疗最少4至6个周期。完全或部分响应可能需要额外的治疗周期。
[引用列表]
[专利文献]
[专利文献1]wo2010/128659
[专利文献2]wo2015/119122
技术实现要素：
本发明可以通过提供用于治疗aml(包括那些具有flt3突变的患者)的替代疗法来解决一种或多种上述需求。
附图说明
[图1]图1示出了用化合物a的半富马酸盐与阿扎胞苷组合处理的mv4-11细胞中的膜联蛋白-v-阳性群体。示出了3次独立实验的平均值和se。***是与单独的化合物a的半富马酸盐处理组的值相比p<0.001，并且##是与单独的阿扎胞苷处理组的值相比p<0.01，###是与单独的阿扎胞苷处理组的值相比p<0.001(student’st检验)。纵轴表示mv4-11细胞中膜联蛋白-v-阳性群体，横轴表示终浓度为0(dmso)、1nmol/l、3nmol/l或10nmol/l的化合物a与终浓度为0或1000nmol/l的阿扎胞苷(dmso)的组合。
[图2]图2示出了用化合物a的半富马酸盐联合或未联合阿扎胞苷处理mv4-11细胞后蛋白的表达。
[图3]图3示出了化合物a的半富马酸盐联合阿扎胞苷在异种移植有mv4-11细胞的裸鼠体内的抗肿瘤效果。***是在第21天与化合物a的半富马酸盐-治疗组的值相比p<0.001，+++是在第21天与阿扎胞苷-治疗组的值相比p<0.001(student’st检验)。纵轴表示肿瘤体积(mm3)，横轴表示天数。
具体实施方式
本发明提供了治疗急性髓性白血病的方法，该方法包括向有此需要的患者施用6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐、以及4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐的治疗有效的组合。在一个实施方案中，急性髓性白血病是具有flt3突变的急性髓性白血病。在一个实施方案中，急性髓性白血病是突变体flt3多核苷酸阳性急性髓性白血病、flt3内部串联重复(itd)阳性急性髓性白血病或具有flt3点突变的急性髓性白血病。在一个实施方案中，该化合物是6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺半富马酸盐。在一个实施方案中，口服施用6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐，或其半富马酸盐。
本发明提供了用于治疗癌症的组合物，该组合物包含作为活性成分的6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐，其用于与4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮(阿扎胞苷)或其盐联合施用。本发明提供了用于治疗癌症的组合物，该组合物包含作为活性成分的4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐，其用于与6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐联合施用。在该组合物的一个实施方案中，癌症是急性髓性白血病。在该组合物的一个实施方案中，癌症是具有flt3突变的急性髓性白血病。在该组合物的一个实施方案中，癌症是突变体flt3多核苷酸阳性急性髓性白血病、flt3内部串联重复(itd)阳性急性髓性白血病或具有flt3点突变的急性髓性白血病。在该组合物的一个实施方案中，化合物是6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺的半富马酸盐。
本发明提供了6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐、以及4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐的治疗有效的组合的用途，其用于治疗有此需要的患者的急性髓性白血病。在一个实施方案中，急性髓性白血病是具有flt3突变的急性髓性白血病。在一个实施方案中，急性髓性白血病是突变体flt3多核苷酸阳性急性髓性白血病、flt3内部串联重复(itd)阳性急性髓性白血病或具有flt3点突变的急性髓性白血病。在一个实施方案中，该化合物是6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺半富马酸盐。在一个实施方案中，口服施用6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐，或其半富马酸盐。
本发明提供了6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐联合4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐，在制造用于治疗急性髓性白血病的药物中的用途。本发明提供了4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐联合6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐，在制造用于治疗急性髓性白血病的药物中的用途。在该用途的一个实施方案中，急性髓性白血病是具有flt3突变的急性髓性白血病。在该用途的一个实施方案中，急性髓性白血病是突变体flt3多核苷酸阳性急性髓性白血病、flt3内部串联重复(itd)阳性急性髓性白血病或具有flt3点突变的急性髓性白血病。在该用途的一个实施方案中，所述化合物是6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺半富马酸盐。在该用途的一个实施方案中，包含所述6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐、或其半富马酸盐的所述药物为口服药物。
本发明还提供了：
(1)一种治疗急性髓性白血病的方法，该方法包括向有此需要的患者施用6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐、以及4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐的治疗有效的组合。
(2)根据(1)的方法，其中所述急性髓性白血病是具有flt3突变的急性髓性白血病。
(3)根据(1)或(2)的方法，其中所述急性髓性白血病是突变体flt3多核苷酸阳性急性髓性白血病、flt3内部串联重复(itd)阳性急性髓性白血病或具有flt3点突变的急性髓性白血病。
(4)根据(1)至(3)中任一项的方法，其中所述化合物是6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺半富马酸盐。
(5)根据(1)至(4)中任一项的方法，其中口服施用所述6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐，或其半富马酸盐。
(6)根据(1)至(5)中任一项的方法，其中同时施用所述6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐、或其半富马酸盐，以及所述4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐。
(7)根据(1)至(5)中任一项的方法，其中依次施用所述6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐、或其半富马酸盐，以及所述4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐。
(8)根据(1)至(5)中任一项的方法，其中以一个单位剂量施用所述6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐、或其半富马酸盐，以及所述4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐。
(9)根据(1)至(5)中任一项的方法，其中以独立的剂型施用所述6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐、或其半富马酸盐，以及所述4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐。
(10)根据(1)的方法，其中所述6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐以约0.001mg/kg患者体重至约100mg/kg患者体重的剂量施用。
(11)根据(10)的方法，其中口服施用所述6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐。
(12)根据(1)的方法，其中所述4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐以约5mg/m2患者体表面积至约125mg/m2患者体表面积的剂量施用。
(13)根据(1)至(9)中任一项的方法，其中通过皮下注射或静脉内输注施用所述4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐。
(14)一种用于治疗癌症的组合物，包含6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐与4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮(阿扎胞苷)或其盐的组合。
(15)根据(14)的组合物，其中所述化合物是6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺半富马酸盐。
(16)6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐、以及4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐的治疗有效的组合的用途，其用于治疗有此需要的患者的急性髓性白血病。
(17)根据(16)的用途，其中所述急性髓性白血病是具有flt3突变的急性髓性白血病。
(18)根据(16)的用途，其中所述急性髓性白血病是突变体flt3多核苷酸阳性急性髓性白血病、flt3内部串联重复(itd)阳性急性髓性白血病或具有flt3点突变的急性髓性白血病。
(19)根据(16)至(18)中任一项的用途，其中所述化合物是6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺半富马酸盐。
(20)根据(16)至(18)中任一项的用途，其中口服施用所述6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐。
本发明还提供了：
(1)一种治疗急性髓性白血病的方法，该方法包括向有此需要的患者施用6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐、以及4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐的治疗有效的组合。
(2)根据(1)的方法，其中所述急性髓性白血病是具有flt3突变的急性髓性白血病。
(3)根据(1)或(2)的方法，其中所述急性髓性白血病是突变体flt3多核苷酸阳性急性髓性白血病、flt3内部串联重复(itd)阳性急性髓性白血病或具有flt3点突变的急性髓性白血病。
(4)根据(1)至(3)中任一项的方法，其中所述化合物是6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺半富马酸盐。
(5)根据(1)至(4)中任一项的方法，其中口服施用所述6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐。
(6)一种用于治疗癌症的组合物，包含作为活性成分的6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐，其用于与4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐联合施用。
(7)一种用于治疗癌症的组合物，包含作为活性成分的4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐，其用于与6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐联合施用。
(8)根据(6)或(7)的组合物，其中所述癌症是急性髓性白血病。
(9)根据(6)至(8)中任一项的组合物，其中所述癌症是具有flt3突变的急性髓性白血病。
(10)根据(6)至(9)中任一项的组合物，其中所述癌症是突变体flt3多核苷酸阳性急性髓性白血病、flt3内部串联重复(itd)阳性急性髓性白血病或具有flt3点突变的急性髓性白血病。
(11)根据(6)至(10)中任一项的组合物，其中所述化合物是6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺半富马酸盐(hfm)。
(12)6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐、以及4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐的治疗有效的组合的用途，其用于治疗有此需要的患者的急性髓性白血病。
(13)根据(12)的用途，其中所述急性髓性白血病是具有flt3突变的急性髓性白血病。
(14)根据(12)或(13)的用途，其中所述急性髓性白血病是突变体flt3多核苷酸阳性急性髓性白血病、flt3内部串联重复(itd)阳性急性髓性白血病或具有flt3点突变的急性髓性白血病。
(15)根据(12)至(14)中任一项的用途，其中所述化合物是6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺半富马酸盐(hfm)。
(16)根据(12)至(15)中任一项的用途，其中口服施用所述6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐。
(17)6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐联合4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐，在制造用于治疗急性髓性白血病的药物中的用途。
(18)4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮或其盐联合6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐，在制造用于治疗急性髓性白血病的药物中的用途。
(19)根据(17)或(18)的用途，其中所述急性髓性白血病是具有flt3突变的急性髓性白血病。
(20)根据(17)至(19)任一项所述的用途，其中所述急性髓性白血病是突变体flt3多核苷酸阳性急性髓性白血病、flt3内部串联重复(itd)阳性急性髓性白血病或具有flt3点突变的急性髓性白血病。
(21)根据(17)至(20)中任一项的用途，其中所述化合物是6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺半富马酸盐(hfm)。
(22)根据(17)或(19)至(21)中任一项的用途，其中包含所述6-乙基-3-({3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-5-(四氢-2h-吡喃-4-基氨基)吡嗪-2-甲酰胺或其盐的所述药物是口服药物。
急性髓性白血病包括具有flt3突变的急性髓性白血病。具有flt3突变的急性髓性白血病包括突变体flt3多核苷酸阳性急性髓性白血病、flt3内部串联重复(itd)阳性急性髓性白血病或具有flt3点突变的急性髓性白血病。
flt3是iii类受体酪氨酸激酶(tk)家族的成员，其通常在造血祖细胞的表面上表达。flt3及其配体在多能干细胞的增殖、存活和分化中起重要作用。flt3在大多数aml病例中过表达。此外，在近膜结构域中以及附近的具有内部串联重复(itd)的活化flt3以及活化环中d835附近的酪氨酸激酶结构域(tkd)突变分别占aml病例中的28％至34％和11％至14％。flt3中的这些活化突变是致癌的并且在细胞中显示转化活性。flt3-itd突变患者在临床研究中预后不良，复发率较高，初始治疗缓解期较短(6个月，而没有flt3-itd突变的患者为11.5个月)，无病生存率降低(5年生存率为16％至27％，而没有flt3-itd突变的患者为41％)并且os降低(5年os为15％至31％，而没有flt3-itd突变的患者为42％)。flt3-itd患者造血干细胞移植(hsct)后复发的发生率也更高(2年后复发率为30％，没有flt3-itd突变的患者为16％)。与他们的一线治疗的预后相似，挽救性化疗后，复发/难治性flt3突变阳性aml患者的缓解率较低，缓解至第二次复发的持续时间更短，并且相对于flt3突变阴性患者的os降低。
axl酪氨酸激酶(axl)是tam家族(tyro-3、axl和mer)受体tk的成员，并且通常在间充质来源的细胞(例如成骨细胞、成纤维细胞和血细胞)中表达。据报道，axl在包括aml在内的许多癌症中过表达或活化。aml中的axl过表达赋予耐药性并且与不良预后相关。axl抑制抑制了体内人flt3阳性aml的生长。此外，axl抑制对体内表达axl的flt3阴性aml也有效。
化合物a和阿扎胞苷的盐可用于本发明中。“盐”是指所公开的化合物的药学上可接受的衍生物，其中通过将现有的酸或碱部分转化为其盐形式来修饰母体化合物。合适的盐的列表可参见remington'spharmaceuticalsciences,第17版,mackpublishingcompany,easton,pa.,1985,第1418页和journalofpharmaceuticalscience,66,2(1977)。
术语“治疗(treating)”、“治疗(treat)”、“治疗(totreat)”或“治疗(treatment)”包括抑制、减缓、停止、减少或逆转现有症状、病症、病情或疾病的进展或严重性。
术语“患者”是指哺乳动物，优选人。
术语“约”通常表示不超过数值的10％、5％或1％的可能的变化。例如，“约25mg/kg”广意上通常表示22.5-27.5mg/kg的值，即25±2.5mg/kg。
“治疗有效量”是当组合施用于患者以治疗急性髓性白血病时化合物的量。对于在给定情况下经证明为治疗有效量的量，即使这种剂量被技术人员视为治疗有效量，但是对于特定受试者而言，这种量也并非对于100％的接受该疾病的类似治疗的受试者都是有效的。对应于治疗有效量的化合物的量强烈依赖于癌症的特定类型、癌症的阶段、所治疗的患者的年龄和其他因素。通常而言，这些化合物的治疗有效量是本领域熟知的。另外，治疗有效量可以是其中化合物a或其盐中的一种或两种和阿扎胞苷以亚治疗有效量或剂量施用，但也获得治疗急性髓性白血病结果的组合量。亚治疗有效量是这样的化合物的量，当其自身施用于患者时，随着时间的推移不会完全抑制目的靶标的生物活性。
本发明包括在治疗有效间隔内使用或施用该组合。“治疗有效间隔”是这样一段时间，当其中一种化合物施用于患者时开始，当另一种化合物的施用完结束，该时间段中保留了两种化合物的联合施用的益处。因此，联合施用可以是同时施用或依次施用，并且可以以任何顺序施用。
联合施用的时间段或周期可以是总共一周、28天、一个月、两个月、三个月或四个月以上。各药物可以在所述时间段或周期的整个持续时间内每天施用，或者仅在所述时间段或周期的部分持续时间内施用。例如，在28天的周期中，化合物a或其盐可以在周期中每天施用，而阿扎胞苷可以仅在部分时间施用，例如连续施用5天、连续施用7天或连续施用10天，并且所述连续施用5天、7天和10天可分别为该时间段或周期的第一个5天、7天或10天。
化合物或其盐可以通过任何可接受的施用方式或本领域已知的药剂来施用。所述化合物可以例如口服、经鼻、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、局部、透皮、阴道内、膀胱内、脑池内或经直肠施用。剂型可以是(例如)固体、半固体、冻干粉末或液体剂型，例如片剂、丸剂、软弹性明胶胶囊或硬明胶胶囊、粉末、溶液、悬浮液、栓剂、气溶胶等，优选适合于简单施用精确剂量的单位剂型。化合物a或其盐的优选施用途径是口服，而阿扎胞苷的优选施用途径是皮下和输注。
化合物可以以单位剂量或单独的剂型施用，并且剂型中使用的制剂可以包括其他活性成分和/或已知的载体。辅助剂和佐剂可包括(例如)防腐剂、润湿剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、乳化剂和分配剂。通常通过各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等)提供抗微生物作用。辅助剂和佐剂还可以包括等渗剂，例如糖类、氯化钠等。通过使用延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可以实现可注射药物形式的延长吸收。辅助剂还可包括润湿剂、乳化剂、ph缓冲剂和抗氧化剂，例如柠檬酸、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、丁基化羟基甲苯等。如何制备制剂和剂型是本领域普通技术人员已知的，并且它们的实例提供于例如remington'spharmaceuticalsciences,18thed.(mackpublishingcompany,easton,pa.,1990)中。
施用于患者的这两种化合物的量可由本领域技术人员通过使用已知技术，并通过观察在类似情况下获得的结果由主治诊断医师确定。在确定施用的化合物的有效量或剂量时，主治诊断医师会考虑许多因素，包括但不限于：哺乳动物的种类；其大小、年龄和一般健康状况；所涉及的特定肿瘤；肿瘤或复杂程度或严重程度的程度；个体患者的反应；施用的特定化合物；施用方式；施用的制剂的生物利用度特征；选择的剂量方案；伴随药物的使用；和其他相关情况。例如，当口服施用化合物a或其盐时，日剂量可以为相对于患者的体重，约0.001mg/kg至约100mg/kg，优选约0.005mg/kg至约30mg/kg，更优选合适地约0.01mg/kg至约10mg/kg。在一些实施方案中，化合物a或其盐以每天约80mg的量施用。当静脉内施用时，日剂量可以合适地为约0.0001mg/kg患者体重至约10mg/kg患者体重，通过在一天内分成一个或多个剂量来施用该总剂量。另外，经粘膜剂以约0.001mg/kg体重至约100mg/kg体重的剂量施用，并且可以每天施用一次或分开并在一天内施用数次。阿扎胞苷的施用量可以为约5mg/m2患者体表面积至约125mg/m2患者体表面积，约50mg/m2患者体表面积至约100mg/m2患者体表面积，更优选为约75mg/m2患者体表面积。阿扎胞苷的施用量可以为每天约250mg至约500mg。
[实施例1]
mv4-11细胞的诱导凋亡
mv4-11是一种源自人aml并具有flt-3-itd突变的细胞系，其购自美国典型培养物保藏中心(atcc)。将细胞在补充有10％热灭活的胎牛血清的iscove氏改良dulbecco培养基中，在37℃、5％co2的条件下进行培养。将细胞接种在12孔板上并培养过夜。用终浓度为0(dmso)、1nmol/l、3nmol/l或10nmol/l的化合物a联合终浓度为0(dmso)或1000nmol/l的阿扎胞苷(tokyochemicalindustry)处理细胞。48小时后，收获细胞并用guava(注册符号)nexinreagent(merckmillipore)孵育，并使用guava(注册符号)pca微量计(guavatechnologies)测定膜联蛋白-v-阳性细胞。使用cytosoft软件(guavatechnologies)分析每个样品中膜联蛋白-v-阳性细胞的百分比。从三个独立实验获得平均值和标准误差(se)值。
与那些仅用化合物a的半富马酸盐或仅用阿扎胞苷处理的细胞相比，通过用浓度为3nmol/l和10nmol/l的化合物a联合浓度为1000nmol/l的阿扎胞苷进行处理48小时，显著增加了mv4-11细胞中膜联蛋白-v-阳性群体的数量(使用student'st检验)(图1)。
结果表明，浓度为3nmol/l和10nmol/l的化合物a联合1000nmol/l的阿扎胞苷诱导了mv4-11细胞的凋亡。
[实施例2]
抗凋亡蛋白的表达
将mv4-11细胞接种在15cm培养皿上并培养过夜。用0(dmso)或10nmol/l的化合物a联合终浓度为0(dmso)或1000nmol/l的阿扎胞苷处理细胞。该测定一式两份进行。24小时后，收获细胞并用裂解缓冲液(ripa缓冲液[thermofisherscientific]、1×halt磷酸酶抑制剂混合物[thermofisherscientific]和蛋白酶抑制剂混合物[sigma-aldrich])裂解。将样品离心，并使用pierce(商标)660nm蛋白质测定法(thermofisherscientific)测定上清液的蛋白质浓度。在样品缓冲液(10mmol/l二硫苏糖醇(dtt)[nacalaitesque]和1×sds样品缓冲液[wakopurechemicalindustries,ltd.]，裂解缓冲液中)中制备2.0μg蛋白质/μl的等分试样，然后煮沸持续5分钟
通过电泳分离样品，并用trans-blot(注册符号)turbo转印packpvdf(bio-radlaboratories)转印样品。用blockingone(nacalaitesque)封闭1小时后，在冷室中，将每个膜与抵抗mcl-1(#5453，cellsignalingtechnology)、bcl2l10(#3869，cellsignalingtechnology)、survivin(#af886，r&dsystems)、裂解parp(#9541，cellsignalingtechnology)或actin(a2066，sigma-aldrich)的抗体一起孵育过夜。洗涤后，将膜与抗兔igghrp连接的抗体(#7074，cellsignalingtechnology)在室温下孵育1小时。在最后一次洗涤后，使用化学发光试剂ecl-prime印迹检测试剂(gehealthcare)，利用ccd照相机(imagequantlas4000，gehealthcare)检测每种蛋白质的信号。
化合物a的半富马酸盐抑制抗凋亡蛋白mcl-1、bcl2l10和survivin在mv4-11细胞中的表达(参见图2)。在化合物a的半富马酸盐处理后，在mv4-11细胞中也观察到parp裂解的增加；用化合物a的半富马酸盐和阿扎胞苷共同处理的细胞显示出parp裂解的进一步增加。
[实施例3]
mv4-11异种移植小鼠模型
从charlesriverlaboratoriesjapan,inc.购买4周龄雄性裸鼠{cann.cg-foxn1nu/crlcrlj(nu/nu)}。将mv4-11细胞以5×106个细胞0.1ml/小鼠的剂量皮下接种到小鼠侧腹中，并使其生长。在施用前一天选择肿瘤体积(长x宽2×0.5)为100mm3至300mm3的小鼠，并分成4组(n＝10)，使得每组中的平均肿瘤体积几乎相等。对照组从第0天到第20天每天一次口服施用0.5％的甲基纤维素溶液，并且从第0天到第4天每天一次静脉内施用盐水。化合物a的半富马酸盐组从第0天到第20天每天一次以3mg/kg/天的剂量口服施用化合物a的半富马酸盐，并且从第0天到第4天每天一次静脉内施用盐水。阿扎胞苷组从第0天到第20天每天一次口服施用0.5％甲基纤维素，并且从第0天到第4天每天一次以3mg/kg/天的剂量静脉内施用阿扎胞苷。联合组从第0天到第20天每天一次以3mg/kg/天的剂量口服施用化合物a的半富马酸盐，并且从第0天到第4天每天一次以3mg/kg/天的剂量静脉内施用阿扎胞苷。
结果示于图3中。与仅化合物a的半富马酸盐处理组或仅阿扎胞苷处理组相比，联合组中第21天的平均肿瘤体积显著更小(使用student'st检验)。
总之，与仅用化合物a的半富马酸盐或仅用阿扎胞苷处理的组相比，化合物a的半富马酸盐联合阿扎胞苷在异种移植了mv4-11细胞的小鼠中显示出优异的抗肿瘤效力。
[实施例4]
将大约528名新诊断为急性髓性白血病且不适合进行强化诱导治疗的受试者按1:1:1的比例随机接受化合物a的半富马酸盐(a组)、化合物a的半富马酸盐+阿扎胞苷(ac组)或仅阿扎胞苷(c组)。根据下面描述的年龄组对随机化进行分级：
1)年龄≧75岁
2)年龄＜75岁
治疗期为28天一周期。对于a组，化合物a的半富马酸盐的起始口服剂量为120mg/天。对于ac组，化合物a的半富马酸盐的起始口服剂量为120mg/天或80mg/天。对于ac组和c组，阿扎胞苷以每天75mg/m2的剂量施用，持续1至7天的周期，施用方式为皮下注射或静脉内输注。允许化合物a的半富马酸盐和阿扎胞苷的剂量增加和减少。例如，化合物a的半富马酸盐的剂量可以增加至200mg/天。
监测受试者的以下参数：总生存率(os)、无事件生存率(efs)、完全缓解(cr)率、无白血病生存率(lfs)、缓解持续时间、复合完全缓解(crc)率、患者报告疲劳(简要疲劳量表[bfi])、不良事件(aes)、移植率、微小残留病(mrd)、flt3基因突变状态(突变类型和频率，与效力和安全性的关系，获得抗性的机制)、患者报告呼吸困难(慢性疾病治疗功能评估-呼吸困难-简式[facit-dys-sf])、患者报告aml的迹象、症状和影响(癌症治疗功能评估-白血病[fact-leu]和头晕和口疮项目)、由euroqolgroup5维度-5水平(eq-5d-5l)仪器评估的与健康相关的生活质量，以及资源利用，包括住院、输血、抗生素静脉输注、ae药物和阿片类药物用法。
受试者在停止治疗后7天内进行治疗结束访视，然后进行30天的安全随访。此后，受试者进入长期随访期，以收集后续治疗事宜、缓解状态、eq-5d-5l和生存率(死亡原因和日期)。
[工业实用性]
通过上述一项或多项研究(包括描述的一个或多个参数)中的积极影响说明了联合治疗的效用。