制备脂质体的方法与流程

制药药物的生物利用度在很大程度上取决于药物的溶解度和稳定性。已经采用许多方法来提高药物的生物利用度，包括但不限于ph调节、将药物与洗涤剂的胶束结合、在有机溶剂中溶解、与环糊精或其它聚合物络合、以及将药物包封在脂质体双层中(strickley,r.g.,pharmaceuticalresearch,no.21,2004:201-230)。药物本身或用于溶解药物的赋形剂可能具有副作用，例如过敏反应或溶血。已知溶剂(例如乙醇、丙二醇、聚乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲亚砜(“dmso”)、络合剂(例如烟酰胺)和表面活性剂(例如油酸钠)是溶血性的，因此不适合用于可注射溶液。在可注射产品中使用有机溶剂的其他限制包括注射时的沉淀、疼痛和炎症。脂质体是微观脂质囊泡，其由中心水性腔组成，所述中心水性腔被由(一或多层)同心双层(片层)形成的脂质膜包围。脂质体能够掺入亲水性物质(在水性内部)或疏水性物质(在脂质膜中)。脂质体可以是具有单个脂质双层的单层囊泡(“umv”)，或具有一系列脂质双层的多层囊泡(“mlv”)(也称为”寡层囊泡”)。多层囊泡的直径通常在0.2μm至10μm的尺寸范围内。参见例如wo98/006882。尽管在制剂中通常采用抗溶血措施，但由于脂质体与赋形剂的不相容性或脂质体在制剂中的不稳定性，在制剂中保持足够量的脂质体可能不是可行的。此外，重构含有疏水性药物的冻干制剂通常是困难的。此外，脂质体在含有浓缩有机溶剂的制剂中不稳定。直径小于0.2μm(例如0.02-0.2μm)的单层囊泡通常称为小单层囊泡(“suv”)。直径大于0.45μm(在一些情况下大于1μm)的单层囊泡通常称为大单层囊泡(“luv”)。脂质体的(一或多层)双层最通常包含磷脂，但也可包含脂质，包括但不限于脂肪酸、脂肪酸盐和/或脂肪醇。除其他因素外，脂质体的特性取决于组成的性质。因此，如果要获得具有某些特征的脂质体，则必须考虑其极性基团的电荷和/或其脂肪酸链的长度和饱和度。此外，脂质体的特性可以被修饰，例如，将胆固醇和其他脂质掺入膜中、改变脂质双层的数量、或将天然分子(例如蛋白质、多糖、糖脂、抗体、酶)或合成分子(例如polyethylglycol)共价连接到表面。任选地，存在多种磷脂与其他脂质或胆固醇的组合，以在水性介质中获得脂质体。取决于制备方法和所用的脂质，可以获得不同尺寸、结构和特性的囊泡。关于脂质体形成所考虑的另一个重要参数是脂质双层的刚性。形成部分双层的水合脂质可以是液晶(流体)状态或凝胶状态。随着温度升高，凝胶状态转变为液晶状态。这发生在称为相变温度(tc)的温度，其对每种脂质是特异性的。tc与链长成正比，与脂肪酸的不饱和度成反比，并取决于极性基团的性质。尽管如此，制备脂质囊泡(例如脂质体)的常用方法包含蒸发有机溶剂，其中脂质溶解在有机溶剂中然后分散在任选的缓冲水性溶液中。一种示例性方法，称为bangham方法，最初描述于banghametal.,j.hot.biol.,11:238-252(1965)。本领域技术人员已知bangham方法的变形，其中一些在下面描述。薄脂质层的水合。从双层的组成脂质的有机溶液开始，通过除去有机溶剂制备脂质膜，这可以通过蒸发(例如在旋转蒸发器中减压)或通过冻干法来实现。通过加入水性溶液并在高于tc的温度搅拌混合物，使所得到的干燥脂质膜水合。反相蒸发。从双层的组成脂质的有机溶液开始，通过除去有机溶剂制备脂质膜。用氮气净化该系统，并将脂质再溶解在通常由乙醚和/或异丙醚构成的第二有机溶液中。将水相加入再溶解的脂质中。该系统保持在连续的氮气下。通过除去第二有机溶剂形成凝胶。溶剂注射。将溶解在有机溶剂中的脂质缓慢注入水性溶液中。所用的有机溶剂通常是与水混溶的溶剂，并且可以温热水性溶液。可以在例如szokaandpapandjopoulos,ann.rev.biophys.bioeng.,2:467-508(1980),和doussetanddouste-blazy,lesliposomes,puisieuxanddelattre,editors,tecniquesetdocumentationlavoisier,paris,pp.1-73(1985)中找到制备多层囊泡的额外方法。此外，当需要掺入多于一种的脂质时，脂质应该均匀地保持分布在脂质体囊泡中。传统上，这通过预先将脂质溶解在有机溶剂中并使用所得的有机溶剂来制备脂质体来实现。美国专利4,508,703描述了一种获得至少一种两性(amphyphilic)脂质和任选的至少一种疏水性或部分疏水性性质组分的粉末混合物的方法，该方法包括将该混合物的组分溶解在至少一种有机溶剂中并将所得的溶液雾化入惰性气体中。该方法允许制备脂质混合物，其可以容易地分散在水性介质中，但不避免使用有机溶剂。wo92/10166描述了一种制备具有提高的包封能力的脂质体的方法。该方法允许使用脂质混合物；然而，通过预先将脂质溶解在有机溶剂中并随后蒸发来获得混合物。此外，脂质与活性剂的水性溶液之间的接触在高于tc的温度进行。此外，据报道，在不使用有机溶剂制备脂质体的情况下，通常需要其他操作，这可能导致具有某些不利特征的制剂。例如，美国专利申请公开no.2008/0274172描述了制备含有至少两种磷脂的脂质体而不使用有机溶剂的方法。然而，使用高于tc的温度从含有无机盐的水性溶液中获得稳定的脂质体。因此，现有的制备脂质体的方法使用有机溶剂、蛋白质、无机盐和/或加热。由于它们的毒性和可燃性，有机溶剂在制备用于药物、化妆品和其它用途的脂质体中是不希望的。此外，有机溶剂和蛋白质的使用在生产成本、安全性、工作卫生和环境方面具有负面反响。类似地，在制备脂质体中使用加热在生产成本、安全性和环境方面是不希望的。在制备脂质体中使用无机盐是不希望的，因为无机盐的引入增加了脂质体的尺寸和/或导致更混浊的制剂。参见例如castileetal.,internationaljournalofpharmaceutics,1999,vol.188,issue1,pp.87-95。因此，需要一种制备脂质体而不使用不希望的试剂和步骤的方法。技术实现要素：本文提供了制备脂质体的方法。在某些实施方案中，在该方法中制备脂质体而不使用加热、有机溶剂、蛋白质和/或无机盐。在一个实施方案中，提供了一种制备脂质体的方法，该方法包含：(a)在环境温度将一种或多种脂质在水性介质中组合；(b)将脂质分散在水性介质中；和(c)向所得混合物中加入一种或多种糖，从而形成脂质体的溶液。在某些实施方案中，脂质体制备物含有一种或多种活性剂。在某些实施方案中，活性剂是药剂。在某些实施方案中，活性剂包括但不限于拉帕醌；转铁蛋白；环孢菌素；秋水仙碱；拉帕醌和转铁蛋白在单一脂质体制剂中的组合。在某些实施方案中，在制备脂质体或脂质体溶液之后加入一种或多种活性剂。在其他实施方案中，在脂质体形成期间加入一种或多种活性剂。本文还提供了脂质体制备物在治疗疾病或病症中的用途。在一个实施方案中，脂质体制备物适合于对患有所述疾病或病症的患者进行肠胃外施用。在一个实施方案中，患者是人。定义如本文所用，除非另有说明，“脂质”应理解为脂肪酸、脂肪酸盐、脂肪醇或磷脂。脂质也可以被理解为包括甾醇，包括但不限于胆固醇；鞘脂，包括但不限于神经鞘髓磷脂；糖鞘脂，包括但不限于神经节苷脂、红细胞糖苷酯(globocide)和脑苷脂；和表面活性剂胺，包括但不限于硬脂酰胺、油胺和亚油酰胺(linoleylamine)。如本文所用，除非另有说明，否则“磷脂”应理解为甘油的两性(anamphyphilic)衍生物，其中其一个羟基被磷酸酯化，另两个羟基被长链脂肪酸酯化，所述长链脂肪酸可以是彼此相等的或彼此不同的，并且可以是饱和的或不饱和的。中性磷脂通常是其中其它磷酸羟基被由极性基团(通常为羟基或氨基)取代的醇酯化并且其净电荷为零的磷脂。带电荷的磷脂通常是其中其它磷酸羟基被由极性基团取代的醇酯化并且其净电荷为正或负的磷脂。磷脂的实例包括但不限于磷脂酸(“pa”)、磷脂酰胆碱(“pc”)、磷脂酰甘油(“pg”)、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(“pr”)和磷脂酰丝氨酸(“ps”)。神经鞘髓磷脂(包括脑神经鞘髓磷脂)、卵磷脂、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、脑苷脂、二花生酰基磷脂酰胆碱(“dapc”)、二癸酰基-l-α-磷脂酰胆碱(“ddpc”)、二芥酰基磷脂酰胆碱(“depc”)、二月桂酰基磷脂酰胆碱(“dlpc”)、二亚油酰基磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(“dmpc”)、二油酰基磷脂酰胆碱(“dopc”)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(“dppc”)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(“dspc”)、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰胆碱(“popc”)、二花生酰基磷脂酰甘油(“dapg”)、二癸酰基-l-α磷脂酰甘油(“ddpg”)、二芥酰基磷脂酰甘油(“depg”)、二月桂酰基磷脂酰甘油(“dlpg”)、二亚油酰基磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油(“dmpg”)、二油酰基磷脂酰甘油(“dopg”)、二棕榈酰基磷脂酰甘油(“dppg”)、二硬脂酰基磷脂酰甘油(“dspg”)、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰甘油(“popg”)、二花生酰基磷脂酰乙醇胺(“dape”)、二癸酰基-l-α-磷脂酰乙醇胺(“ddpe”)、二芥酰基磷脂酰乙醇胺(“depe”)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺(“dlpe”)、二亚油酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(“dmpe”)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(“dope”)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(“dppe”)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(“dspe”)、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺(“pope”)、二花生酰基磷脂酰肌醇(“dapi”)、二癸酰基-l-α-磷脂酰肌醇(“ddpi”)、二芥酰基磷脂酰肌醇(depi”)、二月桂酰基磷脂酰肌醇(“dlpi”)、二亚油酰基磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰基磷脂酰肌醇(“dmpi”)、二油酰基磷脂酰肌醇(“dopi”)、二棕榈酰基磷脂酰肌醇(“dppi”)、二硬脂酰基磷脂酰肌醇(“dspi”)、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰肌醇(“popi”)、二花生酰基磷脂酰丝氨酸(“daps”)、二癸酰基-l-α-磷脂酰丝氨酸(“ddps”)、二芥酰基磷脂酰丝氨酸(“deps”)、二月桂酰基磷脂酰丝氨酸(“dlps”)、二亚油酰基磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰基磷脂酰丝氨酸(“dmps”)、二油酰基磷脂酰丝氨酸(“dops”)、二棕榈酰基磷脂酰丝氨酸(“dpps”)、二硬脂酰基磷脂酰丝氨酸(“dsps”)、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰丝氨酸(“pops”)、二花生酰基神经鞘髓磷脂、二癸酰基神经鞘髓磷脂、二芥酰基神经鞘髓磷脂、二月桂酰基神经鞘髓磷脂、二亚油酰基神经鞘髓磷脂、二肉豆蔻酰基神经鞘髓磷脂、神经鞘髓磷脂、二油酰基神经鞘髓磷脂、二棕榈酰基神经鞘髓磷脂、二硬脂酰基神经鞘髓磷脂和1-棕榈酰基-2-油酰基神经鞘髓磷脂。如本文所用，除非另有说明，否则“包封”应理解为将活性剂掺入脂质体或脂质体囊泡中的过程。包封的活性剂可以保留在水性内部或与膜结合。如本文所用，除非另有说明，当与化合物的溶解度结合使用时，术语“增强”意指本文提供的方法导致化合物的溶解度与相同化合物在水中的溶解度相比增加。具体地，术语“增强”是指，当使用本文提供的方法时，化合物的溶解度比相同化合物在参考溶剂中的溶解度增加约20％或更多、约40％或更多、约60％或更多、约80％或更多、约100％或更多、或约200％或更多。在一些实施方案中，参考溶剂是水。如本文所用，除非另有说明，术语“疏水性化合物”是指水溶解度很小或没有水溶解度的化合物。在一些实施方案中，疏水性化合物具有小于约20重量％、约15重量％、约10重量％、约5重量％、约1重量％、约0.1重量％或约0.01重量％的固有水溶解度(即非离子化形式的水溶解度)。在其他实施方案中，疏水性化合物具有小于约10mg/ml、约7mg/ml、约5mg/ml、约3mg/ml、约1mg/ml或约0.1mg/ml的固有水溶解度。如本文所用，或除非另有说明，术语“水性介质”包括任何水基介质，例如水、盐溶液、糖溶液、输液溶液、缓冲液和任何其他容易获得的水基介质。此外，水性介质可含有一种或多种水溶性有机溶剂。在肠胃外溶液的情况下，水性介质优选是无菌的并且适合用作活性剂的载剂。水性介质的实例包括但不限于注射用水、盐溶液、林格氏溶液、d5w、或其它水混溶物质如葡萄糖和其他电解质的溶液。如本文所用，除非另有说明，术语“脂肪酸”是指其结构是羧基与具有一个或多个碳原子的烃链连接的化合物。烃链可以是饱和的或不饱和的(即烷基、烯基或炔基烃链)。而且，烃链可以是直链或支链的。此外，在一些实施方案中，烃链中的氢可以被取代。如本文所用，除非另有说明，术语“脂肪醇”是指其结构是醇基与具有一个或多个碳原子的烃链连接的化合物。烃链可以是饱和的或不饱和的(即烷基、烯基或炔基烃链)。而且，烃链可以是直链或支链的。此外，在一些实施方案中，烃链中的氢可以被取代。如本文所用，除非另有说明，术语“脂肪酸盐”是指由脂肪酸和无机/有机碱之间的反应形成的化合物。此外，该术语包括由脂肪醇和无机/有机酸之间的反应形成的化合物。这些酸的实例包括但不限于硫酸和磷酸。脂肪酸盐的烃链可以是饱和的或不饱和的(即烷基、烯基或炔基烃链)。而且，烃链可以是直链或支链的。此外，在一些实施方案中，烃链中的氢可以被取代。如本文所用，除非另有说明，术语“取代的”是指被一个或多个取代基取代的基团，所述取代基包括但不限于烷基、烯基、炔基、环烷基、芳酰基、卤代、卤代烷基(例如三氟甲基)、取代的或未取代的杂环烷基、卤代烷氧基(例如三氟甲氧基)、羟基、烷氧基、cycloalkyloxy、heterocylooxy、氧代、烷酰基、芳基、取代的芳基、取代或未取代的杂芳基(例如，吲哚基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯烷基、吡啶基、嘧啶基等)、芳基烷基、烷基芳基、杂芳基、杂芳基烷基、烷基杂芳基、杂环基(heterocyclo)、芳氧基、烷酰氧基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、芳基烷基氨基、环烷基氨基、杂环氨基(heterocycloamino)、单取代的氨基和二取代的氨基、烷酰基氨基、芳酰基氨基、aralkanoylamino、取代的烷酰基氨基、取代的芳基氨基、substitutedaralkanoylamino、氨基甲酰基(例如conh2)、取代的氨基甲酰基(例如conh-烷基、conh-芳基、conh-芳基烷基，或其中氮上有两个取代基的情况)、羰基、烷氧基羰基、羧基、氰基、酯、醚、胍基、硝基、磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基烷基磺酰基、亚磺酰氨基(例如so2nh2)、取代的亚磺酰氨基、硫醇、烷硫基、芳硫基、芳烷硫基、环烷硫基、heterocyclothio、烷硫代羰、芳硫代羰和芳烷硫代羰(arylalkyithiono)。如本文所用，除非另有说明，术语“烷基”是指具有1-20个碳原子，优选1-10个碳原子，最优选1-4个碳原子的饱和直链或支链非环状烃。代表性的饱和直链烷基包括甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基；饱和支链烷基包括异丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基丁基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基戊基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、2-甲基-4-乙基戊基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-1,3-乙基己基、2-甲基-4-乙基己基、2,2-二乙基戊基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基、3,3-二乙基己基等。烷基可以是未取代的或取代的。不饱和烷基包括烯基和炔基，其在下面讨论。如本文所用，除非另有说明，术语“烯基”是指具有2-20个碳原子，优选2-10个碳原子，最优选2-6个碳原子且包括至少一个碳-碳双键的直链或支链非环状烃。代表性的直链和支链(c2-c10)烯基包括乙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、1-辛烯基、2-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、2-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、2-癸烯基、3-癸烯基等。烯基的双键可以是未共轭的或与另一个不饱和基团共轭。烯基可以是未取代的或取代的。如本文所用，除非另有说明，术语“炔基”是指具有2-20个碳原子，优选2-10个碳原子，最优选2-6个碳原子且包括至少一个碳-碳三键的直链或支链非环状烃。代表性的直链和支链(c2-c10)炔基包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1-丁炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、5-己炔基、1-庚炔基、2-庚炔基、6-庚炔基、1-辛炔基、2-辛炔基、7-辛炔基、1-壬炔基、2-壬炔基、8-壬炔基、1-癸炔基、2-癸炔基、9-癸炔基等。炔基的三键可以是未共轭的或与另一个不饱和基团共轭。炔基可以是未取代的或取代的。如本文所用，除非另有说明，术语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒酸或碱制备的盐，所述无毒酸或碱包括无机酸和碱以及有机酸和碱。用于本文提供的组合物的合适的药学上可接受的碱加成盐包括但不限于由铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制成的金属盐，或由赖氨酸、n,n'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(n-甲基葡糖胺)和普鲁卡因制成的有机盐。合适的无毒酸包括但不限于无机和有机酸，例如乙酸、藻酸、邻氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙烯磺酸、甲酸、富马酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、硫酸、酒石酸和对甲苯磺酸。具体的无毒酸包括盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和甲磺酸。因此，具体盐的实例包括盐酸盐和inesylate盐。其它在本领域中是熟知的，参见例如remington'spharmaceuticalsciences,18thed.,mackpublishing,eastonpa.(1990)orremington:thescienceandpracticeofpharmacy,19thcd.,mackpublishing,eastonpa.(1995)。如本文所用，术语“水合物”是指本文提供的化合物或其盐，其进一步包括通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量的水。如本文所用，术语“笼形物”是指本文提供的化合物，或其晶格形式的盐，其包含将客体分子(例如溶剂或水)捕获在其中的空间(例如，通道)。如本文所用，除非另有说明，术语“前药”是指可以在生物学条件下(体外或体内)水解、氧化或以其他方式反应以提供活性化合物的化合物的衍生物。前药的实例包括但不限于包括可生物水解的部分(例如可生物水解的酰胺、可生物水解的酯、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酰脲和可生物水解的磷酸类似物)的化合物的衍生物和代谢物。优选地，具有羧基官能团的化合物的前药是羧酸的低级烷基酯。酯化存在于分子上的任何羧酸部分可方便地形成羧酸酯。前药通常可以使用熟知的方法制备，例如burger'smedicinalchemistryanddrugdiscovery6thed.(donaldj.abrahamed.,2001,wiley),和designandapplicationofprodrugs(h.bundgaarded.,1985,harwoodacademicpublishersgmfh)所述的方法。如本文所用，除非另有说明，当与制剂一起使用时，术语“稳定的”是指在使用本文提供的方法制备时，制剂的活性剂在指定的时间量保持溶解，并且不显著降解或聚集或以其他方式修饰(例如，通过hplc测定)。如本文所用，除非另有说明，否则“低于tc的温度”应理解为低于具有最低tc的脂质的tc的温度，并且“高于tc的温度”应理解为高于具有最高tc的脂质的tc的温度。如本文所用，除非另有说明，当与药物组合物一起使用时，术语”有害成分”是指药物组合物中常用的可能引起临床副作用的成分，所述副作用例如但不限于溶血、过敏反应、周围神经病、和/或组合物活性成分的生物利用度降低。有害成分的实例包括但不限于：有毒溶剂，包括有机溶剂如乙醇、甲醇、1-丙醇、2-丙醇、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙醚、二甲醚、二异丙醚、甲基叔丁基醚(“mtbe”)、四氢呋喃(“thf”)、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、戊烷、己烷、庚烷、石油醚、二恶烷、乙二醇、二甘醇、二甘醇二甲醚、1,2二甲氧基乙烷、1-丁醇、2-丁醇、2-丁酮、苯、甲苯、二甲亚砜(“dmso”)、二甲基甲酰胺(“dmf”)、六甲基磷酰胺(“hmpa”)、n-甲基吡咯烷酮、甘油、硝基甲烷、三乙胺、二甲苯、el和聚乙二醇(“peg”)；共洗涤剂或表面活性剂如聚山梨醇酯(如tweens)或维生素e；油类如蓖麻油或玉米油；蛋白质如hsa；或任何其他是潜在污染源的生物制剂。附图说明图1a显示了不加入脂质体的阿达木单抗(humira)抗体的尺寸排阻hplc的对照洗脱曲线。图1b显示了脂质体包封的曲妥珠单抗(herceptin)抗体的尺寸排阻hplc的洗脱曲线。图1c显示了脂质体包封的阿达木单抗(humira)抗体的尺寸排阻hplc的洗脱曲线。具体实施方式本文提供了一种制备脂质体的方法，该方法包含：(a)在环境温度将一种或多种脂质在水性介质中组合；(b)将脂质分散在水性介质中；和(c)向所得混合物中加入一种或多种糖，从而形成脂质体的悬浮液。在另一个实施方案中，在步骤(b)中，该方法还包含在水性介质中均质化脂质。一些实施方案还包含步骤(d)，其中将一种或多种活性剂加入到脂质体溶液中。在一个实施方案中，活性剂是疏水性药物。在一个实施方案中，活性剂以固体加入。在另一个实施方案中，将活性剂加入有机溶剂中。在另一个实施方案中，将活性剂加入有机溶剂中，所述有机溶剂还包含一种或多种脂肪酸盐、脂肪酸和/或磷脂。在另一个实施方案中，在脂质体形成期间加入活性剂。在某些实施方案中，所得脂质体的直径小于约1μm。在一个实施方案中，所得脂质体的直径小于约500nm。在一个实施方案中，所得脂质体的直径小于约100nm。在一个实施方案中，至少一种脂质是磷脂或磷脂的混合物。磷脂的实例包括但不限于磷脂酸(“pa”)、磷脂酰胆碱(“pc”)、磷脂酰甘油(“pg”)、磷脂酰乙醇胺(“pe”)、磷脂酰肌醇(“pi”)、和磷脂酰丝氨酸(“ps”)、神经鞘髓磷脂(包括脑神经鞘髓磷脂)、卵磷脂、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、脑苷脂、二花生酰基磷脂酰胆碱(“dapc”)、二癸酰基-l-α-磷脂酰胆碱(“ddpc”)、二芥酰基磷脂酰胆碱(“depc”)、二月桂酰基磷脂酰胆碱(“dlpc”)、二亚油酰基磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(“dmpc”)、二油酰基磷脂酰胆碱(“dopc”)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(“dppc”)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(“dspc”)、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰胆碱(“popc”)、二花生酰基磷脂酰甘油(“dapg”)、二癸酰基-l-α磷脂酰甘油(“ddpg”)、二芥酰基磷脂酰甘油(“depg”)、二月桂酰基磷脂酰甘油(“dlpg”)、二亚油酰基磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油(“dmpg”)、二油酰基磷脂酰甘油(“dopg”)、二棕榈酰基磷脂酰甘油(“dppg”)、二硬脂酰基磷脂酰甘油(“dspg”)、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰甘油(“popg”)、二花生酰基磷脂酰乙醇胺(“dape”)、二癸酰基-l-α-磷脂酰乙醇胺(“ddpe”)、二芥酰基磷脂酰乙醇胺(“depe”)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺(“dlpe”)、二亚油酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(“dmpe”)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(“dope”)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(“dppe”)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(“dspe”)、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺(“pope”)、二花生酰基磷脂酰肌醇(“dapi”)、二癸酰基-l-α-磷脂酰肌醇(“ddpi”)、二芥酰基磷脂酰肌醇(depi”)、二月桂酰基磷脂酰肌醇(“dlpi”)、二亚油酰基磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰基磷脂酰肌醇(“dmpi”)、二油酰基磷脂酰肌醇(“dopi”)、二棕榈酰基磷脂酰肌醇(“dppi”)、二硬脂酰基磷脂酰肌醇(“dspi”)、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰肌醇(“popi”)、二花生酰基磷脂酰丝氨酸(“daps”)、二癸酰基-l-α-磷脂酰丝氨酸(“ddps”)、二芥酰基磷脂酰丝氨酸(“deps”)、二月桂酰基磷脂酰丝氨酸(“dlps”)、二亚油酰基磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰基磷脂酰丝氨酸(“dmps”)、二油酰基磷脂酰丝氨酸(“dops”)、二棕榈酰基磷脂酰丝氨酸(“dpps”)、二硬脂酰基磷脂酰丝氨酸(“dsps”)、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰丝氨酸(“pops”)、二花生酰基神经鞘髓磷脂、二癸酰基神经鞘髓磷脂、二芥酰基神经鞘髓磷脂、二月桂酰基神经鞘髓磷脂、二亚油酰基神经鞘髓磷脂、二肉豆蔻酰基神经鞘髓磷脂、神经鞘髓磷脂、二油酰基神经鞘髓磷脂、二棕榈酰基神经鞘髓磷脂、二硬脂酰基神经鞘髓磷脂和1-棕榈酰基-2-油酰基神经鞘髓磷脂。本文提供的磷脂可以是手性的或非手性的。本文提供的手性磷脂可以是d或l磷脂，例如，l-α-磷脂酰胆碱或i,3磷脂酰胆碱。在一个实施方案中，l-α-磷脂酰胆碱用于本文提供的方法中。在另一个实施方案中，本文提供了制备脂质体的方法，该方法包含：(a)在环境温度将油酸钠和α-磷脂酰胆碱在水性介质中组合；(b)将油酸钠和l-α-磷脂酰胆碱分散在水性介质中；和(c)向所得混合物中加入一种或多种糖，从而形成脂质体的溶液。在一个实施方案中，水性介质含有一种或多种活性剂，或其药学上可接受的盐、水合物、笼形物或前药。活性剂的实例包括但不限于拉帕醌(13-拉帕醌)、紫杉烷类(包括但不限于泰素、7-表紫杉醇、7-乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基-7-表紫杉醇、7-木糖基紫杉醇、10-desacetyl-7-sylosyltaxol、7-戊二酰基紫杉醇、7-n,ndimethylglycycltaxol、7-l-丙氨酰基紫杉醇、泰索帝及其混合物)、紫杉醇、秋水仙碱、转铁蛋白、环孢菌素、环孢菌素a、酮洛芬、异丙酚、乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚、两性霉素、地高辛、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、血管发生抑制剂(例如贝伐单抗、雷珠单抗、vitaxin、羧胺三唑、考布他汀a-4、夫马洁林类似物(例如tnp-470)、cm101、ifn-u、白细胞介素-10、白细胞介素-12、血小板因子-4、舒拉明、su5416、凝血酶致敏蛋白、vegfr拮抗剂、血管生长抑素、内皮抑素、2-甲氧基雌二醇、替可加兰、沙利度胺、催乳素、利诺胺、血管生成素-1、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子)、长春花生物碱(例如长春碱、长春新碱、长春地辛、依托泊苷、依托泊苷磷酸酯和替尼泊苷)、阿糖胞苷、放线菌素、依托泊苷、博来霉素、庆大霉素、环磷酰胺、甲氨蝶呤、链脲霉素、胞嘧啶、13-d-阿糖胞苷-5'-三磷酸、细胞色素c、顺铂、n-膦酰-乙酰基-l-天冬氨酸、5-氟乳清酸、阿昔洛韦、齐多夫定、干扰素类、氨基糖苷类、头孢菌素类、四环素类、普萘洛尔、噻吗洛尔、拉贝洛尔、可乐定、肼屈嗪、丙咪嗪、阿米替林、多塞平(doxepim)、phenyloin、苯海拉明、chlorphenirimine、异丙嗪、前列腺素类、甲氨蝶呤、黄体酮、睾酮、雌二醇、雌激素、表柔比星、倍氯米松和酯类、维生素e、可的松、地塞米松和酯类、倍他米松戊酸酯、联苯二甲基二羧酸、降钙素、喜树碱、卡托普利、头孢唑啉、氯喹、氯噻唑、凝血因子viii和ix、d-α-生育酚、地塞米松、双氯芬酸、依托泊苷、费啶、氟比洛芬、氟尿嘧啶、氟西汀、夫西地酸、庆大霉素、格列本脲、格拉司琼、生长激素、吲哚美辛、胰岛素、伊曲康唑、酮康唑、甲氨蝶呤、甲硝唑、米诺地尔、丝裂霉素、萘夫西林、萘普生、昂丹司琼、羟布宗、parazosin、毒扁豆碱、吡罗昔康、泼尼松龙、伯氨喹、奎宁、雷米普利、taxotane、替诺昔康、特拉唑嗪、曲安西龙、尿激酶、阿片样镇痛药(如阿芬太尼、阿尼利定、可待因、二醋吗啡、芬太尼、氢可酮、氢吗啡酮、哌替啶、吗啡、羟考酮、羟吗啡酮、丙氧芬、舒芬太尼、喷他佐辛和纳布啡)、非甾体抗炎药(例如阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬、甲芬那酸和保泰松)、血管紧张素转换酶(“ace”)抑制剂(如captoprilpolyene)、蛋白激酶c抑制剂、抗生素(如咪唑和三唑抗生素类)、叶酸、蒽环类抗生素、反义rna、tricathecums、微生物核糖体灭活毒素(如白树毒素、相思豆毒素、蓖麻毒素a链、假单胞菌外毒素、白喉毒素、美洲商陆抗病毒肽)、哌啶酸衍生物(例如他克莫司)、植物生物碱、染料、放射性同位素标记化合物、不透射线化合物、放射增敏剂(例如5-氯-2'-脱氧尿苷、5-溴-2'-脱氧尿苷和5-碘-2'-脱氧尿苷)、荧光化合物、散瞳化合物、支气管扩张剂、局部麻醉剂(如地布卡因和氯丙嗪)、抗真菌剂(如咪康唑、特康唑、益康唑、异康唑、butaconazole、克霉唑、伊曲康唑、制霉菌素、萘替芬和两性霉素b)、抗寄生虫剂、激素、激素拮抗剂、免疫调节剂、神经递质拮抗剂、抗糖尿病剂、抗青光眼剂、维生素、麻醉剂和显像剂。关于活性剂的其他公开内容，参见gilmanetal.,goodmanandgilman's:thepharmacologicalbasisoftherapeutics,10thed.,mcgraw-hill,newyork,2001；themerckmanualofdiagnosisandtherapy,berkow,m.d.etal.(eds.),17thed.,mercksharp&dohmeresearchlaboratories,rahway,n.j.,1999；ceciltextbookofmedicine,20thed.,bennettandplum(eds.),w.b.saunders,philadelphia,1996。在一个实施方案中，活性剂是疏水性化合物，或在水中具有差的溶解度的化合物。在另一个实施方案中，活性剂是非疏水性化合物。在一个实施方案中，活性剂是水溶性膜非渗透剂，例如肽、蛋白质、核酸、核苷酸、核苷、碳水化合物或其类似物。在一个实施方案中，水性介质不含活性剂。在另一个实施方案中，所得溶液含有10重量％的海藻糖。在另一个实施方案中，活性剂是拉帕醌，或其药学上可接受的盐、水合物、笼形物或前药。在另一个实施方案中，活性剂是转铁蛋白，或其药学上可接受的盐、水合物、笼形物或前药。在另一个实施方案中，活性剂是环孢菌素，或其药学上可接受的盐、水合物、笼形物或前药。在一个实施方案中，活性剂是转铁蛋白和拉帕醌，其药学上可接受的盐、水合物、笼形物或前药。可用于本文提供的方法中的糖的实例包括但不限于蔗糖、葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖、甘露糖、半乳糖和海藻糖。在一个实施方案中，糖是海藻糖。在一个实施方案中，脂质体制备物适合于对患有一种或多种疾病或病症的患者进行肠胃外施用。在一个实施方案中，患者是人。在某些实施方案中，(一或多种)活性剂的加入顺序导致(一或多种)活性剂增强的溶解度。将疏水性药物掺入脂质体的常规方法是在脂质体制备之前将药物加入脂质中。参见，例如immordino,m.l.etal.,journalofcontrolledrelease,2003,91:417429。通过常规方法，药物的掺入仅为0.3至0.7mg/ml。本文提供了制备脂质体的方法，其中在形成脂质体后加入(一或多种)活性剂导致(一或多种)活性剂增强的溶解度。在一个实施方案中，与常规方法相比，在脂质体中的(一或多种)活性剂溶解度增加至少约2倍、5倍或10倍。在一个实施方案中，在脂质体中的(一或多种)活性剂溶解度增加至约5mg/ml。在其中活性剂是疏水性药物的某些实施方案中，将活性剂以固体加入预制脂质体中或加入有机溶剂中。在一个实施方案中，预制脂质体包含一种或多种脂肪酸盐、脂肪酸和/或磷脂以增加活性剂的溶解度。在一个实施方案中。加入(一或多种)活性剂的顺序导致将(一或多种)活性剂掺入脂质体的效率更高。在某些实施方案中，掺入脂质体的效率为50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。在某些实施方案中，掺入效率为90％、95％、98％、99％或100％。不受特定理论或机制的限制，将活性剂掺入预制脂质体的增加(例如，增加至浓度为约5mg/ml)可能是由于脂质体表面积的增加。本文还提供了通过以下方法制备的脂质体组合物，所述方法包含：(a)在环境温度将一种或多种脂质在水性介质中组合；(b)将脂质分散在水性介质中；和(c)向所得混合物中加入一种或多种糖，从而形成脂质体溶液。在另一个实施方案中，本文提供了通过以下方法制备的脂质体组合物，所述方法包含：(a)在环境温度将一种或多种脂质在水性介质中组合；(b)将脂质分散在水性介质中；(c)向所得混合物中加入一种或多种糖，从而形成脂质体溶液；和(d)向脂质体溶液中加入活性剂。在一个实施方案中，活性剂是疏水性药物。在一个实施方案中，活性剂以固体加入。在一个实施方案中，将活性剂加入有机溶剂中。在一个实施方案中，有机溶剂中的活性剂还包含一种或多种脂肪酸盐、脂肪酸和磷脂。在某些实施方案中，本文提供的方法产生包含脂质体和一种或多种活性剂的稳定溶液、组合物或制剂。在这些实施方案中，(一或多种)活性剂在特定的时间量保持溶解，并且不显著降解、聚集或变得以其他方式修饰(例如，通过hplc测定)。在一些实施方案中，在提高的温度(例如，约35℃或更高)用可接受的稀释剂稀释一周后，约70％或更多、约80％或更多、约90％或更多的活性剂保持溶解。在其他实施方案中，在室温用可接受的稀释剂稀释一周后，约70％或更多、约80％或更多、约90％或更多的活性剂保持溶解。在其他实施方案中，在降低的温度(例如，约10℃或更低)一周后，约70％或更多、约80％或更多、约90％或更多的活性剂保持溶解。在某些实施方案中，与在水性介质中的相同活性剂的溶解度相比，本文提供的方法导致活性剂的溶解度增强。具体地，当使用本文提供的方法时，活性剂的溶解度比相同化合物在参考溶剂中的溶解度增加约20％或更多、约40％或更多、约60％或更多、约80％或更多、约100％或更多、或约200％或更多。在一些实施方案中，参考溶剂是水。本文还提供了使用本文提供的脂质体组合物治疗疾病或病症的方法。在一些实施方案中，所述疾病或病症包括但不限于肿瘤疾病、增殖性疾病、中枢神经系统疾病、自身免疫疾病和炎性疾病或病症。在其他实施方案中，该方法涉及细菌、病毒或真菌感染的治疗。可以通过本文提供的方法治疗的增殖性病症(例如癌症)包括但不限于瘤、肿瘤(恶性和良性)和转移，或以不受控制的细胞生长为特征的任何疾病或病症。癌症可能是原发性或转移性癌症。可根据本发明的方法预防、管理、治疗或改善的癌症的具体实例包括但不限于头部、颈部、眼睛、口腔、喉咙、食道、胸部、骨骼、肺、结肠、直肠、胃、前列腺、乳房、卵巢、肾脏、肝脏、胰腺和大脑的癌症。其他癌症包括但不限于以下：白血病(例如急性白血病、急性淋巴细胞白血病)、急性髓细胞白血病(例如成髓细胞、前髓细胞、髓单核细胞、单核细胞、红白血病和骨髓增生异常综合征)、慢性白血病(例如慢性髓细胞(粒细胞)白血病、慢性淋巴细胞白血病、多毛细胞白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤(如霍奇金病、非霍奇金病)、多发性骨髓瘤(如郁积型多发性骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、浆细胞白血病、孤立性浆细胞瘤和髓外浆细胞瘤)、沃尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、未定性的单克隆丙球蛋白血症、良性单克隆丙种球蛋白病、重链疾病、骨和结缔组织肉瘤(如骨瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因氏肉瘤、恶性巨细胞瘤、骨纤维肉瘤、脊索瘤、骨膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤(血管肉瘤)、纤维肉瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管肉瘤、神经鞘瘤、横纹肌肉瘤、滑膜肉瘤)、脑肿瘤(如神经胶质瘤、星形细胞瘤、脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、少突神经胶质瘤、nonglialtumor、听神经瘤、颅咽管瘤、髓母细胞瘤、脑膜瘤、pincocytoma、松果体母细胞瘤、原发性脑淋巴瘤)、乳腺癌(如腺癌、小叶(小细胞)癌、导管内癌、乳腺髓样癌、粘液性乳腺癌、tubularbreastcancer、乳头状乳腺癌、佩吉特氏病和炎性乳腺癌)、肾上腺癌(例如嗜铬细胞瘤和肾上腺皮质癌)、甲状腺癌(例如乳头状或滤泡状甲状腺癌、甲状腺髓样癌和甲状腺未分化癌)、胰腺癌(如胰岛素瘤、胃泌素瘤、胰高血糖素瘤、胰腺瘤(vipoma)、生长抑素分泌肿瘤、类癌或胰岛细胞瘤)、垂体癌(如库兴氏病、催乳素分泌肿瘤、肢端肥大症、和糖尿病insipius)、眼癌(如眼黑素瘤如虹膜黑素瘤、脉络膜黑素瘤和睫状体黑素瘤、视网膜母细胞瘤)、阴道癌(如鳞状细胞癌、腺癌和黑素瘤)、外阴癌(如鳞状细胞癌、黑素瘤、腺癌、基底细胞癌、肉瘤和佩吉特氏病、宫颈癌(如鳞状细胞癌和腺癌)、子宫癌(如子宫内膜癌和子宫肉瘤)、卵巢癌(如卵巢上皮癌、交界瘤、胚细胞肿瘤和间质瘤)、食管癌(如鳞状细胞癌、腺癌、腺样囊性癌、粘液表皮样癌、腺鳞状癌、肉瘤、黑素瘤、浆细胞瘤、疣状癌和燕麦细胞(小细胞)癌)、胃癌(如腺癌、真菌样生长(息肉)、溃疡、浅表扩散、弥漫性扩散、恶性淋巴瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤和carcinosarcotna)、结肠癌、直肠癌、肝癌(如肝细胞癌和肝胚细胞瘤、胆囊癌如腺癌)、胆管上皮癌(如乳头状、结节性和弥漫性)、肺癌(如非小细胞肺癌、鳞状细胞癌(表皮样癌)、腺癌、大细胞癌和小细胞肺癌)、睾丸癌(如生殖细胞瘤、精原细胞瘤、间变性、经典(典型)、精母细胞性、非精原细胞瘤、胚胎性癌、畸胎瘤、绒毛膜癌(卵黄囊肿瘤)、前列腺癌例如但不限于腺癌、平滑肌肉瘤和横纹肌肉瘤)、阴茎癌、口腔癌(例如鳞状细胞癌)、基底癌、唾液腺癌(例如腺癌、粘液表皮样癌和腺样囊性癌)、咽癌(例如鳞状细胞癌和疣状癌)、皮肤癌(例如基底细胞癌、鳞状细胞癌和黑素瘤、浅表性扩散黑素瘤、结节性黑素瘤、恶性雀斑样痣黑素瘤、肢端雀斑痣性黑素瘤)、肾癌(如肾细胞癌、腺癌、肾上腺样瘤、纤维肉瘤、移行细胞癌(肾盂和/或输尿管))、肾母细胞瘤、膀胱癌(如移行细胞癌、鳞状细胞癌、腺癌、癌肉瘤)、粘液肉瘤、成骨性肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、间皮瘤、滑膜瘤、血管母细胞瘤、上皮癌、囊腺癌、支气管原癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌和乳头状腺癌、滤泡性淋巴瘤、具有p53突变的癌、乳腺、前列腺和卵巢激素依赖性肿瘤、癌前病变如家族性腺瘤性息肉病和骨髓增生异常综合征。可通过本文提供的方法治疗的其他具体疾病和病症包括但不限于以下：过敏性疾病、炎症、哮喘、关节炎、脑炎、风湿性关节炎、骨关节炎、银屑病关节炎、炎性骨质溶解、慢性或急性阻塞性肺病、慢性或急性肺炎性疾病、炎性肠病、克罗恩氏病、痛风、bechet病、亨诺-许兰氏紫癜(“fisp”)、脓毒性休克、脓毒症、脑脊膜炎、结肠炎、再灌注引起的炎症、银屑病、纤维化包括肺部纤维化、帕金森病、运动迟缓、肌僵硬、帕金森病震颤、帕金森病步态、运动冻结、抑郁症；缺陷性长期记忆、rubinsteintaybi综合征(rts)、痴呆、睡眠障碍、失眠、姿势不稳定、运动障碍、多动障碍、突触核蛋白障碍、多系统萎缩、纹状体黑质变性、橄榄体脑桥小脑萎缩、shydrager综合征、帕金森病特征运动神经元病、lewy体痴呆、tau病理障碍、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、额颞叶痴呆；淀粉样蛋白病理障碍、轻度认知障碍、阿尔茨海默病、阿尔茨海默病伴帕金森病、wilson病、hallervordenspatz病、chediakhagashi病、sca3脊髓小脑性共济失调、x连锁肌张力障碍帕金森病、亨廷顿病、朊病毒病、舞蹈病、颤搐(ballismus)、肌张力障碍震颤、肌萎缩侧索硬化症(“als”)、cns创伤、肌阵挛和与不希望的免疫反应相关的疾病或病症(例如，与器官移植相关的器官排斥)。可通过本文提供的方法治疗的病毒感染包括但不限于以下：人免疫缺陷病毒(“hiv”)、1型单纯疱疹病毒、2型单纯疱疹病毒、流感病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、人乳头瘤病毒(“hpv”)、腺病毒、鼻病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、登革热、黄热病、西尼罗河病毒、日本脑炎病毒、gb病毒a、gb病毒b、gb病毒c、牛病毒性腹泻病毒(bvdv”)、经典猪瘟病毒(即猪霍乱病毒)、边缘病病毒、水痘带状疱疹病毒、天花、麻疹、狂犬病病毒、虫媒病毒、巨细胞病毒、腮腺炎病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇b病毒、爱泼斯坦巴尔病毒、风疹病毒、细小病毒b19、冠状病毒sars冠状病毒)、星状病毒、诺罗病毒、轮状病毒和腺病毒。可通过本文提供的方法治疗的真菌感染包括但不限于曲霉菌病、芽生菌病、孢球菌病、隐球菌病、真菌性鼻窦炎、组织胞浆菌病、过敏性肺炎、毛霉菌病、副球孢子菌病、孢子丝菌病和谷热病。可通过本文提供的方法治疗的细菌感染包括但不限于布鲁杆菌病、霍乱、麻风病、钩端螺旋体病、志贺氏菌病、战壕热、土拉菌病、q热、惠特莫尔氏病、耶尔森菌病、雅司病、创伤弧菌感染、链球菌感染、葡萄球菌感染和大肠杆菌感染。本发明还涉及包括脂质体的组合物，所述脂质体包封抗体或其他治疗性蛋白质，以及制备这些脂质体包封的抗体或脂质体包封的治疗性蛋白质的方法。发明人已经发现免疫球蛋白和其他治疗性蛋白质含有疏水区域或口袋，所述疏水区域或口袋为其提供了针对脂质体脂质双层的疏水核心的亲和力。令人惊讶的是，如果冻干的抗体或其他蛋白质暴露于在水性介质中预先形成的脂质体悬浮液，则抗体和其他治疗性蛋白质可以自发地掺入脂质体中。这种掺入不需要，并且优选完全避免使用洗涤剂、表面活性剂和有机溶剂，并且也不需要均质化、微流化、过滤或破坏脂质双层的其他机制。在掺入脂质体之前或之后，这种掺入也不需要，并且优选避免免疫球蛋白或其他治疗性蛋白质的任何共价或甚至非共价修饰。免疫球蛋白或其他治疗性蛋白质优选通过非共价结合(例如通过疏水相互作用和/或范德华相互作用)与脂质烷基链结合，并且不涉及使用含有高亲和力匹配结合对的衍生化脂质和衍生化蛋白质，例如链霉抗生物素蛋白和生物素等。得到的含抗体或含蛋白质的脂质囊泡可以具有100或更低、80或更低、60或更低、50或更低、40或更低、或甚至30或更低的脂质(例如，磷脂)与蛋白质的摩尔比。蛋白质或抗体掺入(即包封)的产率为至少约40％、50％、60％、70％或80％。包封的抗体或蛋白质部分或全部包埋在脂质双层的疏水部分内，并且基本上不陷入囊泡腔中或与脂质分子共价结合，或共价结合到高亲和力匹配的结合分子如链霉抗生物素蛋白或生物素。包封的方法是温和的，其保留生物学功能，并且脂质体包封的抗体或蛋白质可以被冻干并随后在使用(例如施用给患者)前重构。实施例实施例1：不含药物的脂质体的制备：6％l-α-磷脂酰胆碱(大豆)脂质体。使用磁力搅拌器在环境温度以200rpm进行10分钟将6g的l-α-磷脂酰胆碱(大豆)分散在100ml水中。使分散的脂质体(多层)在15,000psi通过microfluidic均质器。三次通过循环导致脂质体直径小于100nm。然后将海藻糖加入脂质体中至终浓度为10％(w/w)。将所得稳定的等渗脂质体以液体或冻干形式使用。实施例2：用拉帕醌包封的脂质体的制备。使用磁力搅拌器在环境温度以200rpm进行10分钟将200mg拉帕醌和6gl-α-磷脂酰胆碱(大豆)分散在100μl中。使分散的脂质体(多层)在15,000psi通过microfluidic均质器。三次通过循环导致用2mg/ml拉帕醌包封的脂质体直径小于100nm。然后将海藻糖加入脂质体中至终浓度为10％(w/w)。将所得稳定的用拉帕醌包封的等渗脂质体以液体或冻干形式使用。实施例3：用环孢菌素包封和微乳化的脂质体的制备。使用磁力搅拌器在环境温度以200rpm进行10分钟将在5mlmygliol中的500mg环孢菌素和6gl-α-磷脂酰胆碱(大豆)分散在100ml水中。使分散的脂质体(多层)在15,000psi通过microfluidic均质器。三次通过循环导致用5mg/ml环孢菌素包封的脂质体直径小于100nm。然后将海藻糖加入脂质体中至终浓度为10％(w/w)。将所得稳定的用环孢菌素包封并微乳化的等渗脂质体制剂以液体或冻干形式使用。实施例4：用转铁蛋白包封的脂质体的制备。使用磁力搅拌器在环境温度以200rpm进行10分钟将200mg转铁蛋白和6gl-α-磷脂酰胆碱(大豆)分散在100ml水中。使分散的脂质体(多层)在15,000psi通过microfluidic均质器。三次通过循环导致用5mg/ml转铁蛋白包封的脂质体直径小于100nm。然后将海藻糖加入脂质体中至终浓度为10％(w/w)。将所得稳定的用转铁蛋白包封的等渗脂质体制剂以液体或冻干形式使用。实施例5：用秋水仙碱包封的脂质体的制备。使用磁力搅拌器在环境温度以200rpm进行10分钟将6mg油酸钠、10g海藻糖和6gl-α-磷脂酰胆碱(大豆)分散在100ml水中。使分散的脂质体(多层)在15,000psi通过microfluidic均质器10次。将溶解在丙酮中的100μl秋水仙碱掺入1ml预制脂质体中并冻干。冻干后，所得稳定的用药物包封的等渗冻干脂质体基本上不含有机溶剂。冻干后，产物可以重构为1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml或4mg/ml水性溶液(例如注射用水)。实施例6：脂质体中的抗体包封。许多治疗性蛋白质，包括抗体，具有疏水部分。在一个实施方案中，抗体，如同其他疏水性蛋白质或疏水性药物一样，可以通过将抗体加入到预先形成的脂质体中而被脂质体包封。令人惊奇的是，发现脂质体膜能够将抗体的疏水部分包封在脂质体双层的烷基链部分中。这与先前通过化学修饰(例如通过硫醇-马来酰亚胺反应或肽反应)将蛋白质(包括抗体)与脂质缀合的方法形成对比。在本发明中，不需要对治疗性蛋白质进行化学修饰，并且蛋白质保持其天然结构。herceptin适用于乳腺癌的辅助治疗，所述乳腺癌是her2过表达且淋巴结阳性或淋巴结阴性(er/pr阴性或具有一个高风险特征)。herceptin以无菌、白色至浅黄色、不含防腐剂的冻干粉末形式提供，用于静脉内施用。herceptin的每个多次使用小瓶含有440mg曲妥珠单抗、400mgα,α-1,1-海藻糖二水合物、9.9mgl-组氨酸hcl、6.4mgl-组氨酸和1.8mg聚山梨醇酯20，usp。用20ml注射用水重构一小瓶herceptin，得到含有21mg/ml曲妥珠单抗的溶液，ph约为6.0。将含有1.75mg曲妥珠单抗的溶液的等分试样在3ml小瓶中冻干，并通过将200μl的6％大豆磷脂酰胆碱(spc)脂质体(使用微流化制备)加入到冻干抗体中来重构，得到最终抗体浓度为8.75mg/ml(加入抗体后不进行微流化，只需轻轻混合)。通过尺寸排阻hplc分析样品，通过将10μl样品注射到tosohg3000swxl凝胶过滤柱上，使用100mm硫酸钠和100mm乙酸钠ph6.0作为流动相。将不含脂质体的humira样品用作对照(参见图1a)。数据表明，基于其在空隙体积的洗脱，将5.6mg/ml的曲妥珠单抗包封在脂质体中(图1b)。脂质体herceptin的组成显示在下表1中。表1.脂质体曲妥珠单抗(herceptin)的组成(1ml组合物)组分mg大豆磷脂酰胆碱60海藻糖109.63曲妥珠单抗8.75组氨酸hcl1.97组氨酸0.13聚山梨醇酯200.04humira是一种肿瘤坏死因子(tnf)阻断剂，适用于治疗：风湿性关节炎(ra)、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、克罗恩氏病和斑块状银屑病。humira以无菌、无防腐剂的阿达木单抗溶液提供，用于皮下施用。该药品以一次性使用的预填充笔(humirapen)或以一次性使用的1ml预填充玻璃注射器提供。humira溶液清澈无色，ph值约为5.2。每个注射器递送0.8ml药物产品，其含有40mg阿达木单抗、4.93mg氯化钠、0.69mg磷酸二氢钠二水合物、1.22mg磷酸氢二钠二水合物、0.24mg柠檬酸钠、1.04mg柠檬酸一水合物、9.6mg甘露醇、0.8mg聚山梨醇酯80和注射用水，usp。根据需要加入氢氧化钠以调节ph。将含有1.75mg阿达木单抗的等分试样在3ml小瓶中冻干，然后用200μl6％spc脂质体重构至抗体终浓度为8.75mg/ml。通过sec-hplc分析样品，通过注射10μl样品，使用tosohg3000swxl凝胶过滤柱，使用100mm硫酸钠和100mm乙酸钠ph6.0作为流动相。humira样品用作没有脂质体的对照。令人惊讶的是，数据表明，基于在空隙体积的洗脱，将5.6mg/mlherceptin包封在脂质体中(图1c)。这些数据表明herceptin的疏水口袋嵌在双层的磷脂酰胆碱的烷基之间而没有任何化学修饰。脂质体humira的组成显示在下表2中。表2.脂质体阿达木单抗(humira)的组成(1ml组合物)组分mg大豆磷脂酰胆碱60海藻糖100阿达木单抗8.75氯化钠0.216磷酸二氢钠0.030磷酸氢二钠二水合物0.053柠檬酸钠0.009柠檬酸一水合物0.046甘露醇0.420通过向脂质体的水性悬浮液中加入抗体的液体(即，水溶性的、未冻干的)制备物来获得类似的抗体掺入。本文引用的所有参考文献均以引用的方式整体并入本文，并且用于所有目的，其程度如同明确地和单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请通过引用整体并入本文的所有目的。当前第1页12